CN101637130B - 海南粗榧种胚培养育苗方法 - Google Patents
海南粗榧种胚培养育苗方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101637130B CN101637130B CN2009101842129A CN200910184212A CN101637130B CN 101637130 B CN101637130 B CN 101637130B CN 2009101842129 A CN2009101842129 A CN 2009101842129A CN 200910184212 A CN200910184212 A CN 200910184212A CN 101637130 B CN101637130 B CN 101637130B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- embryo
- seedling
- cephalotaxus
- root
- hainanensis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- Y02P60/216—
Abstract
本发明海南粗榧种胚培养育苗方法，涉及一种植物的快速繁育方法。按照下述步骤进行：(1)外植体的采集与选择；(2)种子的洗净、灭菌与种胚获取；(3)种胚接种与培养；(4)试管苗继代与诱导生根；(5)驯化移栽。本发明首创了用海南粗榧种胚作外植体组培快繁的整套方法，并提供了海南粗榧种胚育苗的优良培养基，不仅可以生产整齐一致的优质海南粗榧幼苗，为解决珍稀濒危植物海南粗榧快繁和恢复保护与资源开发利用提供技术保障；也为进一步探索海南粗榧的基因工程、拓宽外植体材料等奠定了基础。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物的快速繁育方法，尤其涉及海南粗榧种子胚培养进快繁育苗方法。
背景技术
海南粗榧(Cephalotaxus hainanensis Li)为三尖杉科植物，别名红壳松、薄叶蓖子杉，为多年生高大常绿乔木。是我国特有的珍稀树种，其分布范围极为狭窄，仅见于海南及广东、云南等局部地区。研究表明，海南粗榧不仅有效生物碱含量为三尖杉科中最高，而且疗效最显著，是目前公认的最好抗癌树种之一。再加之该树种因材质优良而屡遭砍伐，加之种群数量少，是我国最重要的珍稀濒危植物之一。但该树种自然资源十分有限，很难满足日益增长的需求。由于该树种为雌雄异株、种子产量和萌发率很低，受生态和人为破坏等因素而导致濒临灭绝。鉴于此，海南粗榧的物种保护引起植物学研究机构的高度重视。目前，海南粗榧繁殖方式主要有两种。其一是种子繁殖。但该树种自然资源十分有限，而且为雌雄异株、种子产量和萌发率很低(每年每雌株仅数十粒种子，种子萌发率野外约10％(一方面是因为海南粗榧种子萌发需要低温解除休眠，海南难以满足；另一方面海南粗榧种子在野外很易被动物啃食)、传统人工萌发约20％)，而且海南粗榧种子野外和传统的萌发方法需要约1年以上时间才能成苗，再加之受其生态和人为破坏等因素而导致海南粗榧濒临灭绝(王献溥，王有生.海南粗榧濒危的原因和保护措施.广西植物1994，14(4)：369-372)。其二是扦插繁殖。但是在种质资源濒临灭绝的情况下，通过扦插提供大量苗木的难度很大，远远满足不了制药行业对海南粗榧的需求，而且会对海南粗榧的有限资源造成更大的破坏；而且资料表明扦插幼嫩茎段来源直接影响到扦插幼苗的生长态势，只有来源于主茎顶端的幼嫩枝条扦插产生的幼苗能正常直立良好生长；而主茎顶端幼嫩茎段取材会直接毁灭该株植物的正常生长。所以，扦插繁殖基本不能推广(符文英，潘学峰，陈秀蕙，刘国民，李任珠.海南粗榧扦插与生根试验研究.海南大学学报(自然科学版)，1997，15(3)：239-244；潘学峰，符文英，陈秀蕙，刘国民，李任珠.海南粗榧扦插繁殖研究.热带农业科学，1996，(3)：25-30；杜道林，符文英.珍稀濒危植物海南粗榧种群保护生物生态学.湖南科技出版社，2003.11)。另外也有人研究采用传统的组织培养方法对海南粗榧进行幼苗繁殖，但是基本不能出苗，或者出苗率很低，不能进行应用推广(符文英，杜道林，符木均.海南粗榧愈伤组织的诱导和培养.植物生理学通讯，2004，40(1)：34-36；李志英，王祝年，徐立.海南粗榧的离体快速繁殖.植物生理学通讯，2005，41(5)：786)。
本发明提供了一种直接以海南粗榧种子胚培养进行快繁育苗，在较短的时间内，仅用很少数量的种子便可以生产大量整齐一致的优质种苗，避免不能获得大量种子的的限制问题和扦插与组培的技术问题，非常适宜大量推广，以满足海南粗榧这一珍稀濒危植物种苗迫切需求。
发明内容
本发明解决的关键技术问题是直接以海南粗榧种子胚为外植体进行培养，产生有根的试管苗，去根，诱导产生丛生芽，再诱导生根，形成幼苗。从而生产整齐一致的优质海南粗榧幼苗，为解决珍稀濒危植物海南粗榧快繁和恢复保护与资源开发利用提供技术保障。
本发明要解决的技术问题是用海南粗榧种胚为外植体，提供整套海南粗榧种苗快繁方法。解决上述问题的技术方案包括如下步骤：
(1)外植体的采集与选择：采集并选择发育成熟的种子；
(2)种子的洗净、灭菌与种胚获取：将成熟种子冲水1-3h.，并用蒸馏水清洗干净，滤纸吸干后放入约0.5-2.0％次氯酸钠溶液中真空抽滤灭菌3-8min，然后无菌水反复冲洗3-6次；在无菌操作台上，利用已灭菌解剖显微镜用剪刀及小镊子剥去种壳并用刀尖挑取种胚；或者将灭菌好的种子直接转入以下第(3)步；
(3)种胚接种与培养：将获得的海南粗榧种胚或者灭菌好的种子接种到如下培养基上培养：0.5-1MS(Murashige and Skoog Stock培养基)+0.01-0.1mg·L-16-BA(6-苄基嘌呤)+0-100mg·L-1肌醇+0.2-0.6％琼脂+1-5％蔗糖+1-5％椰子乳，pH值5.0-6.0；暗培养2d后再置于光照周期16h·d-1、光照强度2000-3000Lux的冷光灯下、环境温度25±2℃中继续培养15-25d，便获得新绿色的生有根的试管苗；
(4)试管苗继代与诱导生根：将该生根的试管苗去根后在以下培养基上进行继代培养：0.5-1MS+0.1-2.0mg·L-16-BA+0.01-0.2mg·L-1NAA(萘乙酸)+0-100mg·L-1肌醇+0.2-0.6％琼脂+1-5％蔗糖+0.1-0.5％活性炭，pH值5.0-6.0；每3-5周继代一次，经2-4次继代，即可转入以下培养基上诱导植株生根：0.5-1MS+5.0-10.0mg·L-1IBA(3-吲哚丁酸)+0-100mg·L-1肌醇+0.2-0.6％琼脂+1-5％蔗糖，pH值5.0-6.0。
(5)驯化移栽：将生根良好的幼苗移至驯化室、光照强度20000Lux、驯化1-2周，将苗从试管取出，用温水冲洗苗根部培养基，再用冷水冲洗，移栽至体积比大约为椰糠∶河沙＝1-3∶1或蛙石∶珍珠岩∶泥炭＝1-3∶1-3∶1混合而成的盆装人工基质中，每盆苗套上透明塑料袋，隔3天将袋子剪一小口，9-12d去盆苗透明塑料袋移至温室培养；1-2周后分别移入花盆或装袋制成袋苗(基质为从野外海南粗榧群落收集的土壤及地表腐殖质∶椰糠约按1-3∶1比例混合而成)，再培养1-2周，即可转入室外大棚培养生长；成活率达90％以上。
本发明的有益效果是：首创了用海南粗榧种胚作外植体组培快繁的整套方法，并提供了海南粗榧种胚育苗的优良培养基，不仅可以生产整齐一致的优质海南粗榧幼苗，为解决珍稀濒危植物海南粗榧快繁和恢复保护与资源开发利用提供技术保障；也为进一步探索海南粗榧的基因工程、拓宽外植体材料等莫定了基础。
具体实施方式
本发明具体实施方式下面结合实例予以阐明：培养基中所需各种药品试剂均可市售获得，按商品说明书所示常规方法配用，为行业所通用。
实施例1：
(1)外植体的采集与选择：采集并选择发育成熟的种子；
(2)种子的洗净、灭菌与种胚获得：将成熟种子冲水1h.，并用蒸馏水清洗干净，滤纸吸干后放入0.5％次氯酸钠溶液中真空抽滤灭菌8min，然后无菌水反复冲洗3次；
(3)种胚接种与培养：在无菌操作台上，利用已灭菌解剖显微镜用剪刀及小镊子剥去种壳并用刀尖挑取种胚接种到如下培养基上培养：0.5MS(Murashige and Skoog Stock培养基)+0.01mg·L-16-BA(6-苄基嘌呤)+0.2％琼脂+1％蔗糖+1％椰子乳，pH值5.0；暗培养2d后再置于光照周期16h·d-1、光照强度2000Lux的冷光灯下、环境温度25±2℃中继续培养15d，便获得新绿色的生有根的试管苗；
(4)试管苗继代与诱导生根：将该生根的试管苗去根后在以下培养基上进行继代培养：0.5MS+0.1mg·L-16-BA+0.01mg·L-1NAA(萘乙酸)+0.2％琼脂+1％蔗糖+0.1％活性炭，pH值5.0；每3周继代一次，经2次继代，即可转入以下培养基上诱导植株生根：0.5MS+5.0mg·L-1IBA(3-吲哚丁酸)+0.2％琼脂+1％蔗糖，pH值5.0。
(5)驯化移栽：将生根良好的幼苗移至驯化室、光照强度20000Lux、驯化1周，将苗从试管取出，用温水冲洗苗根部培养基，再用冷水冲洗，移栽至体积比为椰糠∶河沙＝1∶1混合而成的盆装人工基质中，每盆苗套上透明塑料袋，隔3天将袋子剪一小口，9d去盆苗透明塑料袋移至温室培养；10d后分别装袋制成袋苗(基质为从野外海南粗榧群落收集的土壤及地表腐殖质∶椰糠约按1∶1比例混合而成)，再培养1周，即可转入室外大棚培养生长，成活率达90％。
实施例2：
(1)外植体的采集与选择：采集并选择发育成熟的种子；
(2)种子的洗净、灭菌与种胚获得：将成熟种子冲水3h.，并用蒸馏水清洗干净，滤纸吸干后放入2.0％次氯酸钠溶液中真空抽滤灭菌3min，然后无菌水反复冲洗6次；
(3)种胚接种与培养：在无菌操作台上，利用已灭菌解剖显微镜用剪刀及小镊子剥去种壳并用刀尖挑取种胚接种到如下培养基上培养：1MS(Murashige and Skoog Stock培养基)+0.1mg·L-16-BA(6-苄基嘌呤)+100mg·L-1肌醇+0.6％琼脂+5％蔗糖+5％椰子乳，pH值6.0；暗培养2d后再置于光照周期16h·d-1、光照强度3000Lux的冷光灯下、环境温度25±2℃中继续培养25d，便获得新绿色的生有根的试管苗；
(4)试管苗继代与诱导生根：将该生根的试管苗去根后在以下培养基上进行继代培养：1MS+2.0mg·L-16-BA+0.2mg·L-1NAA(萘乙酸)+100mg·L-1肌醇+0.6％琼脂+5％蔗糖+0.5％活性炭，pH值6.0；每5周继代一次，经4次继代，即可转入以下培养基上诱导植株生根：1MS+10.0mg·L-1IBA(3-吲哚丁酸)+100mg·L-1肌醇+0.6％琼脂+5％蔗糖，pH值6.0。
(5)驯化移栽：将生根良好的幼苗移至驯化室、光照强度30000Lux、驯化2周，将苗从试管取出，用温水冲洗苗根部培养基，再用冷水冲洗，移栽至体积比大约为椰糠∶河沙＝3∶1混合而成的盆装人工基质中，每盆苗套上透明塑料袋，隔3天将袋子剪一小口，12d去盆苗透明塑料袋移至温室培养；2周后分别移入花盆或装袋制成袋苗(基质为从野外海南粗榧群落收集的土壤及地表腐殖质∶椰糠约按3∶1比例混合而成)，再培养2周，即可转入室外大棚培养生长；成活率达95％以上。
按本发明的技术方法实施，培养基中成分相对比例差异会导致分化率、生根率、壮弱程度上的差异，总的说，数值越接近最佳值，实施结果越理想。
Claims (1)
1.海南粗榧种胚培养育苗方法，其特征在于按照下述步骤进行：
(1)外植体的采集与选择：采集并选择发育成熟的种子；
(2)种子的洗净、灭菌与种胚获取：将成熟种子冲水1-3h.，并用蒸馏水清洗干净，滤纸吸于后放入0.5-2.0％次氯酸钠溶液中真空抽滤灭菌3-8min，然后无菌水反复冲洗3-6次；在无菌操作台上，利用已灭菌解剖显微镜用剪刀及小镊子剥去种壳并用刀尖挑取种胚；
(3)种胚接种与培养：将获得的海南粗榧种胚接种到如下培养基上培养：0.5-1 Murashigeand Skoog Stock培养基+0.01-0.1mg·L-16-苄基嘌呤+0-100mg·L-1肌醇+0.2-0.6％琼脂+1-5％蔗糖+1-5％椰子乳，pH值5.0-6.0；暗培养2d后再置于光照周期16h·d-1、光照强度2000-3000Lux的冷光灯下、环境温度25±2℃中继续培养15-25d，即可获得新绿色的生有根的试管苗；
(4)试管苗继代与诱导生根：将该生根的试管苗去根后在以下培养基上进行继代培养：0.5-1Murashige and Skoog Stock培养基+0.1-2.0mg·L-16-苄基嘌呤+0.01-0.2mg·L-1萘乙酸+0-100mg·L-1肌醇+0.2-0.6％琼脂+1-5％蔗糖+0.1-0.5％活性炭，pH值5.0-6.0；每3-5周继代一次，经2-4次继代，即可转入以下培养基上诱导植株生根：0.5-1 Murashige and SkoogStock培养基+5.0-10.0mg·L-1 3-吲哚丁酸+0-100mg·L-1肌醇+0.2-0.6％琼脂+1-5％蔗糖，pH值5.0-6.0；
(5)驯化移栽：将生根良好的幼苗移至驯化室、光照强度20000Lux、驯化1-2周，将苗从试管取出，用温水冲洗苗根部培养基，再用冷水冲洗，移栽至以体积比计为椰糠∶河沙＝1-3∶1或蛙石∶珍珠岩∶泥炭＝1-3∶1-3∶1混合而成的盆装人工基质中，每盆苗套上透明塑料袋，隔3天将袋子剪一小口，9-12天去盆苗透明塑料袋移至温室培养；1-2周后分别移入花盆或装袋制成袋苗，其基质为从野外海南粗榧群落收集的土壤及地表腐殖质∶椰糠按1-3∶1体积比例混合而成，再培养1-2周，即可转入室外大棚培养生长。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009101842129A CN101637130B (zh) | 2009-08-14 | 2009-08-14 | 海南粗榧种胚培养育苗方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009101842129A CN101637130B (zh) | 2009-08-14 | 2009-08-14 | 海南粗榧种胚培养育苗方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101637130A CN101637130A (zh) | 2010-02-03 |
| CN101637130B true CN101637130B (zh) | 2011-11-16 |
Family
ID=41612454
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2009101842129A Expired - Fee Related CN101637130B (zh) | 2009-08-14 | 2009-08-14 | 海南粗榧种胚培养育苗方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101637130B (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104838829A (zh) * | 2014-02-14 | 2015-08-19 | 周欣 | 一种优质食用香榧的无性快繁方法 |
| CN106518354A (zh) * | 2016-10-27 | 2017-03-22 | 六安市振清生态农业有限公司 | 一种粗榧种植用营养有机基质 |
| CN109496653A (zh) * | 2018-11-27 | 2019-03-22 | 山东省林业科学研究院 | 一种适宜大规模育苗快速提高元宝枫嫩枝扦插生根率的方法 |
| CN109548639B (zh) * | 2018-12-26 | 2021-05-04 | 旺盛生态环境股份有限公司 | 一种楸树组培苗移栽方法 |
| CN114467750B (zh) * | 2022-02-16 | 2023-05-02 | 浙江大学 | 一种大盘山榧未成熟种子看护培养方法 |
-
2009
- 2009-08-14 CN CN2009101842129A patent/CN101637130B/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 刘进平等.海南粗榧扦插繁殖技术.《中国热带农业》.2006,(第5期),63. * |
| 李志英等.海南粗榧的离体快速繁殖.《植物生理学通讯》.2005,第41卷(第6期),786. * |
| 符文英等.海南粗榧保护和开发利用的研究.《分子植物育种》.2003,第1卷(第5期),795-799. * |
| 符文英等.海南粗榧愈伤组织的诱导和培养.《植物生理学通讯》.2004,第40卷(第1期),34-36. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101637130A (zh) | 2010-02-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101637096B (zh) | 海南粗榧种子种苗快速高效繁育方法 | |
| CN102369881B (zh) | 一种铁皮石斛腋芽的快速繁殖方法 | |
| CN102301952B (zh) | 一种甘菊繁殖方法 | |
| CN101720670B (zh) | 旱半夏组织培养快速繁殖方法 | |
| CN101637130B (zh) | 海南粗榧种胚培养育苗方法 | |
| CN101589690B (zh) | 一种高效诱导赤松(Pinus densiflora)组培苗不定根发生的方法 | |
| CN101637097B (zh) | 海南粗榧种子快速高效萌发和培育优质种苗的方法 | |
| CN112335549A (zh) | 一种通过组织离体培养获得落叶松再生植株的方法 | |
| CN107027627B (zh) | 一种多花黄精幼胚培养的微块茎繁殖方法 | |
| CN103125393A (zh) | 裸花紫珠无菌播种与快速组培繁殖方法 | |
| CN112715367B (zh) | 一种利用硝酸镧进行毛梾组培继代增殖的方法 | |
| CN100381044C (zh) | 北五味子体细胞胚发生和植株再生方法 | |
| CN104938335B (zh) | 利用油茶下胚轴获得再生植株的方法 | |
| CN104472365A (zh) | 富贵榕组培快繁育苗方法 | |
| CN104488723A (zh) | 一种朝鲜淫羊藿组培快速繁殖方法 | |
| CN103548695B (zh) | 一种岩黄连组织培养快速繁殖方法 | |
| CN104686344A (zh) | 一种短葶山麦冬组织培养方法 | |
| CN102763592B (zh) | 一种芍药胚培养方法 | |
| CN102613087A (zh) | 生物组织培养繁育考来木的方法 | |
| CN101743908A (zh) | 红花银桦组培快繁及栽培方法 | |
| CN101904302B (zh) | 一种药用植物北五味子体细胞胚发生和植株再生方法 | |
| CN109874669B (zh) | 一种荷花无菌苗走茎快速增殖方法 | |
| CN105104200A (zh) | 一种合柱金莲木的组织培养快速繁殖方法 | |
| CN101518205B (zh) | 一种茅膏菜无菌播种繁殖方法 | |
| CN105210863A (zh) | 一种天麻的组培快繁方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20111116 Termination date: 20150814 |
|
| EXPY | Termination of patent right or utility model |