CN105104200A - 一种合柱金莲木的组织培养快速繁殖方法 - Google Patents

一种合柱金莲木的组织培养快速繁殖方法 Download PDF

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Abstract

一种合柱金莲木的组织培养快速繁殖方法,包括如下步骤:(1)取合柱金莲木种子作为外植体进行消毒;(2)将消毒后的外植体置于MS诱导培养基中诱导发芽得到无菌试管苗;(3)将所述无菌试管苗置于MS增殖培养基中进行试管苗快速繁殖培养获得丛生芽;(4)将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中进行壮苗培养得到健壮植株;(5)将所述健壮植株置于1/2MS生根培养基中培养得到完整的带根苗;(6)取完整的带根苗进行炼苗后移植于苗床生长一个月,再移栽至大田。采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高,可在短期内提供大量合柱金莲木的优质种苗,有效解决了合柱金莲木的规模化育苗问题。

Description

一种合柱金莲木的组织培养快速繁殖方法
技术领域
本发明涉及一种植物繁殖方法,特别是一种合柱金莲木的组织培养快速繁殖方法。
背景技术
合柱金莲木,拉丁学名为Sauvagesiarhodoleuca(Diels)M.C.E.,又名辛木,属金莲木科(Ochnaceae)落叶小灌木,为我国特有的单种属植物。合柱金莲木以根茎入药,具有止痒杀虫等功效。由于合柱金莲木形态特征与南美洲产的Wallacea属植物很接近,因此,它的存在对于进一步研究本科植物的区系、地理分布及其发生与演化等具有重要的科学意义。
合柱金莲木主要分布于广西金秀、龙胜、融水、德保和广东的封开、连山、怀集等地。常生长在海拔200-1000m的中、低山区,呈片状生于密林或疏林下。由于森林砍伐,生境破坏和挖取根茎入药,致使植株日趋减少,有面临绝灭的危险,因此于1999年被列入《国家重点保护野生植物名录(第1批)》中,为国家一级重点保护野生植物。在自然条件下,合柱金莲木主要依靠种子进行繁育,但种子微小,且果实成熟后即开裂散落的特性常造成种子产量低,生产上难以实现大面积栽培。
发明内容
本发明的目的是提供一种合柱金莲木的组织培养快速繁殖方法,能够有效快速地提高合柱金莲木种苗的繁殖速度和质量,实现合柱金莲木优质种苗的工厂化育苗,以满足生产上的需要。
本发明通过以下技术方案达到上述目的:一种合柱金莲木组织培养快速繁殖方法,包括以下步骤:
(1)外植体的选择与消毒:选取合柱金莲木种子作为外植体,依次用2%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次,最后用消毒滤纸除去表面水分,得到外植体,所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水;
(2)种子萌发获得无菌试管苗:将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中,在培养温度为23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养20天,种子发芽后获得无菌试管苗,所述MS培养基中添加1.5mg/L灵发素LFS、0.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和4.5g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8;
(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽,所述MS繁殖培养基中添加1.0-2.0mg/L灵发素LFS、0.5-1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.3-0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖、4.5g/L的琼脂和1g/L的活性炭,培养基的pH值为5.8;
(4)丛生芽壮苗培养:将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到健壮植株,所述MS壮苗培养基中添加1.0mg/L灵发素LFS、1.0mg/L的萘乙酸NAA、0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖、4.5g/L的琼脂和1g/L的活性炭,培养基的pH值为5.8;
(5)健壮植株生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养25天得到带根的完整植株,所述1/2MS生根培养基中添加0.1-1.0mg/L灵发素LFS、0.5-2.0mg/L的吲哚丁酸IBA、0.1-0.3mg/L的ABT1号生根粉、30g/L蔗糖、4.5g/L的琼脂和1g/L的活性炭,培养基的pH值为5.8;
(6)炼苗与移栽:步骤(5)获得带根的完整植株后,在室温为25℃的室内打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗2-4天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到细河沙:泥炭土=1:2的苗床中,在苗床中生长一个月后移栽大田,移栽后一个星期内,每天早8点到晚6点喷雾3-5次,每次10min,此后每天早8点、晚6点各喷雾1次,每次10min;移栽时的温度条件为20-25℃,相对湿度75-90%,遮阳率为60-80%。
本发明的突出优点在于:
(1)采用生物技术对合柱金莲木进行组织培养快速繁殖,保持了原有品种的优良性状,在短时间内培育出大量可供大田栽培的合柱金莲木幼苗,具有繁育速度快、种苗质量均一,且不受时间、空间和季节限制等突出优点,缩短了种苗繁育周期,提高了种苗质量和种苗繁殖系数,适用于工厂化生产,从而满足生产上的需要。
(2)在MS诱导培养基中添加灵发素、6-苄基腺嘌呤和萘乙酸,能够诱导不定芽萌发;在MS增殖培养基中添加灵发素、6-苄基腺嘌呤和激动素可促进不定芽的分化和生长;在MS壮苗培养基中添加灵发素、萘乙酸和吲哚乙酸可促进苗壮和芽的再次增殖;在1/2MS生根培养基中添加灵发素、吲哚丁酸和ABT1号生根粉可获得完整的带根苗,经炼苗后可直接移栽至苗床中。
(3)采用本发明所述的培养方法得到的丛生芽增殖系数高达16倍,经过扩繁、壮苗和生根培养,组培苗生根率达78.87%以上,移栽苗床后成活率在91.7%以上。本发明提供的合柱金莲木的组织培养方法能够快速、便捷、高效地繁殖出大量适合移栽的优良合柱金莲木种苗,满足生产上的需要。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
本发明所述的合柱金莲木组织培养快速繁殖方法,包括以下步骤:
(1)外植体的选择与消毒:选取合柱金莲木种子作为外植体,依次用2%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次,最后用消毒滤纸除去表面水分,得到外植体,所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水;
(2)种子萌发获得无菌试管苗:将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中,在培养温度为23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养20天,种子发芽后获得无菌试管苗。所述MS培养基中添加1.5mg/L灵发素LFS、0.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和4.5g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8;
(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽。所述MS繁殖培养基中添加如表1所示的不同浓度的灵发素LFS、6-苄基腺嘌呤6-BA和激动素KT、30g/L蔗糖、4.5g/L的琼脂和1g/L的活性炭,培养基的pH值为5.8。数据分析发现,灵发素和激动素对合柱金莲木丛生芽的增殖系数具有显著影响,根据芽增殖系数确定的最适培养基激素浓度为1.5mg/L的灵发素LFS、1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA和0.5mg/L的激动素KT,此时芽增殖系数高达16.25,如实施例5所示。
表1不同激素对合柱金莲木组织培养快速繁殖效果的影响
注:表1中K1/3为水平1的3次指标值的平均;K2/3为水平2的3次指标值的平均;K3/3为水平3的3次指标值的平均;
R表示灵发素LFS,6-苄基腺嘌呤6-BA和激动素KT在各自取值范围内的极差。
(4)丛生芽壮苗培养:将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到健壮植株,所MS壮苗培养基中添加1.0mg/L灵发素LFS、1.0mg/L的萘乙酸NAA、0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖、4.5g/L的琼脂和1g/L的活性炭,培养基的pH值为5.8;
(5)健壮植株生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养25天得到带根的完整植株,所述1/2MS生根培养基中添加如表2所示的不同浓度的灵发素LFS、吲哚丁酸IBA、ABT1号生根粉、30g/L蔗糖、4.5g/L的琼脂和1g/L的活性炭,培养基的pH值为5.8;观察发现,灵发素和吲哚丁酸对合柱金莲木组培苗的生根率具有显著影响,根据生根率确定的最适培养基激素浓度为0.1mg/L的灵发素LFS、1.0mg/L的吲哚丁酸IBA和0.2mg/L的ABT1号生根粉,此时生根率高达95.62,如实施例2所示。
表2不同激素对合柱金莲木组织培养快速繁殖效果的影响
注:
表2中K1/3为水平1的3次指标值的平均;K2/3为水平2的3次指标值的平均;K3/3为水平3的3次指标值的平均;
R表示灵发素LFS,吲哚丁酸IBA和1号生根粉ABT在各自取值范围内的极差。
(6)炼苗与移栽:步骤(5)获得带根的完整植株后,在室温为25℃的室内打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗2-4天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到细河沙:泥炭土=1:2的苗床中,在苗床中生长一个月后移栽大田。移栽后一个星期内,每天早8点到晚6点喷雾3-5次,每次10min,此后每天早8点、晚6点各喷雾1次,每次10min;移栽时的温度条件为20-25℃,相对湿度75-90%,遮阳率为60-80%,成活率为91.7%。

Claims (1)

1.一种合柱金莲木组织培养快速繁殖方法,其特征在于:该方法包括以下步骤:
(1)外植体的选择与消毒:选取合柱金莲木种子作为外植体,依次用2%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次,最后用消毒滤纸除去表面水分,得到外植体,所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水;
(2)种子萌发获得无菌试管苗:将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中,在培养温度为23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养20天,种子发芽后获得无菌试管苗,所述MS培养基中添加1.5mg/L灵发素LFS、0.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和4.5g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8;
(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽,所述MS繁殖培养基中添加1.0-2.0mg/L灵发素LFS、0.5-1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.3-0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖、4.5g/L的琼脂和1g/L的活性炭,培养基的pH值为5.8;
(4)丛生芽壮苗培养:将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到健壮植株,所述MS壮苗培养基中添加1.0mg/L灵发素LFS、1.0mg/L的萘乙酸NAA、0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖、4.5g/L的琼脂和1g/L的活性炭,培养基的pH值为5.8;
(5)健壮植株生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养25天得到带根的完整植株,所述1/2MS生根培养基中添加0.1-1.0mg/L灵发素LFS、0.5-2.0mg/L的吲哚丁酸IBA、0.1-0.3mg/L的ABT1号生根粉、30g/L蔗糖、4.5g/L的琼脂和1g/L的活性炭,培养基的pH值为5.8;
(6)炼苗与移栽:步骤(5)获得带根的完整植株后,在室温为25℃的室内打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗2-4天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到细河沙:泥炭土=1:2的苗床中,在苗床中生长一个月后移栽大田,移栽后一个星期内,每天早8点到晚6点喷雾3-5次,每次10min,此后每天早8点、晚6点各喷雾1次,每次10min;移栽时的温度条件为20-25℃,相对湿度75-90%,遮阳率为60-80%。
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