CN105123529A - 白芨快繁和高效栽培方法 - Google Patents

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李云飞
王昌付
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Abstract

本发明提供一种白芨组织培养方法,包括步骤:将选取的白芨蒴果用水冲洗后进行灭菌处理;在无菌条件下将所述白芨蒴果中的种子均匀抖落在第一培养基上,进行暗培养4.5-5.5d,再移至培养室在预定的温度和光照强度条件下进行培养;将白芨丛生苗接种于第二培养基中,在预定的温度和光照强度下进行培养,直至小苗基部有原球茎出现;将带原球茎的小苗揭开瓶盖,在室内自然光下炼苗6-8天,提高小苗适应性;将得到的带原球茎的小苗取出,用多菌灵浸泡根部,晾干后移栽至育苗基质中,于温室遮阴保湿通风处培养,温度控制在22.5-23.5℃,直至小苗存活,长成健壮白芨植株。该方法实现了白芨的快速繁殖,提高了白芨繁殖的产出效率。

Description

白芨快繁和高效栽培方法
技术领域
[0001] 本发明涉及植物培养应用技术领域,特别涉及一种白芨组织培养方法。
背景技术
[0002] 白发,学名Bletilla striata,又名连及草、甘根、白给、箬兰等,为兰科白发属多年生草本植物,主要分布在中国、日本以及缅甸北部。花有紫红、白、蓝、黄和粉等色,可盆栽室内观赏。具有收敛止血、消肿生肌等功效,广泛应用与医药、日化产品等领域,近年来其应用不断扩展,需求量不断增加,但由于种子发育不完全,自然环境下难以萌发,生产上多靠块茎繁殖,然而繁殖系数有限,投入大,但产量低,难以满足市场需求。
发明内容
[0003] 本发明提供一种白芨组织培养方法,以解决上述问题。
[0004] 本发明实施例提供了一种白芨组织培养方法,包括步骤:
[0005] 步骤A,将选取的白芨蒴果用水冲洗后进行灭菌处理;
[0006] 步骤B,在无菌条件下将所述白芨蒴果中的种子均匀抖落在第一培养基上,进行暗培养4.5-5.5d,再移至培养室在预定的温度和光照强度条件下进行培养,至长成1.8-2.2cm高的白芨丛生苗;
[0007] 步骤C,将所述白芨丛生苗接种于第二培养基中,在预定的温度和光照强度下进行培养,直至小苗基部有原球茎出现;
[0008] 步骤D,将带原球茎的小苗揭开瓶盖,在室内自然光下炼苗6-8天,提高小苗适应性;
[0009] 步骤E,将所述步骤D中得到的带原球茎的小苗取出,洗净根部附着的培养基,用800-1000倍多菌灵浸泡根部0.5-lh,晾干后移栽至育苗基质中,于温室遮阴保湿通风处培养,温度控制在22.5-23.5°C,直至小苗存活,长成健壮白芨植株。
[0010] 其中,所述步骤A中进行灭菌处理包括步骤:
[0011] 在超净工作台上采用75%乙醇消毒28-32s,0.1%升汞消毒14_16min,再用无菌水冲洗3-5次,置于灭菌的滤纸上吸干水分,备用。
[0012] 其中,所述步骤在超净工作台上采用75%乙醇消毒28_32s,0.1%升汞消毒14-16min,再用无菌水冲洗3_5次包括:
[0013] 在超净工作台上采用75%乙醇消毒30s,0.1 %升汞消毒15min,再用无菌水冲洗4次。
[0014] 其中,所述步骤B包括步骤:
[0015] 在无菌条件下,用消过毒的手术刀切开所述白芨蒴果顶部,用无菌镊子将种子均匀抖落在第一培养基上,立即盖上瓶盖,做好标记后,放在培养箱进行暗培养5d,再移至培养室,培养温度23-27°C,光照度2000-25001x,光照时长11.5-12.5h/d,培养时间为29-31d,长成2cm高白芨丛生苗。
[0016] 其中,所述步骤C包括步骤:
[0017] 将所述白芨丛生苗接种于第二培养基中,培养温度23_27°C,光照度2000-25001x,光照时长11.5-12.5h/d,培养时间为89-91d,至小苗基部有直径为0.5mm的原球茎出现。优选地,此步骤中接种于第二培养基后的光照时长为12h/d,培养时间为90d。
[0018] 其中,所述步骤A之前还包括步骤:
[0019] 预先配置第一培养基,所述第一培养基包括l/2MS、30g/L蔗糖、7g/L琼脂、lg/L活性炭,ph为5.8。
[0020] 其中,所述步骤A之前还包括步骤:
[0021] 预先配置第二培养基,所述第二培养基包括MS、(X 75mg/L ΝΑΑ、(λ 5mg/L6_BA、25g/L 鹿糖、200g/L 土豆、6.5g/L 琼脂、5g/L 活性炭,ph 为 5.8。
[0022] 其中,所述步骤E之前包括步骤:
[0023] 配置育苗基质,所述育苗基质包括腐殖土、珍珠岩和河沙。
[0024] 其中,所述育苗基质中的成分按体积份数计为腐殖土:珍珠岩:河沙=2:1:1。
[0025] 本发明实施例提供了一种白芨组织培养方法,以性状优良的白芨种子为外植体,在特定的温度光照度条件下进行消毒处理、接种诱导萌发、继代培养,长成完整的白芨植株小苗,最后将完整小苗移栽至育苗基质中,培养成白芨种苗,整个培养过程标准可控,实现了白芨种苗的工厂化标准生产,繁殖速度快,一年四季均可繁殖生产种苗,不受地域和气候影响,相比传统的野生采挖和人工块茎栽培,生产过程可控,出产率高,产量更大,解决了现有技术中白芨培养产出率低难以满足市场需要的技术问题。
附图说明
[0026]图1为本发明提供的白芨组织培养方法的一个实施例的流程图。
具体实施方式
[0027] 本发明实施例提供了一种白芨组织培养方法。参见图1所示,该方法包括步骤:
[0028] 步骤S110,将选取的白芨蒴果用水冲洗后进行灭菌处理。
[0029] 白芨蒴果应选用形状优良的白芨植株的成熟蒴果。
[0030] 优选地,灭菌处理采用如下方式:在超净工作台上采用75%乙醇消毒28-32S,
0.1 %升汞消毒14-16min,再用无菌水冲洗3_5次,置于灭菌的滤纸上吸干水分,备用。
[0031] 其中,本发明中除非特别说明,s为时间计量单位秒,min为时间计量单位分钟,d为时间计量单位天,h为时间计量单位小时,mm为长度计量单位毫米,cm为长度计量单位厘米,Ix为光照强度单位勒克斯。
[0032] 步骤S111,在无菌条件下将所述白芨蒴果中的种子均匀抖落在第一培养基上,进行暗培养4.5-5.5d,再移至培养室在预定的温度和光照强度条件下进行培养,至长成
1.8-2.2cm高的白芨丛生苗。
[0033] 步骤S112,将白芨丛生苗接种于第二培养基中,在预定的温度和光照强度下进行培养,直至小苗基部有原球茎出现。
[0034] 在该步骤中,预定的温度和光照强度可以为:培养温度23-27 °C,光照度2000-25001x ;而光照时长可以为11.5-12.5h/d,培养时间为29_31d。
[0035] 步骤SI 13,将带原球茎的小苗揭开瓶盖,在室内自然光下炼苗6-8天,提高小苗适应性。
[0036] 步骤SI 14,将所述步骤SI 13中得到的带原球茎的小苗取出,洗净根部附着的培养基,用800-1000倍多菌灵浸泡根部0.5-lh,晾干后移栽至育苗基质中,于温室遮阴保湿通风处培养,温度控制在22.5-23.5°C,直至小苗存活,长成健壮白芨植株。
[0037] 育苗基质,按体积份数计,为腐殖土:珍珠岩:河砂=2:1:1。
[0038] 其中,第一培养基为种子萌发培养基,第二培养基为继代培养基。优选地,作为一种可实施方式,第一培养基包括:l/2MS+30g/L蔗糖+7g/L琼脂+lg/L活性炭,第一培养基Ph值为5.8。
[0039]第 二培养基包括:MS+0.75mg/L NAA+0.5mg/L 6_BA+25g/L 蔗糖 +200g/L 土豆+6.5g/L琼脂+5g/L活性炭,第二培养基ph值为5.8。
[0040]其中,MS 为常规基本培养基Murashige&Skoogl962,即 Murashige 和 SkOog 于 1962年为烟草细胞培养设计的常规培养基。将常规基本培养基MS中大量元素浓度减半即得到1/2MS ;6-BA为6-苄基腺嘌呤,NAA为萘乙酸。
[0041] 下面列举一个本发明提供的白芨组织培养方法的一个较佳的实施例,其步骤如下:
[0042] I)白芨种子蒴果的选取与灭菌:选取成熟的白芨蒴果,将白芨蒴果用水冲洗干净,在超净工作台上采用75%乙醇消毒30s,0.1 %升萊消毒15min,再用无菌水冲洗4次,置于灭菌的滤纸上吸干水分,备用。
[0043] 2)接种:在无菌条件下,用消过毒的手术刀切开蒴果顶部,用无菌镊子将种子均匀抖落在培养基上,立即盖上瓶盖,做好标记后,放在培养箱进行暗培养5d,再移至培养室,培养温度25±2°C,光照度2000-25001x,光照12h/d,培养时间为30d,长成2cm高白芨丛生苗。
[0044] 3)继代培养:将步骤2中的白芨丛生苗接种于继代培养基中,培养温度(25 ±2) 0C,光照度2000〜25001x,光照12h/d,培养时间为90d,有直径为0.5mm (毫米)的原球茎出现,小苗基部略有膨大。
[0045] 4)植株炼苗:将步骤3中得到的带原球茎的小苗揭开瓶盖,在室内自然光下炼苗一周左右,提尚小苗适应性。
[0046] 5)植株移栽:移栽前,对含腐殖土、珍珠岩的育苗基质进行消毒,将步骤4中得到的带原球茎的小苗取出,洗净基部培养基,用800-1000倍多菌灵浸泡根部0.5-lh,晾干后移栽至育苗基质中,于温室遮阴保湿通风处培养,温度控制在23°C左右,基质保持“见干见湿”,直至小苗存活,长成健壮白芨植株。
[0047] 培育成健壮的白芨植株后,进行大田栽培包括步骤:将移栽存活、生长健壮的白芨苗于春秋季移栽,选择阴坡疏林处、土壤有机质丰富、排水良好的沙壤土或者壤土进行种植。优选地,可以畦高25cm,宽1.2m,株行距15 X 25cm,根据白芨生长情况每年除草3次,分别为3-4月,6月,8-9月,除草时浅除表土,勿伤块茎。选择山林坡地种植白芨病虫害相对较少,主要做好排水工作,防止地下块茎腐烂。富含腐殖质的林地基本不用人工施肥,若土地肥力不足,可结合中耕除草追施磷酸二氢钾或有机复合肥。组培苗一般生长3年后采挖,林下种植亩产250kg。
[0048] 选择阴坡林地种植白芨,既可提高土地利用率,又简化了白芨的种植管理,减少人力成本,提高经济效益。
[0049] 现有技术中,白芨多为野生采挖和人工栽培,栽培以块茎繁殖为主,种植生产成本高,块茎容易腐烂在土里,而且抗病性强度不够,多年种植容易出现品种退化,同时种源来源繁杂,品质参差不齐,制约了白芨的规模化种植的发展和单位面积产值的提高。目前尚无有关白芨组织培养和离体快繁的相关技术来解决生产中白芨块茎繁殖系数低问题。
[0050] 本发明提供的白芨组织培养方法,利用植物组织培养技术,实现白芨的组织快繁,繁殖系数高,为以后工厂化育苗提供一定的技术支持,在白芨的产业化栽培的种苗供应和良种快速扩繁方面具有重要的应用价值:
[0051] 1、实现白芨种苗的工厂化标准生产,繁殖速度快,一年四季均可繁殖生产种苗,不受地域和气候影响;
[0052] 2、快速良种选育与扩繁,对于优良植株进行快速扩繁,并在此基础上实现良种的快速选育,为规模化人工栽培提供优良种苗;
[0053] 3、为白芨种质资源保存提供低成本技术手段。
[0054] 需要说明的是,在本文中,术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含,从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素,而且还包括没有明确列出的其他要素,或者是还包括为这种过程、方法、物品者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下,由语句“包括一个......”限定的要素,并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同因素。
[0055] 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明保护的范围之内。

Claims (9)

1.一种白芨组织培养方法,其特征在于,包括步骤: 步骤A,将选取的白芨蒴果用水冲洗后进行灭菌处理; 步骤B,在无菌条件下将所述白芨蒴果中的种子均匀抖落在第一培养基上,进行暗培养4.5-5.5d,再移至培养室在预定的温度和光照强度条件下进行培养,至长成1.8-2.2cm高的白芨丛生苗; 步骤C,将所述白芨丛生苗接种于第二培养基中,在预定的温度和光照强度下进行培养,直至小苗基部有原球茎出现; 步骤D,将带原球茎的小苗揭开瓶盖,在室内自然光下炼苗6-8天,提高小苗适应性;步骤E,将所述步骤D中得到的带原球茎的小苗取出,洗净根部附着的培养基,用800-1000倍多菌灵浸泡根部0.5-lh,晾干后移栽至育苗基质中,于温室遮阴保湿通风处培养,温度控制在22.5-23.5°C,直至小苗存活,长成健壮白芨植株。
2.根据权利要求1所述的白芨组织培养方法,其特征在于,所述步骤A中进行灭菌处理包括步骤: 在超净工作台上采用75%乙醇消毒28-32s,0.1%升汞消毒14_16min,再用无菌水冲洗3-5次,置于灭菌的滤纸上吸干水分,备用。
3.根据权利要求2所述的白芨组织培养方法,其特征在于,所述步骤在超净工作台上采用75%乙醇消毒28-32s,0.1 %升萊消毒14_16min,再用无菌水冲洗3_5次包括: 在超净工作台上采用75%乙醇消毒30s,0.1 %升萊消毒15min,再用无菌水冲洗4次。
4.根据权利要求1所述的白芨组织培养方法,其特征在于,所述步骤B包括步骤: 在无菌条件下,用消过毒的手术刀切开所述白芨蒴果顶部,用无菌镊子将种子均匀抖落在第一培养基上,立即盖上瓶盖,做好标记后,放在培养箱进行暗培养5d,再移至培养室,培养温度23-27°C,光照度2000-25001x,光照时长11.5-12.5h/d,培养时间为29_31d,长成2cm高白芨丛生苗。
5.根据权利要求1所述的白芨组织培养方法,其特征在于,所述步骤C包括步骤: 将所述白芨丛生苗接种于第二培养基中,培养温度23-27°C,光照度2000-25001x,光照时长11.5-12.5h/d,培养时间为89-91d,至小苗基部有直径为0.5mm的原球茎出现。
6.根据权利要求1所述的白芨组织培养方法,其特征在于,所述步骤A之前还包括步骤: 预先配置第一培养基,所述第一培养基包括l/2MS、30g/L蔗糖、7g/L琼脂、lg/L活性炭,Ph值为5.8。
7.根据权利要求1所述的白芨组织培养方法,其特征在于,所述步骤A之前还包括步骤: 预先配置第二培养基,所述第二培养基包括MS、0.75mg/L NAA、0.5mg/L6_BA、25g/L蔗糖、200g/L 土豆、6.5g/L琼脂、5g/L活性炭,ph值为5.8。
8.根据权利要求1所述的白芨组织培养方法,其特征在于,所述步骤E之前包括步骤: 配置育苗基质,所述育苗基质包括腐殖土、珍珠岩和河沙。
9.根据权利要求8所述的白芨组织培养方法,其特征在于,所述育苗基质中的成分按体积份数计为腐殖土:珍珠岩:河砂=2: I: 10
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