CN103348920B - 一种奇楠沉香优质种苗快速繁殖方法 - Google Patents

一种奇楠沉香优质种苗快速繁殖方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种奇楠沉香优质种苗快速繁殖方法。本发明以优良奇楠沉香的成年树嫩芽、幼嫩茎节或半木质化茎节为外植体,经过不定芽的诱导、丛生芽繁殖、生根壮苗和移栽等各阶段,选择适合奇楠沉香丛生芽诱导、繁殖、生根、移栽等各培养阶段的培养基配方和培养条件,实现奇楠沉香种苗的组织培养快速繁殖,繁育出优质的奇楠沉香种苗满足市场的需要,也有利于奇楠沉香野生资源的保护和可持续利用。

Description

一种奇楠沉香优质种苗快速繁殖方法
技术领域
:
[0001] 本发明属于植物育种领域,具体涉及一种奇楠沉香优质种苗快速繁殖方法。
背景技术
:
[0002] 奇楠沉香(Aquilaria crassna Pierre ex Lecomte),瑞香科沉香属植物,分布于柬埔寨、老挝、泰国、越南等地,是一种名贵的木材树种,我国近几年引种栽培。奇楠沉香的用途广泛,除树木可用作木材和纸张外,还可制作香水、化妆品;沉香经加工后还可入药,对恶心、腹痛、哮喘有很好的疗效。随着以奇楠沉香为原料的新产品的不断开发,对奇楠沉香原料需求量越来越大,无限制的采挖使奇楠沉香野生资源遭到了严重的破坏,奇楠沉香已被IUCN红色漸危物种名录(The IUCN Red List of Threatened Species)列为极漸危物种(Critically Endangered),并被列入《野生动植物濒j危物种国际贸易公约》(CITES)附录II的保护范畴而被禁止贸易。
[0003] 人工栽培奇楠沉香是解决奇楠沉香紧缺的最有效的方法,但在引种栽培过程中已碰到种苗紧张的问题。奇楠沉香常用的繁殖方法为播种繁殖与扦插繁殖。但奇楠沉香自然状态下每4年才结一次种,要获得大量种子比较困难;同时,种子采摘后必须在5天内播种,否则发芽率会明显降低。而采用扦插繁殖速度慢,对母株会产生较大伤害,也尚未在生产上大规模运用。
[0004]目前,国内外尚未有奇楠沉香组织培养种苗繁殖的报道。
发明内容
:
[0005] 本发明的目的是提供一种奇楠沉香优质种苗快速繁殖方法,该方法能实现奇楠沉香种苗的组织培养快速繁殖,繁育出优质的奇楠沉香种苗满足市场的需要,也有利于奇楠沉香野生资源的保护和可持续利用。
[0006] 本发明的奇楠沉香优质种苗快速繁殖方法,其特征在于,包括以下步骤:
[0007] (a)外植体的消毒和不定芽诱导:在生长季节,选取生长旺盛优良的奇楠沉香(Aquilaria crassna Pierre ex Lecomte)成年树的嫩芽、幼嫩莖节或半木质化莖节作为外植体,经消毒无菌水洗净后,接种到不定芽诱导培养基中培养,培养温度24〜28°C,光照度1500〜20001χ,光照12〜16小时/天,直至形成不定芽,所述的不定芽诱导培养基每升含有:6_苄基嘌呤0.5〜1.0mg、蔗糖20〜30克和常量的琼脂,余量为改良的MS培养基,pH5.8〜6.0,所述的改良的MS培养基是将原MS培养基中的硝酸铵改为800〜1000毫克/升,其他不变;25天后可以再转入新的不定芽诱导培养基中,再培养25〜30天左右能在外植体上形成不定芽;
[0008] (b)继代增殖:将诱导出的不定芽切割后再继代培养于继代培养基上,进行继代增殖,培养温度24〜28°C,光照度1500〜20001x,光照12〜16小时/天,继代增殖得到的不定芽能用于生根培养或者继续继代增殖,所述的继代培养基每升含有:6_苄基嘌呤0.05〜
0.1毫克、椰子汁5〜15毫升、蔗糖20〜30克和常量的琼脂,余量为改良的MS培养基,pH5.8〜6.0,所述的改良的MS培养基是将原MS培养基中的硝酸铵改为800〜1000毫克/升,其他不变;一般30天为I个继代增殖周期,每I个继代增殖周期后的增殖倍数为3〜4倍;
[0009] (C)生根培养:当继代增殖的不定芽芽高2〜3cm时,切下接种到生根培养基上进行生根培养,培养温度26〜28°C,光照度1800〜25001x,光照12〜16小时/天,所述的生根培养基每升含有:ΙΒΑ0.5〜1.5毫克、蔗糖15〜20克和常量的琼脂,余量为1/2MS培养基,pH5.8〜6.0 ;生根培养一般培养30天后,其生根率可达到60〜80%,每株苗有根数3〜5条;
[0010] (d)试管苗移栽:当生根培养得到试管苗长至4〜5cm高时,在自然光照下炼苗7〜10天,然后洗掉试管苗根部培养基,栽入园土:泥炭土:蛭石按体积比(1-2):(1-2):1混合的基质中,浇水遮荫,保温保湿,由此得到奇楠沉香的种苗;奇楠沉香的种苗的成活率可达80〜90%。
[0011] 所述的消毒无菌水洗净优选为先在体积分数75%酒精中浸泡10〜30秒,再用质量分数0.1%升汞溶液消毒5〜lOmin,无菌水冲洗4〜5次,经过这种方法消毒后,消毒成功率可达30〜50%。
[0012] 所述的MS为国际通用的培养基,其成分和配制方法参看文献(谭文澄、戴策刚主编.观赏植物组织培养技术.北京:中国林业出版社,1991.);所述的1/2MS是将MS中的大量元素浓度减半,而其他成分浓度不变而形成的培养基。
[0013] 琼脂主要的目的是让培养基成为固体状,其量属于常规知识,一般为6〜8g/L。
[0014] 本发明以优良奇楠沉香的成年树嫩芽、幼嫩茎节或半木质化茎节为外植体,经过不定芽的诱导、丛生芽繁殖、生根壮苗和移栽等各阶段,选择适合奇楠沉香丛生芽诱导、繁殖、生根、移栽等各培养阶段的培养基配方和培养条件,实现奇楠沉香种苗的组织培养快速繁殖,繁育出优质的奇楠沉香种苗满足市场的需要,也有利于奇楠沉香野生资源的保护和可持续利用。
[0015] 实施本发明只需有简单的植物组织培养设备即可,因此本发明具有技术简单实惠,切实可行,应用价值高等优点,可以在短时间内获得大量的奇楠沉香种苗,为满足奇楠沉香市场需求提供了一条有效的途径。
具体实施方式
:
[0016] 以下实施例是对本发明进一步说明,而不是对本发明的限制。
[0017] 实施例1:以奇楠沉香(Aquilaria crassna Pierre ex Lecomte)成年树的幼嫩顶芽为外植体的组织培养
[0018] 1.外植体的消毒和不定芽诱导:在生长季节,选取生长旺盛优良的奇楠沉香成年树的幼嫩顶芽为外植体,先在体积分数75%酒精中浸泡10秒,再用质量分数0.1%升汞溶液消毒5分钟,无菌水冲洗5次,再接种到不定芽诱导培养基中培养,培养温度24°C,光照度15001x,光照12小时/天,消毒成功率30%,25天后再转入新的不定芽诱导培养基中进行相同的培养,再培养30天左右能在外植体上形成不定芽,所述的不定芽诱导培养基每升含有:6_苄基嘌呤0.5mg、蔗糖20克、琼脂6g,余量为改良的MS培养基,pH5.8,所述的改良的MS培养基是将原MS培养基中的硝酸铵改为800毫克/升,其他不变;其配制方法是将6-苄基嘌呤、蔗糖和琼脂加入到改良的MS培养基中,调pH值,灭菌消毒后备用。
[0019] 2.继代增殖:将诱导出的不定芽切割后再继代培养于继代培养基中,在培养温度24V,光照度1500,光照12小时/天条件下进行继代增殖,一般30天为I个继代增殖周期。每I个继代增殖周期后的增殖倍数为3倍。继代增殖得到的不定芽能用于生根培养或者继续继代增殖,所述的继代培养基每升含有:6_苄基嘌呤0.05毫克、椰子汁5毫升、蔗糖20克、琼脂6g,余量为改良的MS培养基,pH5.8,所述的改良的MS培养基是将原MS培养基中的硝酸铵改为800毫克/升,其他不变;其配制方法是将6-苄基嘌呤、椰子汁、蔗糖和琼脂加入到改良的MS培养基中,再调pH值,灭菌备用。
[0020] 3.生根培养:当继代增殖的不定芽芽高约2〜3厘米高时,切下接种到生根培养基中进行生根培养,培养条件:培养温度26°C,光照度18001x,光照12小时/天,所述的生根培养基每升含有:ΙΒΑ0.5毫克、蔗糖15克、琼脂6g,余量为1/2MS培养基,pH5.8,其配制方法为将IBA、蔗糖和琼脂溶于1/2MS培养基中,调pH值,灭菌消毒备用。不定芽能正常生根,培养30天时生根率可达60%,每株苗有根数3.2条。
[0021] 4.试管苗移栽:当生根培养得到的试管苗长至4〜5厘米高时,在自然光照下炼苗7天。然后打开瓶塞,用镊子把试管苗从培养瓶中取出,洗掉根部培养基,栽入园土:泥炭土:蛭石=1:1:1 (v/v/v)混合的基质中,注意浇水、遮荫、保温和保湿,由此得到奇楠沉香的种苗,成活率可达80%。
[0022] 实施例2:以奇楠沉香(Aquilaria crassna Pierre ex Lecomte)成年树的幼嫩莖节为外植体的组织培养
[0023] 1.外植体的消毒和不定芽诱导:在生长季节,选取生长旺盛优良的奇楠沉香成年树的幼嫩茎节为外植体,先在体积分数75%酒精中浸泡20秒,再用质量分数0.1%升汞溶液消毒8分钟,无菌水冲洗4次,接种到不定芽诱导培养基中,培养温度26°C,光照度18001x,光照14小时/天,25天后再转入新的不定芽诱导培养基,再培养28天左右能在外植体上形成不定芽,所述的不定芽诱导培养基每升含有:6_苄基嘌呤0.75mg、蔗糖25克、琼脂6g,余量为改良的MS培养基,pH5.9,所述的改良的MS培养基是将原MS培养基中的硝酸铵改为900毫克/升,其他不变;
[0024] 2.继代增殖:将诱导出的不定芽切割后再继代培养于继代培养基上,培养温度260C,光照度18001x,光照14小时/天,一般30天为I个继代增殖周期。每I个继代增殖周期后的增殖倍数为3〜4倍。继代增殖得到的不定芽能用于生根培养或者继续继代增殖。所述的继代培养基每升含有:6_苄基嘌呤0.075毫克、椰子汁10毫升、蔗糖25克、琼脂6g,余量为改良的MS培养基,pH5.9,所述的改良的MS培养基是将原MS培养基中的硝酸铵改为900毫克/升,其他不变;
[0025] 3.生根培养:当继代增殖的不定芽芽高约2〜3厘米高时,切下接种到生根培养基进行生根培养,培养温度26°C,光照度20001x,光照14小时/天,所述的生根培养基每升含有:IBA1毫克、蔗糖18克、琼脂6g,余量为1/2MS培养基,pH5.9 ;能正常生根,培养30天时生根率可达75%,每株苗有根数4.3条。
[0026] 4.试管苗移栽:当生根培养得到的试管苗长至4〜5厘米高时,在自然光照下炼苗8天。然后打开瓶塞,用镊子把试管苗从培养瓶中取出,洗掉根部培养基,栽入园土:泥炭土:蛭石=2:1:1 (v/v/v)混合的基质中,注意浇水、遮荫、保温和保湿,由此得到奇楠沉香的种苗,成活率可达84%。
[0027] 实施例3:以奇楠沉香(Aquilaria crassna Pierre ex Lecomte)成年树的半木质化茎节为外植体的组织培养
[0028] 1.外植体的消毒和不定芽诱导:在生长季节,选取生长旺盛优良的奇楠沉香成年树的半木质化茎节作为外植体,先在体积分数75%酒精中浸泡30秒,再用质量分数0.1%升汞溶液消毒10分钟,无菌水冲洗5次,接种到不定芽诱导培养基中,培养温度28°C,光照度20001x,光照16小时/天,25天后再转入新的不定芽诱导培养基,再培养25天左右能在外植体上形成不定芽。所述的不定芽诱导培养基每升含有:6_苄基嘌呤lmg、蔗糖30克、琼脂6g,余量为改良的MS培养基,pH6.0,所述的改良的MS培养基是将原MS培养基中的硝酸铵改为1000毫克/升,其他不变;
[0029] 2.继代增殖:将诱导出的不定芽切割后再继代培养于继代培养基上,培养温度28°C,光照度20001χ,光照16小时/天。继代增殖得到的不定芽能用于生根培养或者继续继代增殖。所述的继代培养基每升含有:6_苄基嘌呤0.1毫克、椰子汁15毫升、蔗糖30克、琼脂6g,余量为改良的MS培养基,pH6.0,所述的改良的MS培养基是将原MS培养基中的硝酸铵改为1000毫克/升,其他不变;一般30天为I个继代增殖周期。每I个继代增殖周期后的增殖倍数为4倍。
[0030] 3.生根培养:当继代增殖的不定芽芽高约2〜3厘米高时,切下接种到生根培养基上进行生根培养,培养温度28°C,光照度25001x,光照16小时/天,所述的生根培养基每升含有:IBA1.5毫克、蔗糖20克、琼脂6g,余量为1/2MS培养基,pH6.0 ;能正常生根,培养30天时生根率可达80%,每株苗有根数5条。
[0031] 4.试管苗移栽:当生根培养的试管苗长至4〜5厘米高时,在自然光照下炼苗10天。然后打开瓶塞,用镊子把试管苗从培养瓶中取出,洗掉根部培养基,栽入园土:泥炭土:蛭石=2:2:1 (v/v/v)混合的基质中,注意浇水、遮荫、保温和保湿,由此得到奇楠沉香的种苗,成活率可达90%。

Claims (2)

1.一种奇楠沉香优质种苗快速繁殖方法,其特征在于,包括以下步骤: Ca)外植体的消毒和不定芽诱导:在生长季节,选取生长旺盛优良的奇楠沉香(Aquilaria crassna Pierre ex Lecomte)成年树的嫩芽、幼嫩莖节或半木质化莖节作为外植体,经消毒无菌水洗净后,接种到不定芽诱导培养基中培养,培养温度24〜28°C,光照度1500〜20001χ,光照12〜16小时/天,直至形成不定芽,所述的不定芽诱导培养基每升含有:6_苄基嘌呤0.5〜1.0mg、蔗糖20〜30克和常量的琼脂,余量为改良的MS培养基,pH5.8〜6.0,所述的改良的MS培养基是将原MS培养基中的硝酸铵改为800〜1000毫克/升,其他不变; (b)继代增殖:将诱导出的不定芽切割后再继代培养于继代培养基上,进行继代增殖,培养温度24〜28°C,光照度1500〜20001x,光照12〜16小时/天,继代增殖得到的不定芽能用于生根培养或者继续继代增殖,所述的继代培养基每升含有:6_苄基嘌呤0.05〜0.1毫克、椰子汁5〜15毫升、蔗糖20〜30克和常量的琼脂,余量为改良的MS培养基,pH5.8〜6.0,所述的改良的MS培养基是将原MS培养基中的硝酸铵改为800〜1000毫克/升,其他不变; (c)生根培养:当继代增殖的不定芽芽高2〜3cm时,切下接种到生根培养基上进行生根培养,培养温度26〜28°C,光照度1800〜25001x,光照12〜16小时/天,所述的生根培养基每升含有:IBA0.5〜1.5毫克、蔗糖15〜20克和常量的琼脂,余量为1/2MS培养基,pH5.8 〜6.0 ; (d)试管苗移栽:当生根培养得到试管苗长至4〜5cm高时,在自然光照下炼苗7〜10天,然后洗掉试管苗根部培养基,栽入园土:泥炭土:蛭石按体积比(1-2):(1-2):1混合的基质中,浇水遮荫,保温保湿,由此得到奇楠沉香的种苗。
2.根据权利要求1所述的奇楠沉香优质种苗快速繁殖方法,其特征在于,所述的消毒无菌水洗净为先在体积分数75%酒精中浸泡10〜30秒,再用质量分数0.1%升汞溶液消毒5〜lOmin,无菌水冲洗4〜5次。
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