CN103348920B - 一种奇楠沉香优质种苗快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种奇楠沉香优质种苗快速繁殖方法。本发明以优良奇楠沉香的成年树嫩芽、幼嫩茎节或半木质化茎节为外植体，经过不定芽的诱导、丛生芽繁殖、生根壮苗和移栽等各阶段，选择适合奇楠沉香丛生芽诱导、繁殖、生根、移栽等各培养阶段的培养基配方和培养条件，实现奇楠沉香种苗的组织培养快速繁殖，繁育出优质的奇楠沉香种苗满足市场的需要，也有利于奇楠沉香野生资源的保护和可持续利用。
Description
技术领域：
本发明属于植物育种领域，具体涉及一种奇楠沉香优质种苗快速繁殖方法。
背景技术：
奇楠沉香（Aquilaria crassna Pierre ex Lecomte），瑞香科沉香属植物，分布于柬埔寨、老挝、泰国、越南等地，是一种名贵的木材树种，我国近几年引种栽培。奇楠沉香的用途广泛，除树木可用作木材和纸张外，还可制作香水、化妆品；沉香经加工后还可入药，对恶心、腹痛、哮喘有很好的疗效。随着以奇楠沉香为原料的新产品的不断开发，对奇楠沉香原料需求量越来越大，无限制的采挖使奇楠沉香野生资源遭到了严重的破坏，奇楠沉香已被IUCN红色濒危物种名录（The IUCN Red List of Threatened Species）列为极濒危物种（CriticallyEndangered），并被列入《野生动植物濒危物种国际贸易公约》（CITES）附录II的保护范畴而被禁止贸易。
人工栽培奇楠沉香是解决奇楠沉香紧缺的最有效的方法，但在引种栽培过程中已碰到种苗紧张的问题。奇楠沉香常用的繁殖方法为播种繁殖与扦插繁殖。但奇楠沉香自然状态下每4年才结一次种，要获得大量种子比较困难；同时，种子采摘后必须在5天内播种，否则发芽率会明显降低。而采用扦插繁殖速度慢，对母株会产生较大伤害，也尚未在生产上大规模运用。
目前，国内外尚未有奇楠沉香组织培养种苗繁殖的报道。
发明内容：
本发明的目的是提供一种奇楠沉香优质种苗快速繁殖方法，该方法能实现奇楠沉香种苗的组织培养快速繁殖，繁育出优质的奇楠沉香种苗满足市场的需要，也有利于奇楠沉香野生资源的保护和可持续利用。
本发明的奇楠沉香优质种苗快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
（a）外植体的消毒和不定芽诱导：在生长季节，选取生长旺盛优良的奇楠沉香（Aquilariacrassna Pierre ex Lecomte）成年树的嫩芽、幼嫩茎节或半木质化茎节作为外植体，经消毒无菌水洗净后，接种到不定芽诱导培养基中培养，培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小时/天，直至形成不定芽，所述的不定芽诱导培养基每升含有：6-苄基嘌呤0.5～1.0mg、蔗糖20～30克和常量的琼脂，余量为改良的MS培养基，pH5.8～6.0，所述的改良的MS培养基是将原MS培养基中的硝酸铵改为800～1000毫克/升，其他不变；25天后可以再转入新的不定芽诱导培养基中，再培养25～30天左右能在外植体上形成不定芽；
（b）继代增殖：将诱导出的不定芽切割后再继代培养于继代培养基上，进行继代增殖，培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小时/天，继代增殖得到的不定芽能用于生根培养或者继续继代增殖，所述的继代培养基每升含有：6-苄基嘌呤0.05～0.1毫克、椰子汁5～15毫升、蔗糖20～30克和常量的琼脂，余量为改良的MS培养基，pH5.8～6.0，所述的改良的MS培养基是将原MS培养基中的硝酸铵改为800～1000毫克/升，其他不变；一般30天为1个继代增殖周期，每1个继代增殖周期后的增殖倍数为3～4倍；
（c）生根培养：当继代增殖的不定芽芽高2～3cm时，切下接种到生根培养基上进行生根培养，培养温度26～28℃，光照度1800～2500lx，光照12～16小时/天，所述的生根培养基每升含有：IBA0.5～1.5毫克、蔗糖15～20克和常量的琼脂，余量为1/2MS培养基，pH5.8～6.0；生根培养一般培养30天后，其生根率可达到60～80%，每株苗有根数3～5条；
（d）试管苗移栽：当生根培养得到试管苗长至4～5cm高时，在自然光照下炼苗7～10天，然后洗掉试管苗根部培养基，栽入园土：泥炭土：蛭石按体积比(1-2)：(1-2)：1混合的基质中，浇水遮荫，保温保湿，由此得到奇楠沉香的种苗；奇楠沉香的种苗的成活率可达80～90%。
所述的消毒无菌水洗净优选为先在体积分数75%酒精中浸泡10～30秒，再用质量分数0.1%升汞溶液消毒5～10min，无菌水冲洗4～5次，经过这种方法消毒后，消毒成功率可达30～50%。
所述的MS为国际通用的培养基，其成分和配制方法参看文献(谭文澄、戴策刚主编.观赏植物组织培养技术.北京：中国林业出版社，1991.)；所述的1/2MS是将MS中的大量元素浓度减半，而其他成分浓度不变而形成的培养基。
琼脂主要的目的是让培养基成为固体状，其量属于常规知识，一般为6～8g/L。
本发明以优良奇楠沉香的成年树嫩芽、幼嫩茎节或半木质化茎节为外植体，经过不定芽的诱导、丛生芽繁殖、生根壮苗和移栽等各阶段，选择适合奇楠沉香丛生芽诱导、繁殖、生根、移栽等各培养阶段的培养基配方和培养条件，实现奇楠沉香种苗的组织培养快速繁殖，繁育出优质的奇楠沉香种苗满足市场的需要，也有利于奇楠沉香野生资源的保护和可持续利用。
实施本发明只需有简单的植物组织培养设备即可，因此本发明具有技术简单实惠，切实可行，应用价值高等优点，可以在短时间内获得大量的奇楠沉香种苗，为满足奇楠沉香市场需求提供了一条有效的途径。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：以奇楠沉香（Aquilaria crassna Pierre ex Lecomte）成年树的幼嫩顶芽为外植体的组织培养
1．外植体的消毒和不定芽诱导：在生长季节，选取生长旺盛优良的奇楠沉香成年树的幼嫩顶芽为外植体，先在体积分数75%酒精中浸泡10秒，再用质量分数0.1%升汞溶液消毒5分钟，无菌水冲洗5次，再接种到不定芽诱导培养基中培养，培养温度24℃，光照度1500lx，光照12小时/天，消毒成功率30%，25天后再转入新的不定芽诱导培养基中进行相同的培养，再培养30天左右能在外植体上形成不定芽，所述的不定芽诱导培养基每升含有：6-苄基嘌呤0.5mg、蔗糖20克、琼脂6g，余量为改良的MS培养基，pH5.8，所述的改良的MS培养基是将原MS培养基中的硝酸铵改为800毫克/升，其他不变；其配制方法是将6-苄基嘌呤、蔗糖和琼脂加入到改良的MS培养基中，调pH值，灭菌消毒后备用。
2．继代增殖：将诱导出的不定芽切割后再继代培养于继代培养基中，在培养温度24℃，光照度1500，光照12小时/天条件下进行继代增殖，一般30天为1个继代增殖周期。每1个继代增殖周期后的增殖倍数为3倍。继代增殖得到的不定芽能用于生根培养或者继续继代增殖，所述的继代培养基每升含有：6-苄基嘌呤0.05毫克、椰子汁5毫升、蔗糖20克、琼脂6g，余量为改良的MS培养基，pH5.8，所述的改良的MS培养基是将原MS培养基中的硝酸铵改为800毫克/升，其他不变；其配制方法是将6-苄基嘌呤、椰子汁、蔗糖和琼脂加入到改良的MS培养基中，再调pH值，灭菌备用。
3．生根培养：当继代增殖的不定芽芽高约2～3厘米高时，切下接种到生根培养基中进行生根培养，培养条件：培养温度26℃，光照度1800lx，光照12小时/天，所述的生根培养基每升含有：IBA0.5毫克、蔗糖15克、琼脂6g，余量为1/2MS培养基，pH5.8，其配制方法为将IBA、蔗糖和琼脂溶于1/2MS培养基中，调pH值，灭菌消毒备用。不定芽能正常生根，培养30天时生根率可达60%，每株苗有根数3.2条。
4．试管苗移栽：当生根培养得到的试管苗长至4～5厘米高时，在自然光照下炼苗7天。然后打开瓶塞，用镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入园土：泥炭土：蛭石=1：1：1（v/v/v）混合的基质中，注意浇水、遮荫、保温和保湿，由此得到奇楠沉香的种苗，成活率可达80%。
实施例2：以奇楠沉香（Aquilaria crassna Pierre ex Lecomte）成年树的幼嫩茎节为外植体的组织培养
1．外植体的消毒和不定芽诱导：在生长季节，选取生长旺盛优良的奇楠沉香成年树的幼嫩茎节为外植体，先在体积分数75%酒精中浸泡20秒，再用质量分数0.1%升汞溶液消毒8分钟，无菌水冲洗4次，接种到不定芽诱导培养基中，培养温度26℃，光照度1800lx，光照14小时/天，25天后再转入新的不定芽诱导培养基，再培养28天左右能在外植体上形成不定芽，所述的不定芽诱导培养基每升含有：6-苄基嘌呤0.75mg、蔗糖25克、琼脂6g，余量为改良的MS培养基，pH5.9，所述的改良的MS培养基是将原MS培养基中的硝酸铵改为900毫克/升，其他不变；
2．继代增殖：将诱导出的不定芽切割后再继代培养于继代培养基上，培养温度26℃，光照度1800lx，光照14小时/天，一般30天为1个继代增殖周期。每1个继代增殖周期后的增殖倍数为3～4倍。继代增殖得到的不定芽能用于生根培养或者继续继代增殖。所述的继代培养基每升含有：6-苄基嘌呤0.075毫克、椰子汁10毫升、蔗糖25克、琼脂6g，余量为改良的MS培养基，pH5.9，所述的改良的MS培养基是将原MS培养基中的硝酸铵改为900毫克/升，其他不变；
3．生根培养：当继代增殖的不定芽芽高约2～3厘米高时，切下接种到生根培养基进行生根培养，培养温度26℃，光照度2000lx，光照14小时/天，所述的生根培养基每升含有：IBA1毫克、蔗糖18克、琼脂6g，余量为1/2MS培养基，pH5.9；能正常生根，培养30天时生根率可达75%，每株苗有根数4.3条。
4．试管苗移栽：当生根培养得到的试管苗长至4～5厘米高时，在自然光照下炼苗8天。然后打开瓶塞，用镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入园土：泥炭土：蛭石=2：1：1（v/v/v）混合的基质中，注意浇水、遮荫、保温和保湿，由此得到奇楠沉香的种苗，成活率可达84%。
实施例3：以奇楠沉香（Aquilaria crassna Pierre ex Lecomte）成年树的半木质化茎节为外植体的组织培养
1．外植体的消毒和不定芽诱导：在生长季节，选取生长旺盛优良的奇楠沉香成年树的半木质化茎节作为外植体，先在体积分数75%酒精中浸泡30秒，再用质量分数0.1%升汞溶液消毒10分钟，无菌水冲洗5次，接种到不定芽诱导培养基中，培养温度28℃，光照度2000lx，光照16小时/天，25天后再转入新的不定芽诱导培养基，再培养25天左右能在外植体上形成不定芽。所述的不定芽诱导培养基每升含有：6-苄基嘌呤1mg、蔗糖30克、琼脂6g，余量为改良的MS培养基，pH6.0，所述的改良的MS培养基是将原MS培养基中的硝酸铵改为1000毫克/升，其他不变；
2．继代增殖：将诱导出的不定芽切割后再继代培养于继代培养基上，培养温度28℃，光照度2000lx，光照16小时/天。继代增殖得到的不定芽能用于生根培养或者继续继代增殖。所述的继代培养基每升含有：6-苄基嘌呤0.1毫克、椰子汁15毫升、蔗糖30克、琼脂6g，余量为改良的MS培养基，pH6.0，所述的改良的MS培养基是将原MS培养基中的硝酸铵改为1000毫克/升，其他不变；一般30天为1个继代增殖周期。每1个继代增殖周期后的增殖倍数为4倍。
3．生根培养：当继代增殖的不定芽芽高约2～3厘米高时，切下接种到生根培养基上进行生根培养，培养温度28℃，光照度2500lx，光照16小时/天，所述的生根培养基每升含有：IBA1.5毫克、蔗糖20克、琼脂6g，余量为1/2MS培养基，pH6.0；能正常生根，培养30天时生根率可达80%，每株苗有根数5条。
4．试管苗移栽：当生根培养的试管苗长至4～5厘米高时，在自然光照下炼苗10天。然后打开瓶塞，用镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入园土：泥炭土：蛭石=2：2：1（v/v/v）混合的基质中，注意浇水、遮荫、保温和保湿，由此得到奇楠沉香的种苗，成活率可达90%。
Claims (2)
1.一种奇楠沉香优质种苗快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
（a）外植体的消毒和不定芽诱导：在生长季节，选取生长旺盛优良的奇楠沉香（Aquilariacrassna Pierre ex Lecomte）成年树的嫩芽、幼嫩茎节或半木质化茎节作为外植体，经消毒无菌水洗净后，接种到不定芽诱导培养基中培养，培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小时/天，直至形成不定芽，所述的不定芽诱导培养基每升含有：6-苄基嘌呤0.5～1.0mg、蔗糖20～30克和常量的琼脂，余量为改良的MS培养基，pH5.8～6.0，所述的改良的MS培养基是将原MS培养基中的硝酸铵改为800～1000毫克/升，其他不变；
（b）继代增殖：将诱导出的不定芽切割后再继代培养于继代培养基上，进行继代增殖，培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小时/天，继代增殖得到的不定芽能用于生根培养或者继续继代增殖，所述的继代培养基每升含有：6-苄基嘌呤0.05～0.1毫克、椰子汁5～15毫升、蔗糖20～30克和常量的琼脂，余量为改良的MS培养基，pH5.8～6.0，所述的改良的MS培养基是将原MS培养基中的硝酸铵改为800～1000毫克/升，其他不变；
（c）生根培养：当继代增殖的不定芽芽高2～3cm时，切下接种到生根培养基上进行生根培养，培养温度26～28℃，光照度1800～2500lx，光照12～16小时/天，所述的生根培养基每升含有：IBA0.5～1.5毫克、蔗糖15～20克和常量的琼脂，余量为1/2MS培养基，pH5.8～6.0；
（d）试管苗移栽：当生根培养得到试管苗长至4～5cm高时，在自然光照下炼苗7～10天，然后洗掉试管苗根部培养基，栽入园土：泥炭土：蛭石按体积比(1-2)：(1-2)：1混合的基质中，浇水遮荫，保温保湿，由此得到奇楠沉香的种苗。
2.根据权利要求1所述的奇楠沉香优质种苗快速繁殖方法，其特征在于，所述的消毒无菌水洗净为先在体积分数75%酒精中浸泡10～30秒，再用质量分数0.1%升汞溶液消毒5～10min，无菌水冲洗4～5次。
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