CN105409779A - 牛樟树组织培养快速繁殖的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种牛樟树组织培养快速繁殖的方法，包括外植体的采集和消毒、无菌试管苗的获得、试管苗繁殖培养、试管苗的生根培养、炼苗移栽等步骤。本发明得到的种苗健壮，成活率达到99.2%，满足市场对牛樟树的种苗的大量需求，有效解决牛樟树规模化育苗问题。

Description

牛樟树组织培养快速繁殖的方法
技术领域
本发明涉及一种牛樟树组织培养繁殖的方法。
背景技术
牛樟(CinnamomumkanehiraeHay)属樟科(Lauraceae)樟属植物，又名黑樟，为台湾特有常绿阔叶大乔木，树干通直，树体高耸及初生叶颜色多变，深具观赏价值，是极具发展潜力的景观树种。因其具有特殊的香味，且不易腐朽，材质细致，纹理交错，牛樟一直是雕刻神像的最佳素材。牛樟树叶中含有独特的三萜类，对治疗癌症有显著功效。牛樟备受关注的另一个主要原因在于极具商业价值的珍贵药用真菌-牛樟芝仅寄生于牛樟树树干。
目前牛樟天然林因过度开发以及人为盗伐已濒临灭绝危机，常常一木难求。此外，牛樟树体高大，种子采集困难，加上种子的发芽率低，人工繁育困难较大。因此，建立方法简单、生根率高的牛樟树组织培养快速繁殖体系，将对牛樟的开发利用起到重要作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种种苗健壮，成活率高，满足市场对牛樟树的种苗的大量需求，有效解决牛樟树规模化育苗问题的牛樟树组织培养快速繁殖的方法。
本发明的技术解决方案是：
一种牛樟树组织培养快速繁殖的方法，其特征是：包括下列步骤：
(1)外植体的采集和消毒：
取带腋芽的茎段作为外植体，用质量百分数0.05％的洗洁精浸泡5min，自来水冲洗后，移置于超净工作台上；在75％乙醇中浸泡30秒，无菌水冲洗2遍后，用0.1％升汞消毒10min，无菌水清洗3次后，再用无菌吸收纸去掉表面水分，切成0.8-1cm带一个腋芽的茎段；
(2)无菌试管苗的获得：
将上述消毒过的外植体接种于芽分化培养基上30天诱导不定芽萌发，得到无菌试管苗；培养温度为26-28℃，光照强度为1500lux，光照周期：光/暗为12h/12h；分化培养基以WPM为基本培养基，添加植物激素包括：6-苄基腺嘌呤2.0mg/L、吲哚丁酸0.1mg/L、激动素0.2mg/L，蔗糖和琼脂浓度分别是20g/L和6.5g/L；培养基pH值为5.8；
(3)试管苗繁殖培养：
将步骤(2)得到的无菌试管苗置于增殖培养基上得到大量不定芽；培养温度为26-28℃，光照强度为1500lux，光照周期：光/暗为12h/12h；增殖培养基是以WPM为基本培养基，添加聚乙烯吡咯烷酮500mg/L、活性炭1g/L以及植物激素6-苄基腺嘌呤2.5mg/L、吲哚丁酸0.3mg/L、灵发素0.1mg/L，蔗糖和琼脂浓度分别是20g/L和6.5g/L；培养基pH值为5.8；
(4)试管苗的生根培养：
将步骤(3)得到的不定芽，置于生根培养基中诱导生根；培养温度为26-28℃，光照强度为1500lux，光照周期：光/暗为12h/12h；增殖培养基是以WPM为基本培养基，添加聚乙烯吡咯烷酮0.5g/L、活性炭1.0g/L以及植物激素：吲哚丁酸0.5-1.0mg/L、萘乙酸0.5mg/L、灵发素0.1mg/L；蔗糖和琼脂浓度分别是20g/L和6.5g/L；培养基pH值为5.8；
(5)炼苗移栽：
将步骤(4)获得的带根的3cm高试管苗炼苗5-7d，用镊子取出试管苗，洗净根部的培养基，移栽置灭菌后的质量比：蛭石:泥炭土为1:1的基质中生长2个月后，再移栽大棚进行管理。
所述WPM为木本植物用培养基，
配方：
本发明得到的种苗健壮，成活率达到99.2％，满足市场对牛樟树的种苗的大量需求，有效解决牛樟树规模化育苗问题。
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
具体实施方式
一种牛樟树组织培养快速繁殖的方法，包括下列步骤：
(1)外植体的采集和消毒：
取带腋芽的茎段作为外植体，用质量百分数0.05％的洗洁精浸泡5min，自来水冲洗后，移置于超净工作台上。在75％乙醇中浸泡30秒，无菌水冲洗2遍后，用0.1％升汞消毒10min，无菌水清洗3次后，再用无菌吸收纸去掉表面水分，切成0.8-1cm带一个腋芽的茎段。
(2)无菌试管苗的获得：
将上述消毒过的外植体接种于芽分化培养基上30天诱导不定芽萌发，得到无菌试管苗。培养温度为26-28℃，光照强度为1500lux，光照周期为12h/12h(光/暗)。分化培养基以WPM为基本培养基，添加植物激素包括：6-苄基腺嘌呤(6-BA)2.0mg/L、吲哚丁酸(IBA)0.1mg/L、激动素(KT)0.2mg/L。蔗糖和琼脂浓度分别是20g/L和6.5g/L。培养基pH值为5.8。
(3)试管苗繁殖培养：
将步骤(2)得到的无菌试管苗置于增殖培养基上得到大量不定芽。培养温度为26-28℃，光照强度为1500lux，光照周期为12h/12h(光/暗)。增殖培养基是以WPM为基本培养基，添加聚乙烯吡咯烷酮(PVP)500mg/L、活性炭1g/L以及植物激素6-苄基腺嘌呤(6-BA)2.5mg/L、吲哚丁酸(IBA)0.3mg/L、灵发素(LFS)0.1mg/L。蔗糖和琼脂浓度分别是20g/L和6.5g/L。培养基pH值为5.8。
(4)试管苗的生根培养：
将步骤(3)得到的不定芽，置于生根培养基中诱导生根。培养温度为26-28℃，光照强度为1500lux，光照周期为12h/12h(光/暗)。增殖培养基是以WPM为基本培养基，添加聚乙烯吡咯烷酮(PVP)0.5g/L、活性炭1.0g/L以及植物激素：吲哚丁酸(IBA)0.5-1.0mg/L、萘乙酸(NAA)0.5mg/L、灵发素(LFS)0.1mg/L。蔗糖和琼脂浓度分别是20g/L和6.5g/L。培养基pH值为5.8。
(5)炼苗移栽：
将步骤(4)获得的带根的长势良好的试管苗(约3cm高)炼苗5-7d，用镊子取出试管苗，洗净根部的培养基，移栽置灭菌后的蛭石：泥炭土为1:1的基质中生长2个月后，再移栽大棚进行管理。
所述WPM为木本植物用培养基，
配方：
得到的种苗健壮，成活率达到99.2％。

Claims (2)

1.一种牛樟树组织培养快速繁殖的方法，其特征是：包括下列步骤：
(1)外植体的采集和消毒：
取带腋芽的茎段作为外植体，用质量百分数0.05％的洗洁精浸泡5min，自来水冲洗后，移置于超净工作台上；在75％乙醇中浸泡30秒，无菌水冲洗2遍后，用0.1％升汞消毒10min，无菌水清洗3次后，再用无菌吸收纸去掉表面水分，切成0.8-1cm带一个腋芽的茎段；
(2)无菌试管苗的获得：
将上述消毒过的外植体接种于芽分化培养基上30天诱导不定芽萌发，得到无菌试管苗；培养温度为26-28℃，光照强度为1500lux，光照周期：光/暗为12h/12h；分化培养基以WPM为基本培养基，添加植物激素包括：6-苄基腺嘌呤2.0mg/L、吲哚丁酸0.1mg/L、激动素0.2mg/L，蔗糖和琼脂浓度分别是20g/L和6.5g/L；培养基pH值为5.8；
(3)试管苗繁殖培养：
将步骤(2)得到的无菌试管苗置于增殖培养基上得到大量不定芽；培养温度为26-28℃，光照强度为1500lux，光照周期：光/暗为12h/12h；增殖培养基是以WPM为基本培养基，添加聚乙烯吡咯烷酮500mg/L、活性炭1g/L以及植物激素6-苄基腺嘌呤2.5mg/L、吲哚丁酸0.3mg/L、灵发素0.1mg/L，蔗糖和琼脂浓度分别是20g/L和6.5g/L；培养基pH值为5.8；
(4)试管苗的生根培养：
将步骤(3)得到的不定芽，置于生根培养基中诱导生根；培养温度为26-28℃，光照强度为1500lux，光照周期：光/暗为12h/12h；增殖培养基是以WPM为基本培养基，添加聚乙烯吡咯烷酮0.5g/L、活性炭1.0g/L以及植物激素：吲哚丁酸0.5-1.0mg/L、萘乙酸0.5mg/L、灵发素0.1mg/L；蔗糖和琼脂浓度分别是20g/L和6.5g/L；培养基pH值为5.8；
(5)炼苗移栽：
将步骤(4)获得的带根的3cm高试管苗炼苗5-7d，用镊子取出试管苗，洗净根部的培养基，移栽置灭菌后的质量比：蛭石:泥炭土为1:1的基质中生长2个月后，再移栽大棚进行管理。
2.根据权利要求1所述的牛樟树组织培养快速繁殖的方法，其特征是：所述WPM为木本植物用培养基，
配方：
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Assignee: Yantai homeland Technology Co., Ltd.

Assignor: Ludong University

Contract record no.: X2019370000009

Denomination of invention: Tissue culture rapid reproduction method for Cinnamomum kanehirae

Granted publication date: 20171124

License type: Common License

Record date: 20191025

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