CN104686358A - 一种水榆花楸组培快繁方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种水榆花楸组培快繁方法，水榆花楸（Sorbus alnifolia）为蔷薇科花楸属落叶乔木，是我国东部及华北山区的珍贵用材和造林树种，也是北方城市绿化的优良树种，同时有着较高的药用价值。本发明以水榆花楸种子为外植体，通过无菌苗获得、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了水榆花楸离体再植株，建立水榆花楸组织培养快速繁殖技术体系，对促进水榆花楸规模化发展具有重要现实意义。

Description

一种水榆花楸组培快繁方法

技术领域

[0001] 本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种水榆花楸组培快繁方法。

背景技术

[0002] 水榆花楸(a7/?i/b7ia)为蔷薇科花楸属落叶乔木,主要分布于东北、华北、西北、华中、华东地区。水榆花楸在春季白花闪烁，夏季翩翩羽叶，秋季金叶红果相映，着实是一种颇为美观的园林绿化和山地造林树种。其木材色泽美观，结构细致，可做器具、家具，树皮也可做染料，成为我国珍贵的用材树种。其果实、茎皮具有很高的药用价值，具有活血散瘀、止咳降气的功效，果实还可酿酒和制果酱。

[0003] 水榆花楸是我国东部及华北山区的珍贵用材和造林树种，也是北方城市绿化的优良树种，同时有着较高的药用价值。由于采种资源不足、种子繁殖率低、育苗周期长等原因，导致水榆花楸资源日益枯竭,造成市场上水榆花楸苗木供不应求的局面。基于国内外水榆花楸组培的研究现状，加上有鉴于水榆花楸的组培快繁体系还未健全，本发明以水榆花楸种子为外植体，通过无菌苗获得、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了水榆花楸离体再植株，建立水榆花楸组织培养快速繁殖技术体系，对促进水榆花楸规模化发展具有重要现实意义。

发明内容

[0004] 本发明的目的在于提供出一种水榆花楸组培快繁方法，本发明以水榆花楸种子为外植体，通过无菌苗获得、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了水榆花楸离体再植株，建立水榆花楸组织培养快速繁殖技术体系，从而实现了本发明的目的。

[0005] 本发明的一种水榆花楸组培快繁方法，包括以下的步骤:

(I)种子消毒及播种:选用当年的水榆花楸种子，以2〜4°C低温处理30〜60天。挑选饱满的种子在流水下冲洗I〜3h后，于超净工作台中以70%〜80%乙醇溶液浸泡20〜60s,无菌水冲洗3〜5次,再用0.1%〜0.5%升萊溶液消毒5〜15min,无菌水冲洗3〜5次后用无菌滤纸吸干表面的水分，取出完整的种胚，胚根处朝下垂直插入到种子萌发培养基中进行培养。接种后置于每天光照12〜14小时，光照强度为2000〜30001χ，置于培养温度为25〜28°C，空气相对湿度为75%〜80%的条件下培养30天后统计萌发情况。

[0006] (2)诱导培养:剪取步骤(I)获得的无菌苗上I〜2cm的带芽茎段并接种到诱导培养基进行丛生芽诱导培养。接种后置于每天光照12〜14小时，光照强度为2000〜30001x，置于培养温度为25〜28°C，空气相对湿度为75%〜80%的条件下培养30天后统计诱导情况。

[0007] (3)增殖培养:剪取步骤(2)诱导培养得到的带2〜4片叶且大小、状态一致的不定芽接种到增殖培养基进行不定芽增殖培养。接种后置于每天光照12〜14小时，光照强度为2000〜30001x，置于培养温度为25〜28°C，空气相对湿度为75%〜80%的条件下培养45天后统计增殖情况。

[0008] (4)生根培养:切取步骤(3)增殖中获得高2.5〜3.5cm左右的幼苗并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照12〜14小时，光照强度为2000〜30001x，置于培养温度为25〜28°C，空气相对湿度为75%〜80%的条件下培养30天后统计生根情况。

[0009] (5)炼苗移栽:将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗，瓶苗移至常温下4〜5天后，打开瓶盖2〜3天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，移栽至盛有由泥炭土:珍珠岩:蛭石=3:1:1的移栽培养基质的容器袋中进行培养，每个容器袋移栽I株生根苗，移栽时需将基质压实，并进行单株套袋，早晚喷雾，保证生长环境潮湿。移栽7天后剪去塑料袋两角，14天后完全脱袋，移栽30天后统计成活率。

[0010] 上述步骤(I)所述的萌发培养基为:MS+1.0〜4.0mg/LGA3+1.0〜3.0g/L AC+15 〜30g/L 鹿糖 +3.5 〜6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 〜5.8。

[0011] 上述步骤(2 )所述的诱导培养基为:MS+0.1〜L Omg/LNAA+1.0〜3.0mg/LKT+3.0 〜10.0mg/L 6-BA+15 〜30g/L 蔗糖 +3.5 〜6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 〜5.8。

[0012] 上述步骤(3)所述的增殖培养基为:MS+1.0〜5.0mg/L6-BA+0.1〜1.0mg/LZT+15 〜30g/L 蔗糖 +3.5 〜6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 〜5.8。

[0013] 上述步骤(4)所述的生根培养基为:MS+0.1〜1.0mg/L IBA+15〜30g/L蔗糖+3.5 〜6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 〜5.8。

[0014] 本发明的优点是:水榆花楸(5brto5.alnifolia)为蔷薇科花楸属落叶乔木,是我国东部及华北山区的珍贵用材和造林树种，也是北方城市绿化的优良树种，同时有着较高的药用价值。由于采种资源不足、种子繁殖率低、育苗周期长等原因，导致水榆花楸资源日益枯竭,造成市场上水榆花楸苗木供不应求的局面。本发明以水榆花楸种子为外植体,通过无菌苗获得、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了水榆花楸离体再植株，建立水榆花楸组织培养快速繁殖技术体系，对促进水榆花楸规模化发展具有重要现实意义。

具体实施方式

[0015] 以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。

[0016] 实施例1

(O种子消毒及播种:选用当年的水榆花楸种子，以2°c低温处理45天。挑选饱满的种子在流水下冲洗1.5h后，于超净工作台中以75%乙醇溶液浸泡35s，无菌水冲洗3次，再用0.1%升汞溶液消毒lOmin，无菌水冲洗3次后用无菌滤纸吸干表面的水分,取出完整的种胚，胚根处朝下垂直插入到种子萌发培养基中进行培养。接种后置于每天光照13小时，光照强度为25001x，置于培养温度为26°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后种子萌发率达到93.6%。所述的萌发培养基为:MS+3.0mg/LGA3+l.5g/L AC+ 18g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.7。

[0017] (2)诱导培养:剪取步骤(I)获得的无菌苗上I〜2cm的带芽茎段并接种到诱导培养基进行丛生芽诱导培养。接种后置于每天光照13小时，光照强度为20001χ，置于培养温度为26°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后诱导率为83.7%。所述的诱导培养基为:MS+0.5mg/LNAA+2.0mg/LKT+6.0mg/L 6_BA+25g/L 蔗糖 +4.5g/L 琼脂，pH 为 5.5。

[0018] (3)增殖培养:剪取步骤(2)诱导培养得到的带2〜4片叶且大小、状态一致的不定芽接种到增殖培养基进行不定芽增殖培养。接种后置于每天光照12小时，光照强度为25001x，置于培养温度为27°C，空气相对湿度为75%的条件下培养45天增殖系数为21.5。所述的增殖培养基为:MS+5.0mg/L6-BA+0.8mg/L ZT+30g/L 蔗糖 +4.5g/L 琼脂，pH 为 5.5。

[0019] (4)生根培养:切取步骤(3)增殖中获得高2.5〜3.5cm左右的幼苗并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照13小时，光照强度为25001x，置于培养温度为26°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后生根率达94.5%。所述的生根培养基为:MS+0.8mg/L IBA+23g/L 蔗糖 +5.0g/L 琼脂，pH 为 5.5。

[0020] (5)炼苗移栽:将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗，瓶苗移至常温下5天后，打开瓶盖2天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，移栽至盛有由泥炭土:珍珠岩:蛭石=3:1:1的移栽培养基质的容器袋中进行培养，每个容器袋移栽I株生根苗，移栽时需将基质压实，并进行单株套袋，早晚喷雾，保证生长环境潮湿。移栽7天后剪去塑料袋两角，14天后完全脱袋，移栽30天后成活率为91.5%。

[0021] 实施例2

(O种子消毒及播种:选用当年的水榆花楸种子，以3°C低温处理50天。挑选饱满的种子在流水下冲洗2h后，于超净工作台中以75%乙醇溶液浸泡40s，无菌水冲洗4次，再用0.1%升汞溶液消毒15min，无菌水冲洗3次后用无菌滤纸吸干表面的水分,取出完整的种胚，胚根处朝下垂直插入到种子萌发培养基中进行培养。接种后置于每天光照14小时，光照强度为25001x，置于培养温度为27°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后种子萌发率达到95.3%。所述的萌发培养基为:MS+4.0mg/LGA3+2.0g/L AC+ 20g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.7。

[0022] (2)诱导培养:剪取步骤(I)获得的无菌苗上I〜2cm的带芽茎段并接种到诱导培养基进行丛生芽诱导培养。接种后置于每天光照13小时，光照强度为20001χ，置于培养温度为26°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后诱导率为83.7%。所述的诱导培养基为:MS+0.mg/LNAA+2.0mg/LKT+6.0mg/L 6_BA+25g/L 蔗糖 +4.5g/L 琼脂，pH 为 5.5。

[0023] (3)增殖培养:剪取步骤(2)诱导培养得到的带2〜4片叶且大小、状态一致的不定芽接种到增殖培养基进行不定芽增殖培养。接种后置于每天光照12小时，光照强度为20001χ，置于培养温度为25°C，空气相对湿度为75%的条件下培养45天增殖系数为23.25。所述的增殖培养基为:MS+3.0mg/L6-BA+0.5mg/L ZT+30g/L 蔗糖 +4.5g/L 琼脂，pH 为 5.5。

[0024] (4)生根培养:切取步骤(3)增殖中获得高2.5〜3.5cm左右的幼苗并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照12小时，光照强度为20001χ，置于培养温度为25°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后生根率达93.6%。所述的生根培养基为:MS+0.5mg/L IBA+18g/L 蔗糖 +4.5g/L 琼脂，pH 为 5.5。

[0025] (5)炼苗移栽:将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗，瓶苗移至常温下4天后，打开瓶盖2天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，移栽至盛有由泥炭土:珍珠岩:蛭石=3:1:1的移栽培养基质的容器袋中进行培养，每个容器袋移栽I株生根苗，移栽时需将基质压实，并进行单株套袋，早晚喷雾，保证生长环境潮湿。移栽7天后剪去塑料袋两角，14天后完全脱袋，移栽30天后成活率为93.8%。

Claims (5)

1.一种水榆花楸组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤: (1)种子消毒及播种:选用当年的水榆花楸种子，以2〜4°C低温处理30〜60天，挑选饱满的种子在流水下冲洗I〜3h后，于超净工作台中以70%〜80%乙醇溶液浸泡20〜60s,无菌水冲洗3〜5次,再用0.1%〜0.5%升萊溶液消毒5〜15min,无菌水冲洗3〜5次后用无菌滤纸吸干表面的水分，取出完整的种胚，胚根处朝下垂直插入到种子萌发培养基中进行培养，接种后置于每天光照12〜14小时，光照强度为2000〜30001χ，置于培养温度为25〜28°C，空气相对湿度为75%〜80%的条件下培养30天后统计萌发情况； (2)诱导培养:剪取步骤(I)获得的无菌苗上I〜2cm的带芽茎段并接种到诱导培养基进行丛生芽诱导培养，接种后置于每天光照12〜14小时，光照强度为2000〜30001x，置于培养温度为25〜28°C，空气相对湿度为75%〜80%的条件下培养30天后统计诱导情况； (3)增殖培养:剪取步骤(2)诱导培养得到的带2〜4片叶且大小、状态一致的不定芽接种到增殖培养基进行不定芽增殖培养，接种后置于每天光照12〜14小时，光照强度为2000〜30001x，置于培养温度为25〜28°C，空气相对湿度为75%〜80%的条件下培养45天后统计增殖情况； (4)生根培养:切取步骤(3)增殖中获得高2.5〜3.5cm左右的幼苗并接种至生根培养基中进行诱导生根，接种后置于每天光照12〜14小时，光照强度为2000〜30001χ，置于培养温度为25〜28°C，空气相对湿度为75%〜80%的条件下培养30天后统计生根情况； (5)炼苗移栽:将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗，瓶苗移至常温下4〜5天后，打开瓶盖2〜3天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，移栽至盛有由泥炭土:珍珠岩:蛭石=3:1:1的移栽培养基质的容器袋中进行培养，每个容器袋移栽I株生根苗，移栽时需将基质压实，并进行单株套袋，早晚喷雾，保证生长环境潮湿，移栽7天后剪去塑料袋两角，14天后完全脱袋，移栽30天后统计成活率。

2.根据权利要求1所述的一种水榆花楸组培快繁方法，其特征在于步骤(I)所述的萌发培养基为:MS+1.0 〜4.0mg/LGA3+l.0 〜3.0g/L AC+ 15 〜30g/L 蔗糖 +3.5 〜6.0g/L 琼月旨，pH为5.4〜5.8。

3.根据权利要求1所述的一种水榆花楸组培快繁方法，其特征在于步骤(2)所述的诱导培养基为:MS+0.1 〜1.0mg/LNAA+1.0 〜3.0mg/LKT+3.0 〜10.0mg/L 6-BA+15 〜30g/L鹿糖+3.5〜6.0g/L琼脂，pH为5.4〜5.8。

4.根据权利要求1所述的一种水榆花楸组培快繁方法，其特征在于步骤(3)所述的增殖培养基为:MS+1.0 〜5.0mg/L6-BA+0.1 〜1.0mg/L ZT+15 〜30g/L 蔗糖 +3.5 〜6.0g/L琼脂，pH为5.4〜5.8。

5.根据权利要求1所述的一种水榆花楸组培快繁方法，其特征在于步骤(4)所述的生根培养基为:MS+0.1〜1.0mg/L IBA+15〜30g/L蔗糖+3.5〜6.0g/L琼脂，pH为5.4〜5.8。