CN104686358A

CN104686358A - 一种水榆花楸组培快繁方法

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Publication number: CN104686358A
Application number: CN201510108310.XA
Authority: CN
Inventors: 朱炳贵
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2015-03-12
Filing date: 2015-03-12
Publication date: 2015-06-10

Abstract

本发明公开了一种水榆花楸组培快繁方法，水榆花楸（Sorbus alnifolia）为蔷薇科花楸属落叶乔木，是我国东部及华北山区的珍贵用材和造林树种，也是北方城市绿化的优良树种，同时有着较高的药用价值。本发明以水榆花楸种子为外植体，通过无菌苗获得、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了水榆花楸离体再植株，建立水榆花楸组织培养快速繁殖技术体系，对促进水榆花楸规模化发展具有重要现实意义。

Description

一种水榆花楸组培快繁方法

技术领域

本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种水榆花楸组培快繁方法。

背景技术

水榆花楸（Sorbus alnifolia）为蔷薇科花楸属落叶乔木，主要分布于东北、华北、西北、华中、华东地区。水榆花楸在春季白花闪烁，夏季翩翩羽叶，秋季金叶红果相映，着实是一种颇为美观的园林绿化和山地造林树种。其木材色泽美观，结构细致，可做器具、家具，树皮也可做染料，成为我国珍贵的用材树种。其果实、茎皮具有很高的药用价值，具有活血散瘀、止咳降气的功效，果实还可酿酒和制果酱。

水榆花楸是我国东部及华北山区的珍贵用材和造林树种，也是北方城市绿化的优良树种，同时有着较高的药用价值。由于采种资源不足、种子繁殖率低、育苗周期长等原因，导致水榆花楸资源日益枯竭，造成市场上水榆花楸苗木供不应求的局面。基于国内外水榆花楸组培的研究现状，加上有鉴于水榆花楸的组培快繁体系还未健全，本发明以水榆花楸种子为外植体，通过无菌苗获得、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了水榆花楸离体再植株，建立水榆花楸组织培养快速繁殖技术体系，对促进水榆花楸规模化发展具有重要现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供出一种水榆花楸组培快繁方法，本发明以水榆花楸种子为外植体，通过无菌苗获得、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了水榆花楸离体再植株，建立水榆花楸组织培养快速繁殖技术体系，从而实现了本发明的目的。

本发明的一种水榆花楸组培快繁方法，包括以下的步骤：

（1）种子消毒及播种：选用当年的水榆花楸种子，以2～4℃低温处理30～60天。挑选饱满的种子在流水下冲洗 1～3h后，于超净工作台中以70%～80%乙醇溶液浸泡20～60s，无菌水冲洗3～5次，再用0.1%～0.5%升汞溶液消毒5～15min，无菌水冲洗3～5次后用无菌滤纸吸干表面的水分，取出完整的种胚，胚根处朝下垂直插入到种子萌发培养基中进行培养。接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养30天后统计萌发情况。

（2）诱导培养：剪取步骤（1）获得的无菌苗上1～2cm的带芽茎段并接种到诱导培养基进行丛生芽诱导培养。接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养30天后统计诱导情况。

（3）增殖培养：剪取步骤（2）诱导培养得到的带2～4片叶且大小、状态一致的不定芽接种到增殖培养基进行不定芽增殖培养。接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养45天后统计增殖情况。

（4）生根培养：切取步骤（3）增殖中获得高2.5～3.5cm左右的幼苗并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养30天后统计生根情况。

（5）炼苗移栽：将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗，瓶苗移至常温下 4～5天后，打开瓶盖 2～3天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，移栽至盛有由泥炭土:珍珠岩:蛭石＝3:1:1的移栽培养基质的容器袋中进行培养，每个容器袋移栽1株生根苗，移栽时需将基质压实，并进行单株套袋，早晚喷雾，保证生长环境潮湿。移栽7天后剪去塑料袋两角，14天后完全脱袋，移栽30天后统计成活率。

上述步骤（1）所述的萌发培养基为：MS+1.0～4.0mg/LGA₃+1.0～3.0g/L AC+ 15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

上述步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+0.1～1.0mg/LNAA+1.0～3.0mg/LKT+3.0～10.0mg/L 6-BA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

上述步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+1.0～5.0mg/L6-BA+0.1～1.0mg/L ZT+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

上述步骤（4）所述的生根培养基为：MS+0.1～1.0mg/L IBA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

本发明的优点是：水榆花楸（Sorbus alnifolia）为蔷薇科花楸属落叶乔木，是我国东部及华北山区的珍贵用材和造林树种，也是北方城市绿化的优良树种，同时有着较高的药用价值。由于采种资源不足、种子繁殖率低、育苗周期长等原因，导致水榆花楸资源日益枯竭，造成市场上水榆花楸苗木供不应求的局面。本发明以水榆花楸种子为外植体，通过无菌苗获得、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了水榆花楸离体再植株，建立水榆花楸组织培养快速繁殖技术体系，对促进水榆花楸规模化发展具有重要现实意义。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。

实施例1

（1）种子消毒及播种：选用当年的水榆花楸种子，以2℃低温处理45天。挑选饱满的种子在流水下冲洗 1.5h后，于超净工作台中以75%乙醇溶液浸泡35s，无菌水冲洗3次，再用0.1%升汞溶液消毒10min，无菌水冲洗3次后用无菌滤纸吸干表面的水分，取出完整的种胚，胚根处朝下垂直插入到种子萌发培养基中进行培养。接种后置于每天光照13小时，光照强度为2500lx，置于培养温度为26℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后种子萌发率达到93.6%。所述的萌发培养基为：MS+3.0mg/LGA₃+1.5g/L AC+ 18g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.7。

（2）诱导培养：剪取步骤（1）获得的无菌苗上1～2cm的带芽茎段并接种到诱导培养基进行丛生芽诱导培养。接种后置于每天光照13小时，光照强度为2000lx，置于培养温度为26℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后诱导率为83.7%。所述的诱导培养基为：MS+0.5mg/LNAA+2.0mg/LKT+6.0mg/L 6-BA+25g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.5。

（3）增殖培养：剪取步骤（2）诱导培养得到的带2～4片叶且大小、状态一致的不定芽接种到增殖培养基进行不定芽增殖培养。接种后置于每天光照12小时，光照强度为2500lx，置于培养温度为27℃，空气相对湿度为75%的条件下培养45天增殖系数为21.5。所述的增殖培养基为：MS+5.0mg/L6-BA+0.8mg/L ZT+30g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.5。

（4）生根培养：切取步骤（3）增殖中获得高2.5～3.5cm左右的幼苗并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照13小时，光照强度为2500lx，置于培养温度为26℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后生根率达94.5%。所述的生根培养基为：MS+0.8mg/L IBA+23g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，pH为5.5。

（5）炼苗移栽：将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗，瓶苗移至常温下5天后，打开瓶盖2天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，移栽至盛有由泥炭土:珍珠岩:蛭石＝3:1:1的移栽培养基质的容器袋中进行培养，每个容器袋移栽1株生根苗，移栽时需将基质压实，并进行单株套袋，早晚喷雾，保证生长环境潮湿。移栽7天后剪去塑料袋两角，14天后完全脱袋，移栽30天后成活率为91.5%。

实施例2

（1）种子消毒及播种：选用当年的水榆花楸种子，以3℃低温处理50天。挑选饱满的种子在流水下冲洗 2h后，于超净工作台中以75%乙醇溶液浸泡40s，无菌水冲洗4次，再用0.1%升汞溶液消毒15min，无菌水冲洗3次后用无菌滤纸吸干表面的水分，取出完整的种胚，胚根处朝下垂直插入到种子萌发培养基中进行培养。接种后置于每天光照14小时，光照强度为2500lx，置于培养温度为27℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后种子萌发率达到95.3%。所述的萌发培养基为：MS+4.0mg/LGA₃+2.0g/L AC+ 20g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.7。

（2）诱导培养：剪取步骤（1）获得的无菌苗上1～2cm的带芽茎段并接种到诱导培养基进行丛生芽诱导培养。接种后置于每天光照13小时，光照强度为2000lx，置于培养温度为26℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后诱导率为83.7%。所述的诱导培养基为：MS+0.mg/LNAA+2.0mg/LKT+6.0mg/L 6-BA+25g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.5。

（3）增殖培养：剪取步骤（2）诱导培养得到的带2～4片叶且大小、状态一致的不定芽接种到增殖培养基进行不定芽增殖培养。接种后置于每天光照12小时，光照强度为2000lx，置于培养温度为25℃，空气相对湿度为75%的条件下培养45天增殖系数为23.25。所述的增殖培养基为：MS+3.0mg/L6-BA+0.5mg/L ZT+30g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.5。

（4）生根培养：切取步骤（3）增殖中获得高2.5～3.5cm左右的幼苗并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照12小时，光照强度为2000lx，置于培养温度为25℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后生根率达93.6%。所述的生根培养基为：MS+0.5mg/L IBA+18g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.5。

（5）炼苗移栽：将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗，瓶苗移至常温下 4天后，打开瓶盖 2天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，移栽至盛有由泥炭土:珍珠岩:蛭石＝3:1:1的移栽培养基质的容器袋中进行培养，每个容器袋移栽1株生根苗，移栽时需将基质压实，并进行单株套袋，早晚喷雾，保证生长环境潮湿。移栽7天后剪去塑料袋两角，14天后完全脱袋，移栽30天后成活率为93.8%。

Claims

1.一种水榆花楸组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）种子消毒及播种：选用当年的水榆花楸种子，以2～4℃低温处理30～60天，挑选饱满的种子在流水下冲洗 1～3h后，于超净工作台中以70%～80%乙醇溶液浸泡20～60s，无菌水冲洗3～5次，再用0.1%～0.5%升汞溶液消毒5～15min，无菌水冲洗3～5次后用无菌滤纸吸干表面的水分，取出完整的种胚，胚根处朝下垂直插入到种子萌发培养基中进行培养,接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养30天后统计萌发情况;

（2）诱导培养：剪取步骤（1）获得的无菌苗上1～2cm的带芽茎段并接种到诱导培养基进行丛生芽诱导培养,接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养30天后统计诱导情况;

（3）增殖培养：剪取步骤（2）诱导培养得到的带2～4片叶且大小、状态一致的不定芽接种到增殖培养基进行不定芽增殖培养,接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养45天后统计增殖情况;

（4）生根培养：切取步骤（3）增殖中获得高2.5～3.5cm左右的幼苗并接种至生根培养基中进行诱导生根,接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养30天后统计生根情况;

（5）炼苗移栽：将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗，瓶苗移至常温下 4～5天后，打开瓶盖 2～3天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，移栽至盛有由泥炭土:珍珠岩:蛭石＝3:1:1的移栽培养基质的容器袋中进行培养，每个容器袋移栽1株生根苗，移栽时需将基质压实，并进行单株套袋，早晚喷雾，保证生长环境潮湿,移栽7天后剪去塑料袋两角，14天后完全脱袋，移栽30天后统计成活率。

2. 根据权利要求1所述的一种水榆花楸组培快繁方法，其特征在于步骤（1）所述的萌发培养基为：MS+1.0～4.0mg/LGA₃+1.0～3.0g/L AC+ 15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

3.根据权利要求1所述的一种水榆花楸组培快繁方法，其特征在于步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+0.1～1.0mg/LNAA+1.0～3.0mg/LKT+3.0～10.0mg/L 6-BA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

4.根据权利要求1所述的一种水榆花楸组培快繁方法，其特征在于步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+1.0～5.0mg/L6-BA+0.1～1.0mg/L ZT+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

5.根据权利要求1所述的一种水榆花楸组培快繁方法，其特征在于步骤（4）所述的生根培养基为：MS+0.1～1.0mg/L IBA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。