CN101103702A - 花楸离体繁殖的方法 - Google Patents

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王爱芝
杨玲
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花楸离体繁殖的方法，它涉及花楸的繁殖方法。它解决了目前播种方式繁殖花楸存在生长周期长、成型慢，种子收集困难，果实出种率低，种子催芽处理技术复杂，种子出苗率低，苗木产量低和基因性状易产生变异的缺陷。离体繁殖：先形成不定芽，再形成微枝，然后微枝或继代培养的微枝增殖形成无根苗，再生根，即得到花楸再生植株。本发明花楸离体繁殖方法操作简单、易掌握，不受天气和季节的限制，而且不需要占用大量的土地。本发明方法繁殖出的花楸与优良母体具有相同的基因，保证了性状的统一。本发明方法繁殖花楸具有繁殖周期短，繁殖系数高，成活率高和成型快的优点。

Description

花楸离体繁殖的方法
技术领域
本发明涉及花楸的繁殖方法。
背景技术
花楸(Sorbus pohuashanensis Hendl)又名百花山花楸、花楸树，属蔷薇科苹果亚科花楸属落叶小乔木，是我国北方珍贵的观果树种之一。花楸兼具观赏性、耐寒性、适应性，所以非常适合在冬季寒冷、色调单调的北方城市内推广栽培。
目前生产和科学研究中采用播种方式繁殖花楸，播种繁殖花楸存在以下缺点：1、生长周期长，成型慢；2、由于采种母树均为天然野生花楸树，且在林内呈散生状态，所以种子收集困难，来源不稳定；3、果实出种率低、仅为1％左右；4、种子具有深休眠特性，催芽处理技术比较复杂、不易掌握；5、种子出苗率低，苗木产量低，无法满足市场需要；6、种子(杂交)基因性状易产生变异，不能保持母本优良性状。所以目前花楸难以大规模产业化繁殖、栽种。
发明内容
本发明的目的是为了解决目前播种方式繁殖花楸存在生长周期长、成型慢，种子收集困难，果实出种率低，种子催芽处理技术复杂，种子出苗率低，苗木产量低和基因性状易产生变异的缺陷，而提供的花楸离体繁殖的方法。
花楸按以下步骤离体繁殖：一、将经过消毒的花楸胚接种到每升加入0.5～1.0mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值为5.5～6.0的MS固体培养基上培养30～40天形成不定芽；二、将不定芽转移到每升加入0.5～1.0mg6-苄基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值为5.5～6.0的MS固体培养基上继代培养，至形成微枝；三、将微枝或继代培养的微枝剪切成长度为1～3cm、带有腋芽或顶芽的茎段，然后接种到每升加入0.5～1.0mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值为5.5～6.0的WPM培养基上培养至腋芽或顶芽的长度为≥1cm的无根苗；四、将无根苗转入每升加入0.1～0.5mg生长激素、pH值为5.5～6.0、无机盐浓度为1/2的MS固体培养基，并在每天光照时间为16～18h，温度为25～30℃，湿度为60～80％的条件下培养诱导生根，即得到花楸再生植株；其中步骤四中的生长激素为奈乙酸或吲哚-3-丁酸。
花楸也可以按以下步骤离体繁殖：一、将经过消毒的花楸胚接种到每升加入0.5～1.0mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值为5.5～6.0的MS固体培养基上培养30～40天形成不定芽；二、将不定芽转移到每升加入0.5～1.0mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值为5.5～6.0的MS固体培养基上继代培养，至形成微枝；三、将微枝或继代培养的微枝剪切成长度为1～3cm、带有腋芽或顶芽的茎段，然后接种到每升加入0.5～1.0mg6-苄基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值为5.5～6.0的WPM培养基上培养至腋芽或顶芽的长度为≥2cm的无根苗；四、将无根苗剪切下来，再将剪出的新茬口插入由草炭土、蛭石、珍珠岩按5∶4∶1的体积比混合而成的生根基质中，基质含水量为60％～80％、在温度为25～30℃，湿度为60～80％的条件下驯化培养3～4周，即得到花楸再生植株；其中步骤四在生根基质中拌入菌虫双杀，每立方米生根基质中菌虫双杀的用药量为2～5克。
本发明采用组织培养的方法繁殖花楸，有利于植株脱毒，减少病虫害，提高花楸苗木生长和观赏质量，达到快速繁殖和复壮的目的。本发明为实现花楸苗木大规模产业化生产奠定基础。
本发明花楸离体繁殖方法操作简单、易掌握，不受天气和季节的限制，而且不需要占用大量的土地。本发明方法繁殖出的花楸与优良母体具有相同的基因，保证了性状的统一。本发明方法繁殖花楸具有繁殖周期短，繁殖系数高(由一个胚形成多棵再生植株)，成活率高(成活率高达99％以上)和成型快的优点。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式花楸按以下步骤离体繁殖：一、将经过消毒的花楸胚接种到每升加入0.5～1.0mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值为5.5～6.0的MS固体培养基上培养30～40天形成不定芽；二、将不定芽转移到每升加入0.5～1.0mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值为5.5～6.0的MS固体培养基上继代培养，至形成微枝；三、将微枝或继代培养的微枝剪切成长度为1～3cm、带有腋芽或顶芽的茎段，然后接种到每升加入0.5～1.0mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值为5.5～6.0的WPM培养基上培养至腋芽或顶芽的长度为≥1cm的无根苗；四、将无根苗转入每升加入0.1～0.5mg生长激素、pH值为5.5～6.0、无机盐浓度为1/2的MS固体培养基，并在每天光照时间为16～18h，温度为25～30℃，湿度为60～80％的条件下培养诱导生根，即得到花楸再生植株；其中步骤四中的生长激素为奈乙酸或吲哚-3-丁酸。
本实施方式在无菌、无病毒的条件下繁殖花楸再生植株，再生植株为无病毒植株。本实施方式繁殖再生植株无需占用土地，节省空间，室内每平方米可繁殖上千株再生植株。本实施方式步骤二形成的微枝可继代培养2代以上。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中的花楸胚为成熟的花楸胚或幼嫩的花楸胚。其它步骤及参数与实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：还包括步骤五将根系发达的再生植株移栽到由泥炭土和砂子按2∶1的体积比混合而成的驯化基质中，在温度为25～30℃，湿度＞80％的条件下驯化培养。其它步骤及参数与实施方式一相同。
本实施方式驯化培养就是陆续增加再生植株的光照时间和通风量，经过驯化培养的再生植株可移栽到温室或大棚中进行培养。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式三的不同点是：步骤五中驯化基质的含水量为60％～80％。其它步骤及参数与实施方式三相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式三的不同点是：步骤五中先洗掉再生植株根系上的培养基再移栽到驯化基质中。其它步骤及参数与实施方式三相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式三的不同点是：步骤五中多于4条根、每条根长度＞3cm的再生植株为根系发达的再生植株。其它步骤及参数与实施方式三相同。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤三中将继代培养了3～4代的微枝剪切成长度为1.5～2.8cm、带有腋芽或顶芽的茎段，然后接种到WPM培养基上长成无根苗。其它步骤及参数与实施方式一相同。
本实施方式所选用的继代培养了3～4代的微枝具有高繁殖系数，繁殖系数≥10。
具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤二继代培养中每隔3～4周更换一次培养基。其它步骤及参数与实施方式一相同。
具体实施方式九：本实施方式花楸按以下步骤离体繁殖：一、将经过消毒的花楸胚接种到每升加入0.5～1.0mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值为5.5～6.0的MS固体培养基上培养30～40天形成不定芽；二、将不定芽转移到每升加入0.5～1.0mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值为5.5～6.0的MS固体培养基上继代培养，至形成微枝；三、将微枝或继代培养的微枝剪切成长度为1～3cm、带有腋芽或顶芽的茎段，然后接种到每升加入0.5～1.0mg6-苄基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值为5.5～6.0的WPM培养基上培养至腋芽或顶芽的长度为≥2cm的无根苗；四、将无根苗剪切下来，再将剪出的新茬口插入由草炭土、蛭石、珍珠岩按5∶4∶1的体积比混合而成的生根基质中，基质含水量为60％～80％、在温度为25～30℃，湿度为60～80％的条件下驯化培养3～4周，即得到花楸再生植株；其中步骤四在生根基质中拌入菌虫双杀，每立方米生根基质中菌虫双杀的用药量为2～5克。
本实施方式在无菌、无病毒的条件下繁殖花楸再生植株，再生植株为无病毒植株。本实施方式繁殖再生植株无需占用土地，节省空间，室内每平方米可繁殖上千株再生植株。本实施方式的再生植株可移栽到温室或大棚中进行培养。本实施方式步骤二形成的微枝可继代培养2代以上。本实施方式生根基质中拌入的药物(菌虫双杀)为粉末状。
具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式九的不同点是：步骤四每立方米生根基质中菌虫双杀的用药量为3～4克。其它步骤及参数与实施方式九相同。
具体实施方式十一：本实施方式与具体实施方式九的不同点是：步骤一中的花楸胚为成熟的花楸胚或幼嫩的花楸胚。其它步骤及参数与实施方式九相同。
具体实施方式十二：本实施方式与具体实施方式九的不同点是：步骤四中驯化培养是先将盖在无根苗上方的培养盒盖一端支起1/4高度培养一周，再将培养盒盖一端支起1/2高度培养一周，然后将培养盒盖一端支起3/4高度培养一周，之后将培养盒盖撤去继续培养一周。其它步骤及参数与实施方式九相同。
本实施方式中的培养盒购自于长沙长锦科技有限公司。本实施方式中的1/4、1/2和3/4高度分别为培养盒盖可支起最大高度的1/4、1/2和3/4。
具体实施方式十三：本实施方式与具体实施方式九的不同点是：步骤三中将继代培养了3～4代的微枝剪切成长度为1.5～2.8cm、带有腋芽或顶芽的茎段，然后接种到WPM培养基上长成无根苗。其它步骤及参数与实施方式九相同。
本实施方式所选用的继代培养了3～4代的微枝具有高繁殖系数，繁殖系数≥10。

Claims (10)

1.花楸离体繁殖的方法，其特征在于花楸按以下步骤离体繁殖：一、将经过消毒的花楸胚接种到每升加入0.5～1.0mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值为5.5～6.0的MS固体培养基上培养30～40天形成不定芽；二、将不定芽转移到每升加入0.5～1.0mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值为5.5～6.0的MS固体培养基上继代培养，至形成微枝；三、将微枝或继代培养的微枝剪切成长度为1～3cm、带有腋芽或顶芽的茎段，然后接种到每升加入0.5～1.0mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值为5.5～6.0的WPM培养基上培养至腋芽或顶芽的长度为≥1cm的无根苗；四、将无根苗转入每升加入0.1～0.5mg生长激素、pH值为5.5～6.0、无机盐浓度为1/2的MS固体培养基，并在每天光照时间为16～18h，温度为25～30℃，湿度为60～80％的条件下培养诱导生根，即得到花楸再生植株；其中步骤四中的生长激素为奈乙酸或吲哚-3-丁酸。
2.根据权利要求1所述的花楸离体繁殖的方法，其特征在于步骤一中的花楸胚为成熟的花楸胚或幼嫩的花楸胚。
3.根据权利要求1所述的花楸离体繁殖的方法，其特征在于还包括步骤五将根系发达的再生植株移栽到由泥炭土和砂子按2∶1的体积比混合而成的驯化基质中，在温度为25～30℃，湿度＞80％的条件下驯化培养。
4.根据权利要求3所述的花楸离体繁殖的方法，其特征在于步骤五中驯化基质的含水量为60％～80％。
5.根据权利要求3所述的花楸离体繁殖的方法，其特征在于步骤五中先洗掉再生植株根系上的培养基再移栽到驯化基质中。
6.根据权利要求1所述的花楸离体繁殖的方法，其特征在于步骤三中用继代培养了3～4代的微枝剪切成长度为1.5～2.8cm、带有腋芽或顶芽的茎段后接种到WPM培养基上长成无根苗。
7.根据权利要求1所述的花楸离体繁殖的方法，其特征在于步骤二继代培养中每隔3～4周更换一次培养基。
8.花楸离体繁殖的方法，其特征在于花楸按以下步骤离体繁殖：一、将经过消毒的花楸胚接种到每升加入0.5～1.0mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值为5.5～6.0的MS固体培养基上培养30～40天形成不定芽；二、将不定芽转移到每升加入0.5～1.0mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值为5.5～6.0的MS固体培养基上继代培养，至形成微枝；三、将微枝或继代培养的微枝剪切成长度为1～3cm、带有腋芽或顶芽的茎段，然后接种到每升加入0.5～1.0mg 6-苄基氨基嘌呤和0.05～0.1mg奈乙酸、pH值为5.5～6.0的WPM培养基上培养至腋芽或顶芽的长度为≥2cm无根苗；四、将无根苗剪切下来，再将剪出的新茬口插入由草炭土、蛭石、珍珠岩按5∶4∶1的体积比混合而成的生根基质中，基质含水量为60％～80％、在温度为25～30℃，湿度为60～80％的条件下驯化培养3～4周，即得到花楸再生植株；其中步骤四在生根基质中拌入菌虫双杀，每立方米生根基质中菌虫双杀的用药量为2～5克。
9.根据权利要求8所述的花楸离体繁殖的方法，其特征在于步骤四每立方米生根基质中菌虫双杀的用药量为3～4克。
10.根据权利要求8所述的花楸离体繁殖的方法，其特征在于步骤四中驯化培养是先将盖在无根苗上方的培养盒盖一端支起1/4高度培养一周，再将培养盒盖一端支起1/2高度培养一周，然后将培养盒盖一端支起3/4高度培养一周，之后将培养盒盖撤去继续培养一周。
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