CN100559935C

CN100559935C - 桔红灯台报春的组培快繁方法

Info

Publication number: CN100559935C
Application number: CNB2007100640578A
Authority: CN
Inventors: 张启翔; 李翠娟; 潘会堂; 梁树乐; 程堂仁; 孙明
Original assignee: Beijing Forestry University
Current assignee: Beijing Forestry University
Priority date: 2007-02-16
Filing date: 2007-02-16
Publication date: 2009-11-18
Anticipated expiration: 2027-02-16
Also published as: CN101011033A

Abstract

本发明提供了一种桔红灯台报春的组培快繁方法，包括外植体选择、表面消毒、诱导培养、继代培养、生根培养与移栽。本发明的桔红灯台报春(Primula bulleyana)组培快繁方法，一个腋芽可诱导产生40～50个左右的新芽，经过继代30～40天左右增殖系数为3～4，生根率可达到95%以上，移栽成活率几乎为100%，实现了通过快繁技术对优良桔红灯台报春(Primula bulleyana)单株的保存，同时大大提高了桔红灯台报春的育苗生产能力，缩短成苗时间又可降低成本，为报春花的大面积推广应用提供了技术支持。

Description

桔红灯台报春的组培快繁方法

技术领域

本发明涉及植物组织培养，具体地说，涉及桔红灯台报春(Primula bulleyana)的组织培养快速繁殖方法。

背景技术

桔红灯台报春(Primula bulleyana)为报春花科报春花属植物，是一种非常美丽的园林观赏花卉。桔红灯台报春(Primula bulleyana)是多年生草本花卉，整个植株呈莲座状，根状茎发达，向上生5到多个叶丛，以播种繁殖为主，一般于春季播种后，经过营养生长于次年5月份始花，生长较慢，且繁殖系数低。除播种繁殖外，报春花属无性繁殖可用的方法有：分株(叶丛)繁殖，组织培养繁殖，少数多年生种类可采用扦插繁殖，然而分株繁殖的方法远不能满足生产需求。组织培养是快速繁殖优良植物品种的一条重要途径，报春花属已有不少种进行了组织培养的相关报道，但是桔红灯台报春(Primulabulleyana)的组织培养却没有相关研究与报道，因此需要研究桔红灯台报春(Primula bulleyana)的组织培养，并形成一套专门的快繁技术体系。

发明内容

本发明的目的是提供一种桔红灯台报春(Primula bulleyana)的组培快繁方法，提高桔红灯台报春(Primula bulleyana)的繁殖系数、生根率及移栽成活率，并结合其它相关的技术措施，使桔红灯台报春(Primula bulleyana)的种苗生产、种质保存等能够得到较好的保障。

为了实现本发明目的，本发明的一种桔红灯台报春(Primulabulleyana)的组培快繁方法，外植体选择、表面消毒、诱导培养、继代培养、生根培养与移栽。

所述的外植体为桔红灯台报春的腋芽。

所述诱导和继代的培养基为MS+2.0mg/l 6-BA+0.1mg/l NAA，pH为5.8～5.9。其光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光1500～2000Lux。Lux(勒克司)为照度的单位。

所述生根培养基为MS或MS+0.2mg/l NAA，优选为MS+0.2mg/lNAA，pH为5.8～5.9。

其光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光2500～3000Lux。

经在生根培养基中培养2～3周后，炼苗3～4天移栽至温室细草炭土中培养。

外植体采用0.1％的升汞溶液消毒3～4min。

组培苗适宜的培养温度为20～23℃之间，超过25℃组培苗变黄甚至逐渐死亡。

组培苗的移栽适宜温度为18～25℃之间，过高或过低都不利于试管苗的成活。

具体地组培快繁方法为：选桔红灯台报春的腋芽为外植体，经水冲洗干净，采用0.1％的升汞溶液消毒3～4min，在无菌条件下经蒸馏水反复清洗，接种至诱导培养基MS+2.0mg/l 6-BA+0.1mg/l NAA中，pH为5.8，光照条件为自然散射光3000Lux以内加人工辅助光1500～2000Lux；之后移至相同培养基增殖，继代2～3次，生根培养基为MS+0.2mg/l NAA，pH为5.8，光照条件为自然散射光3000Lux以内加人工辅助光2500～3000Lux；温度保持在20～23℃之间；生根培养2～3周，炼苗3～4天后，移至细草炭土中培养，保持湿度高于80％，每天喷水2～3次。2周后逐步揭去覆盖膜正常培养。

一般来说以腋芽为外植体，对植株的破坏性比较大，但对于一些比较珍贵，且急需扩繁的材料，以腋芽为外植体进行扩繁，可以在短时间内获得大量的再生植株；通过腋芽再生的桔红灯台报春(Primulabulleyana)试管苗生长健壮，对后期的生长观察发现，基本能保持其优良种性不变。组培快繁的试管苗，在生长过程中，不易受到病虫害的侵染，但为了进一步防止病虫害的产生，宜在生长季内喷施多菌灵、氧化乐果等3～4次为佳；移栽时的温度应控制在18～25℃之间，过高或过低都不利于试管苗的成活，夏季不宜进行试管苗的移栽。

本发明的组培快繁方法繁育桔红灯台报春(Primula bulleyana)，2个月内增殖系数达到3～4，生根率达95％以上，移栽成活率几乎为100％，极大地提高了桔红灯台报春(Primula bulleyana)的繁殖系数，缩短成苗周期，又可降低成本，为今后大面积园林应用和工厂化育苗提供了非常有效的方法；同时，以腋芽为外植体进行增殖和快繁，能够保持桔红灯台报春(Primula bulleyana)的种性不变，为新品种培育中出现的较为珍贵稀有变种的保存提供了保障。

与现有技术相比，本发明桔红灯台报春(Primula bulleyana)的组培快繁方法的优点在于：

1.建立了一种桔红灯台报春(Primula bulleyana)的组培快繁方法，相比传统的报春花属植物育苗繁殖方法，如播种繁殖和分株繁殖，极大地提高了桔红灯台报春(Primula bulleyana)的繁殖系数，为科研研究和生产栽培提供了技术支持；

2.通过组培快繁得到的幼苗，生长强健，叶色浓绿，一致性强，成苗容易，适应性较强，病虫害少，易于管理；

3.利用组培快繁方法繁育桔红灯台报春(Primula bulleyana)，解除了季节与气候的限制，从而缩短了育苗周期，增加了繁殖量；

4.利用组培快繁方法繁育桔红灯台报春(Primula bulleyana)，可以保持优良种或品种的特性不变，从而为新品种选育研究中变异保存提供了有效的方法。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

以桔红灯台报春(Primula bulleyana)叶片为外植体探究诱导最适培养基：选用长势良好的幼苗叶片作为外植体探究诱导最佳培养基配方。取桔红灯台报春(Primula bulleyana)的幼嫩叶片自来水冲洗2～3h，于水中滴一滴清洁剂震荡15min清除表面杂质，自来水反复冲洗干净；表面消毒：70％酒精消毒10～15s，无菌水冲洗4～5次，0.1％的升汞溶液消毒3～4min，再用无菌水冲洗4～5次。然后将消毒过的叶片切成1cm²的小块(带部分叶脉)接种在丛生芽的诱导培养基上，每瓶接种5～6块，每种培养基接10瓶，暗培养。其中，6-BA的浓度梯度：0.5mg/l、1.0mg/l和2.0mg/l；NAA的浓度梯度：0.05mg/l、0.1mg/l和0.5mg/l，培养基pH为5.8，采用两因素完全随机试验设计。

不同6-BA和NAA浓度影响桔红灯台报春(Primula bulleyana)叶片的分化。接种4～5天后，叶片开始肿胀皱缩，15天左右切口处变肥变厚，30天后，有培养基种叶片开始产生愈伤并有少量不定芽的产生。不定芽分化的最佳浓度是6-BA 2.0mg/l和NAA 0.1mg/l，此培养基上桔红灯台报春(Primula bulleyana)诱导率达到22.5％，并且部分分化成芽。

实施例2

以桔红灯台报春(Primula bulleyana)腋芽为外植体进行初培养和继代培养：选取生长健壮的植株上的腋芽，自来水冲洗2～3h，消毒灭菌过程同叶片，接种在MS+6-BA 2.0mg/l+NAA 0.1mg/l丛生芽诱导培养基上，每瓶接种2～3个；光照条件为自然散射光3000Lux加上人工辅助光源1800±200Lux，光照时间14h。

当腋芽接种在分化培养基上，不断抽出新叶，10天开始，抽出新叶的叶柄粗壮，基部变红，逐渐形成浅绿色愈伤组织，2周后开始有不定芽的分化；接种40天后，在腋芽新抽出的叶柄和叶片上，分化出大量的不定芽。

统计结果显示在MS+6-BA2mg/l+NAA0.1mg/l的培养基上接种2个月后，平均每个腋芽能分化出不定芽的数目是40～50个，显著多于叶片诱导的不定芽的数量。同时，温度对于不定芽的诱导和组培苗的生长起到非常关键的作用，在20～23℃之间，组培苗叶色浓绿，生长健壮；超过25℃，组培苗变黄并逐渐死亡。在这样的培养条件下，试管苗2个月的增值系数达到3～4，极大地提高了桔红灯台报春(Primulabulleyana)的繁殖系数。

实施例3

桔红灯台报春(Primula bulleyana)组培苗的生根培养：当不定芽在分化培养基上长出2～3片叶子时，将其从愈伤组织上切除，转移至生根培养基，配方：MS、MS+NAA(0.1mg/l、0.2mg/l、0.5mg/l)中，pH为5.8；光照条件为自然散射光3000Lux加上人工辅助光源2500Lux，光照时间14h。

从生根所需要的时间来看，在培养基MS和MS+0.2mg/l NAA中生根所需时间最短，为8～10天，但在MS+0.2mg/l NAA中，组培苗生根量和长势明显好于MS基本培养基，组培苗平均高度可达4.8cm，生根率为95％以上。

实施例4

桔红灯台报春(Primula bulleyana)组培苗的移栽：生根培养两周以后，待组培苗平均每株生根4～5条，根长达到1cm时，即可开始为移栽作准备。炼苗是移栽前的过渡，可以帮助试管苗逐步适应外界环境，使试管苗更健壮，叶色更加深绿，从而提高成活率。桔红灯台报春(Primula bulleyana)试管苗炼苗3～4天后，移栽至温室细草炭土中，草炭土提前铺满穴盘，清水浸透；移栽后保持湿度80％以上，覆薄膜并每天喷水2～3次，2周以后即可逐步进行正常管理，移栽成活率几乎为100％。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims

1.一种桔红灯台报春的组培快繁方法，包括外植体选择、表面消毒、诱导培养、继代培养、生根培养与移栽，其特征在于，所述的外植体为桔红灯台报春的腋芽，所述诱导和继代的培养基为MS基本培养基，并添加浓度为2.0mg/l的6-BA和0.1mg/l的NAA，pH为5.8～5.9；所述生根培养基为MS基本培养基或MS基本培养基并添加浓度为0.2mg/l的NAA，pH为5.8～5.9；所述诱导培养、继代培养时，光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光1500～2000Lux，光照时间为14h；所述生根培养时，光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光2500～3000Lux，光照时间为14h；所述组培苗的培养温度为20～23℃；所述组培苗的移栽温度为18～25℃。

2.根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于，所述生根培养基为MS基本培养基并添加浓度为0.2mg/l的NAA。

3.根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于，所述外植体采用0.1％的升汞溶液消毒3～4min。

4.根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于，所述的组培苗经在生根培养基中培养2～3周后，炼苗3～4天移栽至温室细草炭土中培养。

5.根据权利要求1～4任意一项所述的组培快繁方法，其特征在于，选桔红灯台报春的腋芽为外植体，经水冲洗干净，采用0.1％的升汞溶液消毒3～4min，在无菌条件下经蒸馏水反复清洗，接种至诱导培养基即MS基本培养基并添加浓度为2.0mg/l的6-BA和0.1mg/l的NAA中，pH为5.8，光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光1500～2000Lux；之后移至相同培养基增殖，继代2～3次，生根培养基为MS基本培养基并添加浓度为0.2mg/l的NAA，pH为5.8，光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光2500～3000Lux；温度保持在20～23℃之间；生根培养2～3周，炼苗3～4天后，移至细草炭土中培养，保持湿度高于80％，每天喷水2～3次。