CN103651115A - 一种杜鹃花金踯躅的组培快繁方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种杜鹃花金踯躅的组织培养快繁方法，具体地说，涉及植物生物技术中植物组织培养方法。组培快繁包括选择外植体、消毒、丛生芽诱导、继代并生根培养和试管苗移栽步骤，选取金踯躅的茎段为外植体，外植体取金踯躅的茎段，丛芽诱导培养基为改良Anderson+2.0mg/lZT+0.1mg/lNAA，pH5.1-5.2；继代培养基为改良Anderson+1.0mg/lZT+0.1mg/lNAA；生根培养基为1/2改良Anderson+0.5mg/lNAA。使用该方法可达到一个茎段诱导4-5或者更过的丛枝，45天生根率达77%，移栽成活率90%，极大地提高了金踯躅的快繁能力，为新品种金踯躅的保存和规模化生产提供了技术支撑。

Description

一种杜鹃花金踯躅的组培快繁方法

技术领域

本发明涉及一种杜鹃花金踯躅的组织培养快繁方法，具体地说，涉及植物生物技术中植物组织培养方法。

背景技术

“金踯躅”是从羊踯躅实生苗中选育出的变异品种。羊踯躅隶属于杜鹃花科(Ericaceae)杜鹃花属(Rhododendron)羊踯躅亚属，落叶灌木。“金踯躅”的花金黄色，花色鲜艳，具有较高的观赏价值，由于“金踯躅”为羊踯躅芽突变得到的变异性状的新品种，并且经过新品种发明人的多年试验，金踯躅的扦插几乎不生根，扦插较为困难。迄今，金踯躅没有相关生物技术方法快繁的研究与报道，为使金踯躅优良的特性能够保存和可持续利用，需要研究该种的组织培养，并形成一套专门的组织培养快繁技术体系。

发明内容

本发明的目的在于克服金踯躅生扦插困难、成活率低的不足，提供一种杜鹃花金踯躅的组织培养方法，使之能够繁衍。该新品种金踯躅在优良性状的保存能够得到保障条件下，同时缩短离体培养时间，提高生根率和幼苗移栽率，为新品种“金踯躅”的可持续利用奠定组培种苗繁育基础。

为了实现本发明的目的，本发明提供了如下的技术方案：

.一种杜鹃花金踯躅的组培快繁方法包括选择外植体、消毒、丛生芽诱导、继代并生根培养和试管苗移栽步骤，外植体取金踯躅的茎段，丛芽诱导培养基为改良Anderson +2.0mg/l ZT +0.1mg/l NAA，pH5.1-5.2；继代培养基为改良Anderson +1.0mg/l ZT +0.1mg/l NAA；生根培养基为1/2改良Anderson +0.5mg/l NAA。

所述外植体的消毒先用5%洗衣粉水浸泡清洗20min，再用无菌水冲洗至无泡沫，然后采用75%的酒精灭菌30s，无菌水冲洗3遍后再用0.1%升汞溶液进行表面消毒8min，分两次进行，第一次消毒5min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍，再用0.1%升汞消毒3min后用无菌水清洗3-5遍。

所述丛芽诱导和继代及生根培养的温度为20-23℃，湿度30-45%。 

所述丛芽诱导和继代及生根培养的光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX。

试管苗移栽是生根组培苗在培养瓶内培养45天以后，炼苗7天，再移栽到温室大棚。

移栽基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.1-5.2。

试管苗移栽在早上8-11点以前，温度为18-25℃下进行。

杜鹃花金踯躅的组培快繁方法具体操作是：选取金踯躅茎段为外植体，用5%的洗衣粉水进行浸泡和冲洗，然后用75%酒精消毒30s，后用0.1%升汞溶液进行消毒8min，分两次进行，第一次5min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍，再用0.1%升汞消毒3分钟后用无菌水清洗3-5遍；

将金踯躅茎段置于消毒后的滤纸上，切取一叶一段，接种至诱导培养基改良Anderson +2.0mg/l ZT +0.1mg/l NAA， pH5.1-5.2，温度20-23℃，湿度30-45%，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX下培养，长出丛芽后转接入改良Anderson +1.0mg/l ZT +0.1mg/l NAA中进行增殖、继代和生根，继代3-4次，每次30天；

将继代苗转入生根培养基，茎段未木质化，生根培养基为1/2改良Anderson +0.5mg/l NAA，45天生根培养后进行组培苗炼苗7天后得试管苗，将试管苗移栽到基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.1-5.2，湿度50-60%的大棚内，每天早晚各喷水一次。

 

本发明技术方案提出是基于下述的研究基础：“金踯躅”为杜鹃花新品种，色彩艳丽丰富，但金踯躅的生根难度较大，扦插几乎不生根，为了解决其大量快繁、保存和可持续利用，故此发明金踯躅组织培养的技术。

本发明组培扩繁不仅可以在短时间内获得大量的再生植株，而且移栽生长良好且能保持其优良性状不变。试管苗移栽的温度控制在18-23℃，最好在早上8-11点进行移栽，组培苗虽然在生长过程中很少受病虫害的浸染，但为了预防病虫害的发生，在生长季内喷施多菌灵、氧化乐果2-3次为宜。夏季要注意通风。

本发明方法其优点在于：

1、建立了有效的“金踯躅”组培快繁方法，解决了其生根困难，快繁受阻的状况。

2、通过组培快繁得到的幼苗，成苗容易，一致性强，生长健壮,叶色浓绿，很少病虫害，易于管理。

3、利用组培快繁方法快繁的金踯躅不受季节限制，任何时候都可以进行组培。

4、利用组培快繁的方法快繁的金踯躅可以保持物种特性，使该新品种能够延续和可持续利用。

本发明组培快繁方法繁育的金踯躅在1个月内增殖系数为4-5，45天生根率为77%，移栽成活率为90%，极大地提高了金踯躅的快繁系数，为该物种的保存和可持续利用提供了非常有效的快繁方法。

具体实施方式

以下实施例用来进一步说明本发明的实质性内容。根据本发明技术方案和实施例的描述，也许同领域技术人员在本发明的基础上还可以对本发明技术方案进行一些修改和改进。因此，在不偏离本发明主要技术方案基础上所做的修改和改进，均应属于本发明所要求保护的范围。

本发明杜鹃花金踯躅的组培快繁方法可具体描述为：方法包括选择外植体、消毒、丛生芽诱导，继代并生根培养，试管苗移栽步骤，选取金踯躅的茎段为外植体，外植体取金踯躅的茎段，丛芽诱导培养基为改良Anderson +2.0mg/l ZT +0.1mg/l NAA， pH5.1-5.2；继代培养基为改良Anderson +1.0mg/l ZT +0.1mg/l NAA；生根培养基为1/2改良Anderson +0.5mg/l NAA。

所述外植体消毒先用5%的洗衣粉水，浸泡清洗20min，用无菌水冲洗至无泡沫，后用70%的酒精消毒30s，无菌水冲洗3-5遍后，用0.1%升汞溶液进行消毒8min，分两次进行，第一次5min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍，再用0.1%升汞消毒3min后用无菌水清洗3-5遍。

所述丛芽诱导和继代及生根培养的温度为20-23℃，湿度30-45%。

所述丛芽诱导和继代及生根培养的光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX。

移栽生根是组培苗在培养瓶内生根培养45天以后，炼苗7天，再移栽于温室大棚中。

移栽基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.1-5.2。

移栽在早上8-11点以前，温度为18-25℃下进行。

实施例1：选取金踯躅的茎段为外植体，用5%的洗衣粉水浸泡和冲洗20min，后用70%的酒精消毒30s，无菌水冲洗3-5遍后，用0.1%升汞溶液进行消毒8 min，分两次进行，第一次5 min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍，再用0.1%升汞消毒3 min后用无菌水清洗3-5遍，用无菌滤纸吸干表面水分后接种至诱导培养基改良Anderson+2.0mg/l ZT+0.1mg/l NAA，pH5.1-5.2，温度20-23℃，湿度30-45%，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX下培养，长出丛芽后转接入改良Anderson+1.0mg/l ZT+0.1mg/l NAA中进行增殖、继代，生根为改良1/2Anderson+0.5mg/l NAA，继代3-4次，周期30天；组培苗炼苗一周后，移栽于基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.1-5.2， 湿度50-60%的大棚内，每天早晚各喷水一次。

对比实验组：

以“金踯躅”的茎段为外植体探索丛芽诱导最适培养基。选用“金踯躅”的茎段为外植体探索最佳培养基配方。取“金踯躅”的茎段放入5%洗衣粉水中浸泡20min，后用70%的酒精消毒30s，无菌水冲洗3-5遍后，用0.1%升汞溶液进行消毒8 min，分两次进行，第一次5 min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍，再用0.1%升汞消毒3 min后用无菌水清洗3-5遍，用无菌滤纸吸干表面水分，在超净工作台上将茎段切成一叶一段，接种在丛芽诱导培养基上，每瓶接种4-5个，共接30株。其中，ZT的浓度梯度为0.5mg、1.0mg和1.5mg/1；NAA的浓度梯度为为0.05 mg/1，0.1 mg/1和0.5mg/1，培养基PH为5.1-5.2，采用均匀设计法。不同ZT和NAA浓度影响“金踯躅”茎段的分化，接种30天后，茎段底部有大量愈伤组织形成，并有丛芽发生。 

培养室的光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX，光照时间12h/d。

该培养基不仅提高了分化系数而且促进了生根，继代30天后，每个芽生长叶片7-8片，株高3cm，大量须根白色。另外，温度对丛芽的诱导和组培苗的生长和生根也起到了非常关键的作用，温度在21-23℃，光照为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX，光照时间12h/d，有利于丛芽分化。在此条件下叶色浓绿，生长健壮，试管苗的增殖系数为4-5，45天生根率为77%，极大地提高了金踯躅的快繁系数。

当每株金踯躅在瓶内生根较密，根长为1-3cm时可作移栽准备。首先将瓶盖打开进行炼苗，同时，在温室准备移栽准备，移栽基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.1-5.2。将移栽基质装入移栽盘内，清水浸透，将炼苗7天后的组培苗移栽于温室内的移苗盘内，移栽时间最好在早上8-11点进行，温度在18-25℃，覆薄膜并每天浇水1-2次，注意在早上8-10点以前打开薄膜以通气，湿度在50-60%之间。10天以后即可揭掉薄膜，进行正常管理。

通过上述本发明的组培快繁方法，繁育的金踯躅在1个月内增殖系数为4-5，45天生根率为77%，移栽成活率为90%，极大地提高了金踯躅的快繁系数，阻止了由于生殖隔离缺乏种子导致该物种灭绝的危险，为该物种的保存和可持续利用提供了非常有效的快繁方法。

Claims (8)

1.一种杜鹃花金踯躅的组培快繁方法，其特征在于组培快繁包括选择外植体、消毒、丛生芽诱导、继代并生根培养和试管苗移栽步骤，外植体取金踯躅的茎段，丛芽诱导培养基为改良Anderson +2.0mg/l ZT +0.1mg/l NAA，pH5.1-5.2；继代培养基为改良Anderson +1.0mg/l ZT +0.1mg/l NAA；生根培养基为1/2改良Anderson +0.5mg/l NAA。

2.根据权利要求1所述的杜鹃花金踯躅的组培快繁方法，其特征在于所述外植体的消毒先用5%洗衣粉水浸泡清洗20min，再用无菌水冲洗至无泡沫，然后采用75%的酒精灭菌30s，无菌水冲洗3遍后再用0.1%升汞溶液进行表面消毒8min，分两次进行，第一次消毒5min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍，再用0.1%升汞消毒3min后用无菌水清洗3-5遍。

3.根据权利要求1所述的杜鹃花金踯躅的组培快繁方法，其特征在于所述丛芽诱导和继代及生根培养的温度为20-23℃，湿度30-45%。

4.根据权利1所述的杜鹃花金踯躅的组培快繁方法，其特征在于所述丛芽诱导和继代及生根培养的光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX。

5.根据权利要求1所述的杜鹃花金踯躅的组培快繁方法，其特征在于试管苗移栽是生根组培苗在培养瓶内培养45天以后，炼苗7天，再移栽到温室大棚。

6.根据权利要求1或5所述的杜鹃花金踯躅的组培快繁方法，其特征在于移栽基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.1-5.2。

7.根据权利要求1所述的杜鹃花金踯躅的组培快繁方法，其特征在于试管苗移栽在早上8-11点以前，温度为18-25℃下进行。

8.根据权利要求书1-7中任意一项所述的杜鹃花金踯躅的组培快繁方法，其特征在于组培快繁方法具体操作是：选取金踯躅茎段为外植体，用5%的洗衣粉水进行浸泡和冲洗，然后用75%酒精消毒30s，后用0.1%升汞溶液进行消毒8min，分两次进行，第一次5min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍，再用0.1%升汞消毒3分钟后用无菌水清洗3-5遍；

将金踯躅茎段置于消毒后的滤纸上，切取一叶一段，接种至诱导培养基改良Anderson +2.0mg/l ZT +0.1mg/l NAA， pH5.1-5.2，温度20-23℃，湿度30-45%，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX下培养，长出丛芽后转接入改良Anderson +1.0mg/l ZT +0.1mg/l NAA中进行增殖、继代和生根，继代3-4次，每次30天；

将继代苗转入生根培养基，茎段未木质化，生根培养基为1/2改良Anderson +0.5mg/l NAA，45天生根培养后进行组培苗炼苗7天后得试管苗，将试管苗移栽到基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.1-5.2，湿度50-60%的大棚内，每天早晚各喷水一次。