CN104488704A

CN104488704A - 红马银花的组培繁殖方法

Info

Publication number: CN104488704A
Application number: CN201410706386.8A
Authority: CN
Inventors: 张敬丽; 李枝林; 张巧玲; 吴红芝; 王有国; 郑硕理; 刘巧
Original assignee: Yunnan Agricultural University
Current assignee: Yunnan Agricultural University
Priority date: 2014-11-28
Filing date: 2014-11-28
Publication date: 2015-04-08
Anticipated expiration: 2034-11-28
Also published as: CN104488704B

Abstract

提供红马银花的组培繁殖方法。包括选取红马银花的种子为外植体，经种子萌发、丛生芽诱导、壮苗并生根培养和试管苗移栽步骤。培养的温度为20-23℃，湿度为30-45％，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX。使用该方法可达到一个无菌苗诱导4-5或者更多的丛生芽，生根率达68％，移栽成活率达89％以上，极大地提高了红马银花的繁殖能力，为红马银花的保存和规模化生产提供了技术支撑。

Description

红马银花的组培繁殖方法

技术领域：

本发明属于植物生物技术中植物组织培养方法，具体地说，涉及杜鹃花红马银花的组织培养快速繁殖方法。

背景技术：

红马银花Rhododendron vialii属于杜鹃花科(Erieaceae)杜鹃花属(Rhododendron)马银花亚属，常绿小灌木。红马银花为杜鹃花中的早花种类，开花期为2-3月份，花鲜红色，新叶为红色，具有较高的观赏价值。分布范围狭窄，居群数目有限，由于植被不断受到破坏，生存受到威胁，已被IUCN和《The Red List of Rhododendrons》(2011版)列为易危VU(Vulnerable species)杜鹃花种类，亟需扩繁、保存和可持续利用。迄今，红马银花没有相关生物技术方法繁殖的研究与报道，为了使红马银花优良的特性能够保存和可持续利用，需要研究该种的组织培养，并形成一套专门的组织培养繁殖技术体系。

发明内容：

本发明的目的是提供红马银花的组织培养方法，使之在种子成苖和扦插困难的的情况下能够繁衍，使该品种的优良性状的保存能够得到保障，同时缩短离体培养时间，提高生根率和幼苗移栽成活率，为易危杜鹃花红马银花的可持续利用奠定组培种苗繁育基础。

为了实现本发明的目的，本发明提供了如下的技术方案：

红马银花的组培繁殖方法，包括选择外植体、消毒、丛生芽诱导、壮苗并生根培养、试管苗移栽步骤，选择红马银花的种子为外植体，进行种子萌发，种子萌发培养基为改良Anderson+0.1mg/L NAA；丛芽诱导培养基为改良Anderson+1.2mg/L ZT+0.1mg/LNAA，pH5.2-5.4；壮苗培养基为改良Anderson+0.5mg/L 2-IP+0.1mg/L NAA；生根培养基为改良Anderson+0.1mg/L ZT+2mg/L NAA+0.5g/L AC，其中所述的改良Anderson培养基为NH₄NO₃减半。

根据所述的组培繁殖方法，其中所述外植体消毒先用5％洗衣粉水浸泡清洗10min，再用无菌水冲洗至无泡沫，然后采用75％的酒精消毒30s，无菌水冲洗3遍后再用0.1％升汞溶液进行表面消毒5min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍。

根据所述的组培繁殖方法，其中所述丛生芽诱导和壮苗及生根培养的温度为20-23℃，湿度30-45％。

根据所述的组培繁殖方法，其中所述丛生芽诱导和壮苗及生根培养的光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX。

根据所述的组培繁殖方法，其中所述试管苗移栽是生根组培苗在培养瓶内培养60天以后，炼苗7天，再移栽于温室大棚。

根据所述的组培繁殖方法，其中试管苗移栽基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.2-5.4。

根据所述的组培繁殖方法，其中试管苗移栽在早上8-11点，温度为18-25℃下进行。

本发明的红马银花的组培繁殖方法可具体描述为：选取红马银花种子为外植体，用5％的洗衣粉水进行浸泡10分钟后反复冲洗3-5遍直至无泡沫，然后用75％酒精消毒30s，后用0.1％升汞溶液进行消毒5min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍；将种子置于消毒后的滤纸上吸干水分，接种至诱导萌发培养基改良Anderson+0.1mg/l NAA，pH5.4，温度20-23℃，湿度30-45％，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX下培养，无菌苗长到1-2cm后转接入丛芽诱导培养基改良Anderson+1.2mg/L ZT+0.1mg/LNAA中进行增殖，待丛生芽长到2-3cm转入壮苗培养基改良Anderson+0.5mg/L 2-IP+0.1mg/L NAA进行壮苗，完成壮苗周期后将苗转入生根培养基，生根培养基为改良Anderson+0.1mg/L ZT+2mg/L NAA+0.5g/L AC，50天生根培养后进行组培苗炼苗7天后，移栽于基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.4，湿度50-60％的大棚内，每天早晚各喷水一次；其中所述的改良Anderson培养基为NH₄NO₃减半。

本发明技术方案的提出是基于下述的研究基础：

红马银花为云南野生杜鹃花中的早花种类，开花期为2-3月份，花鲜红色，新叶为红色，具有较高的观赏价值。由于植被不断受到破坏，生存受到威胁，原有生境破坏严重。红马银花的扦插生根难度较大，且种子非常细小，千粒重仅为0.024g，种苗成活率非常低，为了解决其大量繁殖、保存和可持续利用，故此发明红马银花组织培养的技术。组培扩繁不仅可以在短时间内获得大量的再生植株，而且移栽生长良好且能保持其优良性状不变。试管苗移栽的温度控制在18-23℃，最好在早上8-11点进行移栽，组培苗虽然在生长过程中很少受病虫害的浸染，但为了预防病虫害的发生，在生长季内喷施多菌灵2-3次为宜。夏季要注意通风。

本发明红马银花的组培繁殖方法的优点在于：

1、建立了有效的红马银花组培快繁方法，解决了其种苗成活率低，扦插生根困难，繁殖受阻的状况。

2、通过组培快繁得到的幼苗，成苗容易，一致性强，生长健壮，叶色浓绿，很少病虫害，易于管理。

3、利用组培快繁方法繁殖的红马银花不受季节限制，任何时候都可以进行组培。

4、利用组培快繁的方法繁殖的红马银花可以保持物种特性，使该种能够延续和可持续利用。

5、通过本发明的组培快繁方法繁育的红马银花在1个月内增殖系数为4-5，生根率为68％，移栽成活率达89％以上，极大地提高了红马银花的繁殖系数，为该物种的保存和可持续利用提供了非常有效的繁殖方法。

具体实施方式:

下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。

实施例1：

品种来源：

红马银花(R.vialii)属于杜鹃花科(Erieaceae)杜鹃花属(Rhododendron L.)马银花亚属(Subgen.Azaleastrum Planch.ex K.Koch)马银花组(Sect.Azaleastrum(Planch.)Maxim.)，是一种常绿灌木树种。红马银花为杜鹃花中的早花种类，开花期为2-3月份，花鲜红色，新叶为红色，具有较高的观赏价值。分布范围狭窄，居群数目有限，由于植被不断受到破坏，生存受到威胁，已被IUCN和《The Red List of Rhododendrons》(2011版)列为易危VU(Vulnerable species)杜鹃花种类。

选取红马银花Rhododendron vialii(Ericaceae)的种子(采自于云南省玉溪市洛河乡，经纬度24°18′N，102°20′E，2012年12月)为外植体，用5％的洗衣粉水浸泡和冲洗10min，后用70％的酒精消毒30s，无菌水冲洗3遍后，用0.1％升汞溶液进行消毒5min，不断震荡后用无菌水清洗3遍，用无菌滤纸吸干表面水分后接种至萌发培养基改良Anderson+0.1mg/l NAA，pH5.2，温度20℃，湿度30％，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX下培养，长出无菌苗后转接入Anderson+1.2mg/L ZT+0.1mg/LNAA中进行增殖，再将长到2cm的幼苗转到改良Anderson+0.5mg/L 2-IP+0.1mg/L NAA中进行壮苗，生根为改良Anderson+0.1mg/L ZT+2mg/l NAA+0.5g/L AC，壮苗3-4次，周期30天；组培苗炼苗7天后，在早上10点，温度为18℃下进行移栽，移栽于基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.2，湿度60％的大棚内，每天早晚各喷水一次。

所述的改良Anderson培养基为NH4NO3减半。

通过上述的组培快繁方法繁育的红马银花在1个月内增殖系数为4，生根率为65％，移栽成活率为86％，极大地提高了迷人杜鹃的繁殖系数，为该物种的保存和可持续利用提供了非常有效的繁殖方法。

实施例2：

选取红马银花Rhododendron vialii(Ericaceae)的种子(采自于云南省玉溪市洛河乡，经纬度24°18′N，102°20′E，2012年12月)为外植体，用5％的洗衣粉水浸泡和冲洗10min，后用70％的酒精消毒30s，无菌水冲洗5遍后，用0.1％升汞溶液进行消毒5min，不断震荡后用无菌水清洗5遍，用无菌滤纸吸干表面水分后接种至萌发培养基改良Anderson+0.1mg/l NAA，pH5.4，温度23℃，湿度30％，光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX下培养，长出无菌苗后转接入Anderson+1.2mg/L ZT+0.1mg/LNAA中进行增殖，再将长到3cm的幼苗转到改良Anderson+0.5mg/L 2-IP+0.1mg/L NAA中进行壮苗，生根为改良Anderson+0.1mg/L ZT+2mg/l NAA+0.5g/L AC，壮苗3-4次，周期30天；组培苗炼苗7天后，在早上11点，温度为25℃下进行移栽，移栽于基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.4，湿度60％的大棚内，每天早晚各喷水一次。

所述的改良Anderson培养基为NH₄NO₃减半。

通过上述的组培快繁方法繁育的红马银花在1个月内增殖系数为5，生根率为71％，移栽成活率为92％，极大地提高了迷人杜鹃的繁殖系数，为该物种的保存和可持续利用提供了非常有效的繁殖方法。

Claims

1.红马银花的组培繁殖方法，包括选择外植体、消毒、丛生芽诱导、壮苗并生根培养、试管苗移栽步骤，其特征在于选择红马银花的种子为外植体，进行种子萌发，种子萌发培养基为改良Anderson+0.1mg/L NAA；丛芽诱导培养基为改良Anderson+1.2mg/LZT+0.1mg/L NAA，pH5.2-5.4；壮苗培养基为改良Anderson+0.5mg/L 2-IP+0.1mg/L NAA；生根培养基为改良Anderson+0.1mg/L ZT+2mg/L NAA+0.5g/L AC，其中所述的改良Anderson培养基为NH₄NO₃减半。

2.根据权利要求1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述外植体消毒先用5％洗衣粉水浸泡清洗10min，再用无菌水冲洗至无泡沫，然后采用75％的酒精消毒30s，无菌水冲洗3遍后再用0.1％升汞溶液进行表面消毒5min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍。

3.根据权利要求1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述丛生芽诱导和壮苗及生根培养的温度为20-23℃，湿度30-45％。

4.根据权利1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述丛生芽诱导和壮苗及生根培养的光照条件为自然光2000‐2500LUX+人工辅助光1500‐2000LUX。

5.根据权利要求1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述试管苗移栽是生根组培苗在培养瓶内培养60天以后，炼苗7天，再移栽于温室大棚。

6.根据权利要求1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述试管苗移栽基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.2-5.4。

7.根据权利要求1所述的组培繁殖方法，其特征在于所述试管苗移栽在早上8-11点，温度为18-25℃下进行。

8.根据权利要求书1-7中的任意一项所述的组培繁殖方法，其特征在于选取红马银花种子为外植体，用5％的洗衣粉水进行浸泡10分钟后反复冲洗3-5遍直至无泡沫，然后用75％酒精消毒30s，后用0.1％升汞溶液进行消毒5min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍；将种子置于消毒后的滤纸上吸干水分，接种至诱导萌发培养基改良Anderson+0.1mg/lNAA，pH5.4，温度20-23℃，湿度30-45％，光照条件为自然光2000‐2500LUX+人工辅助光1500‐2000LUX下培养，无菌苗长到1-2cm后转接入丛芽诱导培养基改良Anderson+1.2mg/L ZT+0.1mg/L NAA中进行增殖，待丛生芽长到2-3cm转入壮苗培养基改良Anderson+0.5mg/L 2-IP+0.1mg/L NAA进行壮苗，完成壮苗周期后将苗转入生根培养基，生根培养基为改良Anderson+0.1mg/L ZT+2mg/L NAA+0.5g/L AC，50天生根培养后进行组培苗炼苗7天后，移栽于基质为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.4，湿度50-60％的大棚内，每天早晚各喷水一次；其中所述的改良Anderson培养基为NH₄NO₃减半。