CN101015280B - 滇北球花报春的组培快繁方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种滇北球花报春的组培快繁方法,包括外植体选择、表面消毒、不定芽诱导、继代培养、生根培养与试管苗移栽。本发明的滇北球花报春(Primula denticulata ssp.sino-denticulata)组培快繁方法,一个腋芽可诱导产生40~50个左右的新芽,经过继代30~40天左右增殖系数为3~4,生根率可达到95%以上,移栽成活率几乎为100%,实现了通过快繁技术对优良滇北球花报春(Primuladenticulata ssp.sino-denticulata)单株的保存,同时大大提高了滇北球花报春的育苗生产能力,缩短成苗时间又可降低成本,为报春花的大面积推广应用提供了技术支持。

Description

滇北球花报春的组培快繁方法
技术领域
[0001] 本发明涉 及植物组织培养,具体地说,涉及滇北球花报春(Primula denticulate ssp. Sino-denticulata)的组织培养快速繁殖方法。
背景技术
[0002] 、漠北球花ί艮春(Primula denticulata ssp. sino-denticulata)为ί艮春花科ί艮春 花属植物,是一种非常美丽的园林观赏花卉。滇北球花报春(Primula denticulata ssp. sino-denticulata)是多年生草本花卉,整个植株呈莲座状,根状茎发达,向上生5到多个 叶丛,以播种繁殖为主,一般于春季播种后,经过营养生长于次年2月底始花,生长较慢,且 繁殖系数低。除播种繁殖外,报春花属无性繁殖,可用的方法有:分株(叶丛)繁殖,组织培 养繁殖,少数多年生种类可采用扦插繁殖,然而分株繁殖的方法远不能满足生产需求。
[0003] 组织培养是快速繁殖优良植物品种的一条重要途径,报春花属已有不少种进行了 组织培养的相关报道,但是滇北球花报春(Primuladenticulata ssp. sino-denticulata) 的组织培养却没有相关研究与报道,因此需要研究滇北球花报春(Primula denticulata ssp. sino-denticulata)的组织培养,并形成一套专门的快繁技术体系。
发明内容
[0004] 本发明的目的是提供一种滇北球花报春(Primula denticulata ssp. sino-denticulata)的组培快繁方法,提高、漠北球花ί艮春(Primuladenticulata ssp. sino-denticulata)的繁殖系数、生根率及移栽成活率,并结合其它相关的技术措施,使滇 北球花报春(Primula denticulata ssp. sino-denticulata)的种苗生产、种质保存等能够 得到较好的的保障。
[0005] 为了实现本发明目的,本发明的一种滇北球花报春(Primuladenticulata ssp. sino-denticulata)组培方法包括外植体选择、表面消毒、不定芽诱导、继代培养、生根培养 与试管苗移栽。
[0006] 所述的外植体为滇北球花报春的腋芽。
[0007] 所述不定芽诱导和继代的培养基为MS+2. Omg/1 6-BA+0. lmg/ΙΝΑΑ, pH为5. 8〜 5. 9。其光照条件为自然散射光2500〜3000 Lux加人工辅助光1500〜2000 Lux0 Lux (勒 克司)为照度的单位。
[0008] 所述生根培养基为MS或MS+0. 2mg/l NAA,优选为MS+0. 2mg/lNAA, pH为5. 8〜 5 · 9 ο
[0009] 其光照条件为自然散射光2500〜3000LUX加人工辅助光2500〜3000Lux。
[0010] 经在生根培养基中培养2〜3周后,炼苗3〜4天移栽至温室细草炭土中培养。
[0011] 外植体采用0. 升汞溶液消毒4〜5min。
[0012] 组培苗适宜的培养温度为20〜23°C之间,超过25°C组培苗变黄甚至逐渐死亡。
[0013] 组培苗的移栽适宜温度为18〜25°C之间,过高或过低都不利于试管苗的成活。[0014] 具体地组培快繁方法为:选滇北球花报春的腋芽为外植体,经水冲洗干净,采 用0. 1 %升汞溶液消毒4〜5min,在无菌条件下经蒸馏水反复清洗,接种至诱导培养基 MS+2. Omg/1 6-BA+O. lmg/1 NAA 中,pH 为 5. 8,光照条件为自然散射光 2500 〜3000Lux 加人工辅助光1500〜2000LUX ;之后移至相同培养基增殖,继代2〜3次,生根培养基为 MS+0. 2mg/l NAA, pH为5. 8,光照条件为自然散射光3000Lux以内加人工辅助光2500〜 3000Lux ;温度保持在20〜23°C之间;生根培养2〜3周,炼苗3〜4天后,移至细草炭土 中培养,保持湿度高于80%,每天喷水2〜3次。2周后逐步揭去覆盖膜正常培养。
[0015] 一般来说以腋芽为外植体,对植株的破坏性比较大,但对于一些比较珍贵,且急需 扩繁的材料,以腋芽为外植体进行扩繁,可以在短时间内获得大量的再生植株;通过腋芽再 生的滇北球花报春(Primuladenticulata ssp. sino-denticulata)试管苗生长健壮,对后 期的生长观察发现,基本能保持其优良种性不变。组培快繁的试管苗,在生长过程中,不易 受到病虫害的侵染,但为了进一步防止病虫害的产生,宜在生长季内喷施多菌灵、氧化乐果 等3〜4次为佳;试管苗移栽时的温度应控制在18〜25°C之间,过高或过低都不利于试管 苗的成活,夏季不宜进行试管苗的移栽。
[0016] 本发明的组培快繁方法繁育滇北球花报春(Primula denticulatassp. sino-denticulata),2个月内增殖系数达到3〜4,生根率达95 %以上,移栽成活率几乎 为 100%,极大地提高了滇北球花报春(Primuladenticulata ssp. sino-denticulata)的 繁殖系数,缩短成苗周期,又可降低成本,为今后大面积园林应用和工厂化育苗提供了非 常有效的方法;同时,以腋芽为外植体进行增殖和快繁,能够保持滇北球花报春(Pri mula denticulate ssp. sino-denticulata)的种性不变,为新品种培育中出现的较为珍贵稀有 变种的保存提供了保障。
[0017] 与现有技术相比,本发明滇北球花报春(Primula denticulate ssp. sino-denticulata)的组培快繁方法的优点在于:
[0018] 1.建立了一种、漠北球花ί艮春(Primula denticulata ssp. sino-denticulata)的 组培快繁方法,相比传统的报春花属植物育苗繁殖方法,如播种繁殖和分株繁殖,极大地提 高了滇北球花报春(Primula denticulata ssp. sino-denticulata)的繁殖系数,为科研研 究和生产栽培提供了技术支持;
[0019] 2.通过组培快繁得到的幼苗,生长强健,叶色浓绿,一致性强,成苗容易,适应性较 强,病虫害少,易于管理;
[0020] 3.利用组培快繁方法繁育滇北球花报春(Primula denticulata ssp. sino-denticulata),解除了季节与气候的限制,从而缩短了育苗周期,增加了繁殖量;
[0021] 4.利用组培快繁方法繁育滇北球花报春(Primula denticulata ssp. sino-denticulata),可以保持优良种或品种的特性不变,从而为新品种选育研究中变异保 存提供了有效的方法。
具体实施方式
[0022] 以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。
[0023] 实施例1
[0024] 以、漠北球花ί艮春(Primula denticulata ssp. sino-denticulata)叶片为夕卜植体探究不定芽诱导最适培养基:选用长势良好的幼苗叶片作为外植体探究不定芽诱导最佳培 养基配方。取滇北球花报春(Primuladenticulata ssp. sino-denticulata)的幼嫩叶片自 来水冲洗5〜6h,于水中滴一滴清洁剂震荡15min,用软毛刷轻轻刷去表面杂质,自来水反 复冲洗干净;表面消毒:70%酒精消毒15〜20s,无菌水冲洗4〜5次,0. 升汞溶液消毒 4〜5min,再用无菌水冲洗4〜5次。然后将消毒过的叶片切成Icm2的小块(带部分叶脉) 接种在丛生芽的诱导培养基上,每瓶接种5〜6块,每种培养基接10瓶,暗培养。其中,6-BA 的浓度梯度:0. 5mg/l、l. Omg/1 和 2. Omg/1 ;NAA 的浓度梯度:0. 05mg/l、0. lmg/1 和 0. 5mg/ 1,培养基PH为5. 8,采用两因素完全随机试验设计。
[0025] 不同6-BA和NAA浓度影B向滇北球花报春(Primula denticulata ssp. sino-denticulata)叶片的分化。接种4〜5天后,叶片开始肿胀皱缩,15天左右切口处变 肥变厚,40天后,有培养基种叶片开始产生愈伤并有少量不定芽的产生。不定芽分化的最 佳浓度是6-BA2. Omg/1和NAAO. lmg/1,此培养基上滇北球花报春(Primula denticulata ssp. sino-denticulata)诱导率达到45. 1%,并且部分分化成芽。
[0026] 实施例2
[0027] 以、漠北球花ί艮春(Primula denticulata ssp. sino-denticulata)月夜芽为夕卜植体 进行初培养和继代培养:选取生长健壮的植株上的腋芽,自来水冲洗5〜6h,消毒灭菌过程 同叶片,接种在MS+6-BA 2. Omg/l+NAAO. lmg/1丛生芽诱导培养基上,每瓶接种2〜3个;光 照条件为自然散射光3000LUX加上人工辅助光源1800士200LUX,光照时间14h。
[0028] 当腋芽接种在分化培养基上,不断抽出新叶,10天开始,抽出新叶的叶柄粗壮,基 部变红,逐渐形成浅绿色愈伤组织,2周后开始有不定芽的分化;接种40天后,在腋芽新抽 出的叶柄和叶片上,分化出大量的不定芽。
[0029] 统计结果显示在MS+6-BA 2mg/l+NAA 0. lmg/1的培养基上接种2个月后,平均 每个腋芽能分化出不定芽的数目是40〜50个,显著多于叶片诱导的不定芽的数量。同 时,温度对于不定芽的诱导和组培苗的生长起到非常关键的作用,在20〜23°C之间,组培 苗叶色浓绿,生长健壮;超过25°C,组培苗变黄并逐渐死亡。在这样的培养条件下,试管苗 2个月的增值系数达到3〜4,极大地提高了滇北球花报春(Primula denticulata ssp. sino-denticulata)
[0030] 实施例3
[0031] 、漠北球花ί艮春(Primula denticulata ssp. sino-denticulata)组培苗的生牛艮培 养:当不定芽在分化培养基上长出2〜3片叶子时,将其从愈伤组织上切除,转移至生根培 养基,配方:MS、MS+NAA(0. lmg/1,0. 2mg/l、0. 5mg/l)中,pH为5. 8 ;光照条件为自然散射光 3000Lux加上人工辅助光源2500Lux,光照时间14h。
[0032] 从生根所需要的时间来看,在培养基MS和MS+0. 2mg/l NAA中生根所需时间最短, 为8〜10天,但在MS+0. 2mg/l NAA中,组培苗生根量和长势明显好于MS基本培养基,组培 苗平均高度可达4. 8cm,生根率为95%以上。
[0033] 实施例4
[0034] 、漠北球花ί艮春(Primula denticulata ssp. sino-denticulata)组培苗的移 栽:生根培养两周以后,待组培苗平均每株生根4〜5条,根长达到Icm时,即可开始为 移栽作准备。炼苗是试管苗移栽前的过渡,可以帮助试管苗逐步适应外界环境,使试管苗更健壮,叶色更加深绿,从而提高成活率。滇北球花报春(Primula denticulate ssp. sino-denticulata)试管苗炼苗3〜4天后,移栽至温室细草炭土中,草炭土提前铺满穴盘, 清水浸透;试管苗移栽后保持湿度80%以上,覆薄膜并每天喷水2〜3次,2周以后即可逐 步进行正常管理,移栽成活率几乎为100%。
[0035] 虽然,上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述,但在 本发明基础上,可以对之作一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因 此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。

Claims (1)

1. 一种滇北球花报春的组培快繁方法,包括外植体选择、表面消毒、不定芽诱导、继代 培养、生根培养与试管苗移栽,其特征在于,选滇北球花报春的腋芽为外植体,经水冲洗干 净,采用0. 的升汞溶液消毒4〜5min,在无菌条件下经蒸馏水反复清洗,接种至诱导培 养基MS+2. Omg/1 6-BA+O. lmg/1 NAA中,pH为5. 8,光照条件为自然散射光2500〜3000Lux 加人工辅助光1500〜2000LUX ;之后移至相同培养基增殖,继代2〜3次,生根培养基为 MS+0. 2mg/l NAA,pH为5. 8,光照条件为自然散射光2500〜3000Lux加人工辅助光2500〜 3000Lux ;温度保持在20〜23°C之间;生根培养2〜3周,炼苗3〜4天后,移至细草炭土 中培养,移栽温度为18〜25°C,保持湿度高于80%,每天喷水2〜3次。
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