CN101011034A

CN101011034A - 霞红灯台报春的组培快繁方法

Info

Publication number: CN101011034A
Application number: CN 200710064058
Authority: CN
Inventors: 张启翔; 李翠娟; 潘会堂; 梁树乐; 程堂仁; 孙明
Original assignee: Beijing Forestry University
Current assignee: Beijing Forestry University
Priority date: 2007-02-16
Filing date: 2007-02-16
Publication date: 2007-08-08

Abstract

本发明提供了一种霞红灯台报春(Primula beesiana)组培快繁方法。本发明选取我国云南地区的霞红灯台报春(Primula beesiana)的腋芽为外植体，经过不定芽诱导、继代培养、生根培养与试管苗移栽。本发明的霞红灯台报春(Primula beesiana)组培快繁方法，一个腋芽可诱导产生40～50个左右的新芽，2个月后增殖系数为3～4，生根率可达到95％以上，移栽成活率几乎为100％，大大提高了霞红灯台报春的育苗生产能力，缩短成苗时间又可降低成本，为霞红灯台报春优良单株的保存提供了技术保障。

Description

霞红灯台报春的组培快繁方法

技术领域

本发明涉及植物组织培养，具体地说，涉及霞红灯台报春(Primula beesiana)的组织培养快速繁殖方法。

背景技术

霞红灯台报春(Primula beesiana)为报春花科报春花属植物，原产海拔在2700～3000m的我国云南地区。霞红灯台报春(Primulabeesiana)是多年生草本花卉，霞红灯台报春一般采用播种和分株繁殖，但以播种繁殖为主，一般于春季播种后，经过营养生长于次年5月份开花，生长周期长，且繁殖系数低。同时，这些方法远不能满足生产需求，且成苗不整齐。

为了提高霞红灯台报春的繁殖系数，并快速繁殖优良植物品种，需要研究霞红灯台报春(Primula beesiana)的组织培养，并形成一套专门的快繁技术体系。

发明内容

本发明的目的是提供一种霞红灯台报春(Primula beesiana)的组培快繁方法，提高霞红灯台报春(Primula beesiana)的繁殖系数、生根率及移栽成活率，并结合其它相关的技术措施，使霞红灯台报春(Primula beesiana)的种苗生产、种质保存等能够得到较好的保障。

为了实现本发明目的，本发明的一种霞红灯台报春(Primulabeesiana)组培方法，包括外植体的消毒、不定芽诱导、继代培养、生根培养与试管苗移栽。

其中，所述的外植体为霞红灯台报春的腋芽。

所述不定芽诱导和继代的培养基为MS+2.0mg/l 6-BA+0.1mg/lNAA，pH为5.8～5.9。

其光照条件为自然散射光2500～300Lux加人工辅助光1500～2000Lux。Lux(勒克司)为照度的单位。

所述生根培养基为MS或MS+0.2mg/l NAA，优选为MS+0.2mg/lNAA，pH为5.8～5.9。

其光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光2500～3000Lux。

经在生根培养基中培养2～3周后，炼苗3～4天移栽至温室细草炭土中培养。

外植体采用0.1％升汞溶液进行表面消毒，消毒时间控制在10～15min内。

组培苗适宜的培养温度为20～23℃之间，超过25℃组培苗变黄甚至逐渐死亡。

组培苗的移栽适宜温度为18～25℃之间，过高或过低都不利于试管苗的成活。

具体地组培快繁方法为：选霞红灯台报春的腋芽为外植体，经水冲洗干净，0.1％升汞溶液消毒10～15min，在无菌条件下接种至诱导培养基MS+2.0mg/l 6-BA+0.1mg/l NAA中，pH为5.8，光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光1500～2000Lux；之后移至相同培养基增殖，继代2～3次，生根培养基为MS+0.2mg/l NAA，pH为5.8，光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光2500～3000Lux；温度保持在20～23℃之间；生根培养2～3周，炼苗3～4天后，移至细草炭土中培养，保持湿度高于80％，每天喷水2～3次。

一般来说，以腋芽为外植体，对植株的破坏性比较大，但对于一些比较珍贵，且急需扩繁的材料，以腋芽为外植体进行扩繁，可以在短时间内获得大量的再生植株；通过腋芽再生的霞红灯台报春(Primula beesiana)试管苗生长健壮，对后期的生长观察发现，基本能保持其优良种性不变。组培快繁的试管苗，在生长过程中，不易受到病虫害的侵染，但为了进一步防止病虫害的产生，宜在生长季内喷施多菌灵、氧化乐果等3～4次为佳；试管苗移栽时的温度应控制在18～25℃之间，过高或过低都不利于试管苗的成活，夏季不宜进行试管苗的移栽。

本发明的组培快繁方法繁育霞红灯台报春(Primula beesiana)，2个月内增殖系数达到3～4，生根率达95％以上，移栽成活率几乎为100％，极大地提高了霞红灯台报春(Primula beesiana)的繁殖系数，缩短成苗周期，又可降低成本，为今后大面积园林应用和工厂化育苗提供了非常有效的方法；同时，以腋芽为外植体进行增殖和快繁，能够保持霞红灯台报春(Primula beesiana)的种性不变，为新品种培育中出现的较为珍贵稀有变种的保存提供了保障。

与现有技术相比，本发明霞红灯台报春(Primula beesiana)的组培快繁方法的优点在于：

1.建立了一种霞红灯台报春(Primula beesiana)的组培快繁方法，相比传统的报春花属植物育苗繁殖方法，如播种繁殖和分株繁殖，极大地提高了霞红灯台报春(Primula beesiana)的繁殖系数，为科研研究和生产栽培提供了技术支持；

2.通过组培快繁得到的幼苗，生长强健，叶色浓绿，一致性强，成苗容易，适应性较强，病虫害少，易于管理；

3.利用组培快繁方法繁育霞红灯台报春(Primula beesiana)，摆脱了季节与气候的限制因素，从而缩短了育苗周期，增加了繁殖量；

4.利用组培快繁方法繁育霞红灯台报春(Primula beesiana)，可以保持优良种或品种的特性不变，从而为新品种选育研究中变异保存提供了有效的方法。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

以霞红灯台报春(Primula beesiana)叶片为外植体探究不定芽诱导最适培养基：选用长势良好的幼苗叶片作为外植体探究不定芽诱导最佳培养基配方。

取霞红灯台报春(Primula beesiana)的幼嫩叶片自来水冲洗2～3h，于水中滴一滴清洁剂震荡15min清除表面杂质，自来水反复冲洗干净；表面消毒：70％酒精消毒8～10s，无菌水冲洗4～5次，0.1％升汞溶液消毒10～15min，再用无菌水冲洗4～5次。然后将消毒过的叶片切成1cm²的小块(带部分叶脉)接种在丛生芽的诱导培养基上，每瓶接种5～6块，每种培养基接10瓶，暗培养。其中，6-BA的浓度梯度：0.5mg/l、1.0mg/l和2.0mg/l；NAA的浓度梯度：0.05mg/l、0.1mg/l和0.5mg/l，培养基pH为5.8，采用两因素完全随机试验设计。

不同6-BA和NAA浓度影响霞红灯台报春(Primula beesiana)叶片的分化。接种4～5天后，叶片开始肿胀皱缩，15天左右切口处变肥变厚，30天后，有培养基种叶片开始产生愈伤并有少量不定芽的产生。不定芽分化的最佳浓度是6-BA 2.0mg/L和NAA 0.1mg/l，此培养基上霞红灯台报春(Primula beesiana)诱导率达到22.5％，并且部分分化成芽。

实施例2

以霞红灯台报春(Primula beesiana)腋芽为外植体进行初培养和继代培养：选取生长健壮的植株上的腋芽，自来水冲洗2～3h，消毒灭菌过程同叶片，接种在MS+6-BA 2.0mg/l+NAA 0.1mg/l丛生芽诱导培养基上，每瓶接种3个；光照条件为自然散射光3000Lux加上人工辅助光源1800±200Lux，光照时间14h。

当腋芽接种在分化培养基上，不断抽出新叶，10天开始，抽出新叶的叶柄粗壮，基部变红，逐渐形成浅绿色愈伤组织，2周后开始有不定芽的分化；接种40天后，在腋芽新抽出的叶柄和叶片上，分化出大量的不定芽。

统计结果显示在MS+6-BA 2mg/l+NAA 0.1mg/l的培养基上接种2个月后，平均每个腋芽能分化出不定芽的数目是40～50个，显著多于叶片诱导的不定芽的数量。同时，温度对于不定芽的诱导和组培苗的生长起到非常关键的作用，在20～23℃之间，组培苗叶色浓绿，生长健壮；超过25℃，组培苗变黄并逐渐死亡。在这样的培养条件下，试管苗2个月的增值系数达到3～4，极大地提高了霞红灯台报春(Primula beesiana)的繁殖系数。

实施例3

霞红灯台报春(Primula beesiana)组培苗的生根培养：当不定芽在分化培养基上长出2～3片叶子时，将其从愈伤组织上切除，转移至生根培养基，配方：MS、MS+NAA(0.1mg/l、0.2mg/l、0.5mg/l)中，pH为5.8；光照条件为自然散射光3000Lux加上人工辅助光源2500Lux，光照时间14h。从生根所需要的时间来看，在培养基MS和MS+0.2mg/l NAA中生根所需时间最短，为8～10天，但在MS+0.2mg/l NAA中，组培苗生根量和长势明显好于MS基本培养基，组培苗平均高度可达4.8cm，生根率为95％以上。

实施例4

霞红灯台报春(Primula beesiana)组培苗的移栽：生根培养两周以后，待组培苗平均每株生根4～5条，根长达到1cm时，即可开始为移栽作准备。炼苗是试管苗移栽前的过渡，可以帮助试管苗逐步适应外界环境，使试管苗更健壮，叶色更加深绿，从而提高成活率。霞红灯台报春(Primula beesiana)试管苗炼苗3～4天后，移栽至温室细草炭土中，草炭土提前铺满穴盘，清水浸透；试管苗移栽后保持湿度80％以上，覆薄膜并每天喷水2～3次，2周以后即可逐步进行正常管理，移栽成活率几乎为100％。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims

1.一种霞红灯台报春的组培快繁方法，包括外植体选择、表面消毒、不定芽诱导、继代培养、生根培养与试管苗移栽，其特征在于，所述的外植体为霞红灯台报春的腋芽，不定芽诱导和继代的培养基为MS+2.0mg/l 6-BA+0.1mg/l NAA，pH为5.8～5.9，所述生根培养基为MS或MS+0.2mg/l NAA，pH为5.8～5.9。

2.根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于，所述不定芽诱导、继代培养时，光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光1500～2000Lux。

3.根据权利要求1或2所述的组培快繁方法，其特征在于，所述生根培养基为MS+0.2mg/l NAA。

4.根据权利要求1～3任意一项所述的组培快繁方法，其特征在于，所述生根培养时，光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光2500～3000Lux。

5.根据权利要求1～4任意一项所述的组培快繁方法，其特征在于，所述组培苗的培养温度为20～23℃。

6.根据权利要求1～5任意一项所述的组培快繁方法，其特征在于，所述组培苗的移栽温度为18～25℃。

7.根据权利要求1～6任意一项所述的组培快繁方法，其特征在于，所述外植体采用0.1％升汞溶液进行表面消毒，消毒时间控制在10～15min。

8.根据权利要求1～7任意一项所述的组培快繁方法，其特征在于，所述的组培苗经在生根培养基中培养2～3周后，炼苗3～4天移栽至温室细草炭土中培养。

9.根据权利要求1～8任意一项所述的组培快繁方法，其特征在于，选霞红灯台报春的腋芽为外植体，经水冲洗干净，0.1％升汞溶液消毒10～15min，在无菌条件下经蒸馏水反复清洗，接种至诱导培养基MS+2.0mg/l 6-BA+0.1mg/l NAA中，pH为5.8，光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光1500～2000Lux；之后移至相同培养基增殖，继代2～3次，生根培养基为MS+0.2mg/l NAA，pH为5.8，光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光2500～3000Lux；温度保持在20～23℃之间；生根培养2～3周，炼苗3～4天后，移至细草炭土中培养，保持湿度高于80％，每天喷水2～3次。