CN104012417A - 小木漆高效快速扩繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及植物组培方法，尤其是小木漆的组培方法。具体来说是一种小木漆高效快速扩繁方法，包括（1）外植体的选择与消毒（2）启动培养（3）增殖培养（4）生根培养（5）炼苗与移栽步骤，本发明具有遗传性状稳定、培养过程简单、易生根，培养扩繁周期短，移栽容易成活的优点。采用对优良小木漆优良单株进行组织培养的方法，可使其繁殖系数达到4-5倍，每10个有效小木漆腋芽，按繁殖系数为4.5，增殖周期为45天计算，除去污染损耗，其年繁殖量仍将达到175万个以上，有效解决了小木漆快速繁殖的问题，使得优良无性系材料能够大面积推广，同时也为工厂化育苗奠定了基础。
Description
技术领域
本发明涉及植物组培方法，尤其是小木漆的组培方法。
背景技术
漆树（Toxicodendron vernicifluum）是漆树科（Anacardiacceae）漆属的重要经济树种。其主产物“生漆”为树干割取的液汁，是目前世界上唯一来自绿色植物，在生物酶催化作用下，常温能固化成膜的生物高分子涂料。随着人们家具保健意识和环保意识的增强，化学油漆所含的甲醛和苯的衍生物的危害为人们所认识，在家居装修中，消费者越来越多的选择环保油漆，而环保油漆离不开生漆作重要原料。生漆越来越受到人们的重视，近10年来，生漆的价格一直在涨，2001年为2万-4万元/吨，3年后价格增长了1倍，2006年为10万-14万元/吨，2008年达到16万-24万元/吨，2013年生漆价格高达26万-36万元/吨。
漆树资源丰富，品种繁多，经过长期的人工培育和自然选择，日益适地适树，分大木漆、小木漆两大类，大木漆即野生的山漆树，小木漆树即人工栽培的家漆树。由于小木漆的产漆量相对较高，质量较好，开割时间较早，漆农主要通过人工栽培小木漆的方式割取生漆，早在上世纪80年代王道植等人曾开展了对大木漆组织培养的研究，但未见有成功的人工扩繁方式推广实施，而关于小木漆组织培养快繁的技术至今尚未见报道。
小木漆的结实量少，甚至败育，种子育苗也往往发生性状分离，对母树的优良性状不能固定，因而漆农主要通过埋根育苗的传统方式获取幼苗，但其成苗率较低，繁殖速度慢，特别是使推广优良品种和优良单株受到了限制。所以要对小木漆成活率高的快速扩繁方法进行研究。
发明内容
本发明要解决现有技术中小木漆获取幼苗成苗率低，繁殖速度慢的问题。
本发明提供了一种小木漆高效快速扩繁方法，其特征在于按下列步骤实施：
（1）外植体的选择与消毒：选取优良小木漆单株的当年生嫩茎或根萌幼苗，去除叶柄和叶片，用毛刷轻刷茎段表面，除去表面杂质，用2%的洗洁精水溶液浸泡10-15分钟，在线状自来水下冲洗1-2小时，剪成3-4cm长含1-2个叶腋的茎段，放于灭过菌的外植体缸内，移至超净工作台内进行消毒，75%乙醇浸泡20-30秒，1%的苯扎氯胺溶液浸泡1-2分钟，无菌蒸馏水冲洗2-3次后，用0.1%升汞浸泡10-20分钟，无菌蒸馏水冲洗5-8次，放于灭过菌的垫有滤纸的接种盘内，使滤纸能够吸干外植体表面的残留水分。
（2）启动培养：将茎段两端分别切去2-4mm，平放在启动培养基上，叶腋朝上，启动培养基的配方为：White + 6-BA 0.5-2mg/L + NAA 0.02-0.5mg/L，20-30g/L蔗糖，4.0-5.0g/L琼脂，pH为5.8-6.0。置于昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下暗培养15-20天后，叶腋处长出1-2cm高腋芽，再置于光照强度1000-2000Lux，光照时间12小时/天，昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下光照培养10-15天。
（3）增殖培养：待腋芽长到3-4cm高时，将其从老茎上剪下，去掉底部1-2个叶片，直立于幼苗增殖培养基上，对于较高腋芽，从基部切取含1-2个腋芽的茎段，并平放于增殖培养基上，增殖培养基的配方为：MS + ZT0.1-1.0mg/L + 6-BA0.5-3.0mg/L + TDZ0.1mg/L，20-30g/L蔗糖，4.0-5.0g/L琼脂，pH为5.8-6.0。置于昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下暗培养15-20天后，腋芽基部形成约1cm3 的愈伤组织，茎段叶腋处长出1-2cm高腋芽，形态学下端也形成约1cm3的愈伤组织，再置于光照强度1000-2000Lux，光照时间12小时/天，昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下光照培养10-15天。基部愈伤组织诱导可出4-8个1-2cm高的不定芽，同时腋芽长到3-4cm。待15天后，待不定芽小苗长到3-4cm高，再将小苗切下，转到相同的增殖培养基上，经过45天的培养，诱导出的小苗又可长到3-4cm，反复将高3-4cm的小苗切下进行增殖培养，可以使小木漆进行快速大量的扩繁，其增值倍数为4-5倍。
（4）生根培养：将3-4cm高的组培苗转接到生根培养基上，生根培养基配方为：1/2MS + IAA0.05-0.2mg/L + IBA0.05-0.2mg/L，0.1-0.5g/L活性炭，20-30g/L蔗糖，4.0-5.0g/L琼脂，pH为5.8-6.0。置于光照强度1000-2000Lux，光照时间12小时/天，昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下光照培养10-15天后，得到小木漆生根苗。
（5）炼苗与移栽：待生根苗的根长达1.5-2cm后，在室温为25℃的室内打开瓶盖，炼苗2-4天后，取出生根苗，洗净沾附在根部的培养基，之后移栽到基质配比为腐殖土：河沙=1：1的沙盘中，移栽后注意控制温室内的温度在25-30℃之间，湿度在75-80%之间，10-15天后成活，移至杯口直径为10cm的营养袋中，移栽基质配比同沙盘。再通过养护2-3个月，苗高达20-30cm时，移至室外空地造林，以待割取生漆。
本发明有以下优点: （1）通过生物技术对小木漆进行组织培养快速繁殖，在短时间内培育出大量可供大田栽培的小木漆幼苗，显著提高了小木漆种苗的繁殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。
（2）通过采用暗培养：光照培养=1：1，克服小木漆外植体伤口褐变死亡的问题。在启动培养的过程中，选择盐离子含量较低的White培养基降低褐变率。
（3）在增殖过程中，选择多种细胞分裂素（ZT、TDZ、6-BA）相结合的方法，使小木漆腋芽的增殖系数达到4-5倍。在生根过程中也综合运用各种生长素（IBA、NAA、IAA、2,4-D），获得组培苗的生根率在99%，每株平均带3-4个根。
本发明具有遗传性状稳定、培养过程简单、易生根，培养扩繁周期短，移栽容易成活的优点。采用对优良小木漆优良单株进行组织培养的方法，可使其繁殖系数达到4-5倍，每10个有效小木漆腋芽，按繁殖系数为4.5，增殖周期为45天计算，除去污染损耗，其年繁殖量仍将达到175万个以上，有效解决了小木漆快速繁殖的问题，使得优良无性系材料能够大面积推广，同时也为工厂化育苗奠定了基础。
具体实施方式
实施例1、实施时间为2013年，小木漆的组培扩繁在西南林业大学林学院实验室和格林温室进行。
（1）外植体的选择与消毒：于2013年5月选取优良漆树单株，获得其当年生嫩茎，去除叶柄和叶片，用毛刷轻刷茎段表面，除去表面杂质，用2%的洗洁精水溶液浸泡10分钟，在线状自来水下冲洗2小时，剪成3-4cm长含1-2个叶腋的茎段，放于灭过菌的外植体缸内，移至超净工作台内进行消毒，75%乙醇浸泡20秒，1%的苯扎氯胺溶液浸泡1分钟，无菌蒸馏水冲洗2-3次后，用0.1%升汞浸泡2分钟，无菌蒸馏水冲洗5-8次，放于灭过菌的垫有滤纸的接种盘内，使滤纸能够吸干外植体表面的残留水分。
（2）启动培养：将茎段两端分别切去2-4mm，平放在启动培养基上，叶腋朝上，启动培养基的配方为：White + 6-BA2.0mg/L + NAA0.5mg/L，20g/L蔗糖，4.0g/L琼脂，pH为5.8。置于昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下暗培养15天后，叶腋处长出1-2cm高腋芽，再置于光照强度1000-2000Lux，光照时间12小时/天，昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下光照培养15天。
（3）增殖培养：2013年6月腋芽长到3-4cm高时，将其从老茎上剪下，去掉底部1-2个叶片，直立于幼苗增殖培养基上，对于较高腋芽，从基部切取含1-2个腋芽的茎段，并平放于增殖培养基上，增殖培养基的配方为：MS + ZT0.5mg/L + 6-BA1.0mg/L + TDZ0.1mg/L，30g/L蔗糖，4.0g/L琼脂，pH为5.8。置于昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下暗培养15天后，腋芽基部形成约1cm3 的愈伤组织，茎段叶腋处长出1-2cm高腋芽，形态学下端也形成约1cm3的愈伤组织，再置于光照强度1000-2000Lux，光照时间12小时/天，昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下光照培养15天。基部愈伤组织诱导可出4-8个1-2cm高的不定芽，同时腋芽长到3-4cm。待15天后，待不定芽小苗长到3-4cm高，再将小苗切下，转到相同的增殖培养基上，经过45天的培养，诱导出的小苗又可长到3-4cm，反复将高3-4cm的小苗切下进行增殖培养，可以使小木漆进行快速大量的扩繁，其增值倍数为4.89倍。
（4）生根培养：2013年7月开始将3-4cm高的组培苗转接到生根培养基上，生根培养基配方为：1/2MS + IAA0.05mg/L + IBA0.2mg/L，0.2g/L活性炭， 30g/L蔗糖，4.0g/L琼脂，pH为5.8。置于光照强度1000-2000Lux，光照时间12小时/天，昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下光照培养15天后，得到小木漆生根苗。
（5）炼苗与移栽：待生根苗的根长达1.5-2cm后，在室温为25℃的室内打开瓶盖，炼苗3天后，取出生根苗，洗净沾附在根部的培养基，之后移栽到基质配比为腐殖土：河沙=1：1的沙盘中，移栽后注意控制温室内的温度在25-30℃之间，湿度在75-80%之间，15天后成活，移至杯口直径为10cm的营养袋中，移栽基质配比同沙盘。再通过养护3个月，苗高达20-30cm时，移至室外空地造林，以待割取生漆。
Claims (1)
1.一种小木漆高效快速扩繁方法，其特征在于按下列步骤实施：
（1）外植体的选择与消毒：选取优良小木漆单株的当年生嫩茎或根萌幼苗，去除叶柄和叶片，用毛刷轻刷茎段表面，除去表面杂质，用2%的洗洁精水溶液浸泡10-15分钟，在线状自来水下冲洗1-2小时，剪成3-4cm长含1-2个叶腋的茎段，放于灭过菌的外植体缸内，移至超净工作台内进行消毒，75%乙醇浸泡20-30秒，1%的苯扎氯胺溶液浸泡1-2分钟，无菌蒸馏水冲洗2-3次后，用0.1%升汞浸泡10-20分钟，无菌蒸馏水冲洗5-8次，放于灭过菌的垫有滤纸的接种盘内，使滤纸能够吸干外植体表面的残留水分；
（2）启动培养：将茎段两端分别切去2-4mm，平放在启动培养基上，叶腋朝上，启动培养基的配方为：White + 6-BA 0.5-2mg/L + NAA 0.02-0.5mg/L，20-30g/L蔗糖，4.0-5.0g/L琼脂，pH为5.8-6.0；置于昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下暗培养15-20天后，叶腋处长出1-2cm高腋芽，再置于光照强度1000-2000Lux，光照时间12小时/天，昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下光照培养10-15天；
（3）增殖培养：待腋芽长到3-4cm高时，将其从老茎上剪下，去掉底部1-2个叶片，直立于幼苗增殖培养基上，对于较高腋芽，从基部切取含1-2个腋芽的茎段，并平放于增殖培养基上，增殖培养基的配方为：MS + ZT0.1-1.0mg/L + 6-BA0.5-3.0mg/L + TDZ0.1mg/L，20-30g/L蔗糖，4.0-5.0g/L琼脂，pH为5.8-6.0；置于昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下暗培养15-20天后，腋芽基部形成约1cm3 的愈伤组织，茎段叶腋处长出1-2cm高腋芽，形态学下端也形成约1cm3的愈伤组织，再置于光照强度1000-2000Lux，光照时间12小时/天，昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下光照培养10-15天；基部愈伤组织诱导可出4-8个1-2cm高的不定芽，同时腋芽长到3-4cm；待15天后，待不定芽小苗长到3-4cm高，再将小苗切下，转到相同的增殖培养基上，经过45天的培养，诱导出的小苗又可长到3-4cm，反复将高3-4cm的小苗切下进行增殖培养，可以使小木漆进行快速大量的扩繁，其增值倍数为4-5倍；
（4）生根培养：将3-4cm高的组培苗转接到生根培养基上，生根培养基配方为：1/2MS + IAA0.05-0.2mg/L + IBA0.05-0.2mg/L，0.1-0.5g/L活性炭，20-30g/L蔗糖，4.0-5.0g/L琼脂，pH为5.8-6.0；置于光照强度1000-2000Lux，光照时间12小时/天，昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下光照培养10-15天后，得到小木漆生根苗；
（5）炼苗与移栽：待生根苗的根长达1.5-2cm后，在室温为25℃的室内打开瓶盖，炼苗2-4天后，取出生根苗，洗净沾附在根部的培养基，之后移栽到基质配比为腐殖土：河沙=1：1的沙盘中，移栽后注意控制温室内的温度在25-30℃之间，湿度在75-80%之间，10-15天后成活，移至杯口直径为10cm的营养袋中，移栽基质配比同沙盘；再通过养护2-3个月，苗高达20-30cm时，移至室外空地造林，以待割取生漆。
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