CN103392597A - 一种北美海棠的组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种北美海棠的组织培养方法，包括初代培养、继代培养、生根培养和炼苗移栽，以北美海棠当年生嫩枝条为外植体，经过无菌接种于初代培养基上培养一段时间后，将初代培养基上的北美海棠小苗切割后接种在继代培养基上进行继代培养，当丛生苗长到2-3cm时转接到生根培养基上进行生根诱导形成生根苗，生根苗经过炼苗驯化得到再生植株。本发明的方法使北美海棠的繁殖更为容易，在短时间内获得大量的无菌苗，繁殖周期缩短，从而可以快速扩大种植面积。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物的组织培养方法，具体是涉及一种北美海棠的组织培养方法。
背景技术
北美海棠属于蔷薇科苹果属，观赏价值很高，花色、叶色、果色和枝条色彩丰富。加之其不同季节中花、叶、果、枝和多姿的形态所突显出来的景观使观赏期整年持续，所以，北美海棠成为北方气候条件下园林植物材料中的一组特色产品。
北美海棠有许多种培植方法，其中扦插法最为简单方便，但是扦插对气候和土壤的要求较高，扦插的时节应选在春季温度稍高时进行，而且温度稳定，不易出现冰冻天气，最好在十几度以上时进行，其次选择的土壤最好是没有种过树木，或者之前是做为农田使用，同时要对土壤进行深翻，使土壤中空气通透良好，也要保证其水分匀称，覆以地膜保持地面温度，并且扦插成活率低。
发明内容
发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供一种北美海棠的组织培养方法，该方法通过采用组织培养的方法，加快了北美海棠的繁殖速度，解决了采用扦插成活率低的问题。
发明内容：为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为：
一种北美海棠的组织培养方法，以北美海棠当年生嫩枝条为外植体，经过无菌接种于初代培养基上培养一段时间后，将初代培养基上的北美海棠小苗切割后接种在继代培养基上进行继代培养，当小苗长至2-3cm时转接到生根培养基上进行生根诱导形成生根苗，生根苗经过炼苗驯化得到再生植株。
其中，该方法的具体操作步骤为：
步骤1，初代培养：
（1）外植体的预处理
剪取北美海棠当年生的枝条，将采下的枝条进行水插，置于生长室中，促使叶芽萌发为嫩梢，在嫩梢长至4-6厘米时切下作外植体，将切下的外植体用漂白粉上清液浸泡4-5分钟后，用流水冲洗20-30分钟；
（2）外植体的灭菌处理
经过流水冲洗后的外植体，沥干水分后用70%的酒精溶液浸泡15秒，再用1%的次氯酸钠溶液浸泡5-8分钟，用无菌水冲洗3-5遍，无菌吸水纸吸干水分待用；
（3）接种培养
外植体经灭菌处理后切成1-2厘米的小茎段，接种在初代培养基上进行培养，初代培养基为MS+BA2.0mg/L+IBA0.3mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L，在温度为25±2℃，光照1800lux下培养20天，茎段基部形成密实的愈伤组织；
步骤2，继代培养：
将初代培养基上的小苗接种在继代培养基上，继代培养基为MS+BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+CH200mg/L+蔗糖30g/L，在温度为25±2℃，光照为2000lux，每天光照12-14小时，培养20-25天后，在小苗基部愈伤组织上萌发出丛生小苗，培养30-35天后，丛生苗长至2-3厘米时，接入生根培养基培养；
步骤3，生根培养：
将2-3厘米的小苗接种到1/2MS+IBA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+0.2%活性炭的生根培养基上，培养10-15天，小苗基部形成根原基，培养20-25天，根原基上长出1-2厘米长的白色根；
步骤4，移栽管理：
将生根培养后的小苗在温度22±3℃下放置1-2天，进行移栽，移栽时，将幼苗用清水将根部琼脂清洗干净，种入苗床后，用清水浇灌，移栽当天喷施稀释20倍的MS溶液，以后每隔一周喷施一次800～1000倍的甲基托布津或1000倍多菌灵药液，连续2～3次。
其中，步骤2中，丛生苗长至2-3厘米时，将小苗基部用0.1%的吲哚丁酸溶液蘸3-5分钟后栽入消毒的基质内，20-25天后小苗基部形成根原基并长成须根。
其中，步骤4中，移栽组培苗采用的容器为组培盆，移栽组培苗所用的基质为蛭石：珍珠岩＝3：1
有益效果：本发明的北美海棠的组织培养方法使北美海棠的繁殖更为容易，在短时间内获得大量的无菌苗，繁殖周期缩短，从而可以快速扩大种植面积，另外本发明的方法打破了气候和土壤对北美海棠繁殖的限制，通过采用组织培养的方法，大大加快了北美海棠的繁殖速度，有效的解决了扦插成活率低的问题。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1
一种北美海棠的组织培养方法，该方法的具体操作步骤为：
一．初代培养：
（1）外植体的预处理
剪取北美海棠当年生的枝条，采下的枝条进行水插，置于生长室中，促使叶芽萌发为嫩梢，在嫩梢长至4厘米时切下作外植体,将切下的外植体用漂白粉上清液浸泡4分钟后，用流水冲洗20分钟；
（2）外植体的灭菌处理
经过流水冲洗后的外植体，沥干水分后用70%的酒精溶液浸泡15秒，再用1%的次氯酸钠溶液浸泡5分钟，用处理过的无菌水反复冲洗3遍，无菌吸水纸吸干水分待用；
（3）接种培养
外植体经灭菌处理后切成1-2厘米的小茎段，接种在初代培养基上进行培养，初代培养基为MS+BA2.0mg/L+IBA0.3mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L,室温控制在25±2℃，在光照1800lux下培养20天后，茎段基部形成密实的愈伤组织，愈伤组织呈深绿色；
二．继代培养：
将初代培养基上的北美海棠小苗接种在继代培养基上，继代培养基的配方为MS+BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+CH200mg/L+蔗糖30g/L，将生长素和分裂素的浓度都适当降低，有利于愈伤组织脱分化，室温在25±2℃，光强2000lux，每天光照12小时，20天左右小苗基部深绿色愈伤组织上萌发出丛生小苗，待长至30天左右，丛生苗长至2-3厘米时，接入生根培养基培养；
三．生根培养：
将2-3厘米的小苗接种在1/2MS+IBA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+0.2%活性炭的生根培养基上，12天小苗基部形成根原基，22天根原基上长出1-2厘米长的白色根；
四．移栽管理
北美海棠组培苗炼苗在温度22±3℃之间的温室内拧松瓶盖放置2天，然后用专用组培盆进行移栽，移栽组培苗所用的基质为蛭石：珍珠岩＝3：1，该基质需要严格消毒灭菌，用800倍的甲基托布津药液拌合在基质里，再用0.15%高锰酸钾喷洒苗床表面及四周，瓶盖打开后2天移栽小苗，移栽时，将幼苗从瓶内取出，用清水将根部琼脂清洗干净，同时应尽量减少伤根，种入苗床后，选择清水浇灌，移栽当天喷施稀释20倍的MS溶液，以后每隔一周喷施一次800倍的甲基托布津药液，连续3次。
移栽初期要特别注意保持苗床和空气湿度，一般需全封闭管理一周左右，根据情况在20天左右可以逐步通风，并除去覆盖物，在春秋季节移栽时，需遮荫10天左右；冬季移栽时，遮荫20天左右，但关键是控制苗床温度在15～25℃之间才有利于成活，一般过渡移栽两个月以后，小苗就可换盆移栽。
实施例2
一种北美海棠的组织培养方法，该方法的具体操作步骤为：
一．初代培养
（1）外植体的预处理
剪取北美海棠当年生的枝条，采下的枝条进行水插，置于生长室中，促使叶芽萌发为嫩梢，在嫩梢长至6厘米时切下作外植体,将切下的外植体用漂白粉上清液浸泡5分钟后，用流水冲洗30分钟；
（2）外植体的灭菌处理
经过流水冲洗后的外植体，沥干水分后用70%的酒精溶液浸泡15秒，再用1%的次氯酸钠溶液浸泡8分钟，用处理过的无菌水反复冲洗5遍，无菌吸水纸吸干水分待用；
（3）接种培养
外植体经灭菌处理后切成1-2厘米的小茎段，接种在初代培养基上进行培养，初代培养基为MS+BA2.0mg/L+IBA0.3mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L,室温控制在25±2℃，在光照1800lux下培养20天后，茎段基部形成密实的愈伤组织，愈伤组织呈深绿色；
二．继代培养
将初代培养基上的小苗接种在继代培养基上，继代培养基的配方为MS+BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+CH200mg/L+蔗糖30g/L，将生长素和分裂素的浓度都适当降低，有利于愈伤组织脱分化，室温在25±2℃，光强2000lux，每天光照14小时，25天左右小苗基部深绿色愈伤组织上萌发出丛生小苗，待长至35天左右，丛生苗长至2-3厘米时，接入生根培养基培养；
三．生根培养
将小苗基部用0.1%的吲哚丁酸溶液蘸4分钟后栽入消毒基质内，22天左右小苗基部形成根原基并长成须根；
四．移栽管理
北美海棠组培苗炼苗在温度22±3℃之间的温室内拧松瓶盖放置1天，然后用专用组培盆进行移栽，移栽组培苗所用的基质为蛭石：珍珠岩＝3：1，该基质需要严格消毒灭菌，用800倍多菌灵药液拌合在基质里，再用0.15%高锰酸钾喷洒苗床表面及四周，瓶盖打开后1天即可移栽小苗，移栽时，将幼苗从瓶内取出，用清水将根部琼脂清洗干净，同时应尽量减少伤根。种入苗床后，选择清水浇灌，移栽当天喷施稀释20倍的MS溶液，以后每隔一周喷施一次1000倍多菌灵药液，连续3次。
移栽初期要特别注意保持苗床和空气湿度，一般需全封闭管理一周左右，根据情况在20天左右可以逐步通风，并除去覆盖物，在春秋季节移栽时，需遮荫10天左右；冬季移栽时，遮荫20天左右，但关键是控制苗床温度在15～25℃之间才有利于成活，一般过渡移栽两个月以后，小苗就可换盆移栽。
Claims (4)
1.一种北美海棠的组织培养方法，其特征在于：以北美海棠当年生嫩枝条为外植体，经过无菌接种于初代培养基上培养一段时间后，将初代培养基上的北美海棠小苗切割后接种在继代培养基上进行继代培养，当小苗长至2-3cm时转接到生根培养基上进行生根诱导形成生根苗，生根苗经过炼苗驯化得到再生植株。
2.根据权利要求1所述的北美海棠的组织培养方法，其特征在于：该方法的具体操作步骤为：
步骤1，初代培养：
（1）外植体的预处理
剪取北美海棠当年生的枝条，将采下的枝条进行水插，置于生长室中，促使叶芽萌发为嫩梢，在嫩梢长至4-6厘米时切下作外植体，将切下的外植体用漂白粉上清液浸泡4-5分钟后，用流水冲洗20-30分钟；
（2）外植体的灭菌处理
经过流水冲洗后的外植体，沥干水分后用70%的酒精溶液浸泡15秒，再用1%的次氯酸钠溶液浸泡5-8分钟，用无菌水冲洗3-5遍，无菌吸水纸吸干水分待用；
（3）接种培养
外植体经灭菌处理后切成1-2厘米的小茎段，接种在初代培养基上进行培养，初代培养基为MS+BA2.0mg/L+IBA0.3mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L，在温度为25±2℃，光照1800lux下培养20天，茎段基部形成密实的愈伤组织；
步骤2，继代培养：
将初代培养基上的小苗接种在继代培养基上，继代培养基为MS+BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+CH200mg/L+蔗糖30g/L，在温度为25±2℃，光照为2000lux，每天光照12-14小时，培养20-25天后，在小苗基部愈伤组织上萌发出丛生小苗，培养30-35天后，丛生苗长至2-3厘米时，接入生根培养基培养；
步骤3，生根培养：
将2-3厘米的小苗接种到1/2MS+IBA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+0.2%活性炭的生根培养基上，培养10-15天，小苗基部形成根原基，培养20-25天，根原基上长出1-2厘米长的白色根；
步骤4，移栽管理：
将生根培养后的小苗在温度22±3℃下放置1-2天，进行移栽，移栽时，将幼苗用清水将根部琼脂清洗干净，种入苗床后，用清水浇灌，移栽当天喷施稀释20倍的MS溶液，以后每隔一周喷施一次800～1000倍的甲基托布津或1000倍多菌灵药液，连续2～3次。
3. 根据权利要求2所述的北美海棠的组织培养方法，其特征在于：步骤2中，丛生苗长至2-3厘米时，将小苗基部用0.1%的吲哚丁酸溶液蘸3-5分钟后栽入消毒的基质内，20-25天后小苗基部形成根原基并长成须根。
4.根据权利要求2所述的北美海棠的组织培养方法，其特征在于：步骤4中，移栽组培苗采用的容器为组培盆，移栽组培苗所用的基质为蛭石：珍珠岩＝3：1。
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