CN104585037B - 一种酒瓶兰组织培养快速繁殖方法 - Google Patents

一种酒瓶兰组织培养快速繁殖方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104585037B
CN104585037B CN201510052859.1A CN201510052859A CN104585037B CN 104585037 B CN104585037 B CN 104585037B CN 201510052859 A CN201510052859 A CN 201510052859A CN 104585037 B CN104585037 B CN 104585037B
Authority
CN
China
Prior art keywords
seedling
culture medium
culture
obtains
bottle
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201510052859.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104585037A (zh
Inventor
李刚
韦坤华
王晓峰
李竞才
舒伟
屈啸声
缪剑华
李林轩
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants
Original Assignee
Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants filed Critical Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants
Priority to CN201510052859.1A priority Critical patent/CN104585037B/zh
Publication of CN104585037A publication Critical patent/CN104585037A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104585037B publication Critical patent/CN104585037B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Abstract

一种酒瓶兰组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：(1)以消毒过的酒瓶兰种子作外植体，置于MS发芽培养基中进行诱导发芽得到无菌试管苗；(2)将所述试管苗置于MS丛芽培养基中进行繁殖培养获得丛生芽；(3)将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中培养获得健壮植株；(4)将所述健壮植株置于1/2MS生根培养基中培养获得生根苗；(5)取生根苗进行炼苗，并移植于沙床生长一个月，再移栽到大田。采用本发明所述的繁殖方法得到的丛生芽增殖系数为20～30倍，获得组培苗生根率在95％以上，移栽苗床成活率在90％以上，有效解决了酒瓶兰工厂化育苗的问题。

Description

一种酒瓶兰组织培养快速繁殖方法
技术领域
本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种酒瓶兰组织培养快速繁殖方法。
背景技术
酒瓶兰(NolinarecurvataLem)为原产墨西哥西北部干燥炎热地区、龙舌兰科诺林那属小乔木状多肉草本植物。诺林那属植物只有2-3种，在植物分类系统中地位较突出，因其繁殖相对困难，不易普及，故而被视为珍稀植物。酒瓶兰茎干直立，下部肥大，形似酒瓶；叶片姿态婆娑，酷似幽兰，故雅称酒瓶兰。由于它姿态妩媚、奇特，喜阳又耐阴，大的植株除在植物园供展览外，还可以布置在宾馆及其他场所；小的植株配上造型合适的花盆，装饰会议室、办公室和居室，十分雅致，富有浓厚的热带气息，呈现出一种奇特的异国情调，是一种特别适于热带地区绿化和美化的园林观赏植物。此外，酒瓶兰叶片中还含有大量甾体皂苷，具有重要的天然药物开发价值(Eskander等,2011)。但是，酒瓶兰繁殖困难，制约了其市场需求与快速推广。生长多年的植株有时会在茎基部自然萌生小芽(4龄以下者又无侧枝)，可用于扦插繁殖，但繁殖系数低，并较难长成酒瓶状茎干，所以，主要靠种子繁殖(黄献胜，2001；邓国富，2002)。但龙舌兰科植物开花很晚，采收种子不易，国内栽培酒瓶兰不易结籽，种子多由国外进口，价格昂贵；且酒瓶兰需5龄左右才能开花，繁殖速度极慢(李意颖，1996；林云甲，2009；凌勇坚与姜宝东，2013)。
发明内容
本发明的目的是提供一种酒瓶兰组织培养快速地繁殖方法，它能够有效快速地提高酒瓶兰种苗繁殖速度和质量，实现酒瓶兰优质种苗的工厂化育苗，满足市场需求。
本发明通过以下技术方案达到上述目的：一种酒瓶兰组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取酒瓶兰的种子作外植体，依次用2％洗洁精水溶液浸泡5分钟，线状自来水冲洗15～20分钟，添加2～3滴吐温-20的100mg/L0.1％升汞消毒8～10分钟，无菌水冲洗3～5次，最后用消毒滤纸去除表面水份，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；
(2)种子萌发获得无菌试管苗：将步骤(1)获得的外植体接种到MS发芽培养基中，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养35天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中，MS发芽培养基为MS基本培养基中加入GA3赤霉素0.1～0.5mg/L，30mg/L蔗糖，5mg/L琼脂，培养基的pH为6.0；
(3)试管苗丛生芽快速扩繁培养：将步骤(2)得到的无菌试管苗置于MS丛芽培养基中，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养30天，获得无菌试管苗丛生芽，其中，MS丛芽培养基为MS基本培养基中加入TDZ 0.1～1.0mg/L，KT0.1～0.5mg/L，IBA0.1～1.0mg/L，30mg/L蔗糖，5mg/L琼脂，培养基的pH为6.0；
(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养30天，得到健壮植株，其中，MS壮苗培养基为MS基本培养基中加入6～BA 0.5～1.5mg/L，NAA 0.1～0.5mg/L，30mg/L蔗糖，5mg/L琼脂，培养基的pH为6.0；
(5)健壮植株生根培养：将步骤(4)得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基培养，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养30天，得到带根完整植株，其中，1/2MS生根培养基为MS基本培养基中加入0.1～1.0mg/LNAA，0.1～0.5mg/LABT生根粉，15g/L蔗糖，5g/L琼脂，培养基pH为6.0；
(6)炼苗与移栽：组培瓶中加入少量自来水，松开瓶盖，炼苗一周，待表面角质形成后，将幼苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到沙床中，在沙床中生长一个月后移栽到大田。
本发明突出的优点在于：
(1)对酒瓶兰进行组织培养，快速获得丛生芽，在短时间内培育出大量适合移栽的酒瓶兰种苗，显著提高了酒瓶兰种苗的增殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足市场上的需求。
在MS发芽诱导培养中，添加0.1～0.5mg/L GA3，可以打破酒瓶兰种子休眠。
在MS繁殖培养基中添加的TDZ、KT和IBA属于常见植物生长调节剂，比较便宜易得，可大大降低酒瓶兰组织培养中的成本消耗，达到降低成本的目的。
在MS繁殖培养基中添加TDZ 0.1～1.0mg/L，KT 0.1～0.5mg/L可促进丛生芽分化，IBA0.1～1.0mg/L，可促进丛生芽生长。
在MS壮苗培养基添加NAA 0.1～0.5mg/L，可促进丛生芽长高展叶。
(2)在生根培养基中添加0.1～0.5mg/L ABT生根粉0.1～1.0mg/L NAA，可获得带根完整植株，这些完整植株经炼苗后可直接移栽于沙床。
(3)采用本技术方案培养所得到的酒瓶兰组培苗增殖系数达到20～30倍，获得组培苗生根率在95％以上，移栽苗床成活率在90％以上，有效解决了酒瓶兰工厂化育苗的问题。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
实施例1
本发明所述的酒瓶兰组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取酒瓶兰的种子作外植体，依次用2％洗洁精水溶液浸泡5分钟，线状自来水冲洗15～20分钟，添加2～3滴吐温-20的100mg/L0.1％升汞消毒8～10分钟，无菌水冲洗3～5次，最后用消毒滤纸去除表面水份，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；
(2)种子萌发获得无菌试管苗：将步骤(1)获得的外植体接种到MS发芽培养基中，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养35天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中，MS发芽培养基为MS基本培养基中加入GA3赤霉素0.5mg/L，30mg/L蔗糖，5mg/L琼脂，培养基的pH为6.0；
(3)试管苗丛生芽快速扩繁培养：将步骤(2)得到的无菌试管苗置于MS丛芽培养基中，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养30天，获得无菌试管苗丛生芽，其中，MS丛芽培养基为MS基本培养基中加入TDZ 1.0mg/L，KT 0.5mg/L，IBA 0.5mg/L，30mg/L蔗糖，5mg/L琼脂，培养基的pH为6.0；
(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养30天，得到健壮植株，其中，MS壮苗培养基为MS基本培养基中加入6～BA 1.0mg/L，NAA 0.3mg/L，30mg/L蔗糖，5mg/L琼脂，培养基的pH为6.0；
(5)健壮植株生根培养：将步骤(4)得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基培养，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养30天，得到带根完整植株，其中，1/2MS生根培养基为MS基本培养基中加入1.0mg/L NAA，0.5mg/L ABT生根粉，15g/L蔗糖，5g/L琼脂，培养基pH为6.0；
(6)炼苗与移栽：组培瓶中加入少量自来水，松开瓶盖，炼苗一周，待表面角质形成后，将幼苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到沙床中，在沙床中生长一个月后移栽到大田。
实施例2
本发明所述的酒瓶兰组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取酒瓶兰的种子作外植体，依次用2％洗洁精水溶液浸泡5分钟，线状自来水冲洗15～20分钟，添加2～3滴吐温-20的100mg/L0.1％升汞消毒8～10分钟，无菌水冲洗3～5次，最后用消毒滤纸去除表面水份，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；
(2)种子萌发获得无菌试管苗：将步骤(1)获得的外植体接种到MS发芽培养基中，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养35天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中，MS发芽培养基为MS基本培养基中加入GA3赤霉素0.5mg/L，30mg/L蔗糖，5mg/L琼脂，培养基的pH为6.0；
(3)试管苗丛生芽快速扩繁培养：将步骤(2)得到的无菌试管苗置于MS丛芽培养基中，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养30天，获得无菌试管苗丛生芽，其中，MS丛芽培养基为MS基本培养基中加入TDZ 1.0mg/L，KT 0.3mg/L，IBA 0.5mg/L，30mg/L蔗糖，5mg/L琼脂，培养基的pH为6.0；
(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养30天，得到健壮植株，其中，MS壮苗培养基为MS基本培养基中加入6～BA 1.5mg/L，NAA 0.3mg/L，30mg/L蔗糖，5mg/L琼脂，培养基的pH为6.0；
(5)健壮植株生根培养：将步骤(4)得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基培养，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养30天，得到带根完整植株，其中，1/2MS生根培养基为MS基本培养基中加入0.8mg/L NAA，0.5mg/L ABT生根粉，5g/L琼脂，培养基pH为6.0；
(6)炼苗与移栽：组培瓶中加入少量自来水，松开瓶盖，炼苗一周，待表面角质形成后，将幼苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到沙床中，在沙床中生长一个月后移栽到大田。
实施例3
本发明所述的酒瓶兰组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取酒瓶兰的种子作外植体，依次用2％洗洁精水溶液浸泡5分钟，线状自来水冲洗15～20分钟，添加2～3滴吐温-20的100mg/L0.1％升汞消毒8～10分钟，无菌水冲洗3～5次，最后用消毒滤纸去除表面水份，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；
(2)种子萌发获得无菌试管苗：将步骤(1)获得的外植体接种到MS发芽培养基中，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养35天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中，MS发芽培养基为MS基本培养基中加入GA3赤霉素0.2mg/L，30mg/L蔗糖，5mg/L琼脂，培养基的pH为6.0；
(3)试管苗丛生芽快速扩繁培养：将步骤(2)得到的无菌试管苗置于MS丛芽培养基中，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养30天，获得无菌试管苗丛生芽，其中，MS丛芽培养基为MS基本培养基中加入TDZ 1.0mg/L，KT 0.3mg/L，IBA 0.2mg/L，30mg/L蔗糖，5mg/L琼脂，培养基的pH为6.0；
(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养30天，得到健壮植株，其中，MS壮苗培养基为MS基本培养基中加入6～BA 1.2mg/L，NAA 0.2mg/L，30mg/L蔗糖，5mg/L琼脂，培养基的pH为6.0；
(5)健壮植株生根培养：将步骤(4)得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基培养，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养30天，得到带根完整植株，其中，1/2MS生根培养基为MS基本培养基中加入0.3mg/LNAA，0.5mg/L ABT生根粉，5g/L琼脂，培养基pH为6.0；
(6)炼苗与移栽：组培瓶中加入少量自来水，松开瓶盖，炼苗一周，待表面角质形成后，将幼苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到沙床中，在沙床中生长一个月后移栽到大田。

Claims (1)

1.一种酒瓶兰组织培养快速繁殖方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取酒瓶兰的种子作外植体，依次用2％洗洁精水溶液浸泡5分钟，线状自来水冲洗15～20分钟，添加2～3滴吐温-20的100mg/L0.1％升汞消毒8～10分钟，无菌水冲洗3～5次，最后用消毒滤纸去除表面水份，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；
(2)种子萌发获得无菌试管苗：将步骤(1)获得的外植体接种到MS丛芽培养基中，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养35天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中，MS丛芽培养基为MS基本培养基中加入GA3赤霉素0.1～0.5mg/L，30mg/L蔗糖，5mg/L琼脂，培养基的pH为6.0；
(3)试管苗丛生芽快速扩繁培养：将步骤(2)得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养30天，获得无菌试管苗丛生芽，其中，MS繁殖培养基为MS基本培养基中加入TDZ 0.1～1.0mg/L，KT0.1～0.5mg/L，IBA0.1～1.0mg/L，30mg/L蔗糖，5mg/L琼脂，培养基的pH为6.0；
(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养30天，得到健壮植株，其中，MS壮苗培养基为MS基本培养基中加入6～BA 0.5～1.5mg/L，NAA 0.1～0.5mg/L，30mg/L蔗糖，5mg/L琼脂，培养基的pH为6.0；
(5)健壮植株生根培养：将步骤(4)得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基培养，在温度为22～26度，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天的条件下培养30天，得到带根完整植株，其中，1/2MS生根培养基为MS基本培养基中加入0.1～1.0mg/L NAA，0.1～0.5mg/L ABT生根粉，15g/L蔗糖，5g/L琼脂，培养基pH为6.0；
(6)炼苗与移栽：组培瓶中加入少量自来水，松开瓶盖，炼苗一周，待表面角质形成后，将幼苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到沙床中，在沙床中生长一个月后移栽到大田。
CN201510052859.1A 2015-02-02 2015-02-02 一种酒瓶兰组织培养快速繁殖方法 Expired - Fee Related CN104585037B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510052859.1A CN104585037B (zh) 2015-02-02 2015-02-02 一种酒瓶兰组织培养快速繁殖方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510052859.1A CN104585037B (zh) 2015-02-02 2015-02-02 一种酒瓶兰组织培养快速繁殖方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104585037A CN104585037A (zh) 2015-05-06
CN104585037B true CN104585037B (zh) 2016-11-30

Family

ID=53111379

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510052859.1A Expired - Fee Related CN104585037B (zh) 2015-02-02 2015-02-02 一种酒瓶兰组织培养快速繁殖方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104585037B (zh)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105284619B (zh) * 2015-11-09 2017-10-24 广西壮族自治区药用植物园 多花指甲兰组织培养快速繁殖方法
CN106561453B (zh) * 2016-10-31 2018-06-05 广西壮族自治区药用植物园 大花金钱豹的快速繁殖方法
CN107018905B (zh) * 2017-05-17 2018-11-09 天津润松生态科技发展有限公司 一种酒瓶兰试管苗种质保存方法
CN107691225A (zh) * 2017-11-14 2018-02-16 广西壮族自治区药用植物园 土沉香愈伤组织成苗的快速繁殖方法
CN107771673A (zh) * 2017-11-14 2018-03-09 广西壮族自治区药用植物园 乌桕愈伤组织成苗的快速繁殖方法
CN107810854B (zh) * 2017-11-27 2020-09-01 北京农学院 生石花离体培养与快繁的方法
CN114467747A (zh) * 2021-12-06 2022-05-13 上海辰山植物园 一种蒙自兰快速繁殖方法及培养基

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2006257088A1 (en) * 2005-06-17 2006-12-21 Kobenhavns Universitet Novel plants

Also Published As

Publication number Publication date
CN104585037A (zh) 2015-05-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104585037B (zh) 一种酒瓶兰组织培养快速繁殖方法
CN103371100B (zh) 春石斛兰种苗的组织培养快速繁殖方法
CN100444722C (zh) 杜鹃兰的组织培养与快速繁殖方法
CN103299911B (zh) 一种高效获得素心建兰脱毒幼苗的方法
CN103704130B (zh) 一种春兰与大花蕙兰杂交种育苗的方法
CN102187810B (zh) 一种所罗门姜黄的组织培养繁殖方法
CN102301951B (zh) 一种广豆根组织培养快速繁殖方法
CN103202229B (zh) 一种绿花重瓣铁线莲组织培养快繁方法
CN102613076A (zh) 一种蝴蝶兰的无性繁殖方法
CN103392597A (zh) 一种北美海棠的组织培养方法
CN104041412A (zh) 一种贵州半蒴苣苔的组织培养快速繁殖方法
CN110972947A (zh) 一种绣球-北极熊组织培养的培养基及培养方法
CN104920223A (zh) 一种墨兰种苗繁殖方法
CN102823502A (zh) 毛葡萄离体快速繁殖培养方法
CN104303745A (zh) 一种玉簪组培苗瓶外生根的方法
CN104719158A (zh) 一种以种子为外植体的快速建立中型狼尾草组织培养再生体系的方法
CN106665367B (zh) 一种黄花风铃木组织培养快速繁殖方法
CN101743908A (zh) 红花银桦组培快繁及栽培方法
CN105519445A (zh) 一种猪笼草离体快繁方法
CN107155882A (zh) 一种药用白芨无菌播种快速育苗方法
JP2017074031A (ja) 希少対馬産オニユリの栽培方法
CN101011011B (zh) 丁香品种‘罗蓝紫’幼苗的越冬促长方法
CN105104197A (zh) 一种滇桂石斛组织培养繁育方法
CN104429964A (zh) 一种紫香兰组培快繁方法
CN104255493B (zh) 一种生产青葙拇指花的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20161130

Termination date: 20170202