CN103299911B - 一种高效获得素心建兰脱毒幼苗的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高效获得素心建兰脱毒幼苗的方法，选择生活状态较好的素心建兰朔果，经15%双氧水、0.1%升汞和75%酒精消毒处理后接种在MF固体培养基中萌发，待种子萌发生长到形成2个嫩叶后，剪取素心建兰幼苗的嫩芽尖、茎尖或者根尖，消毒处理后放入到诱导原球茎培养基MY中进行脱分化培养形成原球茎，原球茎取出分切成1mm2大小的小块，接种在原球茎再分化诱导培养基MZ中先后诱导形成新芽、新根，当幼苗株高长到4cm-6cm，具有5-6个根时，将植物组织培养瓶的无菌瓶盖打开，拿到光照培养架上培养，逐渐进行驯化培养。本发明能够提高素心建兰幼苗培育的成功率，而且还能大大缩短育种周期，得到脱毒的素心建兰幼苗。
Description
技术领域
本发明涉及一种高效获得素心建兰脱毒幼苗的方法，具体涉及一种通过种子诱导萌发、原球茎诱导培养、原球茎诱导再分化及驯化等高效获得素心建兰脱毒幼苗的方法。
背景技术
素心建兰是国宝蕙兰的重要品种，素心建兰是多年生草本植物，是兰属中一部分附生性种类及小部分地生兰种类的杂交种，假鳞茎不明显，集生成丛，呈椭圆形，花常为浅黄绿色，有深紫红色的脉纹和斑点，花通常香气浓郁，一般生活在温带、亚热带，由于其形态秀丽，常作为盆栽，为室内布置之佳品。
素心建兰的繁殖技术主要由三种，分株繁殖、种子繁殖和组织培养繁殖，分株繁殖速度非常慢，并且繁殖系数低，周期长，易伤及母株；素心建兰种子极小，种子内部含胚乳，在自然条件下发芽率极低，很难满足规模化生产的需要。通过组织培养获得素心建兰幼苗目前越来越多被人们应用，例如申请号为CN201010244860.1的中国专利公开了“中国蕙兰组织培养的培养基及培养方法”，通过选取生长健康的绿色原球茎或根状茎做外外植体，以花宝一号作为基本培养基在人工培养箱中诱导培养形成幼苗。
但是组培幼苗移栽到外界基质土壤中存活率很低，成苗效率不太理想，据文献报道在很大程度上与无菌快速繁殖条件下共生真菌侵染效率低下有关，本发明通过培养基诱导素心建兰种子萌发，再经过培养基诱导形成幼苗后，让幼苗与根菌真菌混合培养，大大提高无菌幼苗的成活率。
发明内容
本发明的目的是针对上述素心建兰在繁殖过程中遇到的种种问题，提供了一种高效获得素心建兰脱毒幼苗的方法。
为达到上述目的，本发明采取的技术方案为：一种高效获得素心建兰脱毒幼苗的方法，包括素心建兰种子萌发诱导、外植体选择与消毒、原球茎诱导、原球茎的保存、原球茎再分化诱导以及幼苗驯化培养。其特征在于：
a、素心建兰种子萌发诱导
选择生活状态较好的素心建兰蒴果，将其取下，放在3-5℃冰箱中处理1周，使种子完成后熟。用剪刀将蒴果剪开取出种子，由于种子较细，将种子放置在孔径极细的聚丙烯筛网中，用10%双氧水进行消毒处理10min，取出后用无菌水反复冲洗2-3次，沥干水分；然后再利用0.1%升汞溶液处理2min，取出后用无菌水反复冲洗2-3次，沥干水分；最后将种子放在70%-75%酒精中消毒处理30s，处理后用无菌水反复冲洗3-4遍，将水分沥干；
处理后的种子播撒在改良MS固体培养基中，后将播种有素心建兰种子的培养基放在人工气候培养箱中培养，培养条件为相对湿度为60%-70%，20℃-25℃，2500lux光照12h/d处理，1.5-2月后素心建兰种子萌发；
所述改良MS培养基配方为1/3MS培养基+肌醇100 mg/L+维生素B6 0.5 mg/L+维生素B1 0.1 mg/L+维生素C 0.5 mg/L+甘氨酸2.0 mg/L+活性炭10g/L+烂树叶5g/L+花宝3g/L+椰子汁10ml/L+生长素类物质0.1-0.2mg/L+细胞分裂素类物质0.1-0.2mg/L mg/L+蔗糖30g/L+琼脂条10g/L，pH为5.3-5.5，121℃，20min灭菌；
所述生长素类物质为6-苄氨基嘌呤、吲哚乙酸、吲哚丙酸、吲哚丁酸，萘乙酸、萘乙酸钠、萘氧乙酸、萘乙酰胺、2,4-D、2,4,5-T、4-碘苯氧乙酸或2,4-D丁酯中的任意一种或几种的组合；
所述细胞分裂素物质为玉米素、还有玉米素核苷、二氢玉米素、异戊烯基腺嘌呤、激动素、6-苄基腺嘌呤、四氢吡喃苄基腺嘌呤、二苯脲或KT-30中的任意一种或几种的组合；
b、外植体选择
待素心建兰种子萌发后，生长到形成2-3个嫩叶后，在无菌操作环境中用解剖刀剪取素心建兰幼苗的嫩芽尖、茎尖或者根尖，剪下的嫩芽尖、茎尖或者根尖放在0.1%升汞溶液处理20s，后将其放在70%-75%酒精中消毒处理10s，再用无菌水反复冲洗3-4遍，沥干水分；
c、原球茎诱导
冲洗后在无菌环境中用剪刀将嫩芽尖、茎尖或者根尖剪成1mm2大小的片状，加入到诱导原球茎培养基中，每个组织培养瓶中放入10-15个外植体碎片，接种后放在人工气候培养箱中培养，培养大约3-4个月后，培养基中出现淡黄色的球状紧密的细胞团，该细胞团即为素心建兰的原球茎；
所述诱导原球茎培养基配方为1/3MS培养基+肌醇100 mg/L+维生素B6 0.5 mg/L+维生素B1 0.1 mg/L+维生素C 0.5 mg/L+甘氨酸2.0 mg/L+活性炭10g/L+烂树叶5g/L+花宝3g/L+椰子汁10ml/L+生长素类物质0.5-1.0mg/L+细胞分裂素类物质为1.5-2.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂条10g/L，pH为5.3-5.5，121℃，20min灭菌；
所述生长素类物质为6-苄氨基嘌呤、吲哚乙酸、吲哚丙酸、吲哚丁酸，萘乙酸、萘乙酸钠、萘氧乙酸、萘乙酰胺、2,4-D、2,4,5-T、4-碘苯氧乙酸或2,4-D丁酯中的任意一种或几种的组合；
所述细胞分裂素物质为玉米素、还有玉米素核苷、二氢玉米素、异戊烯基腺嘌呤、激动素、6-苄基腺嘌呤、四氢吡喃苄基腺嘌呤、二苯脲或KT-30中的任意一种或几种的组合；
所述诱导原球茎的培养条件为相对湿度为60%-70%，20℃-25℃，500lux光照12h/d处理。
d、原球茎的保存与扩大培养
原球茎形成后，将原球茎取出放在干净无菌的塑料培养皿中，在无菌条件下用解剖刀将原球茎分切成1mm2大小的小块，接种在原球茎保存培养基中培养，培养条件为温度设定为60%-70%，20℃-25℃，500lux光照12h/d处理，每隔120-150天转接一次继续传代培养，提高原球茎的繁殖系数。
所述原球茎保存培养基的配方同诱导原球茎形成培养基配方相同，培养条件与诱导原球茎形成过程条件一致。
e、原球茎的再分化诱导
将原球茎取出放在干净无菌的塑料培养皿中，在无菌条件下用解剖刀将胚性原球茎分切成1mm2大小的小块，接种在原球茎再分化诱导培养基中诱导培养，大约培养3周左右，原球茎再分化形成新芽，然后再将形成新芽的原球茎转移到诱导根形成培养基中继续培养，诱导培养形成新根，大约培养3-4周开始形成新根，培养条件为为温度设定为60%-70%，25℃-27℃，2500lux光照12h/d处理；
所述原球茎芽分化诱导培养基的配方为1/3MS培养基+肌醇100 mg/L+维生素B6 0.5 mg/L+维生素B1 0.1 mg/L+维生素C 0.5 mg/L+甘氨酸2.0 mg/L+活性炭10g/L+烂树叶5g/L+花宝3g/L+椰子汁10ml/L+细胞分裂素类物质为1.5-2.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂条10g/L，pH为5.3-5.5，121℃，20min灭菌；
所述原球茎根分化诱导培养基的配方为1/3MS培养基+肌醇100 mg/L+维生素B6 0.5 mg/L+维生素B1 0.1 mg/L+维生素C 0.5 mg/L+甘氨酸2.0 mg/L+活性炭10g/L+烂树叶5g/L+花宝3g/L+椰子汁10ml/L+生长素类物质为0.5-1.0mg/L mg/L，蔗糖20g/L，琼脂条10g/L，pH为5.3-5.5；
所述生长素类物质为6-苄氨基嘌呤、吲哚乙酸、吲哚丙酸、吲哚丁酸，萘乙酸、萘乙酸钠、萘氧乙酸、萘乙酰胺、2,4-D、2,4,5-T、4-碘苯氧乙酸或2,4-D丁酯中的任意一种或几种的组合；
所述细胞分裂素物质为玉米素、还有玉米素核苷、二氢玉米素、异戊烯基腺嘌呤、激动素、6-苄基腺嘌呤、四氢吡喃苄基腺嘌呤、二苯脲或KT-30中的任意一种或几种的组合；
f、幼苗驯化培养
当幼苗株高长到4cm-6cm，具有5-6个根时，将植物组织培养瓶的无菌瓶盖打开，将组织培养瓶从人工气候培养箱中拿出放在光照培养架上培养，逐渐将室内恒温空调关闭，连续驯化一周左右，然后将组培幼苗从组培瓶中移出，移栽到素心建兰驯化基质中，定期浇水施加1/5MS液体培养液，移至室外遮阳网下生长，生长大约4-5周后，移栽到素心建兰栽培基质种，在正常光照、温度条件下常规栽培管理。
所述素心建兰驯化基质的制作方法如下：从正常生长的素心建兰根部选取基质，将基质加入到已灭菌处理的真菌培养基中进行富集培养，培养2-3周时间后，将富集得到的根菌真菌进行扩大培养，然后将扩大培养得到的根菌真菌与活性炭、烂树叶、花宝、椰子壳和培蕾牌兰花培养专用土壤均匀混合作为素心建兰驯化基质。
所述真菌培养基配方为麦芽糖40g，蛋白胨10g，酵母浸膏5g，NaCl 5.0g，琼脂20g，蒸馏水1000ml，pH 5.2-5.5，121℃，20min灭菌处理。
所述建兰驯化基质的配方为活性炭10g，烂树叶粉末20g，花宝10g，椰子壳粉末20g，培蕾牌兰花培养专用土壤900g，真菌培养液40g，搅拌均匀后使用。
本发明所述的一种高效获得素心建兰脱毒幼苗的方法，与现有技术相比其有益效果为：1、先后通过10%双氧水、0.1%升汞和75%酒精消毒处理，将素心建兰种子播种在改良MS固体培养基上，能够显著提高素心建兰种子的发芽率，发芽率最高可达49.5%，远远高于自然条件下的发芽率；2、通过改变原球茎诱导培养基中的生长素种类以及细胞分裂素的种类组合以及配比，能够有效地提高了原球茎形成的成功率，诱导外植体经过脱分化形成原球茎，诱导率可达79.6%；3、通过改变培养基的激素含量与配比以及培养条件，能够很好地保存原球茎，同时还能将原球茎切成小块，诱导增殖，在原球茎保存的同时，实现原球茎数量呈指数增长， 提高原球茎的繁殖系数，一般素心建兰一年的繁殖倍数均低于2倍，通过本发明方法能够使素心建兰的繁殖倍数提高到7.5倍以上；4、通过将诱导形成的原球茎先后移入到原球茎芽分化诱导培养基、原球茎根分化诱导培养基中，通过不同激素对原球茎刺激作用，这样有目的性地诱导原球茎形成新芽、新根；5、本发明采用的炼苗处理方法：当幼苗株高长到4cm-6cm，具有5-6个根时，将植物组织培养瓶的无菌瓶盖打开，将组织培养瓶从人工气候培养箱中拿出放在光照培养架上培养，逐渐将室内恒温空调关闭，连续驯化一周左右，然后将组培幼苗从组培瓶中移出，移栽到素心建兰驯化基质中，定期浇水施加1/5MS液体培养液，移至室外遮阳网下生长，生长大约4-5周后，移栽到素心建兰栽培基质种，在正常光照、温度条件下常规栽培管理，大大提高无菌苗移栽的成活率，成活率可达95.6%以上。
具体实施方式
以下结合具体实施方式，对本发明进行详细说明。
实施例1
一种高效获得素心建兰脱毒幼苗的方法，具体步骤如下：
a、素心建兰种子萌发诱导
选择生活状态较好的素心建兰蒴果，将其取下，放在3-5℃冰箱中处理1周，使种子完成后熟；用剪刀将蒴果剪开取出种子，将种子放置在孔径极细的聚丙烯筛网中，用10%双氧水进行消毒处理10min，取出后用无菌水反复冲洗3次，沥干水分；然后再利用0.1%升汞溶液处理2min，取出后用无菌水反复冲洗3次，沥干水分；最后将种子放在75%酒精中消毒处理30s，处理后用无菌水反复冲洗3遍，将水分沥干；处理后的种子播撒在改良MS固体培养基中，后将播种有素心建兰种子的培养基放在人工气候培养箱中培养，培养条件为相对湿度为70%， 25℃，2500lux光照12h/d处理，1.5月后素心建兰种子萌发；发芽率50.1%
b、外植体选择与消毒
待素心建兰种子萌发后，生长到形成3个嫩叶后，在无菌操作环境中用解剖刀剪取素心建兰幼苗的嫩芽尖、茎尖或者根尖，剪下的嫩芽尖、茎尖或者根尖放在0.1%升汞溶液处理20s，后将其放在75%酒精中消毒处理10s，再用无菌水反复冲洗3遍，沥干水分；
c、原球茎诱导
冲洗后在无菌环境中用剪刀将嫩芽尖、茎尖或者根尖剪成1mm2大小的片状，加入到诱导原球茎培养基中，每个组织培养瓶中放入12个外植体碎片，接种后放在人工气候培养箱中培养，培养3个月后，培养基中出现淡黄色的球状紧密的细胞团，该细胞团即为素心建兰的原球茎；所述诱导原球茎的培养条件为相对湿度为65%，温度为23℃，500lux光照12h/d处理；诱导率86.7%；
d、原球茎的保存与扩大培养
原球茎形成后，将原球茎取出放在干净无菌的塑料培养皿中，在无菌条件下用解剖刀将原球茎分切成1mm2大小的小块，接种在原球茎保存培养基中培养，每隔120天转接一次继续传代培养，提高原球茎的繁殖系数；所述原球茎保存培养基的配方同诱导原球茎形成培养基配方相同，培养条件与诱导原球茎形成过程条件一致；
e、原球茎的再分化诱导
将原球茎取出放在干净无菌的塑料培养皿中，在无菌条件下用解剖刀将胚性原球茎分切成1mm2大小的小块，接种在原球茎再分化诱导培养基中诱导培养，大约培养3周左右，原球茎再分化形成新芽，然后再将形成新芽的原球茎转移到诱导根形成培养基中继续培养，诱导培养形成新根，大约培养3周开始形成新根，培养条件为为温度设定为65%，23℃，2500lux光照12h/d处理；
f、幼苗驯化培养
当幼苗株高长到5cm，具有6个根时，将植物组织培养瓶的无菌瓶盖打开，将组织培养瓶从人工气候培养箱中拿出放在光照培养架上培养，逐渐将室内恒温空调关闭，连续驯化一周左右，然后将组培幼苗从组培瓶中移出，移栽到素心建兰驯化基质中，定期浇水施加1/5MS液体培养液，移至室外遮阳网下生长，生长4周后，移栽到素心建兰栽培基质种，在正常光照、温度条件下常规栽培管理。成功率98.1.
所述建兰驯化基质的配方为活性炭10g，烂树叶粉末20g，花宝10g，椰子壳粉末20g，培蕾牌兰花培养专用土壤900g，真菌培养液40g；所述素心建兰驯化基质的制作方法如下：从正常生长的素心建兰根部选取基质，将基质加入到已灭菌处理的真菌培养基中进行富集培养，培养2周时间后，将富集得到的根菌真菌进行扩大培养，然后将扩大培养得到的根菌真菌与活性炭、烂树叶、花宝、椰子壳和培蕾牌兰花培养专用土壤均匀混合作为素心建兰驯化基质。
所述真菌培养基配方为麦芽糖40g，蛋白胨10g，酵母浸膏5g，NaCl 5.0g，琼脂20g，蒸馏水1000ml，pH 5.5，121℃，20min灭菌处理；所述改良MS培养基配方为1/3MS培养基+肌醇100 mg/L+维生素B6 0.5 mg/L+维生素B1 0.1 mg/L+维生素C 0.5 mg/L+甘氨酸2.0 mg/L+活性炭10g/L+烂树叶5g/L+花宝3g/L+椰子汁10ml/L+6-苄氨基嘌呤0.05ml/L+吲哚乙酸0.05ml/L+萘乙酸0.05mg/L+玉米素0.05mg/L+激动素0.05mg/L+6-苄基腺嘌呤0.05mg/L mg/L+蔗糖30g/L+琼脂条10g/L，pH为5.5，121℃，20min灭菌。
所述诱导原球茎培养基配方为1/3MS培养基+肌醇100 mg/L+维生素B6 0.5 mg/L+维生素B1 0.1 mg/L+维生素C 0.5 mg/L+甘氨酸2.0 mg/L+活性炭10g/L+烂树叶5g/L+花宝3g/L+椰子汁10ml/L+6-苄氨基嘌呤0.3ml/L+吲哚乙酸0.2ml/L+萘乙酸0.2mg/L+玉米素0.5ml/L+激动素0.6ml/L+6-苄基腺嘌呤0.6mg/L+蔗糖20g/L+琼脂条10g/L，pH为5.3，121℃，20min灭菌。
所述原球茎芽分化诱导培养基的配方为1/3MS培养基+肌醇100 mg/L+维生素B6 0.5 mg/L+维生素B1 0.1 mg/L+维生素C 0.5 mg/L+甘氨酸2.0 mg/L+活性炭10g/L+烂树叶5g/L+花宝3g/L+椰子汁10ml/L+玉米素0.5ml/L+激动素0.6ml/L+6-苄基腺嘌呤0.6mg/L+蔗糖20g/L+琼脂条10g/L，pH为5.4，121℃，20min灭菌。
所述原球茎根分化诱导培养基的配方为1/3MS培养基+肌醇100 mg/L+维生素B6 0.5 mg/L+维生素B1 0.1 mg/L+维生素C 0.5 mg/L+甘氨酸2.0 mg/L+活性炭10g/L+烂树叶5g/L+花宝3g/L+椰子汁10ml/L+6-苄氨基嘌呤0.3ml/L+吲哚乙酸0.2ml/L+萘乙酸0.2mg/L，蔗糖20g/L，琼脂条10g/L，pH为5.5。
Claims (1)
1.一种高效获得素心建兰脱毒幼苗的方法，其特征在于：包括素心建兰种子萌发诱导、外植体选择与消毒、原球茎诱导、原球茎的保存与扩大培养、原球茎再分化诱导以及幼苗驯化培养，具体步骤如下：
a、素心建兰种子萌发诱导
选择生活状态较好的素心建兰蒴果，将其取下，放在3-5℃冰箱中处理1周，使种子完成后熟；用剪刀将蒴果剪开取出种子，将种子放置在孔径极细的聚丙烯筛网中，用10%双氧水进行消毒处理10min，取出后用无菌水反复冲洗3次，沥干水分；然后再利用0.1%升汞溶液处理2min，取出后用无菌水反复冲洗3次，沥干水分；最后将种子放在75%酒精中消毒处理30s，处理后用无菌水反复冲洗3遍，将水分沥干；处理后的种子播撒在改良MS固体培养基中，后将播种有素心建兰种子的培养基放在人工气候培养箱中培养，培养条件为相对湿度为70%， 25℃，2500lux光照12h/d处理，1.5-2月后素心建兰种子萌发；
b、外植体选择与消毒
待素心建兰种子萌发后，生长到形成2-3个嫩叶后，在无菌操作环境中用解剖刀剪取素心建兰幼苗的嫩芽尖、茎尖或者根尖，剪下的嫩芽尖、茎尖或者根尖放在0.1%升汞溶液处理20s，后将其放在75%酒精中消毒处理10s，再用无菌水反复冲洗3遍，沥干水分；
c、原球茎诱导
冲洗后在无菌环境中用剪刀将嫩芽尖、茎尖或者根尖剪成1mm2大小的片状，加入到诱导原球茎培养基中，每个组织培养瓶中放入10-15个外植体碎片，接种后放在人工气候培养箱中培养，培养3个月后，培养基中出现淡黄色的球状紧密的细胞团，该细胞团即为素心建兰的原球茎；所述原球茎诱导的培养条件为相对湿度为65%，温度为23℃，500lux光照12h/d处理；
d、原球茎的保存与扩大培养
原球茎形成后，将原球茎取出放在干净无菌的塑料培养皿中，在无菌条件下用解剖刀将原球茎分切成1mm2大小的小块，接种在原球茎保存培养基中培养，每隔120天转接一次继续传代培养，提高原球茎的繁殖系数；所述原球茎保存培养基的配方同诱导原球茎培养基配方相同，培养条件与诱导原球茎形成过程条件一致；
e、原球茎的再分化诱导
将原球茎取出放在干净无菌的塑料培养皿中，在无菌条件下用解剖刀将胚性原球茎分切成1mm2大小的小块，接种在原球茎再分化诱导培养基中诱导培养，大约培养3周再分化形成新芽，然后再将形成新芽的原球茎转移到诱导根形成培养基中继续培养，诱导培养形成新根，大约培养3周开始形成新根，培养条件为湿度设定为65%，温度为23℃，2500lux光照12h/d处理；
f、幼苗驯化培养
当幼苗株高长到4cm-6cm，具有5-6个根时，将植物组织培养瓶的无菌瓶盖打开，将组织培养瓶从人工气候培养箱中拿出放在光照培养架上培养，逐渐将室内恒温空调关闭，连续驯化一周左右，然后将组培幼苗从组培瓶中移出，移栽到素心建兰驯化基质中，定期浇水施加1/5MS液体培养液，移至室外遮阳网下生长，生长4-5周后，移栽到素心建兰栽培基质中，在正常光照、温度条件下常规栽培管理；
所述建兰驯化基质的配方为活性炭10g，烂树叶粉末20g，花宝10g，椰子壳粉末20g，培蕾牌兰花培养专用土壤900g，真菌培养基40g；所述素心建兰驯化基质的制作方法如下：从正常生长的素心建兰根部选取基质，将基质加入到已灭菌处理的真菌培养基中进行富集培养，培养2周时间后，将富集得到的根菌真菌进行扩大培养，然后将扩大培养得到的根菌真菌与活性炭、烂树叶、花宝、椰子壳和培蕾牌兰花培养专用土壤均匀混合作为素心建兰驯化基质；
所述真菌培养基配方为麦芽糖40g，蛋白胨10g，酵母浸膏5g，NaCl 5.0g，琼脂20g，蒸馏水1000ml，pH 5.5，121℃，20min灭菌处理；所述改良MS固体培养基为1/3MS培养基+肌醇100 mg/L+维生素B6 0.5 mg/L+维生素B1 0.1 mg/L+维生素C 0.5 mg/L+甘氨酸2.0 mg/L+活性炭10g/L+烂树叶5g/L+花宝3g/L+椰子汁10ml/L+6-苄氨基嘌呤0.05mg/L+吲哚乙酸0.05mg/L+萘乙酸0.05mg/L+玉米素0.05mg/L+激动素0.05mg/L+6-苄基腺嘌呤0.05mg/L +蔗糖30g/L+琼脂条10g/L，pH为5.5，121℃，20min灭菌；
所述诱导原球茎培养基配方为1/3MS培养基+肌醇100 mg/L+维生素B6 0.5 mg/L+维生素B1 0.1 mg/L+维生素C 0.5 mg/L+甘氨酸2.0 mg/L+活性炭10g/L+烂树叶5g/L+花宝3g/L+椰子汁10ml/L+6-苄氨基嘌呤0.3mg/L+吲哚乙酸0.2mg/L+萘乙酸0.2mg/L+玉米素0.5mg/L+激动素0.6mg/L+6-苄基腺嘌呤0.6mg/L+蔗糖20g/L+琼脂条10g/L，pH为5.3，121℃，20min灭菌；
所述原球茎再分化诱导培养基的配方为1/3MS培养基+肌醇100 mg/L+维生素B6 0.5 mg/L+维生素B1 0.1 mg/L+维生素C 0.5 mg/L+甘氨酸2.0 mg/L+活性炭10g/L+烂树叶5g/L+花宝3g/L+椰子汁10ml/L+玉米素0.5mg/L+激动素0.6mg/L+6-苄基腺嘌呤0.6mg/L+蔗糖20g/L+琼脂条10g/L，pH为5.4，121℃，20min灭菌；
所述诱导根形成培养基的配方为1/3MS培养基+肌醇100 mg/L+维生素B6 0.5 mg/L+维生素B1 0.1 mg/L+维生素C 0.5 mg/L+甘氨酸2.0 mg/L+活性炭10g/L+烂树叶5g/L+花宝3g/L+椰子汁10ml/L+6-苄氨基嘌呤0.3mg/L+吲哚乙酸0.2mg/L+萘乙酸0.2mg/L，蔗糖20g/L，琼脂条10g/L，pH为5.5。
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