CN105519448A - 一种黄芪组培苗的培养方法 - Google Patents

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    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
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Abstract

本发明公开了一种黄芪组织培养育苗方法，包括1)种子消毒，2)无菌苗的培养，3)丛生芽初代诱导培养，4)丛生牙继代诱导培养，5)诱导生根，6)试管苗的移栽。本发明中种子消毒后其萌发率可达99％，且不发生任何污染现象；丛生芽诱导率达50％～75％，成苗达90％以上，可以满足人工大量栽培的需要，而且培育出的黄芪苗能保持母体优良性状，移栽后生长快，产量高，移栽后2～3年可收获，比传统栽培时间缩短1年左右，在同等管理条件下比传统栽培产量提高30％。

Description

一种黄芪组培苗的培养方法
技术领域
本发明属于中药材繁殖栽培技术领域，具体涉及一种黄芪组培苗的培养方法。
背景技术
植物组织培养是从20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术，是指在无菌条件下，将离体的植物器官(如根尖、茎尖、叶、花、未成熟的果实、种子等)、组织(如形成层、花药组织、胚乳、皮层等)、细胞(如体细胞、生殖细胞等)、胚胎(如成熟和未成熟的胚)或原生质体等在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱发产生愈伤组织或潜伏芽等，或长成完整的植株的技术，由于是在试管内培养，而且培养的是脱离植株母体的培养物，因此也称之为离体培养或试管培养。
黄芪是豆科蝶形花亚科多年生草本植物，具有很高的药用价值和经济价值。但由于近年来的过度采挖，致使野生黄芪资源几近枯竭，不能满足市场的需要，所以离体培养已成为增加黄芪产量的主要手段之一，黄芪快速繁殖体系的建立，主要是针对种子的消毒和萌发、外植体的筛选、愈伤组织初代诱导培养基、继代增殖培养基和生根培养基的选择，以及褐化现象的抑制进行的。
近年来，黄芪通过多代的种植与繁殖，出现生长缓慢，易染病，产量不高的问题，期刊《甘肃农业科技》，2010年第6期，30-32页，妈伟明等人提供了黄芪愈伤组织的诱导及分化培养的方法，采用了叶片作为外植体，但不利于诱导出完整的植株，黄芪苗的生活力弱。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中黄芪栽培出现生长缓慢，易染病，产量不高的问题，提供一种组织培养育苗方法，提高黄芪育苗成苗率，而且能保持母体优良性状，移栽后生长快，产量高，可大面积进行黄芪人工栽培。
为实现上述目的，本发明所述的一种黄芪组织培养育苗方法，具体包括以下步骤：
1)种子消毒：将黄芪种子浸泡在适量洗洁精10-15min中后，再依次进行45s中75％的酒精浸泡和10-15min，0.1％的升汞消毒；
2)无菌苗的培养：将步骤1)消毒后的种子在超净工作台上用无菌水浸洗3～5次，每次浸洗3分钟，然后将种子播种于培养基，在人工气候箱放置培养，人工气候箱环境控制如下：湿度50％左右，18h光照/6h黑暗，25℃白天/18℃晚上；
3)丛生芽初代诱导培养：当步骤2)培养的无菌苗长至5～6厘米后，切取下胚轴为外植体，2.6～2.9厘米，接入丛生芽初代诱导培养基，培养前3天进行暗培养，其余7天进行光培养(10h/d)后即有丛生芽形成；
4)丛生牙继代诱导培养，将步骤3)中的丛生芽转移到继代诱导培养中，诱导50-60天；
5)诱导生根：当继代增殖的丛生芽有70％长至3～4厘米时，将健壮的芽单切，并转到新的诱导过的培养基上诱导生根，生根培养基为1/2MS+2.0mg/LNAA+0.3％的活性炭(AC)；
6)试管苗的移栽：将发育良好，具有2～3张展开叶片的试管苗瓶盖打开，置于室温下炼苗3～4天后取出小苗，用清水洗去根部了培养基，在有75％～80％遮荫度的大棚内，移栽到苗床或营养杯中，浇透水，并用塑料薄膜覆盖，每天揭开薄膜换气45分钟，喷水雾保持空气湿度85％以上，8天后，可揭去薄膜，按常规管理。
所述步骤2)中光照，单位面积的光通量为1050lx。
所述步骤3)中丛生芽初代诱导培养基为MS+0.5或1.0mg/L6-BA+0.15mg/LNAA+0.1mg/LVc，培养基温度保持24℃～26℃，PH值5.9～6.2。
所述步骤4)中丛生牙继代诱导培养为MS+0.5或1.0mg/L6-BA+0.15mg/LNAA+0.1mg/LVc+2.5％的蔗糖，培养基温度保持24℃～26℃，PH值5.9～6.2。
本发明的有益效果之处：
本发明中种子消毒后其萌发率可达99％，且不发生任何污染现象；本发明的黄芪育苗方法，取材方便，丛生芽诱导率达60％～85％，成苗达90％以上，可以满足人工大量栽培的需要，而且培育出的黄芪苗能保持母体优良性状，移栽后生长快，产量高，移栽后2～3年可收获，比传统栽培时间缩短1年左右，每亩产黄芪干品650千克，在同等管理条件下比传统栽培产量提高30％。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明具体的方案进行详细说明。
实施例1
本发明所述的一种黄芪组织培养育苗方法，具体包括以下步骤：
1)种子消毒：将黄芪种子浸泡在适量洗洁精10min中后，再依次进行45s中75％的酒精浸泡和15min，0.1％的升汞消毒；
2)无菌苗的培养：将步骤1)消毒后的种子在超净工作台上用无菌水浸洗5次，每次浸洗3分钟，然后将种子播种于培养基，在人工气候箱放置培养，人工气候箱环境控制如下：湿度50％左右，18h光照/6h黑暗，25℃白天/18℃晚上，单位面积的光通量为1050lx；
3)丛生芽初代诱导培养：当步骤2)培养的无菌苗长至6厘米后，切取下胚轴为外植体，2.9厘米，接入丛生芽初代诱导培养基，丛生芽初代诱导培养基为MS+0.5或1.0mg/L6-BA+0.15mg/LNAA+0.1mg/LVc，培养基温度保持24℃，PH值6.0，培养前3天进行暗培养，其余7天进行光培养(10h/d)后即有丛生芽形成；
4)丛生牙继代诱导培养，将步骤3)中的丛生芽转移到继代诱导培养中，丛生牙继代诱导培养为MS+0.5或1.0mg/L6-BA+0.15mg/LNAA+0.1mg/LVc+2.5％的蔗糖，培养基温度保持24℃，PH值6.2，诱导50天；
5)诱导生根：当继代增殖的丛生芽有70％长至4厘米时，将健壮的芽单切，并转到新的诱导过的培养基上诱导生根，生根培养基为1/2MS+2.0mg/LNAA+0.3％的活性炭(AC)；
6)试管苗的移栽：将发育良好，具有3张展开叶片的试管苗瓶盖打开，置于室温下炼苗4天后取出小苗，用清水洗去根部了培养基，在有80％遮荫度的大棚内，移栽到苗床或营养杯中，浇透水，并用塑料薄膜覆盖，每天揭开薄膜换气45分钟，喷水雾保持空气湿度85％以上，8天后，可揭去薄膜，按常规管理。
实施例2
本发明所述的一种黄芪组织培养育苗方法，具体包括以下步骤：
1)种子消毒：将黄芪种子浸泡在适量洗洁精15min中后，再依次进行45s中75％的酒精浸泡和15min，0.1％的升汞消毒；
2)无菌苗的培养：将步骤1)消毒后的种子在超净工作台上用无菌水浸洗5次，每次浸洗3分钟，然后将种子播种于培养基，在人工气候箱放置培养，人工气候箱环境控制如下：湿度50％左右，18h光照/6h黑暗，25℃白天/18℃晚上，单位面积的光通量为1050lx；
3)丛生芽初代诱导培养：当步骤2)培养的无菌苗长至6厘米后，切取下胚轴为外植体，2.5厘米，接入丛生芽初代诱导培养基，丛生芽初代诱导培养基为MS+0.5或1.0mg/L6-BA+0.15mg/LNAA+0.1mg/LVc，培养基温度保持24℃，PH值6.0，培养前3天进行暗培养，其余7天进行光培养(10h/d)后即有丛生芽形成；
4)丛生牙继代诱导培养，将步骤3)中的丛生芽转移到继代诱导培养中，丛生牙继代诱导培养为MS+0.5或1.0mg/L6-BA+0.15mg/LNAA+0.1mg/LVc+2.5％的蔗糖，培养基温度保持24℃，PH值6.0，诱导50天；
5)诱导生根：当继代增殖的丛生芽有70％长至4厘米时，将健壮的芽单切，并转到新的诱导过的培养基上诱导生根，生根培养基为1/2MS+2.0mg/LNAA+0.3％的活性炭(AC)；
6)试管苗的移栽：将发育良好，具有3张展开叶片的试管苗瓶盖打开，置于室温下炼苗4天后取出小苗，用清水洗去根部了培养基，在有80％遮荫度的大棚内，移栽到苗床或营养杯中，浇透水，并用塑料薄膜覆盖，每天揭开薄膜换气45分钟，喷水雾保持空气湿度85％以上，8天后，可揭去薄膜，按常规管理。
诱导培养在无菌条件下，将带下胚轴接种诱导处理，每处理25瓶，每瓶接2个茎段或叶片。20d后开始目测观察记录各种培养基中外植体产生愈伤组织的时间及愈伤组织的长势，愈伤组织产生后统计各培养基中出现的愈伤组织的块数，计算愈伤组织诱导率。
诱导率(％)＝愈伤组织数/接种的茎段或叶片的外植体数×100；所得诱导率为19％。
分化培养，将诱导产生的愈伤组织转入含理25瓶，每瓶接2个下胚轴，20d后观察不同的培养基中愈伤组织分化出不定芽的时间，计算不定芽分化率。
不定芽分化率(％)＝产生不定芽的外植体数/接种外植体数×100；所得不定芽分化率为54％。

Claims (4)

1.一种黄芪组织培养育苗方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
1)种子消毒：将黄芪种子浸泡在适量洗洁精10-15min中后，再依次进行45s中75％的酒精浸泡和10-15min，0.1％的升汞消毒；
2)无菌苗的培养：将步骤1)消毒后的种子在超净工作台上用无菌水浸洗3～5次，每次浸洗3分钟，然后将种子播种于培养基，在人工气候箱放置培养，人工气候箱环境控制如下：湿度50％左右，18h光照/6h黑暗，25℃白天/18℃晚上；
3)丛生芽初代诱导培养：当步骤2)培养的无菌苗长至5～6厘米后，切取下胚轴为外植体，2.6～2.9厘米，接入丛生芽初代诱导培养基，培养前3天进行暗培养，其余7天进行光培养(10h/d)后即有丛生芽形成；
4)丛生牙继代诱导培养，将步骤3)中的丛生芽转移到继代诱导培养中，诱导50-60天；
5)诱导生根：当继代增殖的丛生芽有70％长至3～4厘米时，将健壮的芽单切，并转到新的诱导过的培养基上诱导生根，生根培养基为1/2MS+2.0mg/LNAA+0.3％的活性炭(AC)；
6)试管苗的移栽：将发育良好，具有2～3张展开叶片的试管苗瓶盖打开，置于室温下炼苗3～4天后取出小苗，用清水洗去根部了培养基，在有75％～80％遮荫度的大棚内，移栽到苗床或营养杯中，浇透水，并用塑料薄膜覆盖，每天揭开薄膜换气45分钟，喷水雾保持空气湿度85％以上，8天后，可揭去薄膜，按常规管理。
2.根据权利要求1所述的一种黄芪组织培养育苗方法，其特征在于，所述步骤2)中光照，单位面积的光通量为1050lx。
3.根据权利要求1所述的一种黄芪组织培养育苗方法，其特征在于，所述步骤3)中丛生芽初代诱导培养基为MS+0.5或1.0mg/L6-BA+0.15mg/LNAA+0.1mg/LVc，培养基温度保持24℃～26℃，PH值5.9～6.2。
4.根据权利要求1所述的一种黄芪组织培养育苗方法，其特征在于，所述步骤4)中丛生牙继代诱导培养为MS+0.5或1.0mg/L6-BA+0.15mg/LNAA+0.1mg/LVc+2.5％的蔗糖，培养基温度保持24℃～26℃，PH值5.9～6.2。
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