CN105557518A - 一种白及种子开放式组培繁殖方法 - Google Patents

一种白及种子开放式组培繁殖方法 Download PDF

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汪冶
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
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Abstract

本发明公开了一种白及种子开放式组培繁殖法，它包括以下步骤：①容器准备，②白及种子处理，③种子萌发与取出，④开放式组培等；本发明解决了白及人工栽培中的关键技术问题，可以快速繁殖不受季节限制，在短期内获得大量种苗；不需要诱导形成愈伤组织，再生芽和根，继代多次增值，直接由种子培养成完整的幼苗，这样能减少接种次数和培养时间；开放式组培不需要经过高压灭菌，简化了组织培养操作环节，提高了工作效率，降低了植物组织培养育苗成本。在本发明中针对白及种子繁殖的特点，全面设计种子的繁殖过程，包括种子处理，培养基的配置，培养环境的设定等各方面，从而保证了白及种子快速繁殖。

Description

一种白及种子开放式组培繁殖方法
技术领域
本发明涉及中药栽培领域，具体是一种白及种子开放式组培繁殖方法。
背景技术
白及的药用价值较为广泛，具有治疗鼻血不止、痔疮、肿疮、跌打骨折、冬季手足皲裂等近二十种疾病症状。白及的繁殖常用分株繁殖：春季新叶萌发前或秋冬地上部枯萎后，掘起老株，分割假鳞茎进行分植，每株可分3～5株，每株须带顶芽。亦可采用播种繁殖，但因种子细小，发育不全，需用培养基无菌接种，用无菌组培方式操作要求高，要求在全无菌的条件下进行的，组织培养操作环节多，工作效率不高，组织培养育苗成本高。
发明内容
本发明的目的是提供一种白及种子开放式组培繁殖方法。
本发明解决问题所采用的技术方案是，一种白及种子开放式组培繁殖法，它包括以下步骤：
1、容器准备
取干净的透明带盖或塑料膜的培养容器，将消毒洁净不易长霉的保水材料铺在上述容器中，用培养基或叶面肥将材料润透；
2、白及种子处理
取贮藏或新鲜的优质白及成熟果实，脱果皮，将净种子均匀洒播在上述洁净的材料上，种子表面喷洒培养基或叶面肥；
3、种子萌发与取出
将上述种子放置在阴凉、通风处培养，每隔1～2天喷水1次，吸去多余的水份，待白及种子膨大、变绿后，用水冲洗种子，沥干，收集种子；
4、开放式组培
⑴种子消毒
将上述膨大、变绿的种子，用乙醇浸泡，然后用无菌蒸馏水冲洗干净，再用次氯酸钠消毒，然后用无菌蒸馏水冲洗干净；
⑵培养基的配制
幼苗形成培养基的配方：
½MS+6-BA0.2～1.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L+蔗糖26g/L +琼脂6～7g/L+复合抑菌剂；pH=5.8；
生根壮苗培养基的配方：
MS+6-BA0.2～1.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L+蔗糖26g/L +琼脂6～7g /L+复合抑菌剂；pH=5.8；
⑶接种及培养
接种：将消好毒的组培瓶中装入幼苗形成培养基，将种子用含抑菌剂的无糖培养基稀释，用无菌滴管加入到已凝固的培养基上，种子撒播量为50～100粒；
培养：在培养室中培养，培养温度为日温23±2℃，夜温18±2℃，相对湿度75～80%，模拟光照，经过10～15天，获得大量带叶的小苗，有细根或绒毛状细根长出，再经过15～30天，萌发培养完成，得白及1～2cm高幼苗；
⑷生根壮苗培养
在培养室中培养，在组培瓶中装入生根壮苗培养基，将白及幼苗消毒后，转接至瓶中，按照每瓶20～30株转接；培养温度为23±2℃，模拟光照，相对湿度75～80%；经过60～90天，白及苗高度在5cm以上，有3～5片叶子，完成壮苗培养；
⑸出瓶驯化
打开组培瓶，在大棚内适应性生长1-3天，再取出种苗，洗净培养基，晾干表面水分，在营养土中栽培，行距5cm、株距3cm，湿度70～80%，温度为10～30℃，遮阳率为60～70%，保持20～30天；然后，控制大棚内相对湿度60～70%，保持10～15天；完成驯化过程，再移栽至大田或林下坡地。
所述的一种白及种子开放式组培繁殖方法，其幼苗形成培养基的配方是：½MS+6-BA0.2～1.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L+蔗糖26g/L +琼脂6～7g/L+复合抑菌剂；pH=5.8。
所述的一种白及种子开放式组培繁殖方法，其生根壮苗培养基的配方是：MS+6-BA0.2～1.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L+蔗糖26g/L +琼脂6～7g /L+复合抑菌剂；pH=5.8。
本发明解决了白及人工栽培中的关键技术问题，使用本发明，可以快速繁殖不受季节限制，在短期内获得大量种苗；不需要诱导形成愈伤组织，再生芽和根，继代多次增值，直接由种子培养成完整的幼苗，这样能减少接种次数和培养时间；开放式组培不需要经过高压灭菌，简化了组织培养操作环节，提高了工作效率，降低了植物组织培养育苗成本。在本发明中针对白及种子繁殖的特点，全面设计种子的繁殖过程，包括种子处理，培养基的配置，培养环境的设定等各方面，从而保证了白及种子快速繁殖。
具体实施方式
下面详细描述本发明
一种白及种子开放式组培繁殖方法，它包括以下步骤：
1、容器准备
取干净的透明带盖培养皿、保鲜盒或其他容器，或上面加盖玻璃或塑料膜的无盖容器，将消毒洁净不易长霉的保水材料，如滤纸、海棉、岩棉或棉布等铺在上述容器中，用兰花叶面肥将其润透。
2、白及种子处理
取贮藏或新鲜的优质白及成熟果实，脱果皮，将净种子均匀洒播在上述洁净海棉、岩棉上，种子表面喷洒兰花叶面肥，加盖子保湿。
3、种子萌发与取出
将上述种子放置在10～30℃的阴凉、通风处培养，每隔1～2天喷水1次，用吸水纸或无菌管吸去多余的水份，待白及种子膨大、变绿后，用自来水冲洗种子，并用80目筛网沥干，收集种子。
4、开放式组培
⑴种子消毒
将上述膨大、变绿的种子，用75%乙醇浸泡30秒钟，用无菌蒸馏水冲洗干净，再用5%次氯酸钠消毒10分钟，用无菌蒸馏水冲洗干净；
⑵培养基的配制
幼苗形成培养基的配方：
½MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖26g/L +琼脂7g/L+复合抑菌剂；pH=5.8。
生根壮苗培养基的配方：
MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖26g/L +琼脂7g/L+复合抑菌剂；pH=5.8。
按配方制备培养基，在上述配方中，复合抑菌剂可以选择0.2mg/L大蒜素，6-BA选择范围0.2～1.0mg/L，NAA选择范围0.1～0.5mg/L。
⑶接种及培养
接种：将消好毒的容量为240ml的组培瓶中装入约50ml的幼苗形成培养基，将种子用少量含抑菌剂的½MS溶液稀释，用无菌滴管加入到已凝固的培养基上，种子撒播量为50～100粒；
培养:在培养室中培养，培养温度为日温23±2℃，夜温18±2℃，相对湿度75～80%，光照强度2000Lux，光照时间12h，经过10～15天，获得大量带叶的小苗，有细根或绒毛状细根长出，再经过15～30天，萌发培养完成，得白及1～2cm高幼苗；
⑷壮苗培养
在培养室中培养，将消好毒容量为480ml的组培瓶中装入100ml生根壮苗培养基，将白及幼苗用5%次氯酸钠消毒后，转接至480ml组培瓶中，按照每瓶20～30株转接；培养温度为23±2℃，光照强度3000Lux，光照时间14h，相对湿度75～80%；经过60～90天，白及苗高度在5cm以上，有3～5片叶子，完成壮苗培养；
⑸出瓶驯化
打开组培瓶，在大棚内适应性生长1～3天，再取出种苗，洗净培养基，晾干表面水分，在营养土中栽培，行距5cm、株距3cm，湿度70～80%，温度为10～30℃，遮阳率为60～70%，保持20～30天；然后，控制大棚内相对湿度60～70%，保持10～15天；完成驯化过程，再移栽至大田或林下坡地。

Claims (3)

1.一种白及种子开放式组培繁殖方法，其特征在于，它包括以下步骤：
①容器准备
取干净的透明带盖或塑料膜的培养容器，将消毒洁净不易长霉的保水材料铺在上述容器中，用培养基或叶面肥将材料润透；
②白及种子处理
取贮藏或新鲜的优质白及成熟果实，脱果皮，将净种子均匀洒播在上述洁净的材料上，种子表面喷洒培养基或叶面肥；
③种子萌发与取出
将上述种子放置在阴凉、通风处培养，每隔1～2天喷水1次，吸去多余的水份，待白及种子膨大、变绿后，用水冲洗种子，沥干，收集种子；
④开放式组培
⑴种子消毒
将上述膨大、变绿的种子，用乙醇浸泡，然后用无菌蒸馏水冲洗干净，再用次氯酸钠消毒，然后用无菌蒸馏水冲洗干净；
⑵培养基的配制
幼苗形成培养基的配方：
½MS+6-BA0.2～1.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L+蔗糖26g/L +琼脂6～7g/L+复合抑菌剂；pH=5.8；
生根壮苗培养基的配方：
MS+6-BA0.2～1.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L+蔗糖26g/L +琼脂6～7g /L+复合抑菌剂；pH=5.8；
⑶接种及培养
接种：将消好毒的组培瓶中装入幼苗形成培养基，将种子用含抑菌剂的无糖培养基稀释，用无菌滴管加入到已凝固的培养基上，种子撒播量为50～100粒；
培养：在培养室中培养，培养温度为日温23±2℃，夜温18±2℃，相对湿度75～80%，模拟光照，经过10～15天，获得大量带叶的小苗，有细根或绒毛状细根长出，再经过15～30天，萌发培养完成，得白及1～2cm高幼苗；
⑷生根壮苗培养
在培养室中培养，在组培瓶中装入生根壮苗培养基，将白及幼苗消毒后，转接至瓶中，按照每瓶20～30株转接；培养温度为23±2℃，模拟光照，相对湿度75～80%；经过60～90天，白及苗高度在5cm以上，有3～5片叶子，完成壮苗培养；
⑸出瓶驯化
打开组培瓶，在大棚内适应性生长1～3天，再取出种苗，洗净培养基，消毒，晾干表面水分，在营养土中栽培，行距5cm、株距3cm，湿度70～80%，温度为10～30℃，遮阳率为60～70%，保持20～30天；然后，控制大棚内相对湿度60～70%，保持10～15天；完成驯化过程，再移栽至大田或林下坡地。
2.根据权利要求1所述的一种白及种子开放式组培繁殖方法，其特征在于，所述幼苗形成培养基的配方是：½MS+6-BA0.2～1.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L+蔗糖26g/L +琼脂6～7g/L+复合抑菌剂；pH=5.8。
3.根据权利要求1所述的一种白及种子开放式组培繁殖方法，其特征在于，所述生根壮苗培养基的配方是：MS+6-BA0.2～1.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L+蔗糖26g/L +琼脂6～7g /L+复合抑菌剂；pH=5.8。
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