CN111480578B - 一种箭叶淫羊藿种胚组培快繁方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体公开了一种箭叶淫羊藿种胚组培快繁方法，包括以箭叶淫羊藿种胚为外植体，通过对完全干燥的种子消毒、种子低温培养、诱导外植体生成愈伤组织、诱导愈伤组织分化出不定芽或丛生芽、诱导芽体形成须根、炼苗、育苗等过程获得箭叶淫羊藿再生苗，建立了箭叶淫羊藿植物组织培养快速繁殖体系。具有操作简单，污染率低，繁殖周期短，繁殖率高，成本低，幼苗田间存活率高等优点，为箭叶淫羊藿工厂化生产，提供技术支撑，对箭叶淫羊藿野生资源的保护有一定的促进作用。

Description

一种箭叶淫羊藿种胚组培快繁方法
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，更具体涉及一种箭叶淫羊藿种胚组培快繁方法。
背景技术
中药材淫羊藿为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(Epimedium)植物的干燥叶片，在我国作为药材使用已有2000余年历史。目前淫羊藿药材的获取主要依靠于野外采摘，灭绝式采挖使淫羊藿药材野生资源急剧减少，供需矛盾日益加剧。箭叶淫羊藿(Epimediumsagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.)是《中国药典》淫羊藿药材的基原植物之一，使用量较大，目前该种的人工种植已经在多个省份开展起来。种苗繁育技术作为人工种植的关键环节，箭叶淫羊藿的种苗繁育主要是地下根茎分兜繁殖和种胚繁殖，但是根茎繁殖繁殖系数低、种胚繁殖周期长，严重制约了箭叶淫羊藿规模化种植产业的发展。
植物组织培养技术利用植物细胞全能性，将植物的器官、组织、原生质体等作为组织培养的外植体，在适宜的环境下，经过诱导进而分化成完整植株。由于高效快速，植物组织培养技术已经广泛应用于园林园艺及药用植株的种苗生产。目前，箭叶淫羊藿关于组培技术报道相对较少，利用箭叶淫羊藿种胚诱导形成愈伤组织脱分化再分化形成无菌苗进行植物组织培养更是鲜有报道，为淫羊藿的育种技术奠定坚实的基础。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的是提供一种完善的箭叶淫羊藿种胚组培快繁方法，具有操作简单，污染率低，繁殖周期短，繁殖率高，成本低，幼苗田间存活率高等优点，便于大规模工业化生产。
为进一步实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种箭叶淫羊藿种胚组培快繁方法，其构思是：以箭叶淫羊藿种胚为外植体，通过对完全干燥的种子消毒、种子低温培养、诱导外植体生成愈伤组织、诱导愈伤组织分化出不定芽或丛生芽、诱导芽体形成须根、炼苗、育苗等过程获得箭叶淫羊藿再生苗，建立了箭叶淫羊藿植物组织培养快速繁殖体系。大大提高了箭叶淫羊藿愈伤组织的诱导率，消毒过程更加完善，且简化了操作过程，缩短育种周期，为淫羊藿的工厂化生产奠定了良好的基础。
一种箭叶淫羊藿种胚组培快繁方法，包括以下步骤：
(1)干燥后种子的消毒：从种子收集袋中选取完全干燥后健康饱满的种子，去除草叶等杂质后，撕去种子上的种膜，用洗洁精溶液1:500比例清洗，置于震荡箱中120rpm，震荡1h，去除其表面附着的灰尘，清水冲洗3-4次除去残留的洗洁精；移入超净工作台，然后用75％的酒精溶液震荡消毒30s，无菌水冲洗2遍，将种子置于0.1％质量浓度的HgCl2溶液中，120rpm震荡消毒10min，取出用无菌水漂洗3-4次除去残留的HgCl2溶液；然后置于灭过菌的滤纸除去残留的水分备用。
(2)种子低温培养：将消毒后的种子接种到播种培养皿上，封口膜密封后，放置于4℃冰箱无菌冷藏培养60天。
(3)诱导外植体生成愈伤组织：挑取冰箱中刚萌芽的种子置于超净工作台中，用无菌镊子与解剖针剥除种皮，取出种胚，并用灭过菌的解剖刀沿种胚纵向轻轻划伤1道，轻贴于愈伤组织诱导培养基a上，接种到愈伤组织诱导培养基a上；在光强1000-2000lux，14h/天光照进行培养，培养温度24-26℃条件下；每三周(21天)更换一次培养基，所换培养基配方与原培养基一致，诱导生成愈伤组织；待初步生成愈伤组织后(以肉眼可见在创口处形成团簇状淡绿色愈伤组织)，转接愈伤组织诱导培养基b上，同等光照和温度条件，促进愈伤组织加速形成，42天后统计愈伤组织增长率。
(4)诱导愈伤组织分化出不定芽或丛生芽：诱导产生的愈伤组织转接到芽分化培养基上，在光强1500-2500lux，14h/天光照进行培养，培养温度24-26℃条件下，诱导不定芽的形成，30天后统计不定芽诱导率。
芽的增殖培养：切取单个芽体接种到芽增殖培养基，进行继代培养，在光强1500-2500lux，14h/天光照进行培养，培养温度24-26℃条件下，诱导形成丛生芽，30天后统计丛生芽的增殖情况。
(5)诱导芽体形成须根：无菌条件下切取单个芽体，接种于生根培养基，在光强1500-2500lux，14h/天光照进行培养，培养温度24-26℃条件下，形成白色须根，30天后统计生根率。
(6)炼苗、育苗：挑选长势良好，根系相对发达的组培苗，在炼苗准备室，揭去组培瓶的盖子，在光强1500-2500lux，14h/天光照进行培养，培养温度24-26℃，空气湿度60％-80％条件下，炼苗5-7天，期间注意喷水保湿；洗净培养基，栽种到田园土：蛭石：泥炭土：腐殖土＝2:1:2:1混合后的基质中，荫棚炼苗30-60天；炼苗结束后移栽至育苗圃，移栽前对苗圃土壤喷洒百菌清按1:1000进行消毒，施适量的有机肥后耙平，以每株距12～16cm进行定植，覆土压实后浇足水，与此同时架设遮阳率为60％-70％的遮阳网，并注意防虫、防旱涝，60天后统计苗的成活率。
在本发明中，步骤(1)所采用的种子消毒过程更为严谨、完善，在充分消毒的情况下又不致使种子因消毒过程活性发生变化，为种子生长提供良好的无菌环境。
在本发明中，步骤(2)所采用的种子低温培养方法能促进种子萌发，形成种胚优势，简化了低温培养的条件，大大缩短了低温培养的时间。
在本发明中，步骤(4)所述芽分化和芽的增殖培养所采用的培养基相同，能在保证出芽及增殖系数的情况下简化实验操作流程。
在本发明中，步骤(6)基质中所述蛭石用于土壤疏松透气，防止土壤板结，由于淫羊藿的生长环境为土壤肥沃，疏松透气的林下腐殖土，本发明所用田园土量多是为保证水分不过多流失；本发明采用的基质关键在于保持一定的湿度、营养性的情况下又不致使土壤粘结，最大程度的模仿淫羊藿在自然环境下的生长情况。
在本发明中，步骤(6)采用荫棚炼苗30-60天，是基于完全无菌的组培苗到下地移栽需要有一个缓冲过程，适当增加炼苗天数能够使组培苗生长更加健壮，提高组培苗的下地移栽成活率。
在本发明中，步骤(6)所述遮阳网为了模拟箭叶淫羊藿在自然状态下生于林下等遮阴较高的地方，防止晒伤。
在本发明中，步骤(6)中防虫、防旱涝指的是，定期除草并喷洒1:2000百菌清药液，夏季多日未雨时采用人工喷灌，使其湿度达到65％-80％，并注意定期排水。
上述步骤(2)、(3)、(4)、(6)为本发明关键，因本发明所用冷藏方式与传统沙藏不同，不仅能在一定程度上简化操作流程，减少冷藏时间，且易观察种子是否发芽，培养皿中的培养基在冷藏期间能更好的为种子提供养分；培养基的优化也有利于愈伤组织的诱导及增殖，在箭叶淫羊藿领域对利用植物细胞全能性脱分化形成愈伤组织再分化形成苗的报道较为少见，能够很好的保持植物本身的药用价值，缩短育苗周期，为箭叶淫羊藿的组培快繁奠定良好的基础。
上述步骤(2)所述的播种培养基为：MS 4.74g/L+6-BA(浓度1mg/mL)0.5-1.5mL/L+NAA(浓度1mg/mL)0.05-0.15mL/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5。
上述步骤(3)所述的愈伤组织诱导培养基a为：MS 4.74g/L+6-BA(浓度1mg/mL)0.5-1.5mL/L+NAA(浓度1mg/mL)0.05-0.15mL/L+TDZ(浓度1mg/mL)0.1-0.2mL/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5；
愈伤组织诱导培养基b为：MS 4.74g/L+6-BA(浓度1mg/mL)1.0-2.5mL/L+NAA(浓度1mg/mL)0.1-0.25mL/L+TDZ(浓度1mg/mL)0.1-0.2mL/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5。
本发明所采用的愈伤组织诱导培养基a为诱导种胚创口处形成愈伤组织，所采用的愈伤组织诱导培养基b为增殖培养基，为加速愈伤组织量的生成，能有效提高愈伤组织的诱导率及愈伤组织的增殖系数。
上述步骤(4)所述的芽分化培养基为：MS 4.74g/L+6-BA(浓度1mg/mL)1.0-2.5mL/L+NAA(浓度1mg/mL)0.1-0.25mL/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5。
上述步骤(4)所述的芽增殖培养基配方为：MS 4.74g/L+6-BA(浓度1mg/mL)1.0mL/L+NAA(浓度1mg/mL)0.1-0.25mL/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5。
上述步骤(5)所述的生根培养基为：1/2MS 4.74g/L+6-BA(浓度1mg/mL)1.0-2.5mL/L+NAA(浓度1mg/mL)0.1-0.25mL/L+活性炭0.2-0.4g/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5。
本发明在生根培养基添加一定浓度的6-BA与NAA能够有效地促进苗生根，组合后加以调整其生根效率效果更好。
在本发明中，所用洗洁精为白猫牌500ml瓶装洗洁精。
在本发明中，MS指的是组织培养一般作物用培养基的基本配方。
在本发明中，6-BA指的是6-苄氨基腺嘌呤。
在本发明中，NAA指的是α-萘乙酸。
在本发明中，TDZ指的是噻苯隆。
在本发明中，愈伤组织增长率＝(愈伤组织的鲜重-接种时愈伤组织的鲜重)/接种时愈伤组织的鲜重×100％。
在本发明中，不定芽诱导率＝形成不定芽的愈伤组织数/愈伤组织接种数×100％。
在本发明中，丛生芽增殖系数＝增殖的芽数量/接种时芽的数量。
在本发明中，生根率＝生根苗数/接种苗数×100％。
与现有技术相比，本发明的优点和有益效果是：
1、本发明大大提高了箭叶淫羊藿愈伤组织的诱导率，消毒过程更加完善，且简化了操作过程，缩短育种周期，为淫羊藿的工厂化生产奠定了良好的基础。
2、本发明诱导箭叶淫羊藿种胚形成愈伤组织进而分化出不定芽，在诱导形成愈伤组织过程中采用不同配比的愈伤组织诱导培养基，提高了愈伤组织诱导成功的比率，降低了愈伤组织诱导的难度；诱导愈伤组织分化不定芽培养基和后期增殖培养基相同，简化了操作。
3、本发明繁殖率高、操作简单、成本低、不受时间和环境的限制，适宜于工厂生产应用。
附图说明
图1显示本发明实施例1种胚诱导产生的愈伤组织；
图2显示本发明实施例1由愈伤组织形成的丛生苗。
此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本申请的实施例，并与说明书一起用于解释本申请的原理。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。
实施例1：一种箭叶淫羊藿种胚组培快繁方法，其步骤如下：
(1)干燥后种子的消毒：从种子收集袋中选取完全干燥后健康饱满的种子，去除草叶等杂质后，撕去种子上的种膜，用洗洁精溶液1：500比例清洗，置于震荡箱中120rpm，震荡1h，去除其表面附着的灰尘，清水冲洗3或4次除去残留的洗洁精；移入超净工作台，然后用75％的酒精溶液震荡消毒30s，无菌水冲洗2遍，将种子置于0.1％质量浓度的HgCl2溶液中，120rpm震荡消毒10min，取出用无菌水漂洗3或4次除去残留的HgCl2溶液；然后置于灭过菌的滤纸除去残留的水分备用。
(2)种子低温培养：将消毒后的种子接种到播种培养皿上，培养基配方为：MS4.74g/L+6-BA(浓度1mg/mL)0.5mL/L+NAA(浓度1mg/mL)0.05mL/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5。封口膜密封后，放置于4℃冰箱无菌冷藏培养60天。
(3)诱导外植体生成愈伤组织：挑取冰箱中刚萌芽的种子置于超净工作台中，用无菌镊子与解剖针剥除种皮，取出种胚，并用灭过菌的解剖刀沿种胚纵向轻轻划伤1道，轻贴于愈伤组织诱导培养基a上，愈伤组织诱导培养基a配方：MS 4.74g/L+6-BA(浓度1mg/mL)0.5mL/L+NAA(浓度1mg/mL)0.05mL/L+TDZ(浓度1mg/mL)0.1mL/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5；在光强1000lux，14h/天光照进行培养，培养温度24℃条件下；每三周(21天)更换一次培养基，所换培养基配方与原培养基(MS4.74g/L+6-BA(浓度1mg/mL)0.5mL/L+NAA(浓度1mg/mL)0.05mL/L+TDZ(浓度1mg/mL)0.1mL/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5)一致，诱导生成愈伤组织；待初步生成愈伤组织后，转接愈伤组织诱导培养基b上，愈伤组织诱导培养基b配方：MS 4.74g/L+6-BA(浓度1mg/mL)1.0mL/L+NAA(浓度1mg/mL)0.1mL/L+TDZ(浓度1mg/mL)0.1mL/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5；同等光照和温度条件，促进愈伤组织加速形成，42天后统计愈伤组织增长率，愈伤组织增长率为172.15％。
(4)诱导愈伤组织分化出不定芽或丛生芽：诱导产生的愈伤组织转接到芽分化培养基上，芽分化培养基配方：MS 4.74g/L+6-BA(浓度1mg/mL)1.0mL/L+NAA(浓度1mg/mL)0.1mL/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5。在光强2000lux，14h/天光照进行培养，培养温度24℃条件下，诱导不定芽的形成，30天后统计不定芽诱导率，不定芽诱导率为79.5％。
芽的增殖培养：切取单个芽体接种到芽分化培养基，芽增殖培养基配方：MS4.74g/L+6-BA(浓度1mg/mL)1.0mL/L+NAA(浓度1mg/mL)0.1mL/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5，进行继代培养，在光强2000lux，14h/天光照进行培养，培养温度24℃条件下，诱导形成丛生芽，30天后统计丛生芽的增殖情况，增殖系数为4.98。
(5)诱导芽体形成须根：无菌条件下切取单个粗壮芽体，接种于生根培养基，生根培养基配方：1/2MS 4.74g/L+6-BA(浓度1mg/mL)1.0mL/L+NAA(浓度1mg/mL)0.1mL/L+活性炭0.2g/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5。在光强2000lux，14h/天光照进行培养，培养温度24℃条件下，形成白色须根，30天后统计生根率，生根率为73％。
(6)炼苗、育苗：挑选长势良好，根系相对发达的组培苗，在炼苗准备室，揭去组培瓶的盖子，在光强2000lux，14h/天光照进行培养，培养温度24℃，空气湿度70％条件下，炼苗5天，期间注意喷水保湿；洗净培养基，栽种到田园土：蛭石：泥炭土：腐殖土＝2:1:2:1混合后的基质中，荫棚炼苗45天；炼苗结束后移栽至育苗圃，移栽前对苗圃土壤喷洒百菌清按1:1000进行消毒，施适量的有机肥后耙平(施用量：有机肥400kg/亩，史丹利复合肥按N-P2O5-K2O以15-15-15 30kg/亩)，以每株距12或14或16cm进行定植，覆土压实后浇足水，与此同时架设遮阳率为60％或65％或70％的遮阳网，并注意防虫、防旱涝，60天后统计其成活率，其幼苗成活率达到85％。
实施例2：一种箭叶淫羊藿种胚组培快繁方法，其步骤如下：
(1)干燥后种子的消毒：从种子收集袋中选取完全干燥后健康饱满的种子，去除草叶等杂质后，撕去种子上的种膜，用洗洁精溶液1:500比例清洗，置于震荡箱中120rpm，震荡1h，去除其表面附着的灰尘，清水冲洗3或4次除去残留的洗洁精；移入超净工作台，然后用75％的酒精溶液震荡消毒30s，无菌水冲洗2遍，将种子置于0.1％质量浓度的HgCl2溶液中，120rpm震荡消毒10min，取出用无菌水漂洗3或4次除去残留的HgCl2溶液；然后置于灭过菌的滤纸除去残留的水分备用。
(2)种子低温培养：将消毒后的种子接种到播种培养皿上，培养基配方为：MS4.74g/L+6-BA(浓度1mg/mL)1.0mL/L+NAA(浓度1mg/mL)0.15mL/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5。封口膜密封后，放置于4℃冰箱无菌冷藏培养60天。
(3)诱导外植体生成愈伤组织：挑取冰箱中刚萌芽的种子置于超净工作台中，用无菌镊子与解剖针剥除种皮，取出种胚，并用灭过菌的解剖刀沿种胚纵向轻轻划伤1道，轻贴于愈伤组织诱导培养基a上，愈伤组织诱导培养基a配方：MS 4.74g/L+6-BA(浓度1mg/mL)0.5mL/L+NAA(浓度1mg/mL)0.15mL/L+TDZ(浓度1mg/mL)0.1mL/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5；在光强1500lux，14h/天光照进行培养，培养温度26℃条件下；每21天更换一次培养基，所换培养基配方与原培养基一致，诱导生成愈伤组织；待初步生成愈伤组织后，转接愈伤组织诱导培养基b上，愈伤组织诱导培养基b配方：MS 4.74g/L+6-BA(浓度1mg/mL)1.0mL/L+NAA(浓度1mg/mL)0.25mL/L+TDZ(浓度1mg/mL)0.2mL/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5。同等光照和温度条件，促进愈伤组织加速形成，42天后统计愈伤组织增长率，增长率为213.17％。
(4)诱导愈伤组织分化出不定芽或丛生芽：诱导产生的愈伤组织转接到芽分化培养基上，芽分化培养基配方：MS 4.74g/L+6-BA(浓度1mg/mL)1.0mL/L+NAA(浓度1mg/mL)0.25mL/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5。在光强2500lux，14h/天光照进行培养，培养温度26℃条件下，诱导不定芽的形成，30天后统计不定芽诱导率，不定芽诱导率为83.74％。
芽的增殖培养：切取单芽体接种到芽分化培养基，芽增殖培养基配方：MS 4.74g/L+6-BA(浓度1mg/mL)1.0mL/L+NAA(浓度1mg/mL)0.25mL/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5，进行继代培养，在光强2500lux，14h/天光照进行培养，培养温度26℃条件下，诱导形成丛生芽，30天后统计增殖情况，增殖系数为5.13。
(5)诱导芽体形成须根：无菌条件下切取单个粗壮芽体，接种于生根培养基，生根培养基配方：1/2MS 4.74g/L+6-BA(浓度1mg/mL)1.0mL/L+NAA(浓度1mg/mL)0.25mL/L+活性炭0.4g/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5。在光强2500lux，14h/天光照进行培养，培养温度26℃条件下，形成白色须根，30天后统计生根率，生根率为80％。
(6)炼苗、育苗：挑选长势良好，根系相对发达的组培苗，在炼苗准备室，揭去组培瓶的盖子，在光强2500lux，14h/天光照进行培养，培养温度26℃，空气湿度80％条件下，炼苗5天，期间注意喷水保湿；洗净培养基，栽种到田园土：蛭石：泥炭土：腐殖土＝2:1:2:1混合后的基质中，荫棚炼苗60天；炼苗结束后移栽至育苗圃，移栽前对苗圃土壤喷洒百菌清按1:1000进行消毒，施适量的有机肥后耙平(施用量：有机肥400kg/亩，史丹利复合肥按N-P2O5-K2O以15-15-15 30kg/亩)，以每株距12或13或15或16cm进行定植，覆土压实后浇足水，与此同时架设遮阳率为60％或65％或70％的遮阳网，并注意防虫、防旱涝，60天后统计其成活率，其幼苗成活率达到90.3％。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

Claims (2)

1.一种箭叶淫羊藿种胚组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)干燥后种子的消毒：选取干燥健康饱满的种子，撕去种子上的种膜，用洗洁精：水＝1：500的溶液清洗，置于震荡箱中120rpm，震荡1h，去除其表面附着的灰尘，清水冲洗3～4次除去残留的洗洁精；移入超净工作台，然后用75％的酒精溶液震荡消毒30s，无菌水冲洗2遍，将种子置于0.1％质量浓度的HgCl2溶液中，120rpm震荡消毒10min，取出用无菌水漂洗3～4次除去残留的HgCl2溶液；然后置于灭过菌的滤纸除去残留的水分备用；
(2)种子低温培养：将消毒后的种子接种到播种培养皿上，封口膜密封后，放置于4℃冰箱无菌冷藏培养60天；
所述的播种培养基为：MS 4.74g/L+6-BA 0.5～1.5mg/L+NAA 0.05～0.15mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5；
(3)诱导外植体生成愈伤组织：挑取冰箱中刚萌芽的种子置于超净工作台中，用无菌镊子与解剖针剥除种皮，取出种胚，并用灭过菌的解剖刀沿种胚纵向轻轻划伤1道，轻贴于愈伤组织诱导培养基a上；在光强1000～2000lux，14h/天光照条件下进行培养，培养温度24～26℃；每三周更换一次培养基，所换培养基配方与原培养基一致，诱导生成愈伤组织；待初步生成愈伤组织后，转接愈伤组织诱导培养基b上，同等光照和温度条件，促进愈伤组织加速形成；
所述的愈伤组织诱导培养基a为：MS 4.74g/L+6-BA 0.5～1.5mg/L+NAA 0.05～0.15mg/L+TDZ 0.1～0.2mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5；
所述的愈伤组织诱导培养基b为：MS 4.74g/L+6-BA 1.0～2.5mg/L+NAA 0.1～0.25mg/L+TDZ 0.1～0.2mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5；
(4)诱导愈伤组织分化出不定芽或丛生芽：诱导产生的愈伤组织转接到芽分化培养基上，在光强1500～2500lux，14h/天光照条件下进行培养，培养温度24～26℃，诱导不定芽的形成；
芽的增殖培养：切取单个芽体接种到芽增殖培养基，进行继代培养，在光强1500～2500lux，14h/天光照条件下进行培养，培养温度24～26℃，诱导形成丛生芽；
所述芽分化培养基为：MS 4.74g/L+6-BA 1.0～2.5mg/L+NAA 0.1～0.25mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5；
所述的芽增殖培养基配方为：MS 4.74g/L+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1～0.25mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5；
(5)诱导芽体形成须根：无菌条件下切取单个芽体，接种于生根培养基，在光强1500～2500lux，14h/天光照条件下进行培养，培养温度24～26℃，形成白色须根；
所述的生根培养基为：1/2MS 4.74g/L+6-BA 1.0～2.5mg/L+NAA 0.1～0.25mg/L+活性炭0.2～0.4g/L+蔗糖30g/L+卡拉胶7.5g/L，pH调节至6.5；
(6)炼苗、育苗：挑选长势良好，根系相对发达的组培苗，在炼苗准备室，揭去组培瓶的盖子，在光强1500～2500lux，14h/天光照条件下进行培养，培养温度24～26℃，空气湿度60％～80％，炼苗5～7天；洗净培养基，栽种到田园土：蛭石：泥炭土：腐殖土＝2：1：2：1混合后的基质中，荫棚炼苗30～60天；炼苗结束后移栽至育苗圃，以每株距12～16cm进行定植，覆土压实后浇足水，与此同时架设遮阳率为60％～70％的遮阳网，并注意防虫、防旱涝。
2.根据权利要求1所述的箭叶淫羊藿种胚组培快繁方法，其特征在于，
步骤(6)移栽前对育苗圃土壤喷洒百菌清，用百菌清：水＝1：1000的溶液进行消毒。
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