CN109287487B

CN109287487B - 一种大花型兜兰的种子萌发率提高方法与栽培方法

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Publication number: CN109287487B
Application number: CN201811313572.XA
Authority: CN
Inventors: 张英杰; 郭文姣; 孙纪霞; 张京伟; 刘学庆; 刘述河; 丁朋松
Original assignee: Shandong Yantai Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Shandong Yantai Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2016-09-09
Filing date: 2016-09-09
Publication date: 2022-05-27
Anticipated expiration: 2036-09-09
Also published as: CN106417014A; CN106417014B; CN109287487A

Abstract

本发明涉及一种大花型兜兰的种子萌发率提高方法与栽培方法。更具体地说，本发明提供了一种提高大花型兜兰种子萌发率的方法，所述方法包括如下步骤：(1)在大花型兜兰开花后进行人工授粉；和(2)在授粉后180天至240天获取种子并播种于在种子萌发培养基上，从而由种子获得芽体。本发明还提供了一种大花型兜兰的栽培方法，所述方法采用上述提高萌发率的方法来提高种子萌发率。采用本发明方法可以具有生产花径可达12cm的大花型兜兰，花序完整，花瓣完好无损，观赏效果好，而且播种萌发率高，组培苗生长速度快，成活率达95％以上，可以将栽培周期缩短到3年。

Description

一种大花型兜兰的种子萌发率提高方法与栽培方法

本申请是发明名称为“一种大花型兜兰育种与栽培方法”、申请日为“2016年09月09日”、申请号为“201610812117.9”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明属于花卉栽培和园艺领域，涉及兜兰育种与栽培方法，更具体地说，本发明涉及兜兰尤其是大花型兜兰的育种栽培方法。

背景技术

兜兰畅销于国际花卉市场，同时也是兰科的一个濒危类群。我国的杏黄、硬叶兜兰曾勇获世界兰展全场总冠军，获得近百个美国兰展奖项。兜兰总共有79个野生种，其中约1/3产自我国，是兰科中唯一受国际贸易公约（CITES）保护的濒危野生动植物物种。我国兜兰花卉市场需求缺口大，价格极为昂贵，常见品种单株价格100至150元，珍稀品种单株价格可达上千元。2012年，我国年产兜兰仅几万株，近年兜兰产量增加了10倍，每年产品都供不应求。

然而，尽管兜兰畅销于国际花卉市场，但是兜兰也是兰科的一个濒危类群。兜兰种子没有胚乳，在自然环境中需与真菌共生才能萌发，且萌发率极低，而且兜兰组织培养是国际兜兰产业发展的瓶颈，存在增殖率低、褐化严重等问题。目前世界上兜兰商业化量产技术仍未建立，其繁殖仍以无菌播种为主要手段，但存在着萌发率极低，成苗率低的问题，且不同种和品种兜兰的采种时间相差迥异，最适合的培养基种类也不同。此外，兜兰设施栽培存在品质差、生长周期长、生长速度慢的缺点，从瓶苗到开花甚至需要4至5年。

兜兰组织培养存在增殖率低、褐化严重等问题。目前我国兜兰科研投入明显不足，主要存在以下几方面问题。我国关于兜兰的研究主要集中于原生种保护栽培，如杏黄兜兰、硬叶兜兰、带叶兜兰、巨瓣兜兰、同色兜兰、文山兜兰等，兜兰大多数种的花径小于10cm，关于花径大于12cm的商业品种的研究较少。然而，与原生种小花型或者多花型兜兰相比，商品用的大花型兜兰尽管观赏价值要高得多，但是这类兜兰为杂交种，倍性复杂，往往只能得到很少的种子，难以大规模生产利用，而且种子萌发率要比原生种小花型或者多花型兜兰更低。

CN201510731703.6认为，包括魔帝系列兜兰在内的多数兜兰的花期在春季，其果实的发育需要3个月乃至更长的时间，果实发育过程正遇夏季的高温，造成种子有胚率下降，烂果率增加，这些都是影响兜兰种苗产业化生产的难题，并提出在授粉后120天左右采果播种。

因此如何运用快速育种、繁殖和栽培高品质大花型兜兰已成为该类花卉植物科研项目的重点，在其科研与开发中具有极深远的现实意义。

发明内容

本发明的目的是研究大花型兜兰育种与栽培的各个环节，以培育出具有的优质兜兰，并提高兜兰生长速度和成品率，有效降低成本，提升市场竞争力，为兜兰的规模化生产提供理论指导和技术支撑。

针对现有技术中大花型兜兰所存在的种子萌发率低、褐化严重、成苗率低、生产周期长、品质低等技术问题，本发明在第一方面提供了一种提高大花型兜兰种子萌发率的方法，所述方法包括如下步骤：（1）在大花型兜兰开花后进行人工授粉；（2）在授粉后180天至240天获取种子并播种于在种子萌发培养基上，从而由种子获得芽体。

在本发明第一方面的一些优选的实施方式中，将所获取的种子播种在配方为1/4MS+1mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1g/L蛋白胨+25 g/L香蕉+5.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭的种子萌发培养基上。

本发明在第二方面还提供了一种大花型兜兰的栽培方法，所述方法采用本发明第一方面所述的方法来提高种子萌发率。

采用本发明方法可以显著提高大花型兜兰的种子萌发率、降低或消除褐化程度，从而为扩大生长规模和缩短生产周期提供技术支撑。在本发明第二方面的一些优选的实施方式中，还严格控制栽培养护条件包括但不限于湿度、温度、光照和水肥条件，提高了大花型兜兰的种苗成活率，改善了大花型兜兰产品的品质，从而进一步为扩大生长规模和缩短生产周期提供技术支撑。

附图说明

图1为红、绿魔帝系列兜兰的照片；

图2为魔帝类兜兰种子萌发率随授粉后时间的变化曲线；

图3为在魔帝类兜兰在不同相对湿度条件下的组培苗成活率；

图4为魔帝类兜兰组培苗移栽时使用不同基质的情况下成活率随时间的变化；

图5为魔帝类兜兰中壮苗换盆时使用不同基质的情况下叶片生长总量随时间的变化；

图6为使用本发明方法(6a)和对照方法(6b)种植得到的魔帝类兜兰盆花产品的照片。

具体实施方式

如上所述，本发明在第一方面提供了一种提高大花型兜兰种子萌发率的方法，在一些优选的实施方式中，所述方法包括如下步骤：

（1）在大花型兜兰开花后进行人工授粉；和

（2）在授粉后180天至240天获取种子并播种于在种子萌发培养基上，从而由种子获得芽体。

本发明人在深入研究大花型兜兰的杂交育种和播种的基础上，发现现有的大花型兜兰种子萌发率低的主要原因至少有二。

本发明经过深入研究发现，影响兜兰尤其是大花型兜兰的种子萌发率的最关键因素是用于播种的种子的成熟度。现有技术尽管也选择具有一定成熟度的播种仅播种，但是对适合于播种的兜兰种子的成熟度没有统一认识，有的认为来自授粉后300至360天的充分膨大蒴果的种子最好，例如CN201510565855.3公开了一种肉饼系列兜兰杂交育种及其种苗快速繁殖的方法，其中采用授粉后300至360天的充分膨大蒴果作为种子；有的认为获自授粉后140～150天的果荚的种子为宜，例如CN201410514229.7公开了兜兰种子萌发培养基及培养方法，其中采用授粉140～150天的果荚的种子；有的认为获自授粉后110～120天的果荚的种子更佳，例如CN201310742625.0使用授粉后110至120天收取的种子用于播种；有的认为使用授粉后180～220天时采收的种子会遇到夏季高温，从而造成种子有胚率下降，烂果率增加，建议使用在授粉后120天左右所采收的种子，例如CN201510731703.6公开了一种缩短兜兰果实发育期及提高种子萌发率的方法，认为魔帝兜兰在授粉后180～220天时采收种子会遇到夏季高温，从而造成种子有胚率下降，烂果率增加，因此建议在授粉后120天左右即可采果播种。但是，本发明人经过研究却发现，大花型兜兰的种子发育阶段是影响种子无菌播种后萌发的关键因子，种子发育初期，幼嫩的种子紧密着生在果荚的胎座组织上，难以分离下来，即使播种于培养基上也很快褐化，仅少量种子具有萌发能力。种子发育过于成熟时呈棕褐色，干燥松动，播种的萌发率也很低，可能是因为种皮发育成熟，难以打破休眠，需要超声破皮或者化学物质处理才能促进萌发。对于大花型兜兰，使用授粉后120天采收的种子萌发率非常低，有的甚至没有萌发，并且适合播种的种子成熟度存在品种差异，例如魔帝品种在180至240天采收种子为宜。

本发明人还发现，相对于小花型兜兰，例如原生种兜兰，如杏黄兜兰、硬叶兜兰、带叶兜兰、巨瓣兜兰、同色兜兰、文山兜兰等（这些兜兰的花径均小于12cm，观赏价值较差），商品用的大花型兜兰尽管观赏价值要高得多，但是这类兜兰为杂交种，倍性复杂，往往只能得到很少的种子，难以大规模生产利用，而且种子萌发率要比原生种小花型或者多花型兜兰更低。但是，采用本发明方法能够很大程度上克服了现有技术中大花型兜兰所存在的问题。于是，在一些优选的实施方式中，所述大花型兜兰为花朵大于12 cm的兜兰品种，更优选为F1代大花型兜兰品种，进一步优选为种子萌发、种苗成活、品质问题较为严重并且生产周期长的魔帝系列兜兰品种。

在一些优选的实施方式中，所述兜兰品种为魔帝系列兜兰品种(Paphiopedilum Maudiae)，并且所述种子为在授粉后180天至240天获取的种子（例如为180、200、220或240天），更优选为在授粉后240天获取的种子。

本发明对授粉方式没有特别的限制，但是在一些优选的实施方式中，使用人工授粉的方式，所述人工授粉可以为人工自交授粉也可以为人工杂交授粉，或者这两种授粉方式的组合。不过，为了避免性状分离，更优选为人工杂交授粉。

在一些优选的实施方式中，所述种子萌发培养基为1/4MS+1mg/L 6-BA+0.1 mg/LNAA+1g/L蛋白胨+25 g/L香蕉+5.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭。

本发明经过试验发现，大花型兜兰的种子萌发培养基的组成是影响萌发率的另一个重要因素。现有技术中用于兜兰种子萌发的基础培养基有很多种，例如MS、NDM、花宝1号、VW培养基，其中进一步添加的组分更是五花八门。另外，一般认为，香蕉果肉中含有大量的氨基酸、激素和酶等有机物且成分较为复杂的天然复合物，蛋白胨的主要成分是氨基酸，因此在兜兰的种子萌发培养基中，使用香蕉泥和蛋白胨的主要目的都是为了提供各种氨基酸，一般情况下没有同时两者都使用。但是经过研究发现，在1/4MS的基础上添加适量的6-BA、NAA、琼脂和活性炭，并同时添加适量的蛋白胨和香蕉肉泥可以显著提高大花型兜兰的种子萌发率。

在一些优选的实施方式中，在播种100天至150天（例如100、110、120、130、140或150天）后，将已发育出叶片的芽体转入壮苗培养基中培养以获得组培苗，所述壮苗培养基的配方为1/4MS+4mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA +25 g/L香蕉+5.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭。本发明人经过试验发现，壮苗培养基中可以在不添加任何蛋白胨的情况下能够很好地生长，从而实现壮苗的目的。

在一些优选的实施方式中，在所述组培苗的株高为4cm至6cm时，将组培苗转移到自然光下炼苗20天后，将组培苗移栽到装有树皮基质的栽培容器中，并且以如下条件进行养护：相对湿度条件为60%至80%，更优选为80%。如果相对湿度低于60%，将会对大花型兜兰的植株生长造成不利的不可逆的影响，因此需要在炼苗移栽之后需要严格讲相对湿度控制在60%以上。温度条件可以为白天18℃至28℃，夜间15℃至18℃；光照条件为10000 lux至15000 lux；水肥管理条件为每5至7天浇透水一次，单独或者交替地施用N:P:K为30:10:10和20:20:20的复合肥，稀释倍数优选为3000倍，施用频率为2至4周一次，施用方式为根区浇灌和/或叶面喷施。

在一些优选的实施方式中，在株幅等于或者大于9 cm时进行一次换盆，并且在株幅等于或者大于22 cm时进行二次换盆，换盆使用的基质均为由质量比为1:1的水苔和树皮组成，并且以如下条件进行养护：相对湿度条件为60%至80%，更优选的为80%；温度条件为白天18℃至28℃，夜间15℃至18℃；光照条件为10000 lux至15000 lux；水肥管理条件为每7至10天浇透水一次，施用N:P:K为20:20:20的复合肥，稀释倍数为3000倍，施用频率为每2周一次，施用方式为根区浇灌和/或叶面喷施。

在一些优选的实施方式中，在二次换盆之后并且在目标花期之前6个月进行催花，催花期间以如下条件进行养护：相对湿度条件为不低于50%，更优选的为80%；温度条件为白天25℃至27℃，夜间16℃至18℃；光照条件为10000 lux至15000 lux；水肥管理条件为每7至10天浇透水一次，施用N:P:K为10:30:10的复合肥，稀释倍数为3000倍，施用频率为4周一次，施用方式为根区浇灌和/或叶面喷施。

在一些优选的实施方式中，炼苗后移栽时使用的所述树皮基质为松树皮，优选为松鳞，更优选的是树皮的尺寸为3 mm至7 mm。在另外一些优选的实施方式中，换盆时使用的基质中所含有的树皮为松树皮，优选为松鳞，更优选的是树皮的尺寸为10 mm至20 mm。

在炼苗后移栽时，可以使用百菌灵稀释液清洗掉根部的培养基，在清洗的同时进行消毒。

本发明人经过试验还发现，现有技术中大花型兜兰种苗的成活率低和产品品质欠佳还与种苗出瓶炼苗后所使用的培养基质密切相关，如果炼苗后使用树皮作为基质和/或换盆后使用水苔和树皮的组合作为基质可以显著大花型兜兰的瓶苗成活率。

在一个具体的实施方式中，本发明方法包括品种的选择、育种方法、无菌播种与组织培养、组培苗定植与基质筛选、盆苗管理与花期管理技术等，具体可以包括以下步骤：（a）选择具有目标性状的大花型兜兰品种；（b）在兜兰品种开花后，选择健康成熟的植株进行人工自交或杂交授粉；（c）将果荚中的种子播种于培养基上，萌发后进行壮苗和生根培养；（d）组培苗炼苗、消毒与定植；（e）换盆、光温、水肥管理技术；（f）低温催花及花期肥水管理技术。

在一个更具体的实施方式中，可以选择3年成熟苗、花朵大（直径大于12cm）的黄色、绿色和红色品种，如魔帝系列兜兰品种。其中魔帝系列兜兰是以瘤瓣兜兰和劳伦斯兜兰为主要亲本的杂交后代，主要分为红花和绿花系列。选择健康成熟的兜兰品种开花后，进行人工自交或杂交育种。授粉时，首先去掉父母本的唇瓣，用针挑下父本花粉粒，安放在母本柱头上，因花粉团具有粘性物质，因此，花粉粒很容易粘在柱头上。选择授粉180天至240天后成熟的果荚，制作无菌播种培养基，配方为1/4MS+1mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1g/L蛋白胨+25 g/L香蕉+5.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭。将果荚中的白色种子播种于制作好的培养基上。播种30天至40天后，种子开始萌动，出现白色点状组织，并转绿，出现绿色芽尖。播种100天至150天后，可将已发育叶片的芽体转入壮苗培养基，配方为1/4MS+4mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA +25 g/L香蕉+5.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭。在株高为4 cm至6 cm时，将组培苗带瓶转移到自然光下培养20天后进行炼苗（炼苗时间最好选择在11月左右进行），取出植株，用百菌灵稀释液清洗根部培养基，移栽于1.7寸透明营养钵中，基质为树皮。养护管理条件：湿度是决定组培苗移栽成活率的重要因素，最佳湿度为60至80%，湿度达到60%时，可以在盆栽兜兰附近地下洒水、喷雾、水帘通风；温度条件白天18℃至28℃，夜间15℃至18℃；大花型兜兰光照控制在10000 lux至15000 lux，可以采用遮光度在75%的遮光网遮光进行光照控制。水肥管理条件：树皮为基质，需要一般5至7天浇一次（基质8成干即可补水），每次浇水要浇透。肥料浓度为3000倍，营养生长期可以每2周施肥一次，可以采用液肥浇灌根区和喷施叶表面。大花型兜兰的营养生长期以氮肥及均衡肥为主，常用N:P:K为30:10:10和/或20:20:20复合肥。将养护1年、株幅大于9cm的1.5寸植株换盆至2.5寸透明营养钵中，养护1年后，株幅大于22cm的2.5寸植株换盆至3寸透明营养钵中，基质均为水苔:树皮=1:1。养护管理条件：白天18℃至28℃，夜间15℃至18℃。夏季达到28℃时，可以加强通风和采取降温措施，冬季低至15℃时，进行保温或加温；相对湿度50至80%，湿度大于80％时，可以加强通风以促进空气流动，湿度低于50%时，可以在盆栽兜兰附近地下洒水、喷雾、水帘通风；大花型兜兰的光照强度可以控制为10000 lux至15000 lux，在必要的情况下可以采用遮光度为75%的遮光网遮光进行遮光控制。水肥管理条件：水苔加树皮为基质时，一般7至10天浇一次。每次浇水要浇透，下雨天不浇水。肥料浓度为3000倍，营养生长期2周施肥一次，生殖生长期1个月施肥一次，可以采用液肥浇灌根区和喷施叶表面。兜兰生长期以氮肥及均衡肥为主，具体可以采用N:P:K为30:10:10和/或20:20:20复合肥。催花日期为目标花期之前6个月，昼/夜温度控制于25至27℃/16至18℃进行催花处理，光照强度10000 lux至15000 lux。花期减少施肥，可以每4周施肥一次，适当提高P肥，具体可以采用N:P:K为10:30:10复合肥，可以采用液肥浇灌根区和喷施叶表面。

采用本发明的方法可以具有如下优点等：1、兜兰杂交后代花径可达12cm。2、无菌播种萌发率高，组培苗生长速度快。3、瓶苗基质为树皮，魔帝的瓶苗成活率达95%以上。4、缩短栽培周期到3年。5、花序完整，花瓣完好无损，观赏效果好。

实施例

以下实施例用来进一步说明本发明的实质性内容。根据本发明技术方案和实施例的描述，也许同领域技术人员在本发明的基础上还可以对本发明技术方案进行一些修改和改进。因此，在不偏离本发明主要技术方案基础上所做的修改和改进，均应属于本发明所要求保护的范围。以下实施例中炼苗后移栽时使用的树皮基质时树皮为5mm的松鳞，并且换盆时使用的树皮基质或者基质中所含有的树皮基质为15 mm松鳞。

实施例1

选择健康成熟的魔帝系列兜兰品种（参见图1右图），进行人工杂交育种。授粉时，首先去掉父母本的唇瓣，用针挑下父本花粉粒，安放在母本柱头上，因花粉团具有粘性物质，因此，花粉粒很容易粘在柱头上。选择授粉30天至300天不同成熟程度的果荚，分别播种在种子萌发培养基上，培养基配方为1/4MS+1mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1g/L蛋白胨+25 g/L香蕉+5.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭，并于60天后统计萌发率。

由图2的统计结果可见，魔笛系列兜兰品种的萌发率与种子成熟程度同样有直接关系。授粉后90天接种培养基上种子不萌发，授粉后180天至240天种子萌发率最高，授粉后超过270天种子因过于成熟，种子萌发率显著下降。因此，选择播种时间对种子萌发率有重要影响。

实施例2

使用实施例1所述的魔帝系列兜兰品种的组培苗，出瓶后，栽培于1.7寸透明营养钵，基质为树皮。设置不同养护湿度管理条件：湿度为60%和80%。培养200天后，统计成活率。试验结果如图3所示，魔帝兜兰在相对湿度为60%时，成活率为90%以上，当相对湿度为80%时，成活率可以达到95%以上。

实施例3

使用实施例1所述的魔帝系列兜兰品种，以实施例1基本相同的方法进行种子萌发率试验，不同的是采用如下种子萌发培养基。结果如下所示。

由上表可以看出，使用1/4MS+1mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1g/L蛋白胨+25 g/L香蕉+5.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭作为种子萌发培养基可以显著提高大花型兜兰的种子萌发率。

实施例4

以实施例1所使用的魔帝系列兜兰品种为试材，将株高4至6cm的组培苗带瓶转移到自然光下培养20天后，取出植株，用百菌灵1000倍稀释液清洗根部培养基，移栽于1.7寸透明营养钵中，基质分别为树皮、沸石：树皮：椰块=2:1:2、果树枝、水草和椰块，分别于64天、167天、250天、365天后统计成活率。

养护管理条件：湿度60至80%；温度条件白天18℃至28℃，夜间15℃至18℃；光照10000 lux至15000 lux，采用遮光度在75%的遮光网进行遮光控制。水肥管理条件：一般5至7天浇一次，基质8成干就应及时补水。每次浇水要浇透，下雨天不浇水。肥料浓度为3000倍，营养生长期2周施肥一次，采用液肥浇灌根区和喷施叶表面交替施肥，其中营养生长期以氮肥及均衡肥为主，具体为交替施用N:P:K为30:10:10和20:20:20复合肥。

由图4可见，兜兰组培苗基质试验结果表明，以树皮为基质成活率最高，培养6个月后成活率达到98%，其次是沸石：树皮：椰块=2:1:1，成活率达95%，果树枝基质的成活率达85%，但在栽培过程中，易引起真菌和细菌感染，早起出现真菌性白灰色霉状物，后期出现细菌性灰色水渍状物，以此为基质，将提高兜兰病害（如茎腐病）几率。

实施例5

以实施例1所述的魔帝系列兜兰品种为试材，选择株幅大于9cm的1.7寸植株换盆至2.5寸透明营养钵中，基质处理分别为水苔、树皮、水苔：树枝=2:1、水苔：树皮=1:1、水苔：树皮：羊粪=1:1:1。

养护管理条件：白天18℃至28℃，夜间15℃至18℃；湿度50至80%；光照要求10000lux至15000 lux，采用遮光度在75%的遮光网遮光控制光照。水肥管理条件：每7天至10天浇透水一次。肥料浓度为3000倍，营养生长期2周施肥一次，生殖生长期1个月施肥一次，采用液肥浇灌根区和喷施叶表面结合施肥方式，兜兰营养生长期以氮肥及均衡肥为主，交替施用N:P:K为30:10:10和20:20:20的复合肥。

由图5可以看出，水苔：树皮=1:1为基质时，兜兰的叶片生长量最大，由6cm生长至55cm，相对于其他基质而言，是最适合魔帝类中大苗生长的基质种类。其次，纯水苔和纯树皮的生长量也较大，但远不及水苔：树皮=1:1的生长量大。

实施例6

选择实施例1所述的魔帝系列兜兰品种的3年成熟苗。选择健康成熟的兜兰植株，在开花后进行人工自交授粉。授粉时，首先去掉父母本的唇瓣，用针挑下父本花粉粒，安放在母本柱头上，因花粉团具有粘性物质，因此，花粉粒能够粘在柱头上。选择授粉120天后成熟的果荚，制作无菌播种培养基，配方为MS+1mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA +5.5 g/L琼脂+1g/L活性炭。将果荚中的种子播种于制作好的培养基上。播种30至40天后，种子开始萌动，出现白色点状组织，并转绿，出现绿色芽尖，此时测量萌发率。

播种100天至150天后，可将已发育叶片的芽体转入壮苗培养基，配方为MS+4mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA +25 g/L香蕉+5.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭。

将在壮苗培养基中长到株高4至6cm时带瓶转移到自然光下培养20天进行炼苗。

经过炼苗后，取出植株，用百菌灵1000倍稀释液清洗根部培养基，移栽于1.7寸透明营养钵中，基质为水苔。养护管理条件：湿度为60至80%，湿度低于60%时，在盆栽兜兰附近地下洒水、喷雾、水帘通风；温度条件白天18℃至28℃，夜间15℃至18℃；将光照强度控制为10000 lux至15000 lux，采用遮光度在75%的遮光网进行遮光控制。水肥管理条件：树皮基质8成干（一般需要5至7天浇一次）时补水。每次浇水要浇透（下雨天不浇水）。肥料浓度为3000倍，营养生长期2周施肥一次，采用液肥浇灌根区结合喷施叶表面的施肥方式。兜兰营养生长期以氮肥及均衡肥为主，具体使用N:P:K为20:20:20的复合肥。

将养护1年、株幅大于9cm的1.5寸植株换盆至2.5寸透明营养钵中，养护1年后，株幅大于22cm的2.5寸植株换盆至3寸透明营养钵中，基质均为树皮。养护管理条件：最佳湿度为60至80%，湿度低于60%时，在盆栽兜兰附近地下洒水、喷雾、水帘通风；温度条件白天18℃至28℃，夜间15℃至18℃；采用遮光度在75%的遮光网将兜兰光照控制在10000 lux至15000lux。水肥管理条件：树皮基质8成干时补水（一般需要5至7天浇一次）。每次浇水要浇透（下雨天不浇水）。肥料浓度为3000倍，营养生长期2周施肥一次，采用液肥浇灌根区结合喷施叶表面。兜兰生长期以氮肥及均衡肥为主，具体常用N:P:K为20:20:20的复合肥。

将养护1年、株幅大于9cm的1.5寸植株换盆至2.5寸透明营养钵中，养护1年后，株幅大于22cm的2.5寸植株换盆至3寸透明营养钵中，基质均为树皮。养护管理条件：白天18℃至28℃，夜间15℃至18℃。在温度高于30℃时，通过加强通风进行降温，冬季低于15℃时，采用保温或加温措施；湿度50至80%，湿度大于80％时，加强通风促使空气流动，湿度低于50%时，在盆栽兜兰附近地下洒水、喷雾、水帘通风；兜兰光照采用遮光度在75%的遮光网控制在10000 lux至15000 lux。水肥管理条件：水苔加树皮为基质时，7至10天浇一次。每次浇水要浇透（下雨天不浇水）。肥料浓度为3000倍，营养生长期2周施肥一次，生殖生长期1个月施肥一次，施肥采用液肥浇灌根区和喷施叶表面进行。兜兰营养生长期以氮肥及均衡肥为主，具体使用N:P:K为30:10:10和20:20:20的复合肥。催花日期为目标花期之前6个月，昼/夜温度控制于25至27℃/16至18℃进行催花处理，光照强度10000 lux至15000 lux。花期减少施肥，每4周施肥一次，适当提高P肥，具体使用N:P:K为10:30:10的复合肥，通过液肥浇灌根区和喷施叶表面进行。

该方法操作下，杂交种子无菌播种不萌发或者萌发率极低，兜兰种子极不成熟（白色团装）或已成熟（褐色颗粒状），均很难萌发。组培苗出瓶后基质为水苔，成活率低于60%。中大苗基质为树皮，根系发育良好，但叶片不挺立且缺绿，生长周期长，开花品质差，花径小于10cm，花色浅（参见图6a）。

实施例7

选择实施例1所述的魔帝系列兜兰品种的3年成熟苗。选择健康成熟的植株，在开花后，进行人工自交授粉。授粉时，首先去掉父母本的唇瓣，用针挑下父本花粉粒，安放在母本柱头上，因花粉团具有粘性物质，因此，花粉粒能够粘在柱头上。选择授粉240天后的果荚获取种子（种子为半成熟，呈浅黄色颗粒状），制作种子萌发培养基，配方为1/4MS+1mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1g/L蛋白胨+25 g/L香蕉+5.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭。将果荚中的白色种子播种于制作好的培养基上。在播种30至40天后，种子开始萌动，出现白色点状组织，并转绿，出现绿色芽尖，此时测量萌发率。

在播种100天至150天后，将已发育叶片的芽体转入壮苗培养基，配方为1/4MS+4mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA +25 g/L香蕉+5.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭。

经过炼苗后，取出植株，用百菌灵1000倍稀释液清洗掉根部培养基，然后移栽于1.7寸透明营养钵中，基质为树皮。养护管理条件：湿度控制为60至80%，湿度低于60%时，在盆栽兜兰附近地下洒水、喷雾、水帘通风；温度条件白天18℃至28℃，夜间15℃至18℃；兜兰光照在10000 lux至15000 lux，采用遮光度在75%的遮光网进行遮光控制。水肥管理条件：树皮基质8成干时补水（一般需要5至7天浇一次）。每次浇水要浇透（下雨天不浇水）。肥料浓度为3000倍，营养生长期2周施肥一次，采用液肥浇灌根区结合喷施叶表面。兜兰生长期以氮肥及均衡肥为主，具体使用N:P:K为20:20:20的复合肥。

将养护1年、株幅大于9cm的1.5寸植株换盆至2.5寸透明营养钵中，养护1年后，株幅大于22cm的2.5寸植株换盆至3寸透明营养钵中，基质均为水苔:树皮=1:1。养护管理条件：白天18℃至28℃，夜间15℃至18℃。在温度高于30℃时，通过加强通风进行降温，冬季低于15℃时，采用保温或加温措施；湿度50至80%，湿度大于80％时，加强通风促使空气流动，湿度低于50%时，在盆栽兜兰附近地下洒水、喷雾、水帘通风；兜兰光照采用遮光度在75%的遮光网控制在10000 lux至15000 lux。水肥管理条件：水苔加树皮为基质时，7至10天浇一次。每次浇水要浇透（下雨天不浇水）。肥料浓度为3000倍，营养生长期2周施肥一次，生殖生长期1个月施肥一次，施肥采用液肥浇灌根区结合喷施叶表面进行。兜兰营养生长期以氮肥及均衡肥为主，具体使用N:P:K为20:20:20的复合肥。

在目标花期之前6个月进行催花，催花期间昼/夜温度控制于25至27℃/16至18℃进行催花处理，光照强度10000 lux至15000 lux。花期减少施肥，每4周施肥一次，适当提高P肥，具体使用N:P:K为10:30:10的复合肥，通过液肥浇灌根区结合喷施叶表面进行。

该方法操作下，选择种子半成熟（授粉后240天，呈浅黄色颗粒状）时进行播种萌发率高，出苗整齐。采用基础培养基为1/4MS时的成活率和生长速度高，培养基中添加蛋白胨和香蕉可提高萌发率。

组培苗出瓶后基质为树皮，成活率可以高达98%以上，甚至达到100%。中大苗基质为水苔:树皮=1:1时，根系发育良好，叶片挺立、墨绿色、宽而厚，大大缩短了营养生长周期，开花品质好，花径可达12 cm，花色艳而靓（参见图6b）。

通过本发明方法培育的大花型兜兰的开花数量多，观赏效果好。杂交后代萌发率高，瓶苗成活率高，大苗叶片挺立、墨绿色、宽而厚，花大色艳，花期长达两个半月，生产周期降到3年。本技术应用于大花型兜兰育种与生产，缩短生产周期的同时，保证产品数量和质量，为大花型兜兰育种和盆花的生产提供了技术保证。

Claims

1.一种提高大花型兜兰种子萌发率的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）在大花型兜兰开花后进行人工授粉，所述大花型兜兰为魔帝系列兜兰品种；和

（2）在(a)种子不再紧密着生在果荚的胎座组织上和（b）种子可以从果荚的胎座组织分离下来之后且（c）授粉后180天以上，并且在(i)种子呈棕褐色和（ii）种子干燥松动之前且（iii）授粉后240天以下，获取种子并播种在种子萌发培养基上，从而由种子获得芽体；其中所述种子萌发培养基为如下培养基（1）至（6）中的一种培养基：（1）MS+1mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+5.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭、（2）1/2MS+1mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+5.5 g/L琼脂+1g/L活性炭、（3）1/4MS+1mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+5.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭、（4）1/4MS+1mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1g/L蛋白胨+5.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭、（5）1/4MS+1mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+25 g/L香蕉+5.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭、或（6）1/4MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+1g/L蛋白胨+25 g/L香蕉+5.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述大花型兜兰为花朵大于12 cm的兜兰品种。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述大花型兜兰为F1代大花型兜兰品种。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述魔帝系列兜兰品种为红花系列或绿花系列。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述人工授粉为自交授粉和/或杂交授粉。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

在人工授粉时，首先去掉父母本的唇瓣，用针挑下父本花粉粒，安放在母本柱头上。

7.一种大花型兜兰的栽培方法，其特征在于：

所述方法采用权利要求1至6中任一项所述的方法来提高种子萌发率。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（a）选择具有目标性状的大花型兜兰品种，所述大花型兜兰品种为魔帝系列兜兰品种；

（b）在兜兰品种开花后，进行人工自交或杂交授粉；

（c）将果荚中的种子播种于培养基上，萌发后进行壮苗和生根培养；

（d）对组培苗实施炼苗、消毒与定植；

（e）换盆，并进行光温、水肥管理；

（f）实施低温催花和花期肥水管理。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，在炼苗后移栽时，使用百菌灵稀释液清洗掉根部的培养基。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：

在炼苗后，使用树皮作为基质；和/或

在换盆时，使用水苔和树皮的组合作为基质。

11.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：

选择3年成熟苗、花朵直径大于12cm的绿色或红色品种。

12.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：

在授粉时，首先去掉父母本的唇瓣，用针挑下父本花粉粒，安放在母本柱头上。

13.根据权利要求7至12中任一项所述的方法，其特征在于：

在播种100天后，将已发育出叶片的芽体转入壮苗培养基中培养以获得组培苗，所述壮苗培养基的配方为1/4MS+4mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA +25 g/L香蕉+5.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于：

在所述组培苗的株高为4cm至6cm时，将组培苗转移到自然光下炼苗20天后，将组培苗移栽到装有树皮基质的栽培容器中，并且以如下条件进行养护：相对湿度条件为60%至80%；温度条件为白天18℃至28℃，夜间15℃至18℃；光照条件为10000 lux至15000 lux；水肥管理条件为每5至7天浇透水一次，施用N:P:K为30:10:10或20:20:20的复合肥，稀释倍数为3000倍，施用频率为2至4周一次，施用方式为根区浇灌和/或叶面喷施。

15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于：

在株幅等于或者大于9 cm时进行一次换盆，并且在株幅等于或者大于22 cm时进行二次换盆，换盆使用的基质均为由质量比为1:1的水苔和树皮组成，并且以如下条件进行养护：相对湿度条件为60%至80%；温度条件为白天18℃至28℃，夜间15℃至18℃；光照条件为10000 lux至15000 lux；水肥管理条件为每7至10天浇透水一次，施用N:P:K为20:20:20的复合肥，稀释倍数为3000倍，施用频率为每2周一次，施用方式为根区浇灌和/或叶面喷施。

16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于：

在二次换盆之后并且在目标花期之前6个月进行催花，催花期间以如下条件进行养护：相对湿度条件为不低于50%；温度条件为白天25℃至27℃，夜间16℃至18℃；光照条件为10000 lux至15000 lux；水肥管理条件为每7至10天浇透水一次，施用N:P:K为10:30:10的复合肥，稀释倍数为3000倍，施用频率为4周一次，施用方式为根区浇灌和/或叶面喷施。

17.根据权利要求14所述的方法，其特征在于：

将组培苗移栽到装有树皮基质的栽培容器中进行养护所采用的所述相对湿度为80%。

18.根据权利要求15所述的方法，其特征在于：

二次换盆进行的养护所采用的所述相对湿度为80%。

19.根据权利要求16所述的方法，其特征在于：

催花期间进行的养护所采用的所述相对湿度为80%。

20.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：

炼苗后移栽时使用的树皮基质为松树皮；和/或

换盆时使用的基质中所含有的树皮为松树皮。

21.根据权利要求15所述的方法，其特征在于：

炼苗后移栽时使用的所述树皮基质为松鳞；和/或

换盆时使用的基质中所含有的树皮为松鳞。

22.根据权利要求15所述的方法，其特征在于：

炼苗后移栽时使用的所述树皮基质中的树皮的尺寸为3 mm至7 mm；和/或

换盆时使用的基质中所含有的树皮的尺寸为10 mm至20 mm。