CN110972947A - 一种绣球-北极熊组织培养的培养基及培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种绣球‑北极熊组织培养的培养基及培养方法。本发明绣球‑北极熊组织培养的培养基，包括腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基，其中，所述腋芽诱导培养基包括1/2WPM+6‑BA 1~2mg/L+2，4‑D 0.1 mg/L，所述增殖培养基包括1/2MS+6‑BA 1.6~2.0mg/L+IBA0.05mg/L，所述生根培养基1/2WPM+IBA0.8~1.2mg/L。本发明的组培方法包括无菌材料的获得、芽的诱导、增殖培养、生根培养和炼苗，本发明的组织培养方法扩繁增殖率高，商品率高，组培方法易于操作，能够大大降低生产成本，打破季节限制，便于运输。
Description
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种绣球-北极熊组织培养的培养基及培养方法。
技术背景
绣球：为虎耳草科绣球属植物，灌木，高1~4米；茎常于基部发出多数放射枝而形成一圆形灌丛；枝圆柱形，叶纸质或近革质，倒卵形或阔椭圆形。伞房状聚伞花序近球形，直径8~20厘米，具短的总花梗，花密集，粉红色、淡蓝色或白色；花瓣长圆形，长3~3.5毫米，蒴果未成熟，长陀螺状；种子未熟，花期6~8月。
绣球花花型丰满，大而美丽，其花色能红能蓝，令人悦目怡神，是常见的盆栽观赏花木。中国栽培绣球的时间较早，在明、清时代建造的江南园林中都栽有绣球。20世纪初建设的公园也离不开绣球的配植。现代公园和风景区都以成片栽植，形成景观。传统繁殖受季节限制，不能大量快速繁殖，优质商品率低。
植物组织培养包括以下步骤：（1）外植体选材消毒，（2）启动培养，（3）增殖培养，（4）生根培养，（5）瓶苗驯化（炼苗），植物组培的关键在于如何优化外植体的脱分化与再分化过程，即（2）、（3）和（4）部分，其中（2）为脱分化过程，（3）和（4）为再分化过程，不同植物脱分化和再分化所需求的外部激素浓度不同，这是组培工作者研究的重点。组培的流程都是一样的，但是不一样的在于培养基配方，不同品种的植物每个步骤所需的外部条件（培养基种类、激素种类、浓度等）都是不同的。
发明内容
本发明所要解决的技术问题提供了一种绣球-北极熊组织培养的培养基及培养方法。本发明能够提高繁殖速度和苗的整齐度，并提高性状稳定性，从而建立更适合绣球-北极熊快速繁殖的工厂化生产体系。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种绣球-北极熊组织培养的培养基及培养方法，其特征在于，该绣球-北极熊组织培养的培养基及培养方法具有以下特征：
一种绣球-北极熊组织培养的培养基，所述培养基包括腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基，其中，所述腋芽诱导培养基包括 1/2WPM+6-BA 1~2mg/L+2，4-D 0.08~0.12mg/L，所述增殖培养基包括1/2MS+6-BA 1.6~2.0mg/L+IBA0.04~0.06mg/L，所述生根培养基1/2WPM+IBA0.8~1.2mg/L。
一种绣球-北极熊组织培养的培养方法，包括以下步骤：
（1）无菌材料的获得：选取长势较好且无病虫害嫩枝条的外植体，去除外植体叶片，轻刷去表面绒毛，用加入洗洁精的清水浸泡不超过1分钟，再冲洗外植体，过滤至无泡沫状态；在超净工作台上，用配制好的0.08%~0.12%升汞和吐温的混合溶液消毒6~10分钟后，用无菌水冲洗4~6次，滤干水分，将消毒完的外植体切去伤口和受伤部位，切割成长度1.6~2.4cm带腋芽的茎段，接入到配制好的培养基上培养5~9天；
（2）芽的诱导：所述腋芽诱导培养基为 1/2WPM+6-BA 1~2mg/L+2，4-D 0.08~0.12 mg/L，pH为5.7~5.9，温度为23~25℃，光照强度为2300~2700lx，光照和暗培养交替，光照为10~14小时，将无污染的外植体接种到腋芽诱导培养基中，腋芽不可末入培养基，7~15天后，腋芽部位膨大萌动，形成愈伤组织，长出小芽，25天后把嫩枝条切下转接入增殖培养基中；
（3）增殖培养：将腋芽萌动形成的小芽转接到增殖培养基中进行增殖培养，所述增殖培养基为1/2MS+6-BA 1.6~2.0 mg/L+IBA0.04~0.06 mg/L，pH为5.7~5.9，温度为23~25℃，光照强度为2300~2700lx，光照和暗培养交替，光照为10~14小时，将外植体截取成1.6~2.4cm长的茎段，转接入增殖培养基中，利用茎段顶芽和腋芽进行增殖，增殖系数为8~15；
（4）生根培养：由增殖培养基转换为生根培养基，所述生根培养基1/2WPM+IBA0.8~1.2mg/L，pH为5.7~5.9，温度为23~25℃，光照强度为2300~2700lx，光照和暗培养交替，光照为10~14小时，将增殖苗愈伤组织切除转接入生根培养基中，4~6天长出根原基，12~18天生根率95%~100%；
（5）炼苗：生根培养10~14天后，将瓶苗取出，洗去在根部附着的培养基，剪去较长的根，用多菌灵水浸泡后洗净移栽，移种在泥炭和珍珠岩的混合基质中，遮阳保湿。
所述腋芽诱导培养基包括1/2WPM+6-BA 1.3~1.7mg/L+2，4-D 0.09~0.11mg/L。
所述增殖培养基包括1/2MS+6-BA 1.7~1.9mg/L+IBA 0.045~0.055mg/L。
所述生根培养基包括 1/2WPM+IBA0.9~1.1mg/L。
所述腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基还分别包括蔗糖28~32g/L、琼脂粉4~6g/L。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
本发明的组培方法易于操作，增殖扩繁比例高，商品率高，能够大大降低了生产成本，提高繁殖速度和苗的整齐度，并提高性状稳定性，从而建立更适合绣球-北极熊快速繁殖的工厂化生产体系。
实施例 1
一种绣球-北极熊组织培养的培养方法，包括以下步骤：
（1）无菌材料的获得：选取长势较好且无病虫害嫩枝条的外植体，去除外植体叶片，轻刷去表面绒毛，用加入洗洁精的清水浸泡不超过1分钟，再冲洗外植体，过滤至无泡沫状态；在超净工作台上，用配制好的0.08%升汞和吐温的混合溶液消毒10分钟后，用无菌水冲洗4次，滤干水分，将消毒完的外植体切去伤口和受伤部位，切割成长度2cm带腋芽的茎段，接入到配制好的培养基上培养9天；
（2）芽的诱导：所述腋芽诱导培养基为 1/2WPM+6-BA 1mg/L+2，4-D 0.1 mg/L，pH为5.8，温度为24℃，光照强度为2300lx，光照和暗培养交替，光照为14小时，将无污染的外植体接种到腋芽诱导培养基中，腋芽不可末入培养基， 15天后，腋芽部位膨大萌动，形成愈伤组织，长出小芽，25天后把嫩枝条切下转接入增殖培养基中；
（3）增殖培养：将腋芽萌动形成的小芽转接到增殖培养基中进行增殖培养，所述增殖培养基为1/2MS+6-BA 1.6 mg/L+IBA0.05 mg/L，pH为5.8，温度为24℃，光照强度为2500lx，光照和暗培养交替，光照为12小时，将外植体截取成2cm 长的茎段，转接入增殖培养基中，利用茎段顶芽和腋芽进行增殖，增殖系数为8；
（4）生根培养：由增殖培养基转换为生根培养基，所述生根培养基1/2WPM+IBA0.8 mg/L，pH为5.8，温度为24℃，光照强度为2500lx，光照和暗培养交替，光照为12小时，将增殖苗愈伤组织切除转接入生根培养基中，9天长出根原基，14天生根率95%；
（5）炼苗：生根培养14天后，将瓶苗取出，洗去在根部附着的培养基，剪去较长的根，用多菌灵水浸泡2分钟后洗净移栽，移种在泥炭和珍珠岩的混合基质中，遮阳保湿，湿度保持在65%，根的温度保持在15℃，移栽成活率达为100%。
实施例2
一种绣球-北极熊组织培养的培养方法，包括以下步骤：
（1）无菌材料的获得：选取长势较好且无病虫害嫩枝条的外植体，去除外植体叶片，轻刷去表面绒毛，用加入洗洁精的清水浸泡不超过1分钟，再冲洗外植体，过滤至无泡沫状态；在超净工作台上，用配制好的0.09%升汞和吐温的混合溶液消毒6分钟后，用无菌水冲洗4次，滤干水分，将消毒完的外植体切去伤口和受伤部位，切割成长度2cm带腋芽的茎段，接入到配制好的培养基上培养8天；
（2）芽的诱导：所述腋芽诱导培养基为 1/2WPM+6-BA1.25 mg/L+2，4-D 0.1 mg/L，pH为5.8，温度为25℃，光照强度为2500lx，光照和暗培养交替，光照为13小时，将无污染的外植体接种到腋芽诱导培养基中，腋芽不可末入培养基， 13天后，腋芽部位膨大萌动，形成愈伤组织，长出小芽，23天后把嫩枝条切下转接入增殖培养基中；
（3）增殖培养：将腋芽萌动形成的小芽转接到增殖培养基中进行增殖培养，所述增殖培养基为1/2MS+6-BA 1.7mg/L+IBA0.05 mg/L，pH为5.8，温度为25℃，光照强度为2500lx，光照和暗培养交替，光照为12小时，将外植体截取成2cm 长的茎段，转接入增殖培养基中，利用茎段顶芽和腋芽进行增殖，增殖系数为11；
（4）生根培养：由增殖培养基转换为生根培养基，所述生根培养基1/2WPM+IBA0.9 mg/L，pH为5.8，温度为24℃，光照强度为2400lx，光照和暗培养交替，光照为12小时，将增殖苗愈伤组织切除转接入生根培养基中，8天长出根原基，13天生根率96%；
（5）炼苗：生根培养13天后，将瓶苗取出，洗去在根部附着的培养基，剪去较长的根，用多菌灵水浸泡2分钟后洗净移栽，移种在泥炭和珍珠岩的混合基质中，遮阳保湿，湿度保持在65%，根的温度保持在15℃，移栽成活率达为100%。
实施例3
一种绣球-北极熊组织培养的培养方法，包括以下步骤：
（1）无菌材料的获得：选取长势较好且无病虫害嫩枝条的外植体，去除外植体叶片，轻刷去表面绒毛，用加入洗洁精的清水浸泡不超过1分钟，再冲洗外植体，过滤至无泡沫状态；在超净工作台上，用配制好的0.1%升汞和吐温的混合溶液消毒8分钟后，用无菌水冲洗6次，滤干水分，将消毒完的外植体切去伤口和受伤部位，切割成长度2cm带腋芽的茎段，接入到配制好的培养基上培养7天；
（2）芽的诱导：所述腋芽诱导培养基为 1/2WPM+6-BA 1.5 mg/L+2，4-D 0.1 mg/L，pH为5.8，温度为23℃，光照强度为2700lx，光照和暗培养交替，光照为12小时，将无污染的外植体接种到腋芽诱导培养基中，腋芽不可末入培养基， 10天后，腋芽部位膨大萌动，形成愈伤组织，长出小芽，20天后把嫩枝条切下转接入增殖培养基中。
（3）增殖培养：将腋芽萌动形成的小芽转接到增殖培养基中进行增殖培养，所述增殖培养基为1/2MS+6-BA 1.8mg/L+IBA0.05 mg/L，pH为5.8，温度为23℃，光照强度为2500lx，光照和暗培养交替，光照为12小时，将外植体截取成2cm 长的茎段，转接入增殖培养基中，利用茎段顶芽和腋芽进行增殖，增殖系数为15；
（4）生根培养：由增殖培养基转换为生根培养基，所述生根培养基1/2WPM+IBA1.0 mg/L，pH为5.8，温度为23℃，光照强度为2500lx，光照和暗培养交替，光照为12小时，将增殖苗愈伤组织切除转接入生根培养基中，7天长出根原基，12天生根率100%；
（5）炼苗：生根培养12天后，将瓶苗取出，洗去在根部附着的培养基，剪去较长的根，用多菌灵水浸泡2分钟后洗净移栽，移种在泥炭和珍珠岩的混合基质中，遮阳保湿，湿度保持在65%，根的温度保持在15℃，移栽成活率达为100%。
实施例4
一种绣球-北极熊组织培养的培养方法，包括以下步骤：
（1）无菌材料的获得：选取长势较好且无病虫害嫩枝条的外植体，去除外植体叶片，轻刷去表面绒毛，用加入洗洁精的清水浸泡不超过1分钟，再冲洗外植体，过滤至无泡沫状态；在超净工作台上，用配制好的0.11%升汞和吐温的混合溶液消毒7分钟后，用无菌水冲洗5次，滤干水分，将消毒完的外植体切去伤口和受伤部位，切割成长度2cm带腋芽的茎段，接入到配制好的培养基上培养6天；
（2）芽的诱导：所述腋芽诱导培养基为 1/2WPM+6-BA 1.75mg/L+2，4-D 0.1 mg/L，pH为5.8，温度为25℃，光照强度为2500lx，光照和暗培养交替，光照为11小时，将无污染的外植体接种到腋芽诱导培养基中，腋芽不可末入培养基，9天后，腋芽部位膨大萌动，形成愈伤组织，长出小芽，17天后把嫩枝条切下转接入增殖培养基中。
（3）增殖培养：将腋芽萌动形成的小芽转接到增殖培养基中进行增殖培养，所述增殖培养基为1/2MS+6-BA 1.9 mg/L+IBA0.05 mg/L，pH为5.8，温度为25℃，光照强度为2500lx，光照和暗培养交替，光照为12小时，将外植体截取成2cm 长的茎段，转接入增殖培养基中，利用茎段顶芽和腋芽进行增殖，增殖系数为12；
（4）生根培养：由增殖培养基转换为生根培养基，所述生根培养基1/2WPM+IBA1.1mg/L，pH为5.9，温度为25℃，光照强度为2600lx，光照和暗培养交替，光照为12小时，将增殖苗愈伤组织切除转接入生根培养基中，6天长出根原基，11天生根率100%；
（5）炼苗：生根培养11天后，将瓶苗取出，洗去在根部附着的培养基，剪去较长的根，用多菌灵水浸泡2分钟后洗净移栽，移种在泥炭和珍珠岩的混合基质中，遮阳保湿，湿度保持在65%，根的温度保持在15℃，移栽成活率达为100%。
实施例5
一种绣球-北极熊组织培养的培养方法，包括以下步骤：
（1）无菌材料的获得：选取长势较好且无病虫害嫩枝条的外植体，去除外植体叶片，轻刷去表面绒毛，用加入洗洁精的清水浸泡不超过1分钟，再冲洗外植体，过滤至无泡沫状态；在超净工作台上，用配制好的0.12%升汞和吐温的混合溶液消毒6分钟后，用无菌水冲洗6次，滤干水分，将消毒完的外植体切去伤口和受伤部位，切割成长度2cm带腋芽的茎段，接入到配制好的培养基上培养5天；
（2）芽的诱导：所述腋芽诱导培养基为 1/2WPM+6-BA 2mg/L+2，4-D 0.1 mg/L，pH为5.8，温度为24℃，光照强度为2500lx，光照和暗培养交替，光照为10小时，将无污染的外植体接种到腋芽诱导培养基中，腋芽不可末入培养基，7天后，腋芽部位膨大萌动，形成愈伤组织，长出小芽，15天后把嫩枝条切下转接入增殖培养基中；
（3）增殖培养：将腋芽萌动形成的小芽转接到增殖培养基中进行增殖培养，所述增殖培养基为1/2MS+6-BA2.0 mg/L+IBA0.05 mg/L，pH为5.8，温度为24℃，光照强度为2500lx，光照和暗培养交替，光照为12小时，将外植体截取成2cm 长的茎段，转接入增殖培养基中，利用茎段顶芽和腋芽进行增殖，增殖系数为11；
（4）生根培养：由增殖培养基转换为生根培养基，所述生根培养基1/2WPM+IBA1.2mg/L，pH为5.8，温度为24℃，光照强度为2500lx，光照和暗培养交替，光照为12小时，将增殖苗愈伤组织切除转接入生根培养基中，5天长出根原基，10天生根率100%；
（5）炼苗：生根培养10天后，将瓶苗取出，洗去在根部附着的培养基，剪去较长的根，用多菌灵水浸泡2分钟后洗净移栽，移种在泥炭和珍珠岩的混合基质中，遮阳保湿，湿度保持在65%，根的温度保持在15℃，移栽成活率达为100%。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制。凡是根据本发明实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。
Claims (6)
1. 一种绣球-北极熊组织培养的培养基，其特征在于，所述培养基包括腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基，其中，所述腋芽诱导培养基包括 1/2WPM+6-BA 1~2mg/L+2，4-D 0.08~0.12 mg/L，所述增殖培养基包括1/2MS+6-BA 1.6~2.0mg/L+IBA0.04~0.06mg/L，所述生根培养基1/2WPM+IBA0.8~1.2mg/L。
2.一种绣球-北极熊组织培养的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）无菌材料的获得：选取长势较好且无病虫害嫩枝条的外植体，去除外植体叶片，轻刷去表面绒毛，用加入洗洁精的清水浸泡不超过1分钟，再冲洗外植体，过滤至无泡沫状态；在超净工作台上，用配制好的0.08%~0.12%升汞和吐温的混合溶液消毒6~10分钟后，用无菌水冲洗4~6次，滤干水分，将消毒完的外植体切去伤口和受伤部位，切割成长度1.6~2.4cm带腋芽的茎段，接入到配制好的培养基上培养5~9天；
（2）芽的诱导：所述腋芽诱导培养基为 1/2WPM+6-BA 1~2mg/L+2，4-D 0.08~0.12 mg/L，pH为5.7~5.9，温度为23~25℃，光照强度为2300~2700lx，光照和暗培养交替，光照为10~14小时，将无污染的外植体接种到腋芽诱导培养基中，腋芽不可末入培养基，7~15天后，腋芽部位膨大萌动，形成愈伤组织，长出小芽，25天后把嫩枝条切下转接入增殖培养基中；
（3）增殖培养：将腋芽萌动形成的小芽转接到增殖培养基中进行增殖培养，所述增殖培养基为1/2MS+6-BA 1.6~2.0 mg/L+IBA0.04~0.06 mg/L，pH为5.7~5.9，温度为23~25℃，光照强度为2300~2700lx，光照和暗培养交替，光照为10~14小时，将外植体截取成1.6~2.4cm长的茎段，转接入增殖培养基中，利用茎段顶芽和腋芽进行增殖，增殖系数为8~15；
（4）生根培养：由增殖培养基转换为生根培养基，所述生根培养基1/2WPM+IBA0.8~1.2mg/L，pH为5.7~5.9，温度为23~25℃，光照强度为2300~2700lx，光照和暗培养交替，光照为10~14小时，将增殖苗愈伤组织切除转接入生根培养基中，4~6天长出根原基，12~18天生根率95%~100%；
（5）炼苗：生根培养10~14天后，将瓶苗取出，洗去在根部附着的培养基，剪去较长的根，用多菌灵水浸泡后洗净移栽，移种在泥炭和珍珠岩的混合基质中，遮阳保湿。
3.根据权利要求 2 所述的绣球-北极熊组织培养的培养方法，其特征在于，所述腋芽诱导培养基包括1/2WPM+6-BA 1.3~1.7mg/L+2，4-D 0.09~0.11mg/L。
4.根据权利要求 2 所述的绣球-北极熊组织培养的培养方法，其特征在于，所述增殖培养基包括1/2MS+6-BA 1.7~1.9mg/L+IBA 0.045~0.055mg/L。
5.根据权利要求2所述的绣球-北极熊组织培养的培养方法，其特征在于，所述生根培养基包括 1/2WPM+IBA0.9~1.1mg/L。
6.根据权利要求2所述的绣球-北极熊组织培养的培养方法，其特征在于，所述腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基还分别包括蔗糖28~32g/L、琼脂粉4~6g/L。
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