CN105028194A

CN105028194A - 一种空气凤梨的组织培养快繁方法

Info

Publication number: CN105028194A
Application number: CN201510350901.8A
Authority: CN
Inventors: 李鹏; 郑桂灵
Original assignee: Qingdao Agricultural University
Current assignee: Qingdao Agricultural University
Priority date: 2015-06-23
Filing date: 2015-06-23
Publication date: 2015-11-11

Abstract

本发明公开了一种空气凤梨的组织培养快繁方法，包括以下步骤：种子无菌处理，诱导丛生芽，增殖培养，壮苗培养制备得到空气凤梨壮苗，本方法解决了现有技术中存在的外植体消毒困难、诱导愈伤组织困难的问题。本发明生长速度比自然状态下提高3倍以上，而且一粒种子萌发的芽最终分离出4-5棵幼苗，出苗率提高4倍以上。

Description

一种空气凤梨的组织培养快繁方法

技术领域

本发明属于植物栽培技术领域，具体涉及一种空气凤梨的组织培养快繁方法。

背景技术

空气凤梨隶属于凤梨科(Bromeliaceae)，为单子叶植物、多年生草本。凤梨科有3个亚科、50个属、2600多种。3个亚科分别为穗花凤梨亚科(Pitcairnioideae)、铁兰亚科(Tillandsioideae)和凤梨亚科(Bromelioideae)。

绝大多数空气凤梨是铁兰亚科铁兰属(Tillandsia)植物。铁兰属是凤梨科中最大的一属，有500多个原生种，分布于拉丁美洲海拔1000～3000m的广阔区域。在原生环境中，它们多附生或垂挂于树干或石头、甚至于电缆线上。

空气凤梨主要的吸收养分和水分的器官是叶表面覆盖的“葵花状”鳞片结构。该结构能帮助空气凤梨直接从存在污染物的空气中获得养分和水分。而它们的根系退化，只在支撑物上起固定作用，不需要土壤，所以它们与地面不会有任何联系。

空气凤梨是既能赏花，又可观叶的观赏植物。空气凤梨品种繁多，株形优美，装饰性极强。可以个性地粘贴在古树桩、假山石和墙壁上，或放在竹篮、贝壳里，点缀空间，时尚清新，富有大自然野趣；也可将其拼组成盆景、装饰成屏风，会让居室生机勃勃。除此之外，空气凤梨还具有观赏期长的优点，几乎全年都能开花；空气凤梨无栽培基质，不用搭置花架，清洁卫生，可随意摆放，是非常理想的室内观赏植物。空气凤梨同时也可用于园林植物造景，绿地景观组景，或在节假日举办空气凤梨植物专题花展。

凤梨科植物原产于北美加勒比海沿岸至南美洲，仅有1种分布在非洲西海岸。凤梨(菠萝)最初是由哥伦布于1493年在瓜德鲁普岛时发现的并将其种苗带回了西班牙。15世纪后，菠萝被传至欧洲，同时引起世界著名的英国皇家植物园的重视，到1864年英国皇家植物园已经搜集了100种凤梨科植物。空气凤梨的栽培历史已有100多年了，但直至上世纪80年代才风靡国外，我国是近几年才开始引种。如今空气凤梨已成为植物爱好者的新宠，也是新型的室内观赏花卉，逐步进入寻常百姓家。

目前空气凤梨繁殖大多采用传统的分株繁殖和扦插繁殖，也可用组织培养和种子繁殖。种子繁殖成功率高，但由种子生长至成品需5～8年时间，植物快繁虽速度快，但由于空气凤梨叶片布满鳞片给外植体的消毒带来很大困难，以顶芽或侧芽为外植体进行快发，常常会导致霉菌污染而失败；此外因空气凤梨分化程度高，诱导愈伤组织也较为困难，因此目前对空气凤梨的组织培养尚属探索阶段因此目前花卉厂商多采用分株繁殖。

发明内容

本发明的目的是提供一种空气凤梨的组织培养快繁方法，解决了现有技术中存在的外植体消毒困难、诱导愈伤组织困难的问题。

本发明所采用的技术方案是，一种空气凤梨的组织培养快繁方法，包括以下步骤：

步骤1、种子无菌处理：将种子置于70％乙醇溶液中浸泡2min，再置于2％次氯酸钠溶液中浸泡20min，用无菌水清洗3次；接种于萌芽培养基中；种子膨胀发芽，成长为幼苗；

步骤2、诱导丛生芽：制备诱导培养基，将幼苗放置于诱导培养基上培养；待诱导芽基部长出小刺状的新芽基后进行增殖培养；

步骤3、将上述诱导培养的侧芽外植体放到B5培养基或者是普通增值培养基上进行适宜条件的培养，仔细观察其生长状况，侧芽外植体长为一团，并且似苗状，进行分苗；

步骤4、将分苗后的侧芽移转在无激素但附加椰乳的MS培养基中进行壮苗培养，培养得到空气凤梨壮苗。

本发明的特点还在于：

萌芽培养基配方为：1/2MS+0.1mg/LNAA+0.01mg/LKT；糖20g/L，pH5.8。

诱导培养基为：K/MSvit+ZT1.2mg/L+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L，糖20g/L，pH6.0，琼脂粉5-10克。

K/MSvit的配方为(mg/L)：硫酸铵500；七水硫酸镁250；四水硝酸钙1000；磷酸氢二钾250；水硫酸锰7.5；七水硫酸铁25。

诱导培养基通过以下方法制备得到：诱导丛生芽的培养基为K/MSvit+ZT1.2mg/L+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L，糖20g/L，pH6.0，琼脂粉5-10克；K/MSvit配方(mg/L)：硫酸铵500；七水硫酸镁250；四水硝酸钙1000；磷酸氢二钾250；水硫酸锰7.5；七水硫酸铁25；按上述K/MSvit配方先配制7500mLK/MSvit溶液，将激素均配备为0.1mg/mL的母液，加入K/MSvit培养基配置液中，调pH6.0，加入糖20g/L，琼脂粉5-10克，定容至1000mL后高压灭菌；培养基灭菌后，分装到三角瓶中，冷却凝固。

将幼苗放置于诱导培养基上培养的培养条件为：无菌、25℃恒温、每天光照12小时，光照强度为1500LX，相对湿度为80％。

步骤4中MS培养基中椰乳的质量浓度为10％-20％。

本发明的有益效果是：本发明生长速度比自然状态下提高3倍以上，而且一粒种子萌发的芽最终分离出4-5棵幼苗，出苗率提高4倍以上。

附图说明

图1是在壮苗培养基上生长3个月时分离出的空气凤梨幼苗照片。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。

实施例1空气凤梨的组织培养快繁方法

一、种子无菌处理：将种子置于70％乙醇溶液中浸泡2min，再置于2％次氯酸钠溶液中浸泡20min，用无菌水清洗3次。接种于萌芽培养基中。待种子膨胀发芽后，将幼苗放置于诱导培养基上处理。

萌芽配方：1/2MS+0.1mg/LNAA+0.01mg/LKT。糖20g/L,pH5.8左右，最好搭建滤纸桥，可避免芽被过分浸泡于水分中，自行坏死。

二、诱导丛生芽：诱导丛生芽的培养基(1000mL)为K/MSvit+ZT1.2mg/L+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L，糖20g/L，pH6.0左右，琼脂粉5-10克。K/MSvit配方(mg/L)：硫酸铵500；七水硫酸镁250；四水硝酸钙1000；磷酸氢二钾250；水硫酸锰7.5；七水硫酸铁25。按上述K/MSvit配方先配制7500mLK/MSvit溶液，将激素(ZT，6-BA，NAA)均配备为0.1mg/mL的母液，加入K/MSvit培养基配置液中，调pH6.0左右，加入糖20g/L，琼脂粉5-10克，定容至1000mL后高压灭菌。培养基灭菌后，分装到三角瓶中，冷却凝固。将萌芽的外植体在无菌条件下移植到诱导丛生芽培养基上，仔细观察芽的生长情况，要求条件是无菌、25℃恒温、每天光照12小时，光照强度为1500LX，相对湿度为80％。随时观察生长状况，持续观察一个月。待诱导芽基部长出小刺状的新芽基后进行下一步处理。

三、增殖培养：将上述诱导培养的侧芽外植体放到B5培养基(为常规技术的培养基)或者是普通增值培养基上进行无菌培养，条件是25℃恒温、每天光照12小时，光照强度为1500LX，相对湿度为80％。仔细观察其生长状况，侧芽外植体长为一簇并且似苗状，进行分苗。

四、壮苗培养：将分苗后的侧芽移转在无激素但附加质量浓度为10％-20％的椰乳的MS培养基中进行壮苗培养，培养得到空气凤梨壮苗。

ZT：玉米素；6-BA是6-苄基腺嘌呤；NAA是萘乙酸。

组培萌芽，长出两片子叶需要一周左右，幼芽长出丛生芽需要1个月的时间，分离出的小芽长至真叶3-4片需2个月，长至真叶6-8片需3个月，生长速度比自然状态下提高3倍以上，而且一粒种子萌发的芽最终分离出4-5棵幼苗，出苗率提高4倍以上。

Claims

1.一种空气凤梨的组织培养快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的空气凤梨的组织培养快繁方法，其特征在于，所述萌芽培养基配方为：1/2MS+0.1mg/LNAA+0.01mg/LKT；糖20g/L，pH5.8。

3.根据权利要求1所述的空气凤梨的组织培养快繁方法，其特征在于，所述诱导培养基为：K/MSvit+ZT1.2mg/L+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L，糖20g/L，pH6.0，琼脂粉5-10克。

4.根据权利要求3所述的空气凤梨的组织培养快繁方法，其特征在于，所述K/MSvit的配方为(mg/L)：硫酸铵500；七水硫酸镁250；四水硝酸钙1000；磷酸氢二钾250；水硫酸锰7.5；七水硫酸铁25。

5.根据权利要求4所述的空气凤梨的组织培养快繁方法，其特征在于，所述诱导培养基通过以下方法制备得到：诱导丛生芽的培养基为K/MSvit+ZT1.2mg/L+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L，糖20g/L，pH6.0，琼脂粉5-10克；K/MSvit配方(mg/L)：硫酸铵500；七水硫酸镁250；四水硝酸钙1000；磷酸氢二钾250；水硫酸锰7.5；七水硫酸铁25；按上述K/MSvit配方先配制7500mLK/MSvit溶液，将激素均配备为0.1mg/mL的母液，加入K/MSvit培养基配置液中，调pH6.0，加入糖20g/L，琼脂粉5-10克，定容至1000mL后高压灭菌；培养基灭菌后，分装到三角瓶中，冷却凝固。

6.根据权利要求5所述的空气凤梨的组织培养快繁方法，其特征在于，所述将幼苗放置于诱导培养基上培养的培养条件为：无菌、25℃恒温、每天光照12小时，光照强度为1500LX，相对湿度为80％。

7.根据权利要求1所述的空气凤梨的组织培养快繁方法，其特征在于，所述步骤4中MS培养基中椰乳的质量浓度为10％-20％。