CN103202229B - 一种绿花重瓣铁线莲组织培养快繁方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种绿花重瓣铁线莲组织培养快繁方法，步骤包括：取绿花重瓣铁线莲幼茎的茎尖，在超净台上用无菌水冲洗、75％酒精浸泡处理20～30秒，再用0.1～0.2％升汞浸泡消毒6～10分钟，无菌水冲洗干净后接种到丛芽诱导培养基中进行初代诱导培养；2)将初代诱导培养得到的丛生芽分成单个小芽，接种到丛芽增殖培养基中进行继代培养；3)当芽苗长至2～3cm时接种到壮苗生根培养基中进行生根培养。本发明方法可以快速繁殖绿花重瓣铁线莲，不仅可以节约培育种苗成本、提高生产效率，而且不受外界条件的限制，四季皆可进行，节约育苗占地面积，可在短期内形成大量优良试管苗，进行规模化、工厂化生产。

Description

一种绿花重瓣铁线莲组织培养快繁方法

技术领域

本发明涉及一种绿花重瓣铁线莲组织培养快繁方法。

背景技术

铁线莲(Clematis florida Thunb)为毛茛科 、铁线莲属藤本植物。具有很高的观赏和药用功能，药用以根或全草入药。利尿，理气通便，活血止痛。用于小便不利，腹胀，便闭；外用治关节肿痛，虫蛇咬伤。我国是铁线莲的原产地，有100多个品种，生于低山区的丘陵灌丛中，多为单瓣铁线莲。重瓣铁线莲“ Clematis florida var. plena D. Don ”是铁线莲的一个变种，花朵颜色多样，外圈6片花瓣，内为细碎花瓣组成的“球”，具有极高的观赏价值。重瓣铁线莲是国际花卉园艺上一类重要垂直绿化材料, 每年种苗交易量达数百万之多。绿花重瓣铁线莲更加珍贵，是花卉中少有的品种。绿花重瓣铁线莲花色新奇，花瓣为浅绿色有上百枚，整个花朵成绿色秀球，花径可达6厘米以上，三年生以上的植株可节节开花，具有极高的观赏价值和开发前景。绿花重瓣铁线莲不能产生种子，繁殖方式是采用压条、分株或扦插，繁殖速度很慢，限制了珍贵品种绿花重瓣铁线莲生产的发展。采用组织培养的方法可以快速繁殖珍贵品种绿花重瓣铁线莲，提供栽培种苗，具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种绿花重瓣铁线莲组织培养快繁方法。

包括以下步骤:

1) 取绿花重瓣铁线莲幼茎的茎尖，在超净台上用无菌水冲洗、75％酒精浸泡处理20～30秒，再用0.1～0.2％升汞浸泡消毒6～10分钟，无菌水冲洗干净后接种到丛芽诱导培养基中进行初代诱导培养；2)将初代诱导培养得到的丛生芽分成单个小芽,接种到丛芽增殖培养基中进行继代培养；3)当芽苗长至2～3cm时接种到壮苗生根培养基中进行生根培养；

采用的培养基配方如下：

①丛芽诱导培养基：MS + 6-BA 1.0～2.0 mg/L + NAA 0.02～0.2 mg/L + KT 0.2～0.5 mg/L + 白糖20～30g/L + 土豆50g/L + 琼脂0.3～0.5%，pH5.6～5.8，

②丛芽增殖培养基：MS + 6-BA 2.0～3.0 mg/L + NAA 0.1～0.5 mg/L + KT 0.5～1.0 mg/L + 白糖20～30g/L + 蛋白胨1g/L + 琼脂0.3～0.5%， pH5.6～5.8，

③壮苗生根培养基：1/2MS + 0.2～0.5mg/L NAA + 0.2～0.5mg/L IBA + 活性碳0.1% + 白糖20g/L + 蛋白胨1g/L + 琼脂0.3～0.5%， pH5.6～5.8；

培养条件如下：

①初代诱导培养：温度23℃～25℃，空气湿度60%～65%，光照50～100 lx，8h/d；

②继代培养：温度24～26℃，湿度65%～70%，光照强度800～1200lx，光照10h/d；

③生根培养：温度25～27℃，湿度65%～70%，光照强度1500～2000lx，光照12h/d。

1/2MS指MS培养基配方元素减半，配方元素不包括蔗糖和琼脂。

本发明的显著优点：

绿花重瓣铁线莲采用幼茎的茎尖诱导产生丛芽成苗，具有生长繁殖速度快，能保持亲本的优良特性，种苗成品率高等优点，该品种快繁方法目前尚末见报道过。

具体实施方式

实施例1

一种绿花重瓣铁线莲组织培养快繁方法，具体步骤如下：

1、外植体处理和接种

 采集绿花重瓣铁线莲外植体茎尖，在超净台上用无菌水冲洗、75％的酒精处理30秒，再用0.1％升汞浸泡消毒10分钟，无菌水冲洗干净后将茎尖接种于丛芽诱导培养基中。当丛芽产生后，转入丛芽增殖培养基再培养，不断扩大种苗数量。需要大苗时，将2～3 cm长的丛芽切下后转到壮苗生根培养基上培养，即生长成带根的绿花重瓣铁线莲试管苗。

2、培养基配方：根据不同生育阶段其培养基最佳配方如下：

①丛芽诱导培养基：MS + 6-BA 1.0～2.0 mg/L + NAA 0.02～0.2 mg/L + KT 0.2～0.5 mg/L + 白糖20～30g/L + 土豆50g/L + 琼脂0.3～0.5%，  pH5.6～5.8。

培养基添加激素量及激素组合6-BA+NAA；KT+NAA；6-BA+KT+NAA；虽然都能芽诱产生丛芽，但诱导丛芽率差异极显著，不加土豆汁和添加土豆汁诱导丛芽率差异也是极显著。因此试验结果该配方是最佳的组合。

②丛芽增殖培养基：MS + 6-BA 2.0～3.0 mg/L + NAA 0.1～0.5 mg/L + KT 0.5～1.0 mg/L + 白糖20～30g/L + 蛋白胨1g/L + 琼脂0.3～0.5%， pH5.6～5.8。

培养基添加激素量及激素组合6-BA+NAA；KT+NAA；6-BA+KT+NAA；丛芽都能增殖，但增殖倍数差异极显著，不加蛋白胨和添加蛋白胨丛芽粗壮差异极显著。因此试验结果该配方是丛芽增殖最佳的组合。

③壮苗生根培养基：1/2MS + 0.2～0.5mg/LNAA + 0.2～0.5mg/LIBA + 活性碳0.1% + 白糖20g/L + 蛋白胨1g/L + 琼脂0.3～0.5%， pH5.6～5.8。

培养基添加激素量及激素NAA、IBA；绿花重瓣铁线莲幼芽都能生根，但生根迟、早和数量差异极显著，不加蛋白胨、活性碳和添加蛋白胨、活性碳苗粗壮差异极显著。因此试验结果该配方是壮苗生根最佳的组合。

配制方法按常规操作进行。

2、培养条件设定

①丛芽诱导培养：接种后置光照培养箱内或培养室内的培养架上培养，设定温度23℃～25℃；空气湿度60%～65%；光照50～100 lx，8h/d。

②丛芽增殖培养：接种后置光照培养箱内或培养室内的培养架架上培养，设定温度24～26℃，湿度65%～70%，光照强度800～1200lx，光照10h/d。

③ 壮苗培养：接种后置光照培养箱内或培养室内的培养架上培养，设定温度25～27℃，湿度65%～70%，光照强度1500～2000lx，光照12h/d。

Claims (1)

1.一种绿花重瓣铁线莲组织培养快繁方法，其特征在于：包括以下步骤:

1) 取绿花重瓣铁线莲幼茎的茎尖，在超净台上用无菌水冲洗、75％酒精浸泡处理20～30秒，再用0.1～0.2％升汞浸泡消毒6～10分钟，无菌水冲洗干净后接种到丛芽诱导培养基中进行初代诱导培养；2)将初代诱导培养得到的丛生芽分成单个小芽，接种到丛芽增殖培养基中进行继代培养；3）当芽苗长至2～3cm时接种到壮苗生根培养基中进行生根培养；

采用的培养基配方如下：

①丛芽诱导培养基：MS + 6-BA 1.0～2.0 mg/L + NAA 0.02～0.2 mg/L + KT 0.2～0.5 mg/L + 白糖20～30g/L + 土豆50g/L + 琼脂0.3～0.5%，pH5.6～5.8，

②丛芽增殖培养基：MS + 6-BA 2.0～3.0 mg/L + NAA 0.1～0.5 mg/L + KT 0.5～1.0 mg/L + 白糖20～30g/L + 蛋白胨1g/L + 琼脂0.3～0.5%， pH5.6～5.8，

③壮苗生根培养基：1/2MS + 0.2～0.5mg/L NAA + 0.2～0.5mg/L IBA + 活性炭0.1% + 白糖20g/L + 蛋白胨1g/L + 琼脂0.3～0.5%， pH5.6～5.8；

培养条件如下：

①初代诱导培养：温度23℃～25℃，空气湿度60%～65%，光照50～100 lx，8h/d；

②继代培养：温度24～26℃，湿度65%～70%，光照强度800～1200lx，光照10h/d；

③生根培养：温度25～27℃，湿度65%～70%，光照强度1500～2000lx，光照12h/d。