CN102273408A - 蝴蝶文心兰优质种苗快速繁殖方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了蝴蝶文心兰(Pschopsis)种苗的组织培养繁殖方法，旨在提供一种繁殖速度快，可在短期内获得大量试管苗，对母株不会产生损伤，能保持母株优良性状的蝴蝶文心兰的组织培养繁殖方法。本方法包括选择生长旺盛的蝴蝶文心兰优良株系的花茎带节切段为外植体，对外植体进行消毒，在花梗苗诱导培养基中进行不定芽的诱导，再将花梗苗茎尖接入原球茎诱导和增殖培养基中进行原球茎的诱导和继代增殖，然后在原球茎分化培养基上进行原球茎的分化，再将由原球茎能分化出小苗接种到壮苗培养基上培养，当试管苗长至3～4厘米高时，在温室中的自然光照下炼苗7～14天，取出试管苗，洗掉根部培养基，栽入树皮、兰石和泥炭的混合基质中，进一步栽培成种苗，移栽的成活率90-98％。本发明为蝴蝶文心兰的种苗的繁殖开辟了一条新的途径，能为市场提供大量的蝴蝶文心兰种苗。

Description

蝴蝶文心兰优质种苗快速繁殖方法
技术领域
本发明涉及蝴蝶文心兰的繁殖方法。具体地说，涉及蝴蝶文心兰种苗的组织培养试管繁殖方法。
背景技术
蝴蝶文心兰，拟蝶唇兰属(Psychopsis)植物及其杂交种的总称，原产于中南美洲，分布于特尼特岛、哥伦比亚、哥斯达尼加、秘鲁、巴拿马等地，多作为珍稀兰花盆栽观赏。本属植物共有5个原生种并育成了50多个杂交种。蝴蝶文心兰是兰科植物中造型独特、极富观赏价值的一类兰花，它的花序为无限花序，常年开花，在开花期内，随花序轴的生长不断离心地产生花芽，即在一朵花凋谢后，另一朵花接着开放。蝴蝶文心兰的花形酷似一只鲜艳蝴蝶，细长的花瓣就像蝴蝶长长的触须，侧萼片就像黄褐斑纹的翅膀，每朵花花期约2～3周。
蝴蝶文心兰为我国近年来引进的珍稀兰花，种苗昂贵。它的常规繁殖常采用分株繁殖，但分株繁殖系数极低，远远不能满足市场的需要。采用无菌播种和组织培养能进行蝴蝶文心兰规模化快速繁殖，但采用无菌播种难以保持一些优良株系特别是一些优良杂种株系的优良性状，以蝴蝶文心兰的花茎为外植体，采用组织培养培养技术能有效地解决这些问题。
目前，国内外尚无蝴蝶文心兰组织培养种苗繁殖的报道。也没有蝴蝶文心兰种苗组织培养专利的申请。
发明内容
本发明提供了一种繁殖速度快，可在短期内获得大量试管苗，不会对母株产生损伤，能保持母株优良性状的蝴蝶文心兰的组织培养繁殖方法。
本发明主要应用植物组织细胞的全能性和植物组织培养技术，以蝴蝶文心兰的花梗节段为外植体，利用独特的培养基诱导出花梗苗，再以花梗苗的茎尖进行原球茎的诱导和分化、然后进行壮苗培养，生产出优质的蝴蝶文心兰种苗，从而实现了本发明的目的。
本发明的蝴蝶文心兰种苗繁殖方法，其特征包括以下的步骤：
(1)开花时选取生长健壮的蝴蝶文心兰的带节花梗为外植体；
(2)将外植体依次用酒精浸泡，升汞溶液消毒，无菌水漂洗后接种到花梗苗诱导培养基上培养，30～40天时能诱导花梗苗的产生。所述的花梗苗诱导培养基每升含花宝1号(HYPONeX 1)1～2g，肌醇80～120mg，甘氨酸1.5～2.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.05～0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.4～0.8mg，烟酸0.4～0.8mg，柠檬酸钠50～200mg，萘乙酸(NAA)0.2～1mg，10～20％的椰子汁，蔗糖15～30g，琼脂6～7g。
(3)将由花梗诱导的小苗转移到类原球茎诱导培养基培养，40～60天能诱导类原球茎的形成，在相同的培养基上能进行类原球茎的增殖，增殖倍数3～5倍，增殖周期30～40天。所述的类原球茎诱导和增殖培养基为每升含花宝2号1～2g，肌醇80～120mg，甘氨酸1.5～2.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.05～0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.4～0.8mg，烟酸0.4～0.8mg，柠檬酸钠50～200mg，6-苄基腺嘌呤(6-BA)2～5mg，萘乙酸(NAA)0.2～1mg，10％～20％的椰子汁，蔗糖15～30g，琼脂6～7g。
(4)将增殖而来的类原球茎接种到分化培养基培养，40～50天能分化出小苗。所述的原球茎分化培养基为每升含花宝1号1～2g，肌醇80～120mg，甘氨酸1.5～2.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.05～0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.4～0.8mg，烟酸0.4～0.8mg，萘乙酸(NAA)0.5～1.5mg，活性炭0.5～1g，蔗糖15～30g，琼脂6～7g。
(5)将类原球茎分化出的小植株接种到壮苗培养培养，40～50天能试管苗的形成，所述的壮苗培养基为每升含花宝1号1～2g，花宝2号1～2g，肌醇80～120mg，甘氨酸1.5～2.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.05～0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.4～0.8mg，烟酸0.4～0.8mg，萘乙酸(NAA)1～2mg，蔗糖20～30g，香蕉汁50～100g，活性碳0.5～1g，琼脂6～7g。
(6)将试管苗在温室的自然光下炼苗，然后洗净根部的培养基，在用树皮、兰石和泥炭的混合基质(体积比2∶2∶1)中栽培，得到种苗。
上述步骤(2)～(5)中培养基pH 5.4～5.6，培养温度24～28℃，光照的照度为1500～2000lx，光照时间为12～16小时/天。
2.根据权利要求1所述的一种蝴蝶文心兰种苗繁殖方法，步骤(2)所述的酒精浓度是体积分数70％～80％，浸泡时间是30～60秒，所述的升汞溶液的浓度是质量分数0.1％～0.2％，消毒时间是10～20分钟，所述的无菌水的漂洗次数是4～6次。
步骤(2)～(5)培养基中使用的花宝1号和花宝2号均可从市场上购得。
步骤(6)所述的试管苗高3～4cm，炼苗时间为7～14天，光照强度为5000～6000lx。
3.根据权利要求1或2所述的一种蝴蝶文心兰种苗繁殖方法，其特征在于步骤(1)所述的外植体为魔鬼文心兰(Psychopsis papilio)、维氏蝴蝶文心兰(Psychopsis versteegiana)或杂交种黄花蝴蝶文心兰(Psychopsis Carolina Yellow Butterfly)的带节花梗。
利用本专利能成功地进行优良品种的蝴蝶文心兰优质种苗的组织培养和快速繁殖，此发明生产出的蝴蝶文心兰种苗具有遗传稳定性高，出苗快，种苗品质好、生长良好等特点。具有投入少，产出高等优势，是利用植物组织细胞的全能性和植物组织培养等生物技术进行植物优质种苗的规模化生产。
目前，国内外还没有蝴蝶文心兰种苗组织培养快速繁殖论文的报道，也没有蝴蝶文心兰种苗组织培养专利的申请。
具体实施方法
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。实施例中使用的花宝1号(HYPONeX 1)和花宝2号(HYPONeX 2)均为美国生产台湾台和园艺企业股份有限股份有限公司分装产品。
实施例1：
(1)开花时选取生长健壮的魔鬼文心兰(Psychopsis papilio)的带节花梗为外植体，将外植体用70％的酒精浸泡60秒后，再用0.1％升汞溶液消毒20分钟，无菌水漂洗4次后接种到花梗苗诱导培养基上培养，40天时能诱导花梗苗的产生。所述的花梗苗诱导培养基每升含花宝1号(HYPONeX 1)1g，肌醇80mg，甘氨酸1.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.05mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.4mg，烟酸0.4mg，柠檬酸钠50mg，萘乙酸(NAA)0.2mg，10％的椰子汁，蔗糖15g，琼脂7g。
(2)将由花梗诱导的小苗转移到类原球茎诱导培养基培养，60天能诱导类原球茎的形成，在相同的培养基上能进行类原球茎的增殖，增殖倍数3倍，增殖周期40天。所述的类原球茎诱导和增殖培养基为每升含花宝2号1g，肌醇80mg，甘氨酸1.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.05mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.4mg，烟酸0.4mg，柠檬酸钠50mg，6-苄基腺嘌呤(6-BA)2mg，萘乙酸(NAA)0.2mg，10％的椰子汁，蔗糖15g，琼脂7g。
(3)将增殖而来的类原球茎接种到分化培养基培养，50天能分化出小苗。所述的原球茎分化培养基为每升含花宝1号1g，肌醇80mg，甘氨酸1.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.05mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.4mg，烟酸0.4mg，萘乙酸(NAA)0.5mg，活性炭0.5～1g，蔗糖15～30g，琼脂6～7g。
(4)将类原球茎分化出的小植株接种到壮苗培养培养，50天能试管苗的形成，所述的壮苗培养基为每升含花宝1号1g，花宝2号1g，肌醇80mg，甘氨酸1.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.05mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.48mg，烟酸0.4mg，萘乙酸(NAA)1mg，蔗糖20g，香蕉汁50g，活性碳0.5g，琼脂7g。
(5)将3～4cm高的试管苗在温室的自然光下炼苗，光照强度为5000～6000lx，然后洗净根部的培养基，在用树皮、兰石和泥炭的混合基质(体积比2∶2∶1)中栽培，得到种苗，成活率为90％。
上述步骤(2)～(4)中培养基pH 5.4，培养温度24℃，光照的照度为1500lx，光照时间为12小时/天。
实施例2：
(1)开花时选取生长健壮的维氏蝴蝶文心兰(Psychopsis versteegiana)的带节花梗为外植体，将外植体用75％的酒精浸泡45秒后，再用0.15％升汞溶液消毒15分钟，无菌水漂洗5次后接种到花梗苗诱导培养基上培养，45天时能诱导花梗苗的产生。所述的花梗苗诱导培养基每升含花宝1号(HYPONeX 1)1.5g，肌醇100mg，甘氨酸2mg，盐酸硫胺素(VB1)0.1mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.6mg，烟酸0.6mg，柠檬酸钠75mg，萘乙酸(NAA)0.5mg，15％的椰子汁，蔗糖20g，琼脂6.5g。
(2)将由花梗诱导的小苗转移到类原球茎诱导培养基培养，50天能诱导类原球茎的形成，在相同的培养基上能进行类原球茎的增殖，增殖倍数4倍，增殖周期35天。所述的类原球茎诱导和增殖培养基为每升含花宝2号1.5g，肌醇100mg，甘氨酸2mg，盐酸硫胺素(VB1)0.1mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.6mg，烟酸0.6mg，柠檬酸钠75mg，6-苄基腺嘌呤(6-BA)3mg，萘乙酸(NAA)0.5mg，15％的椰子汁，蔗糖20g，琼脂6.5g。
(3)将增殖而来的类原球茎接种到分化培养基培养，45天能分化出小苗。所述的原球茎分化培养基为每升含花宝1.5号1g，肌醇100mg，甘氨酸2mg，盐酸硫胺素(VB1)0.1mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.6mg，烟酸0.6mg，萘乙酸(NAA)0.75mg，活性炭0.75g，蔗糖20g，琼脂6.5g。
(4)将类原球茎分化出的小植株接种到壮苗培养培养，45天能试管苗的形成，所述的壮苗培养基为每升含花宝1.5号1g，花宝2号1.5g，肌醇100mg，甘氨酸2mg，盐酸硫胺素(VB1)0.1mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.6mg，烟酸0.6mg，萘乙酸(NAA)1.5mg，蔗糖25g，香蕉汁75g，活性碳0.75g，琼脂6.5g。
(5)将3～4cm高的试管苗在温室的自然光下炼苗，光照强度为5000～6000lx，然后洗净根部的培养基，在用树皮、兰石和泥炭的混合基质(体积比2∶2∶1)中栽培，得到种苗，成活率为95％。
上述步骤(2)～(4)中培养基pH 5.5，培养温度26℃，光照的照度为1800lx，光照时间为14小时/天。
实施例3：
(1)开花时选取生长健壮的黄花蝴蝶文心兰(Psychopsis Carolina Yellow Butterfly)的带节花梗为外植体，将外植体用80％的酒精浸泡30秒后，再用0.2％升汞溶液消毒10分钟，无菌水漂洗6次后接种到花梗苗诱导培养基上培养，30天时能诱导花梗苗的产生。所述的花梗苗诱导培养基每升含花宝1号(HYPONeX 1)2g，肌醇120mg，甘氨酸2mg，盐酸硫胺素(VB1)0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.8mg，烟酸0.8mg，柠檬酸钠100mg，萘乙酸(NAA)1mg，20％的椰子汁，蔗糖30g，琼脂6g。
(2)将由花梗诱导的小苗转移到类原球茎诱导培养基培养，40天能诱导类原球茎的形成，在相同的培养基上能进行类原球茎的增殖，增殖倍数4倍，增殖周期30天。所述的类原球茎诱导和增殖培养基为每升含花宝2号2g，肌醇120mg，甘氨酸2mg，盐酸硫胺素(VB1)0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.8mg，烟酸0.8mg，柠檬酸钠100mg，6-苄基腺嘌呤(6-BA)5mg，萘乙酸(NAA)1mg，20％的椰子汁，蔗糖30g，琼脂6g。
(3)将增殖而来的类原球茎接种到分化培养基培养，40天能分化出小苗。所述的原球茎分化培养基为每升含花宝1号2g，肌醇120mg，甘氨酸2mg，盐酸硫胺素(VB1)0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.8mg，烟酸0.8mg，萘乙酸(NAA)1.5mg，活性炭1g，蔗糖30g，琼脂6g。
(4)将类原球茎分化出的小植株接种到壮苗培养培养，40天能试管苗的形成，所述的壮苗培养基为每升含花宝1号2g，花宝2号2g，肌醇120mg，甘氨酸2mg，盐酸硫胺素(VB1)0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.8mg，烟酸0.8mg，萘乙酸(NAA)2mg，蔗糖30g，香蕉汁100g，活性碳1g，琼脂6g。
(5)将3～4cm高的试管苗在温室的自然光下炼苗，光照强度为5000～6000lx，然后洗净根部的培养基，在用树皮、兰石和泥炭的混合基质(体积比2∶2∶1)中栽培，得到种苗，成活率为98％。
上述步骤(2)～(4)中培养基pH 5.6，培养温度28℃，光照的照度为2000lx，光照时间为16小时/天。

Claims (3)

1.一种蝴蝶文心兰种苗繁殖方法，其特征包括以下的步骤：
(1)开花时选取生长健壮的蝴蝶文心兰的带节花梗为外植体；
(2)将外植体依次用酒精浸泡，升汞溶液消毒，无菌水漂洗后接种到花梗苗诱导培养基上培养，30～40天时能诱导花梗苗的产生。所述的花梗苗诱导培养基每升含花宝1号(HYPONeX 1)1～2g，肌醇80～120mg，甘氨酸1.5～2.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.05～0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.4～0.8mg，烟酸0.4～0.8mg，柠檬酸钠50～200mg，萘乙酸(NAA)0.2～1mg，10～20％的椰子汁，蔗糖15～30g，琼脂6～7g。
(3)将由花梗诱导的小苗转移到类原球茎诱导培养基培养，40～60天能诱导类原球茎的形成，在相同的培养基上能进行类原球茎的增殖，增殖倍数3～5倍，增殖周期30～40天。所述的类原球茎诱导和增殖培养基为每升含花宝2号1～2g，肌醇80～120mg，甘氨酸1.5～2.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.05～0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.4～0.8mg，烟酸0.4～0.8mg，柠檬酸钠50～200mg，6-苄基腺嘌呤(6-BA)2～5mg，萘乙酸(NAA)0.2～1mg，10％～20％的椰子汁，蔗糖15～30g，琼脂6～7g。
(4)将增殖而来的类原球茎接种到分化培养基培养，40～50天能分化出小苗。所述的原球茎分化培养基为每升含花宝1号1～2g，肌醇80～120mg，甘氨酸1.5～2.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.05～0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.4～0.8mg，烟酸0.4～0.8mg，萘乙酸(NAA)0.5～1.5mg，活性炭0.5～1g，蔗糖15～30g，琼脂6～7g。
(5)将类原球茎分化出的小植株接种到壮苗培养培养，40～50天能试管苗的形成，所述的壮苗培养基为每升含花宝1号1～2g，花宝2号1～2g，肌醇80～120mg，甘氨酸1.5～2.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.05～0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.4～0.8mg，烟酸0.4～0.8mg，萘乙酸(NAA)1～2mg，蔗糖20～30g，香蕉汁50～100g，活性碳0.5～1g，琼脂6～7g。
(6)将试管苗在温室的自然光下炼苗，然后洗净根部的培养基，在用树皮、兰石和泥炭的混合基质(体积比2∶2∶1)中栽培，得到种苗。
上述步骤(2)～(5)中培养基pH 5.4～5.6，培养温度24～28℃，光照的照度为1500～2000lx，光照时间为12～16小时/天。
2.根据权利要求1所述的一种蝴蝶文心兰种苗繁殖方法，步骤(2)所述的酒精浓度是体积分数70％～80％，浸泡时间是30～60秒，所述的升汞溶液的浓度是质量分数0.1％～0.2％，消毒时间是10～20分钟，所述的无菌水的漂洗次数是4～6次，步骤(6)所述的试管苗高3～4cm，炼苗时间为7～14天，光照强度为5000～6000lx。
3.根据权利要求1或2所述的一种蝴蝶文心兰种苗繁殖方法，其特征在于步骤(1)所述的外植体为魔鬼文心兰(Psychopsis papilio)、维氏蝴蝶文心兰(Psychopsis versteegiana)或杂交种黄花蝴蝶文心兰(Psychopsis Carolina Yellow Butterfly)的带节花梗。
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