CN102283114A - 兰花无菌播种和试管成苗繁殖方法及所采用的广谱培养基 - Google Patents

兰花无菌播种和试管成苗繁殖方法及所采用的广谱培养基 Download PDF

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Abstract

本发明公开了兰花无菌播种和试管成苗的繁殖方法及所采用的广谱培养基。本方法选取生长健壮的兰花母株，于开花时进行人工授粉，将授粉后发育至基本成熟而未开裂时的果实做为外植体，或从野外采取基本成熟而未开裂的兰花果实为外植体，经过无菌播种、种子萌发、壮苗培养和试管苗移栽等繁殖步骤。分别采用专门的配制的培养基进行无菌播种和种子萌发获得小植株，再将小植株经在专门配制的壮苗培养基上培养，出瓶前在温室中的自然光照下炼苗7～14天，取出试管苗，洗掉根部培养基，栽入树皮、兰石和泥炭的混合基质中，进一步栽培成种苗。本发明具有种子的萌发率高、成苗快、种苗品质好、成本低廉等特点，能在短期内获得大量的试管苗，成苗的移栽成活率可保持在90％以上。能为兰花的种苗生产提供一条有效的途径。

Description

兰花无菌播种和试管成苗繁殖方法及所采用的广谱培养基
技术领域
本发明涉及兰花无菌播种和试管成苗的繁殖方法。
背景技术
兰花是高雅、美丽又带有神秘色彩的植物，广泛分布于除两极和极端干旱沙漠地区以外的各种陆地生态系统中，其中热带亚热带地区种类最为丰富。全世界兰花约有800属，3-3.5万种，是被子植物中最大的科之一。我国地域辽阔，气候资源优越，具有丰富的兰花资源，已知有173个属1300多种，主要分布于长江流域和以南各省区。兰花由于独特的观赏价值，花期长，是世界上栽培最广、销售量最大的花卉之一，目前全世界兰花的年消费额已超过30亿美元。但长期无节制的乱采滥挖，大多数兰花种类已濒危，所有野生兰花种类均属于“野生动植物濒危物种国际贸易公约”(CITES)的保护对象而被限制或禁止贸易。兰花通常可采用分株或扦插繁殖，但繁殖速度慢；尽管兰花果实中的种子数量繁多，但由于种子无胚乳，在野外需与真菌共生才能萌发，发芽率极低。通过无菌播种和试管成苗能获得大量种苗用于兰花种质资源的保护和商品花卉生产。本专利提供广谱的兰花无菌播种和试管成苗的专用培养基，适合于所试验的大部分兰科植物种类的无菌萌发和试管成苗，获得成功的兰科植物有50多个属100多种。
发明内容
本发明提供了一种繁殖速度快，可在短期内获得大量试管苗，不会对母株产生损伤，能保持母株优良性状的兰花的种苗繁殖方法。
本发明以兰花基本成熟而未开裂的种子外植体，利用独特的培养基进行无菌播种、然后进行壮苗培养，生产出优质的兰种花苗，从而实现了本发明的目的。
本发明所提出的兰花无菌播种和试管成苗的繁殖方法，其特征包括以下的步骤：
(1)选取生长健壮的兰花母株，于开花时进行人工授粉，将授粉后发育至基本成熟而未开裂时的果实做为外植体用于播种，或从野外采取基本成熟而未开裂的兰花果实为外植体用于播种；
(2)将外植体依次用酒精浸泡，升汞溶液消毒，无菌水漂洗后，切开取出种子均匀接种到接种培养到种子萌发培养基上，10～30天时能形成原球茎，原球茎长出叶片后，将其转移到相同的培养基中进行生长培养。所述的种子萌发培养基每升含花宝1号1～2g，蛋白胨0.5～2g，椰子汁50～100mL，活性炭0.5～1g，肌醇80～120mg，甘氨酸1.5～2.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.05～0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.4～0.8mg，烟酸0.4～0.8mg，萘乙酸(NAA)0.2～2mg，蔗糖15～30g，琼脂6～7g，pH 5.4-5.6；
(3)将在上述无菌播种培养所得的高1～1.5厘米高的小植株转移到壮苗培养基上培养，所述的壮苗培养基每升含花宝1号1～2g，花宝2号1～2g，蛋白胨0.5～3g，萘乙酸(NAA)0.5-3mg、香蕉匀浆50-100g、活性炭0.5～2g，肌醇80～120mg，甘氨酸1.5～2.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.05～0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.4～0.8mg，烟酸0.4～0.8mg，蔗糖20～30g，琼脂6～7g，pH 5.4-5.6；
(4)将培养瓶中的试管苗转移到自然光下炼苗，然后将其从培养瓶中取出，洗净根部的培养基，移入兰石∶树皮∶泥炭为2∶0.5～2∶0.5～2的混合基质中，得到种苗。
上述步骤(2)～(3)中，培养温度24～28℃，光照的照度为1500～2000lx，光照时间为12～16小时/天。
2.根据权利要求1所述的一种兰花种苗繁殖方法，步骤(2)所述的酒精浓度是体积分数70％～80％，浸泡时间是30～60秒，所述的升汞溶液的浓度是质量分数0.1％～0.2％，消毒时间是10～20分钟，所述的无菌水的漂洗次数是4～6次。
步骤(2)～(3)培养基中使用的花宝1号和花宝2号均可从市场上购得。
步骤(4)所述的试管苗高3～4cm，炼苗时间为7～14天，光照强度为5000～6000lx。
3.根据权利要求1或2所述的一种兰花种苗繁殖方法，其特征在于步骤(1)所述的外植体为蝴蝶兰属(Phalaenopsis)、文心兰属(Oncidium)、卡特兰(Cattleya)、万代兰(Vanda)、兜兰属(Paphiopedilum)、石斛属(Dendrobium)、兰属(Cypripedium)、火焰兰属(Renanthera)、开唇兰属(Anoectochilus)、接瓣兰属(Zygopetalum)、湿唇兰属(Hygrochilus)、象鼻兰属(Nethodoritis)、树兰属(Epidendrum)、虾脊兰属(Calanthe)、指甲兰属(Aerides)、竹叶兰属(Arundina)、鸟舌兰属(Ascocentrum)、白芨属(Bletia)、石豆属(Bulbophyllum)、地宝花属(Geodorum)等50多个属100多种等基本成熟而未开裂的种子。
利用本专利能成功地进行兰花优质种苗的快速繁殖，此发明生产兰花种苗具有出苗快，种苗品质好、生长良好等特点。具有投入少，产出高等优势。
目前，国内外虽有大量兰花无菌播种和试管成苗的报道。但没有一种培养基能适合于如此多的兰花种类的无菌播种和试管成苗，在适应性具有较大的优势。
具体实施方法
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。实施例中使用的花宝1号(HYPONeX 1)和花宝2号(HYPONeX 2)均为美国生产台湾台和园艺企业股份有限股份有限公司分装产品。
实施例1：
(1)开花时选取生长健壮的白花蝴蝶兰(Phalaenopsis amabilis)的基本成熟而未开裂的种子，将外植体用70％的酒精浸泡60秒后，再用0.1％升汞溶液消毒20分钟，无菌水漂洗4次后切开果实，将粉末状种子接种到种子萌发培养基上培养，15天时种子萌发形成原球茎。40天时原球茎分化出叶片。所述的种子萌发培养基每升含花宝1号1g，蛋白胨0.5g，椰子汁50mL，活性炭0.5g，肌醇80mg，甘氨酸1.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.05mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.4mg，烟酸0.4mg，萘乙酸(NAA)0.2mg，蔗糖15g，琼脂7g，pH 5.4；
(2)将由种子萌发原球茎分化出的小苗转移到同样的培养基培养，40天能形成1-2cm高小苗。所使用的培养基为每升含花宝1号1g，花宝2号1g，蛋白胨0.5g，萘乙酸(NAA)0.5mg、香蕉匀浆50g、活性炭0.5g，肌醇80mg，甘氨酸1.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.05mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.4mg，烟酸0.4mg，蔗糖20g，琼脂7g，pH 5.4；
(3)将1-2厘米高小苗接种到壮苗培养培养，40天能形成3～4cm高的试管苗，所述的壮苗培养基为每升含花宝1号1g，花宝2号1g，蛋白胨0.5g，萘乙酸(NAA)0.5mg、香蕉匀浆50g、活性炭0.5g，肌醇80mg，甘氨酸1.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.05mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.4mg，烟酸0.4mg，蔗糖20g，琼脂7g，pH 5.4；
(4)将3～4cm高的试管苗在温室的自然光下炼苗，光照强度为5000～6000lx，然后洗净根部的培养基，在用兰石、树皮和泥炭的混合基质(体积比4∶1∶1)中栽培，得到种苗，成活率为95％。
上述步骤(1)～(3)中培养温度28℃，光照的照度为1800lx，光照时间为12小时/天。
实施例2：
(1)开花时选取生长健壮的多花指甲兰(Aerides rosea)的基本成熟而未开裂的种子，将外植体用75％的酒精浸泡45秒后，再用0.15％升汞溶液消毒15分钟，无菌水漂洗5次后切开果实，将粉末状种子接种到种子萌发培养基上培养，10天时种子萌发形成原球茎。30天时原球茎分化出叶片。所述的种子萌发培养基每升含花宝1号1.5g，蛋白胨1g，椰子汁75mL，活性炭0.75g，肌醇100mg，甘氨酸2mg，盐酸硫胺素(VB1)0.1mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg，烟酸0.5mg，萘乙酸(NAA)0.5mg，蔗糖20g，琼脂6.5g，pH 5.5；
(2)将由种子萌发原球茎分化出的小苗转移到同样的培养基培养，30天能形成1-2cm高小苗。所使用的培养基为每升含含花宝1号1.5g，蛋白胨1g，椰子汁75mL，活性炭0.75g，肌醇100mg，甘氨酸2mg，盐酸硫胺素(VB1)0.1mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg，烟酸0.5mg，萘乙酸(NAA)0.5mg，蔗糖20g，琼脂6.5g，pH 5.5；
(3)将1-2厘米高小苗接种到壮苗培养培养，30天能形成3～4cm高的试管苗，所述的壮苗培养基为每升含花宝1号1.5g，花宝2号1.5g，蛋白胨2g，萘乙酸(NAA)1mg、香蕉匀浆75g、活性炭1g，肌醇100mg，甘氨酸2mg，盐酸硫胺素(VB1)0.1mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg，烟酸0.5mg，蔗糖25g，琼脂6.5g，pH 5.5；
(4)将3～4cm高的试管苗在温室的自然光下炼苗，光照强度为5000～6000lx，然后洗净根部的培养基，在用兰石、树皮和泥炭的混合基质(体积比4∶2∶1)中栽培，得到种苗，成活率为90％。
上述步骤(1)～(3)中培养温度26℃，光照的照度为1600lx，光照时间为14小时/天。
实施例3：
1.(1)开花时选取生长健壮的根茎兜兰(Paphiopedilum rhizomatosum)的基本成熟而未开裂的种子，将外植体用80％的酒精浸泡30秒后，再用0.2％升汞溶液消毒10分钟，无菌水漂洗6次后切开果实，将粉末状种子接种到种子萌发培养基上培养，30天时种子萌发形成原球茎。60天时原球茎分化出叶片。所述的种子萌发培养基每升含花宝1号2g，蛋白胨2g，椰子汁100mL，活性炭1g，肌醇120mg，甘氨酸2.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.8mg，烟酸0.8mg，萘乙酸(NAA)2mg，蔗糖30g，琼脂6g，pH 5.6；
(2)将由种子萌发原球茎分化出的小苗转移到同样的培养基培养，50天能形成1-2cm高小苗。所使用的培养基为每升含花宝1号2g，蛋白胨2g，椰子汁100mL，活性炭1g，肌醇120mg，甘氨酸2.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.8mg，烟酸0.8mg，萘乙酸(NAA)2mg，蔗糖30g，琼脂6g，pH 5.6；
(3)将1-2厘米高小苗接种到壮苗培养培养，50天能形成3～4cm高的试管苗，所述的壮苗培养基为每升含花宝1号2g，花宝2号2g，蛋白胨3g，萘乙酸(NAA)3mg、香蕉匀浆100g、活性炭2g，肌醇120mg，甘氨酸2.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.8mg，烟酸0.8mg，蔗糖30g，琼脂6g，pH 5.6；
(4)将3～4cm高的试管苗在温室的自然光下炼苗，光照强度为5000～6000lx，然后洗净根部的培养基，在用兰石、树皮和泥炭的混合基质(体积比2∶1∶1)中栽培，得到种苗，成活率为98％。
上述步骤(1)～(3)中培养温度24℃，光照的照度为1500lx，光照时间为16小时/天。

Claims (3)

1.兰花无菌播种和试管成苗的繁殖方法及所采用的广谱培养基，其特征在于包括以下步骤：
(1)材料：选取生长健壮的兰花母株，于开花时进行人工授粉，将授粉后发育至基本成熟而未开裂时的果实做为外植体用于播种，或从野外采取基本成熟而未开裂的兰花果实为外植体用于播种；
(2)无菌播种：将外植体依次用酒精浸泡，升汞溶液消毒，无菌水漂洗后切开，将粉末状胚接种到种子萌发培养基，种子萌发形成原球茎，随后转移到同样的培养基中进一步形成小苗，所述的种子萌发培养基每升含花宝1号1～2g，蛋白胨0.5～2g，椰子汁50～100mL，活性炭0.5～1g，肌醇80～120mg，甘氨酸1.5～2.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.05～0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.4～0.8mg，烟酸0.4～0.8mg，萘乙酸(NAA)0.2～2mg，蔗糖15～30g，琼脂6～7g，pH 5.4-5.6；
(3)壮苗培养：将在上述无菌播种培养所得的高1～1.5厘米高的小植株转移到壮苗培养基上培养，所述的壮苗培养基每升含花宝1号1～2g，花宝2号1～2g，蛋白胨0.5～3g，萘乙酸(NAA)0.5-3mg、香蕉匀浆50-100g、活性炭0.5～2g，肌醇80～120mg，甘氨酸1.5～2.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.05～0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.4～0.8mg，烟酸0.4～0.8mg，蔗糖20～30g，琼脂6～7g，pH 5.4-5.6；
(4)试管苗移栽：将培养瓶中的试管苗转移到自然光下炼苗，然后将其从培养瓶中取出，洗净根部的培养基，移入兰石∶树皮∶泥炭为2∶0.5～2∶0.5～2的混合基质中；
上述步骤(2)～(3)中培养条件为培养温度24-28℃，光照度1500～2000lx，光照12-16小时/天。
2.根据权利要求1所述的兰花无菌播种和试管成苗的繁殖方法，步骤(2)所述的酒精浓度是体积分数70％～80％，浸泡时间是30～60秒，所述的升汞溶液的浓度是质量分数0.1％～0.2％，消毒时间是10～20分钟，所述的无菌水的漂洗次数是4～6次，步骤(5)所述的试管苗高3～4cm，炼苗时间为7～14天，光照强度为5000～6000lx。
3.根据权利要求1或2所述的一种蝴兰花种苗繁殖方法，其特征在于步骤(1)所述的外植体为兰科植物有中的蝴蝶兰属(Phalaenopsis)、文心兰属(Oncidium)、卡特兰(Cattleya)、万代兰(Vanda)、兜兰属(Paphiopedilum)、石斛属(Dendrobium)、兰属(Cypripedium)、火焰兰属(Renanthera)、开唇兰属(Anoectochilus)、接瓣兰属(Zygopetalum)、湿唇兰属(Hygrochilus)、象鼻兰属(Nethodoritis)、树兰属(Epidendrum)、虾脊兰属(Calanthe)、指甲兰属(Aerides)、竹叶兰属(Arundina)、鸟舌兰属(Ascocentrum)、白芨属(Bletia)、石豆属(Bulbophyllum)、地宝花属(Geodorum)等50多个属100多种等基本成熟而未开裂的种子。
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