CN103477978B - 蝴蝶兰试管开花的诱导方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种蝴蝶兰试管开花的诱导方法。该方法包括以下步骤：取经壮苗生根后的健壮无菌蝴蝶兰瓶苗为外植体进行花芽诱导。花芽诱导约3-4个月，可见花梗抽出。再经开花诱导培养，花芽可正常发育并有花苞出现，花苞发育正常并得以正常开放，无畸形花出现。本发明的诱导蝴蝶兰开花的方法，可以准确有效地诱导蝴蝶兰花芽的形成，花芽诱导率可达80.0-93.3%。并有60.0-73.3%的花芽可正常发育并成功诱导开花。花器官完整的花朵高达100.0%。花期持久，可长达30-40天。通常试管定植生根后瓶苗经移栽种植开花需约24个月，本发明的瓶苗试管内诱导开花仅需6-8个月。
Description
技术领域
本发明涉及一种蝴蝶兰试管开花的诱导方法，属于花卉生物技术领域。
背景技术
蝴蝶兰（Phalaenopsis hybrida），兰科蝴蝶兰属(Phalaenopsis)植物，是兰科植物中栽培最广泛、最受欢迎的种类之一。花形别致、色彩艳丽多样，花期持久，观赏价值及经济价值极高，素有“洋兰皇后”之美称。温室栽培条件下，从种子萌发至开花至少需要3年时间。其中，种植开花所需时间较长是制约杂交育种及商业化生产的重要因素之一。而利用植物生物技术诱导蝴蝶兰试管开花可大大缩短生长周期，且具有方法简单、易于调控、重复性强及不受季节或地域限制等优点。为研究植物开花机理提供理想的实验系统并利于植物试管杂交开展。此项技术应用于开发迷你型试管花卉产品，市场前景广阔。因此，蝴蝶兰试管开花研究无论在理论上还是应用上都具有重要意义。
现有技术中，已对蝴蝶兰试管开花进行了初步的研究。Duan与Yazawa(1995)进行蝴蝶兰试管开花研究显示，蝴蝶兰花芽诱导率可达70%，经9个月后培养有10%的花芽成花，但均为畸形花（Duan J X,Yazawa S,Floral induction and development in Phalaenopsisin vitro[J].Plant Cell,Tissue and Organ Culture,1995,43:71-74）。王再花等（2007）研究则表明，蝴蝶兰实生苗经预处理后，于添加6-BA、TDZ的VW培养基，辅以低温处理，花芽诱导率可提高至51.7%。但发芽发育至一定程度即停止发育（王再花，朱根发，吕复兵等.蝴蝶兰快速繁殖及花芽诱导[J].亚热带植物科学，2007,36（3）：65-66）。Chiu与Chang（2011）研究显示，蝴蝶兰花芽诱导率可高达100%。其中，部分花芽可见花苞出现；但部分花芽发育至一定程度即停止发育。且花苞最终也无法正常开放（Chiu Y T,Chang C.Induction of in vitro flowering in the Phalaeopsis orchid[J].J.Taiwan Soc.Hort.Sci.,2011,57(1):43-51）。由现有研究可见，国内外尚无法实现蝴蝶兰正常试管成花。存在着花芽难以进一步发育成花的难题。
发明内容
本发明的目在于提供一种简单的、开花诱导率较高的蝴蝶兰试管开花的方法。
通过取经壮苗生根的健壮蝴蝶兰瓶苗为植体，经去根后于成分独特的培养基进行花芽诱导，再经开花诱导培养，成功诱导蝴蝶兰开花，提高蝴蝶兰试管成花率。该法简单，开花诱导率较高，从而实现本发明目的。
本发明的目的是通过以下技术方案实现：
本发明提供的一种蝴蝶兰试管开花的诱导方法，包括以下步骤：
（1）花芽诱导阶段：取经壮苗生根后的健壮无菌蝴蝶兰瓶苗为外植体，去根后于花芽诱导培养基中进行花芽诱导。花芽诱导培养基为：MS培养基(1/5-1/10N、2-5P)＋6-BA(6-苄基腺嘌呤)5-10mg/L，另在培养基中添加蔗糖20-30g/L、蛋白胨3-5g/L、椰子汁100-150ml/L、活性炭0.5-1.0g/L以及琼脂6-8g/L、pH5.5-5.8。培养温度为18±2℃。光照时间为12-16h，光照强度为30-50μmol m-2s-1。诱导3-4个月。
（2）开花培养阶段：花芽诱导完成后即进入诱导开花阶段。开花诱导培养基为：以1/2MS培养基为基本培养基，另在培养基中添加蔗糖20-30g/L、蛋白胨3-5g/L、椰子汁100-150ml/L、活性炭0.5-1.0g/L以及琼脂6-8g/L、pH5.5-5.8。培养温度为25±2℃。光照时间为12-16h，光照强度为30-50μmol m-2s-1。培养3-4个月。
步骤（1）所述的1/5-1/10N为N减少为原来MS培养基中N的1/5-1/10，2-5P为P增加为原来MS培养基中P的2-5倍。
步骤（2）所述的1/2MS培养基，指的是原来MS培养基中的大量元素减半，其余含量不变。
本发明的诱导蝴蝶兰开花的方法，可以有效诱导蝴蝶兰花芽形成，花芽发育正常且健壮，花苞发育正常并能正常成花，无畸形花出现。通过降低培养基中的N含量及提高培养基中的P含量，并结合6-BA、去除根及低温协同作用，诱导蝴蝶兰花芽形成，并得以正常发育并出现花苞，最终能正常开花。本发明的方法简单易行。培养的植株健壮、花芽诱导率高，为80.0-93.3%。其中，60.0-73.3%的花芽可正常发育并可正常开花。且花器官完整率可达100.0%。花型大且健壮。花期持久，可长达30-40天。通常试管定植生根后瓶苗经移栽种植开花需约24个月，本发明的瓶苗试管内诱导开花仅需6-8个月。
附图说明
图1为本发明实施例1诱导出的花。
具体实施方式
以下的实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1：
以经壮苗生根的蝴蝶兰健壮瓶苗为诱导材料进行诱导，分两个阶段进行，一是花芽诱导阶段，二是开花培养阶段。
（1）花芽诱导阶段：取经壮苗生根后的健壮瓶苗为外植体，去除根后进行花芽诱导。共接种15株。花芽诱导培养基为：MS培养基＋6-BA5mg/L，另在培养基中添加蔗糖20g/L、蛋白胨3g/L、椰子汁150ml/L、活性炭0.5g/L以及琼脂6g/L、pH5.8。并调整MS培养基的N、P量，N减少为原来的1/5，P增加为原来的2倍。培养温度为18℃。光照时间为12h，光照强度为30μmol m-2s-1。诱导3个半月。
（2）开花培养阶段：花芽诱导完成后即可进入开花诱导阶段。开花诱导培养基为：以1/2MS培养基为基本培养基，另在培养基中添加蔗糖20g/L、蛋白胨3g/L、椰子汁150ml/L、活性炭0.5g/L以及琼脂6g/L、pH5.8。培养温度为25℃。光照时间为12h，光照强度为30μmol m-2s-1。培养3个半月后，13株植株可见花芽抽出，部分植株可见2个花芽。花芽诱导率为86.7%。其中，绝大部分花芽可正常发育并可见花苞形成。极少部分花芽发育至一定程度即萎缩或停止生长；亦有部分花芽可形成花苞，但花苞发育至一定大小即变黄凋谢。有9株植株花芽可见花苞形成且能正常成花，开花率达60.0%。所有花器官均正常发育，花器官完整率达100.0%。花期持久，可长达30d。
花芽诱导率（%）=形成花芽的植株数/总植株数×100%；开花率（%）=开花植株数/总植株数×100%；花器官完整率（%）=正常开花植株数/总开花植株数×100%。
实施例2
取经壮苗生根的蝴蝶兰健壮瓶苗为诱导材料进行以下步骤诱导。
（1）花芽诱导阶段：取经壮苗生根后的健壮瓶苗为外植体，去除根后进行花芽诱导。共接种15株。花芽诱导培养基为：MS培养基＋6-BA7mg/L，另在培养基中添加蔗糖30g/L、蛋白胨4g/L、椰子汁120ml/L、活性炭0.7g/L以及琼脂7g/L、pH5.7。并调整MS培养基的N、P量，N减少为原来的1/8，P增加为原来的3倍。培养温度为20℃。光照时间16h，光照强度40μmol m-2s-1。诱导4个月。
（2）开花培养阶段：花芽诱导完成后即可进入开花诱导阶段。开花诱导培养基为：以1/2MS培养基为基本培养基，另在培养基中添加蔗糖30g/L、蛋白胨4g/L、椰子汁120ml/L、活性炭0.7g/L以及琼脂7g/L、pH5.7。培养温度为27℃。光照时间14h，光照强度40μmol m-2s-1。培养3个月后，12株植株可形成花芽，部分植株可同时形成2个花芽。花芽诱导率为80.0%。其中，绝大部分花芽可正常发育并可形成花苞。极少部分花芽发育至一定程度即停止生长或萎缩；亦有部分花芽可见花苞形成，但花苞发育至一定大小时变黄凋谢。10株植株中的花芽可见花苞形成并能正常成花，开花率达66.7%。所有花均发育正常，无畸形花出现，花器官完整率达100.0%。花期持久，可长达40d。
花芽诱导率（%）=形成花芽的植株数/总植株数×100%；开花率（%）=开花植株数/总植株数×100%；花器官完整率（%）=正常开花植株数/总开花植株数×100%。
实施例3
取经壮苗生根的蝴蝶兰健壮瓶苗为诱导材料进行以下步骤诱导。
（1）花芽诱导阶段：取经壮苗生根后的健壮瓶苗为外植体，去根后进行花芽诱导。共接种15株。花芽诱导培养基为：MS培养基＋6-BA10mg/L，另在培养基中添加蔗糖25g/L、蛋白胨5g/L、椰子汁100ml/L、活性炭1.0g/L以及琼脂8g/L、pH5.6。并调整MS培养基的N、P量，N减少为原来的1/10，P增加为原来的5倍。培养温度为16℃。光照时间16h，光照强度50μmol m-2s-1。诱导3个月。
（2）开花培养阶段：开花诱导培养基为：以1/2MS培养基为基本培养基，另在培养基中添加蔗糖25g/L、蛋白胨5g/L、椰子汁100ml/L、活性炭1.0g/L以及琼脂8g/L、pH5.6。培养温度为26℃。光照时间为16h，光照强度为50μmol m-2s-1。培养4个月后，14株植株可形成花芽，部分植株可同时形成2个花芽。花芽诱导率为93.3%。其中，绝大部分花芽可正常发育并可形成花苞。极少部分花芽发育至一定程度即停止生长；亦有部分花芽可见花苞形成，但花苞发育至一定大小时即变黄凋谢。有11株植株中的花芽可形成花苞并能正常成花，开花率达73.3%。花全部发育正常，并无畸形花出现，花器官完整率达100.0%。花期持久，可长达35d。
花芽诱导率（%）=形成花芽的植株数/总植株数×100%；开花率（%）=开花植株数/总植株数×100%；花器官完整率（%）=正常开花植株数/总开花植株数×100%。
Claims (2)
1.蝴蝶兰试管开花的诱导方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)花芽诱导阶段：取经壮苗生根后的健壮蝴蝶兰无菌瓶苗为外植体，去根后于花芽诱导培养基中进行花芽诱导；花芽诱导培养基为：MS培养基+6-BA 5-10mg/L，其中，该MS培养基中的N含量为1/5-1/10N、P含量为2-5P，所述的1/5-1/10N为N减少为原来MS培养基中N的1/5-1/10，2-5P为P增加为原来MS培养基中P的2-5倍；另在培养基中添加蔗糖20-30g/L、蛋白胨3-5g/L、椰子汁100-150ml/L、活性炭0.5-1.0g/L以及琼脂6-8g/L、pH 5.5-5.8；培养温度18±2℃；光照时间为12-16h/d，光照强度30-50μmol m-2s-1；诱导3-4个月；
(2)诱导开花阶段：花芽诱导完成后即进入诱导开花阶段；诱导开花培养基为：以1/2MS培养基为基本培养基，另在培养基中添加蔗糖20-30g/L、蛋白胨3-5g/L、椰子汁100-150ml/L、活性炭0.5-1.0g/L以及琼脂6-8g/L、pH 5.5-5.8；培养温度为25±2℃；光照时间为12-16h/d，光照强度30-50μmol m-2s-1；培养3-4个月。
2.根据权利要求1的蝴蝶兰试管开花的诱导方法，其特征在于；步骤(2)所述的1/2MS培养基，指的是大量元素减半，其余含量不变。
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| C14 | Grant of patent or utility model | ||
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Granted publication date: 20141029 |