CN107094615A - 一种克服百合种间杂交障碍的杂交方法 - Google Patents
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Abstract
本发明一种克服百合种间杂交障碍的杂交方法,解决百合种间杂交过程中的受精前和受精后障碍,且方法简单有效。本发明方法主要通过采用切柱头嫁接,解决花粉不识别其他柱头的问题,和离体胚抢救的技术使用人工培养基代替胚乳,为胚发育至成苗提供营养,解决了胚败育的问题。克服了百合种间杂交障碍,大大改善了百合种间杂交获得杂交苗成功率低下的问题,提高了百合育种效率,本方法工作强度和成本较低,为大量获得新颖的种间杂交百合新品种打下了坚实的基础。
Description
技术领域
本发明涉及一种克服百合种间杂交障碍的杂交方法,通过适宜的杂交方法、恰当的胚抢救时间与适当的胚抢救方法,为培育新颖种间杂交品种提供技术支持;本发明属于农业生物技术,尤其属于园林植物与观赏园艺领域;
背景技术
百合是百合科,百合属多年生球根草本植物;百合花大,色彩丰富,花姿优美,既能作切花,盆花,又能在园林绿地中应用;既可观赏,又可食用和药用,深受人们的喜爱;其被划分成6个种群:1、东方百合:是基于天香百合和鹿子百合形成的区群,也包含多种亚洲百合的杂交种;花芬芳,向外伸展,植株往往高大,花朵可能会很大;2、麝香百合:为麝香百合原种和亚种的栽培种,是重要的切花材料,与其他杂交种相比较少种植于庭园中;3、亚洲百合:品种常为中型植物,花直立向外,无香气,是由东亚和中亚的百合原生种形成;4、山丹百合:因叶细而多,花冠似珊瑚得名;株秆高30~40cm,茎上生叶50~80cm,细小纤弱,狭长如松叶;5、卷丹百合:因花色火红,花瓣反卷,故名“卷丹”,又因花瓣上有紫黑色斑纹,很象虎背之花纹,故有虎皮百合之雅称;6、美丽百合(鹿子百合):株高60~100cm,叶对生,宽而疏,故名大叶百合;茎上部开花数朵,花瓣向外反卷,雄蕊露出花瓣之外,花白色和淡红色,花瓣上布有玫瑰色花纹和斑点,状如鹿身上的斑纹,故有鹿子百合之美名;
无论是作为盆花或切花,百合的销售量在国际花卉市场上都名列前茅;有些百合品种的花茎较高,适于作切花;百合球茎含丰富淀粉质,部分品种可作为蔬菜食用,部分还用于保健食品和常用中药中;不少百合都是食用佳品,如我国的兰州百合个大、味甜,既可作点心,又可作菜肴;宜兴的卷丹制成百合汤是夏日消暑佳品;百合还可制作成百合干、百合粉,在国际市场上价格很高;到目前为止,百合还是中药中的常用药材,经济价值巨大;
当前不同百合种间存在血缘差别,所以在种间杂交过程中存在杂交障碍;杂交障碍分为受精前障碍和受精后障碍;受精前障碍,例如花粉粒不萌发、花粉管在柱头或花柱中不伸长,花粉管进入不了子房,进入子房的花粉管不发生向胚珠的定向生长等;受精后障碍,是指由双亲孢子体不协调或配子体不协调,致使受精后的胚中途败育;或者由于胚乳提前败育,不能给胚提供继续发育的营养,最后胚不能发育成苗;受以上杂交障碍影响,种间杂交后的百合组合,获得F1代种苗的几率非常低,导致百合育种效率低下,以致种间杂交产生的新品种非常少;
发明内容
由于百合种间存在不同差别,分为亚洲百合、东方百合与麝香百合;由于亲本的血统组成有差别,不同种间存在杂交障碍;
切花柱法,解决了受精前花粉管在柱头或花柱中不伸的情况,使花粉识别柱头,并且直接向下生长发育,为受精做好充足准备,大大增加了百合杂交的成功率;离体胚抢救的方法,解决了受精后胚乳提前败育,即不能给胚提供继续发育的营养以致不能发育成苗的情况;离体胚抢救,提供了胚正常生长发育所需的营养,降低了由于缺少营养败育的机率;本方法克服了不同百合种间杂交障碍,为培育新颖种间杂交品种提供基础;
为实现克服不同百合种间杂交育种受精前障碍和受精后障碍,提高杂交育种成功率,本发明的技术方案中,切花柱法解决了花粉识别百合花柱头的受精前障碍;离体胚抢救方法为不能提供营养的胚提供充足营养,以保证其正常发育,从而解决了百合受精后的障碍,全过程的提高了百合种间的杂交成功率;
本发明的具体步骤为:
1、花粉前期处理:用小刀和镊子,将成熟花粉剥下,放入事先裁好的草图纸内,折好后放入装有氯化钙粉末的瓶中进行干燥,选取处理好的新鲜花粉进行杂交;
2、人工自交授粉:取将要开放的百合,拨开花瓣,去除未成熟的花药,将百合花朵用杂交袋罩好,使去掉花药的百合花朵完全隔离外界花粉;去掉花药后,当花柱上产生明显柱头分泌物时,将处理好的花粉均匀、大量的涂抹在花柱上,使花粉覆盖柱头面积不少于柱头总面积的2/3;并将花朵罩上杂交袋,在袋外用标签系好并标注百合品种名称及人工自交的日期;
3、切花柱和嫁接花柱:在人工自交授粉1~2天后,以45度角切下人工自交授粉百合花柱总体长度的1/3,同时将要嫁接的母本百合花柱也以45度角切下总体长度的1/3;将切下的人工自交授粉的百合花柱嫁接到剩余2/3的母本的花柱上;关键要使双方的花柱壁对齐,如果不能两边对齐,就保持一侧花柱壁对齐;再用宽1cm、长8-10cm的塑料条将接口捆扎起来,捆扎时要将伤口全部包严,并捆紧;在温室中培养,白天控温在24-26℃,夜间控温在20-22℃;相对湿度85~95%,不通风全遮光,5~6天后受精过程完成,按照常规田间种植方法管理;
4、种子的处理:待果实成熟后,取饱满果实,在相对无菌的环境下按果实腹缝线与背缝线,用解剖刀将其划开;取出合子胚,在光线较好的地点仔细观察胚,选取有胚的种子;将有胚的种子,放入超净工作台中,使用蒸馏水洗净种子,然后采用0.1~0.2%HgCl,消毒20~30s,无菌水冲洗3~4次;
5、切种子接种法:在超净工作台中,沿着种子的直边一侧(非弧形边),在不切到胚的情况下,用解剖刀切掉0.4~0.5mm边条,含有胚珠部分平躺着接种在MS+6-BA(1~2mg/L)+NAA(0.5~1mg/L)、蔗糖30~40g/L、琼脂6~7g/L的MS培养基中进行胚抢救,培养基pH值调到5.8~6.4的范围内,在培养环境温度为20~30℃,光照强度为2000~3000lx,光照时间7~8个小时的培养间进行培养;调节PH值的试剂为:1mol/L磷酸,1mol/L氢氧化钠,以下调节PH值是均与此相同;
6、继代培养:在超净工作台中,将长出叶片的百合材料在超净工作台上进行切割,取大小合适的叶子放到含有0.2~0.6mg/L KT、0.5~1.5mg/L 2,4-D、蔗糖30~40g/L、琼脂6~7g/L的MS培养基中进行继代培养,45~55天继代一次,共继代2~3次,培养基为pH值5.8~6.4,在培养环境温度在20~30℃,光照强度为2000~3000lx,光照时间7~8个小时的培养间进行培养;
7、诱导生根培养:在超净工作台中,将继代培养后并长出叶子的百合材料接种到含有1~2mg/L NAA、0.4~0.75mg/L BA、蔗糖30~40g/L、琼脂6~7g/L的MS的生根培养基上,培养基为pH值5.8~6.4,在培养环境温度在20~30℃,光照强度为2000~3000lx,光照时间7~8个小时的培养间进行培养,培养25~35天出根;
8、营养生长培养:在超净工作台中,将诱导生根的百合幼苗移植到0.2~0.4mg/LNAA、1~2mg/L BA、蔗糖40~60g/L、琼脂6~7g/L的MS营养生长培养基中,培养基pH值为5.8~6.4,在培养环境温度在20~30℃,光照强度为2000~3000lx,光照时间7~8个小时的培养间进行培养,培养25~30天,选取根叶长势良好的百合幼苗出瓶培养;
9、出瓶移栽:将长势良好的百合种苗移栽至按照35~45%腐殖细土、10~20%珍珠岩、10~15%细沙、10~20%草炭和20~25%棉籽壳配比的基质中进行培养,以上基质121℃灭菌40~50分钟,移栽前将株上的琼脂及杂物冲洗干净;30天浇一次营养液,营养液配比为硫酸镁500mg/L、硫酸二氢钾250mg/L、硝酸钾200mg/L、硝酸钙500mg/L、硫酸钾100mg/L、硼酸2mg/L、钼酸铵0.02mg/L、硫酸锌0.2mg/L,其余按照常规田间种植方法管理;
本发明一种克服百合种间杂交障碍的杂交方法,解决百合种间杂交过程中的受精前和受精后障碍,且方法简单有效;本发明方法主要通过采用切柱头嫁接,解决花粉不识别其他柱头的问题,和离体胚抢救的技术使用人工培养基代替胚乳,为胚发育至成苗提供营养,解决了胚败育的问题;本发明克服了百合种间杂交障碍,大大改善了百合种间杂交获得杂交苗成功率低下的问题,提高了百合育种效率,本方法工作强度和成本较低,为大量获得新颖的种间杂交百合新品种打下了坚实的基础;
实施例1
选取优良品种的麝香百合与东方百合育种杂交
1、花粉前期处理:用小刀和镊子,将成熟的麝香百合花粉剥下,放入事先裁好的草图纸内,折好后放入装有氯化钙粉末的瓶中进行干燥,选取处理好的新鲜花粉进行杂交;
2、人工自交授粉:取将要开放的麝香百合,拨开花瓣,去除未成熟的花药,将麝香百合花朵用杂交袋罩好,使去掉花药的麝香百合花朵完全隔离外界花粉;去掉花药后,当花柱上产生明显柱头分泌物时,将处理好的麝香百合花粉均匀、大量的涂抹在花柱上,使花粉覆盖柱头面积不少于柱头总面积的2/3;并将花朵罩上杂交袋,在袋外用标签系好并标注百合品种名称及人工自交的日期;
3、切花柱和嫁接花柱:在人工自交授粉1天后,以45度角切下人工自交授粉的麝香百合花柱总体长度的1/3,同时将要嫁接的母本东方百合花柱也以45度角切下总体长度的1/3;将切下的人工自交授粉的麝香百合花柱嫁接到剩余2/3的东方百合母本的花柱上;关键要使双方的花柱壁对齐,如果不能两边对齐,就保持一侧花柱壁对齐;再用宽1cm、长10cm的塑料条将接口捆扎起来,捆扎时要将伤口全部包严,并捆紧;在温室中培养,白天控温在24℃,夜间控温在22℃;相对湿度90%,不通风全遮光,6天后受精过程完成,按照常规田间种植方法管理;
4、种子的处理:待果实成熟后,取饱满果实,在相对无菌的环境下按果实腹缝线与背缝线,用解剖刀将其划开;取出合子胚,在光线较好的地点仔细观察胚,选取有胚的种子;将有胚的种子,放入超净工作台中,使用蒸馏水洗净种子,然后采用0.1%HgCl,消毒25s,无菌水冲洗4次;
5、切种子接种法:在超净工作台中,沿着种子的直边一侧(非弧形边),在不切到胚的情况下,用解剖刀切掉0.4mm边条,含有胚珠部分平躺着接种在MS+6-BA(1mg/L)+NAA(0.5mg/L)、蔗糖30g/L、琼脂6g/L的MS培养基中进行胚抢救,培养基pH值调到6.4的范围内,在培养环境温度为25℃,光照强度为2500lx,光照时间7个小时的培养间进行培养;调节PH值的试剂为:1mol/L磷酸,1mol/L氢氧化钠,以下调节PH值是均与此相同;
6、继代培养:在超净工作台中,将长出叶片的百合材料在超净工作台上进行切割,取大小合适的叶子放到含有0.3mg/L KT、1mg/L 2,4-D、蔗糖30g/L、琼脂6g/L的MS培养基中进行继代培养,50天继代一次,共继代3次,培养基为pH值6.4,在培养环境温度在25℃,光照强度为2500lx,光照时间7个小时的培养间进行培养;
7、诱导生根培养:在超净工作台中,将继代培养后并长出叶子的百合材料接种到含有2mg/LNAA、0.5mg/L BA、蔗糖30g/L、琼脂6g/L的MS的生根培养基上,培养基为pH值6.4,在培养环境温度在25℃,光照强度为2500lx,光照时间8个小时的培养间进行培养,培养30天出根;
8、营养生长培养:在超净工作台中,将诱导生根的百合幼苗移植到0.2mg/L NAA、2mg/L BA、蔗糖30g/L、琼脂6g/L的MS营养生长培养基中,培养基pH值为6.2,在培养环境温度在25℃,光照强度为2500lx,光照时间8个小时的培养间进行培养,培养30天,选取根叶长势良好的百合幼苗出瓶培养;
9、出瓶移栽:将长势良好的百合种苗移栽至按照40%腐殖细土、20%珍珠岩、10细沙、10%草炭和20%棉籽壳配比的基质中进行培养,以上基质121℃灭菌40分钟,移栽前将株上的琼脂及杂物冲洗干净;30天浇一次营养液,营养液配比为硫酸镁500mg/L、硫酸二氢钾250mg/L、硝酸钾200mg/L、硝酸钙500mg/L、硫酸钾100mg/L、硼酸2mg/L、钼酸铵0.02mg/L、硫酸锌0.2mg/L,其余按照常规田间种植方法管理;
实施例2
选取优良品种的亚洲百合与麝香百合育种杂交
1、花粉前期处理:用小刀和镊子,将成熟的亚洲百合花粉剥下,放入事先裁好的草图纸内,折好后放入装有氯化钙粉末的瓶中进行干燥,选取处理好的新鲜花粉进行杂交;
2、人工自交授粉:取将要开放的亚洲百合,拨开花瓣,去除未成熟的花药,将亚洲百合花朵用杂交袋罩好,使去掉花药的亚洲百合花朵完全隔离外界花粉;去掉花药后,当花柱上产生明显柱头分泌物时,将处理好的亚洲百合花粉均匀、大量的涂抹在花柱上,使花粉覆盖柱头面积不少于柱头总面积的2/3;并将花朵罩上杂交袋,在袋外用标签系好并标注百合品种名称及人工自交的日期;
3、切花柱和嫁接花柱:在人工自交授粉2天后,以45度角切下人工自交授粉的亚洲百合花柱总体长度的1/3,同时将要嫁接的母本麝香百合花柱也以45度角切下总体长度的1/3;将切下的人工自交授粉的亚洲百合花柱嫁接到剩余2/3的麝香百合母本的花柱上;关键要使双方的花柱壁对齐,如果不能两边对齐,就保持一侧花柱壁对齐;再用宽1cm、长8cm的塑料条将接口捆扎起来,捆扎时要将伤口全部包严,并捆紧;在温室中培养,白天控温在26℃,夜间控温在21℃;相对湿度88%,不通风全遮光,5天后受精过程完成,按照常规田间种植方法管理;
4、种子的处理:待果实成熟后,取饱满果实,在相对无菌的环境下按果实腹缝线与背缝线,用解剖刀将其划开;取出合子胚,在光线较好的地点仔细观察胚,选取有胚的种子;将有胚的种子,放入超净工作台中,使用蒸馏水洗净种子,然后采用0.2%HgCl,消毒20s,无菌水冲洗4次;
5、切种子接种法:在超净工作台中,沿着种子的直边一侧(非弧形边),在不切到胚的情况下,用解剖刀切掉0.5mm边条,含有胚珠部分平躺着接种在MS+6-BA(1.5mg/L)+NAA(0.6mg/L)、蔗糖40g/L、琼脂7g/L的MS培养基中进行胚抢救,培养基pH值调到6.2的范围内,在培养环境温度为26℃,光照强度为2800lx,光照时间8个小时的培养间进行培养;调节PH值的试剂为:1mol/L磷酸,1mol/L氢氧化钠,以下调节PH值是均与此相同;
6、继代培养:在超净工作台中,将长出叶片的百合材料在超净工作台上进行切割,取大小合适的叶子放到含有0.4mg/L KT、0.75mg/L 2,4-D、蔗糖40g/L、琼脂7g/L的MS培养基中进行继代培养,45天继代一次,共继代2次,培养基为pH值6.2,在培养环境温度在26℃,光照强度为2800lx,光照时间7个小时的培养间进行培养;
7、诱导生根培养:在超净工作台中,将继代培养后并长出叶子的百合材料接种到含有1mg/LNAA、0.5mg/L BA、蔗糖40g/L、琼脂7g/L的MS的生根培养基上,培养基为pH值6.2,在培养环境温度在26℃,光照强度为2800lx,光照时间7个小时的培养间进行培养,培养28天出根;
8、营养生长培养:在超净工作台中,将诱导生根的百合幼苗移植到0.2mg/L NAA、1mg/L BA、蔗糖50g/L、琼脂7g/L的MS营养生长培养基中,培养基pH值为6.2,在培养环境温度在26℃,光照强度为2800lx,光照时间7个小时的培养间进行培养,培养26天,选取根叶长势良好的百合幼苗出瓶培养;
9、出瓶移栽:将长势良好的百合种苗移栽至按照35腐殖细土、10%珍珠岩、15%细沙、15%草炭和25%棉籽壳配比的基质中进行培养,以上基质121℃灭菌45分钟,移栽前将株上的琼脂及杂物冲洗干净;30天浇一次营养液,营养液配比为硫酸镁500mg/L、硫酸二氢钾250mg/L、硝酸钾200mg/L、硝酸钙500mg/L、硫酸钾100mg/L、硼酸2mg/L、钼酸铵0.02mg/L、硫酸锌0.2mg/L,其余按照常规田间种植方法管理;
实施例3
选取优良品种的东方百合与亚洲百合育种杂交
1、花粉前期处理:用小刀和镊子,将成熟的东方百合花粉剥下,放入事先裁好的草图纸内,折好后放入装有氯化钙粉末的瓶中进行干燥,选取处理好的新鲜花粉进行杂交;
2、人工自交授粉:取将要开放的东方百合,拨开花瓣,去除未成熟的花药,将东方百合花朵用杂交袋罩好,使去掉花药的东方百合花朵完全隔离外界花粉;去掉花药后,当花柱上产生明显柱头分泌物时,将处理好的东方百合花粉均匀、大量的涂抹在花柱上,使花粉覆盖柱头面积不少于柱头总面积的2/3;并将花朵罩上杂交袋,在袋外用标签系好并标注百合品种名称及人工自交的日期;
3、切花柱和嫁接花柱:在人工自交授粉2天后,以45度角切下人工自交授粉的东方百合花柱总体长度的1/3,同时将要嫁接的母本亚洲百合花柱也以45度角切下总体长度的1/3;将切下的人工自交授粉的东方百合花柱嫁接到剩余2/3的亚洲百合母本的花柱上;关键要使双方的花柱壁对齐,如果不能两边对齐,就保持一侧花柱壁对齐;再用宽1cm、长10cm的塑料条将接口捆扎起来,捆扎时要将伤口全部包严,并捆紧;在温室中培养,白天控温在25℃,夜间控温在20℃;相对湿度85%,不通风全遮光6天后受精过程完成,按照常规田间种植方法管理;
4、种子的处理:待果实成熟后,取饱满果实,在相对无菌的环境下按果实腹缝线与背缝线,用解剖刀将其划开;取出合子胚,在光线较好的地点仔细观察胚,选取有胚的种子;将有胚的种子,放入超净工作台中,使用蒸馏水洗净种子,然后采用0.2%HgCl,消毒20s,无菌水冲洗4次;
5、切种子接种法:在超净工作台中,沿着种子的直边一侧(非弧形边),在不切到胚的情况下,用解剖刀切掉0.4mm边条,含有胚珠部分平躺着接种在MS+6-BA(2mg/L)+NAA(1mg/L)、蔗糖35g/L、琼脂7g/L的MS培养基中进行胚抢救,培养基pH值调到6.0的范围内,在培养环境温度为26℃,光照强度为2700lx,光照时间8个小时的培养间进行培养;调节PH值的试剂为:1mol/L磷酸,1mol/L氢氧化钠,以下调节PH值是均与此相同;
6、继代培养:在超净工作台中,将长出叶片的百合材料在超净工作台上进行切割,取大小合适的叶子放到含有0.4mg/L KT、0.5mg/L 2,4-D、蔗糖35g/L、琼脂7g/L的MS培养基中进行继代培养,50天继代一次,共继代3次,培养基为pH值6,在培养环境温度在25℃,光照强度为3000lx,光照时间8个小时的培养间进行培养;
7、诱导生根培养:在超净工作台中,将继代培养后并长出叶子的百合材料接种到含2mg/L NAA、0.5mg/L BA、蔗糖35g/L、琼脂7g/L的MS的生根培养基上,培养基为pH值6,在培养环境温度在25℃,光照强度为3000lx,光照时间8个小时的培养间进行培养,培养25天出根;8、营养生长培养:在超净工作台中,将诱导生根的百合幼苗移植到0.4mg/L NAA、2mg/L BA、蔗糖60g/L、琼脂7g/L的MS营养生长培养基中,培养基pH值为6,在培养环境温度在25℃,光照强度为3000lx,光照时间8个小时的培养间进行培养,培养27天,选取根叶长势良好的百合幼苗出瓶培养;
9、出瓶移栽:将长势良好的百合种苗移栽至按照45%腐殖细土、10%珍珠岩、15%细沙、10%草炭和20%棉籽壳配比的基质中进行培养,以上基质121℃灭菌50分钟,移栽前将株上的琼脂及杂物冲洗干净;30天浇一次营养液,营养液配比为硫酸镁500mg/L、硫酸二氢钾250mg/L、硝酸钾200mg/L、硝酸钙500mg/L、硫酸钾100mg/L、硼酸2mg/L、钼酸铵0.02mg/L、硫酸锌0.2mg/L,其余按照常规田间种植方法管理。
Claims (9)
1.一种克服百合种间杂交障碍的杂交方法,其特征在于:包括以下步骤:1)、花粉前期处理;
2)、人工自交授粉;
3)、切花柱和嫁接花柱;
4)、种子的处理;
5)、切种子接种法;
6)、继代培养;
7)、诱导生根培养;
8)、营养生长培养;
9)、出瓶移栽。
2.如权利要求1所述的一种克服百合种间杂交障碍的杂交方法,其特征在于:1)、花粉前期处理:用小刀和镊子,将成熟花粉剥下,放入事先裁好的草图纸内,折好后放入装有氯化钙粉末的瓶中进行干燥,选取处理好的新鲜花粉进行杂交;2)、人工自交授粉:取将要开放的百合,拨开花瓣,去除未成熟的花药,将百合花朵用杂交袋罩好,使去掉花药的百合花朵完全隔离外界花粉;去掉花药后,当花柱上产生明显柱头分泌物时,将处理好的花粉均匀、大量的涂抹在花柱上,使花粉覆盖柱头面积不少于柱头总面积的2/3;并将花朵罩上杂交袋,在袋外用标签系好并标注百合品种名称及人工自交的日期。
3.如权利要求1所述的一种克服百合种间杂交障碍的杂交方法,其特征在于:3)、切花柱和嫁接花柱:在人工自交授粉1~2天后,以45度角切下人工自交授粉百合花柱总体长度的1/3,同时将要嫁接的母本百合花柱也以45度角切下总体长度的1/3;将切下的人工自交授粉的百合花柱嫁接到剩余2/3的母本的花柱上;关键要使双方的花柱壁对齐,如果不能两边对齐,就保持一侧花柱壁对齐;再用宽1cm、长8-10cm的塑料条将接口捆扎起来,捆扎时要将伤口全部包严,并捆紧;在温室中培养,白天控温在24-26℃,夜间控温在20-22℃;相对湿度85~95%,不通风全遮光,5~6天后受精过程完成,按照常规田间种植方法管理。
4.如权利要求1所述的一种克服百合种间杂交障碍的杂交方法,其特征在于:4)、种子的处理:待果实成熟后,取饱满果实,在相对无菌的环境下按果实腹缝线与背缝线,用解剖刀将其划开;取出合子胚,在光线较好的地点仔细观察胚,选取有胚的种子;将有胚的种子,放入超净工作台中,使用蒸馏水洗净种子,然后采用0.1~0.2%HgCl,消毒20~30s,无菌水冲洗3~4次。
5.如权利要求1所述的一种克服百合种间杂交障碍的杂交方法,其特征在于:5)、切种子接种法:在超净工作台中,沿着种子的直边一侧(非弧形边),在不切到胚的情况下,用解剖刀切掉0.4~0.5mm边条,含有胚珠部分平躺着接种在MS+6-BA(1~2mg/L)+NAA(0.5~1mg/L)、蔗糖30~40g/L、琼脂6~7g/L的MS培养基中进行胚抢救,培养基pH值调到5.8~6.4的范围内,在培养环境温度为20~30℃,光照强度为2000~3000lx,光照时间7~8个小时的培养间进行培养;调节PH值的试剂为:1mol/L磷酸,1mol/L氢氧化钠,以下调节PH值是均与此相同。
6.如权利要求1所述的一种克服百合种间杂交障碍的杂交方法,其特征在于:6)、继代培养:在超净工作台中,将长出叶片的百合材料在超净工作台上进行切割,取大小合适的叶子放到含有0.2~0.6mg/L KT、0.5~1.5mg/L 2,4-D、蔗糖30~40g/L、琼脂6~7g/L的MS培养基中进行继代培养,45~55天继代一次,共继代2~3次,培养基为pH值5.8~6.4,在培养环境温度在20~30℃,光照强度为2000~3000lx,光照时间7~8个小时的培养间进行培养。
7.如权利要求1所述的一种克服百合种间杂交障碍的杂交方法,其特征在于:7)、诱导生根培养:在超净工作台中,将继代培养后并长出叶子的百合材料接种到含有1~2mg/LNAA、0.4~0.75mg/L BA、蔗糖30~40g/L、琼脂6~7g/L的MS的生根培养基上,培养基为pH值5.8~6.4,在培养环境温度在20~30℃,光照强度为2000~3000lx,光照时间7~8个小时的培养间进行培养,培养25~35天出根。
8.如权利要求1所述的一种克服百合种间杂交障碍的杂交方法,其特征在于:8)、营养生长培养:在超净工作台中,将诱导生根的百合幼苗移植到0.2~0.4mg/L NAA、1~2mg/LBA、蔗糖40~60g/L、琼脂6~7g/L的MS营养生长培养基中,培养基pH值为5.8~6.4,在培养环境温度在20~30℃,光照强度为2000~3000lx,光照时间7~8个小时的培养间进行培养,培养25~30天,选取根叶长势良好的百合幼苗出瓶培养。
9.如权利要求1所述的一种克服百合种间杂交障碍的杂交方法,其特征在于:9)、出瓶移栽:将长势良好的百合种苗移栽至按照35~45%腐殖细土、10~20%珍珠岩、10~15%细沙、10~20%草炭和20~25%棉籽壳配比的基质中进行培养,以上基质121℃灭菌40~50分钟,移栽前将株上的琼脂及杂物冲洗干净;30天浇一次营养液,营养液配比为硫酸镁500mg/L、硫酸二氢钾250mg/L、硝酸钾200mg/L、硝酸钙500mg/L、硫酸钾100mg/L、硼酸2mg/L、钼酸铵0.02mg/L、硫酸锌0.2mg/L,其余按照常规田间种植方法管理。
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