CN108849504A - 一种杂交建兰根状茎诱导花芽成花的方法 - Google Patents

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漆子钰
兰思仁
吴沙沙
翟俊文
艾叶
周育真
江鸣涛
陈俊晖
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Abstract

本发明提供了一种杂交建兰根状茎诱导花芽成花的方法，解决现有技术中杂交建兰开花年限久，在开花之前不能确定杂交建兰开品的问题，直接在试管内挑选开品最佳的杂交建兰根状茎进行繁殖培育，从而省去不必要的人力物力。本发明其材料选取杂交建兰根状茎经过诱导培养，第10 d根状茎即可发生萌动，三个月后即可出现肉眼可见的花芽，再经过两个月出现整体的盛花期，正常开花率达21.4%，成花花型完整。

Description

一种杂交建兰根状茎诱导花芽成花的方法
技术领域
本发明涉及一种杂交建兰在试管内开花的方法，特别是涉及一种杂交建兰根状茎诱导花芽成花的方法。
背景技术
建兰（Cymbidium ensifolium）因较早在福建被栽培、观赏故名，是我国国兰最主要的种类之一，其叶片质地飘逸，总状花序具3朵以上，花色多为浅黄绿色且具紫斑，以花的质感好、瓣形美且伴有香气著称；一般于秋季开花，少数在初夏开花，大多一年开花两次，栽培管理良好可一年盛开三次；是国兰中资源丰富、易栽培管理、赏点较多、价格亲民的一类兰花。国兰栽培与鉴赏是中国传统文化的组成部分，市场需求量巨大，但由于国兰栽培年限久，筛选新品种历时久成本高，杂交后代的兰花幼苗经过漫长的瓶内萌发-增殖-分化-生根-练苗出瓶后一般还需经过至少2-3年的栽培管理时间才能看到开花，而杂交后代性状分离差异巨大，从确定优良开品的成花再返回到组培扩繁、销售，前后一般需要7-10年的时间，有时甚至更久，期间浪费了巨大的人力与物力，培育成本也一直居高不下，因此，如何有效的缩短兰花开花年限进行早期杂种苗筛选优良后代与淘汰普通开品的兰花已成为近年来杂交兰花研究的热点。有关杂交建兰根状茎催花且成花皆正常的试管催花技术还未见报道。
发明内容
本发明目的是缩短杂交建兰开花年限，提前看到成花开品，在杂交建兰根状茎阶段直接催出花芽的组织培养方法；人为控制开花时间，为建兰杂交种子无菌萌发试管开花体系提供技术支持。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
（1）材料选取：选取生长健壮、无褐化的根状茎培养在培养基中；
（2）材料处理：在转接过程中，需要用手术刀刀背刮去根状茎母瓶上原有的培养基，操作时尽量避免减少根状茎的伤口；
（3）容器规格：组培玻璃瓶650 mL；
（4）试管催花培养：将生长健壮的根状茎切成长1.8-2.2 cm的无分支根状茎，接种在所述花芽诱导培养基中，每瓶培养基100-110 mL，厚度为1.4-1.6 cm，接种20个根状茎材料；所述诱导培养基的培养条件：pH5.6-5.8，培养室温度为26±2 ℃，光照时间 12 h/d，光照强度3500±100 Lx，花芽诱导时间120-150 d。
所述步骤4）中的20个处理好的1.8-2.2 cm的根状茎平铺在培养基上，按4列摆放，第1列摆放6个根状茎，第2、3列摆放8个根状茎，第4列摆放6个根状茎，材料互相之间平行错开，正好铺满培养基；每条根状茎前端和后端都需接触到培养基，接种深度为根状茎厚度的1/3。
上述方法涉及的花芽诱导培养基配制如下：
MS+6-BA3.0-5.0 mg·L-1+NAA0.5-1.5mg·L-1 + Su 30g·L-1 +Ac 1.5 g·L-1 + Ag7 g·L-1。
以上涉及：1、Ag为（Agar培养基凝固剂和支撑物琼脂条缩写）。
2、Su为（Sugar提供植物碳源和维持渗透压白砂糖的缩写）。
3、Ac为活性炭。
所述步骤4）中的光强较常规组培室内2排灯管需要增加至5排灯管加强光照强度进行催花，从而大大提高了正常花的比率。光照使用LED6500K灯管，距离材料28 cm。
诱导花芽的材料并不是移栽前期的试管小苗，而是杂交建兰的根状茎，俗称龙根。
本发明的优点在于：
1、通过本发明方法，摆脱季节对杂交建兰开花的限制，缩短开花周期，通过生物技术手段在培养前期摒除成花不好的根状茎材料，短时间内提前挑选优良的种质资源，与传统的筛选选择育种技术比较，可以缩短3年左右时间，大大提高育种效率，有效节约不必要的时间成本和经济成本。
2、本发明方法在材料选取上选择了较易获得的根状茎，相对幼苗瓶内催花，根状茎瓶内催花更易繁殖及操作，针对挑选出的好的成花材料也更易进行后续繁殖扩繁，时间短，指向性强。
3、本发明方法诱导出的花芽正常开花率高，所诱导出的花的大小与栽培时抽出的花的差别不大，挑选优良种质依据更强，具有显著的经济效益。
附图说明
图1 ‘四季外蝶’♀ב一品梅’♂F1代试管花芽与叶芽的萌动。
图2 ‘四季外蝶’♀ב一品梅’♂F1代试管内萌发出的花苞。
图3 ‘四季外蝶’♀ב一品梅’♂F1代诱导出的花朵出现不同的性状分离以及出现了极为独特的瓣型。
图4 ‘四季外蝶’♀ב一品梅’♂F1代试管花朵直观图。
图5‘四季外蝶’♀ב一品梅’♂F1代的父母本。
具体实施方式
实施例1
取材方法：选取‘四季外蝶’♀ב一品梅’♂杂交种子萌发繁殖进行2次继代转接后生长健壮的根状茎作为催花材料进行接种；
培养基：MS基本培养基采用1986，北京高等教育出版社，陈正华主编的《木本植物组织培养及其应用》中的配方进行配制的。
培养基配制：基本培养基为MS，将Su（白砂糖）30 g·L-1 和 Ag（琼脂条）7 g·L-1加热溶解，附加物活性炭Ac先用冷水溶解，加入生长调节剂 NAA 和 6-BA，用温度测试范围0-80℃的pH仪和1mol·L-1 NaOH和1mol·L-1HCL调节pH值为5.7，倒入650 mL规格的组培玻璃瓶（每瓶100 mL），培养基厚度一般为1.5 cm。
花芽诱导培养基：MS+6-BA5.0 mg·L-1+NAA0.5mg·L-1 + Su 30g·L-1 +Ac 1.5g·L-1 + Ag 7 g·L-1；
试管催花培养：将生长健壮的根状茎切成2cm长，接种在所述花芽诱导培养基中，每瓶接种20个材料，20个材料平铺于培养基上，按4列摆放，第1列摆放6个根状茎，第2、3列摆放8个根状茎，第4列摆放6个根状茎，材料互相之间平行错开，正好铺满培养基；每条根状茎前端和后端都需接触到培养基，接种深度为根状茎厚度的1/3。培养室温度为26±1℃，光照时间12 h/d，光照强度3500±100 Lx，花芽诱导时间180 d。
按照以上方法进行，建兰‘四季外蝶’♀ב一品梅’♂杂交后代根状茎花芽诱导的正常开花率达21.4%。生根率达100%，成活率达100%。
实施例2
（1）材料选取：选取‘四季外蝶’♀ב一品梅’♂杂交种子萌发繁殖进行2次继代转接后生长健壮的根状茎作为催花材料进行接种；
（2）材料处理：在转接过程中，需要用手术刀刀背刮去根状茎母瓶上原有的培养基，操作时尽量避免减少根状茎的伤口；
（3）容器规格：组培玻璃瓶650 mL；
（4）试管催花培养：将生长健壮的根状茎切成长1.8cm的无分支根状茎，接种在所述花芽诱导培养基中，每瓶培养基100mL，厚度为1.4cm，接种20个根状茎材料；所述诱导培养基的培养条件：pH5.6，培养室温度为26±2 ℃，光照时间 12 h/d，光照强度3500±100 Lx，花芽诱导时间120d。
所述步骤4）中的20个处理好的1.8cm的根状茎平铺在培养基上，按4列摆放，第1列摆放6个根状茎，第2、3列摆放8个根状茎，第4列摆放6个根状茎，材料互相之间平行错开，正好铺满培养基；每条根状茎前端和后端都需接触到培养基，接种深度为根状茎厚度的1/3。
上述方法涉及的花芽诱导培养基配制如下：
MS+6-BA3.0mg·L-1+NAA0.5mg·L-1 + Su 30g·L-1 +Ac 1.5 g·L-1 + Ag 7 g·L-1。
按照以上方法进行，建兰‘四季外蝶’♀ב一品梅’♂杂交后代根状茎花芽诱导的正常开花率达21.3%。生根率达100%，成活率达98%。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (3)

1.一种杂交建兰根状茎诱导花芽成花的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：
1）材料选取：选取生长健壮、无褐化的根状茎培养在培养基中；
2）材料处理：在转接过程中，需要用手术刀刀背刮去根状茎母瓶上原有的培养基，操作时避免减少根状茎的伤口；
3）试管催花培养：将生长健壮的根状茎切成长1.8-2.2 cm的无分支根状茎，接种在诱导培养基中，每个培养瓶培养基100-110 mL，厚度为1.4-1.6 cm，接种20个根状茎材料；培养条件：pH 5.6-5.8，培养室温度为26±2℃，光照时间12 h/d，光照强度3500±100 Lx，花芽诱导时间120-150 d。
2.根据权利要求1所述的一种杂交建兰根状茎诱导花芽成花的方法，其特征在于，所述步骤3）中的20个处理好的1.8-2.2 cm的根状茎平铺在培养基上，按4列摆放，第1列摆放6个根状茎，第2、3列摆放8个根状茎，第4列摆放6个根状茎，材料互相之间平行错开，正好铺满培养基；每条根状茎前端和后端都需接触到培养基，接种深度为根状茎厚度的1/3。
3.根据权利要求1所述的一种杂交建兰根状茎诱导花芽成花的方法，其特征在于，所述步骤3）花芽诱导培养基为：MS+6-BA3.0-5.0 mg·L-1+NAA0.5-1.5mg·L-1 + Su 30g·L-1 +Ac 1.5 g·L-1 + Ag 7 g·L-1。
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