CN116439132B - 一种微型蝴蝶兰的培育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种微型蝴蝶兰的培育方法。本发明首先筛选童期短，可以在小苗期(1.5寸)开花的蝴蝶兰种质资源并进行杂交授粉；然后找到标志蝴蝶兰童期结束的关键因子(组培苗具有4片叶则完成童期)，调整培养基促进瓶内蝴蝶兰出梗(在继代培养基中添加硝酸钙和硫酸镁，当硝酸钙0.4‑0.6g/L，硫酸镁0.2‑0.4g/L，硝酸钙:硫酸镁＝2:1时，与磷酸二氢钾配合使用，促进开花)；最后调整适宜的组培环境条件，促进瓶内蝴蝶兰开花。本发明不需生根直接开花，既可以实现组培瓶内开花，也可以进行田间种植获得微型蝴蝶兰品种，有利于培育微型蝴蝶兰新品系。
Description
技术领域
本发明属于花卉培育技术领域，具体涉及一种微型蝴蝶兰的培育方法。
背景技术
蝴蝶兰为兰科蝴蝶兰属植物，因其花形奇特、花姿优美、花色艳丽、花期长等优点，深受消费者青睐，被誉为“兰花皇后”，常作盆栽或切花。随着国际花卉产业的迅速发展，我国蝴蝶兰产业呈现出快速化、标准化、规模化的发展态势，发展前景可观。目前蝴蝶兰育种周期很长，从种苗出瓶至开花至少需要13-14个月(参见CN108651444A一种蝴蝶兰花粉保存及育种方法)。植物都有童期(花前成熟期)，即植物的幼年期，从种子萌发开始到第一次开花之间这段时期，主要进行营养生长。蝴蝶兰童期决定蝴蝶兰第一次开花的时间，目前蝴蝶兰主要在3.5寸阶段(生长18个月)或2.5寸阶段(生产13个月)开花，苗龄太小一般不能开花。因此，目前没有在组培阶段即可开花的蝴蝶兰，相应的，也没有微型蝴蝶兰品系。既缺乏童期短的蝴蝶兰种质资源，也没有配套的组培瓶内开花的技术手段，成为微型蝴蝶兰新品系选育和蝴蝶兰组培开花的主要限制因素。
CN103477978A公开了一种蝴蝶兰试管开花的诱导方法，该方法包括以下步骤：取经壮苗生根后的健壮无菌蝴蝶兰瓶苗为外植体进行花芽诱导。花芽诱导约3-4个月，可见花梗抽出。再经开花诱导培养，花芽可正常发育并有花苞出现，花苞发育正常并得以正常开放，无畸形花出现。上述专利适应性窄，只在“枫叶”(图1)那个品种上效果明显。
发明内容
针对上述问题，本发明提供了一种微型蝴蝶兰的培育方法。本发明首先筛选到童期短的蝴蝶兰种质资源并进行杂交授粉，然后找到标志蝴蝶兰童期结束的关键因子，并研究微型蝴蝶兰瓶内开花的培养方法及其专用培养基，可以实现微型蝴蝶兰在组培瓶内开花，培育微型蝴蝶兰新品系。本发明不需生根直接开花，既可以实现组培瓶内开花，也可以田间种植获得微型蝴蝶兰品种。
本发明的技术方案是：一种微型蝴蝶兰的培育方法，其特征是，首先筛选童期短，可以在小苗期(1.5寸)开花的蝴蝶兰种质资源并进行杂交授粉；然后找到标志蝴蝶兰童期结束的关键因子，调整培养基促进瓶内蝴蝶兰出梗；最后调整适宜的组培环境条件，促进瓶内蝴蝶兰开花；
具体包括以下步骤：
1)筛选在小苗期(1.5寸)开花的蝴蝶兰种质资源并进行杂交授粉后获得小苗
首先筛选到1.5寸可以开花的蝴蝶兰亲本进行杂交授粉，摘取果荚获得种子，再播种到播种培养基上培养，然后经原球茎培养基上培养，小苗培养基上培养获得小苗；
2)找到标志蝴蝶兰童期结束的关键因子，调整培养基促进瓶内蝴蝶兰出梗
挑选健壮，具有完整的4片叶的小苗(生长至4片大叶是结束童期，具备开花能力的关键因子)，定植在继代培养基中，组培苗催花50-60天后可见花梗破皮；
所述继代培养基为：MS+活性炭2.0g/l+香蕉100g/l+蔗糖25g/l+琼脂6g/l+KH2PO40.3-0.6g/L+Ca(NO3)2 0.4-0.6g/L+MgSO40.2-0.4g/L，且优选按质量比硝酸钙:硫酸镁＝2:1；
3)适宜的组培环境条件，促进瓶内蝴蝶兰开花
花梗抽出并伸长到3个节后，移栽到开花培养基中培养至开花；所述开花培养条件为：12小时光照+12小时黑暗，温度22-25℃，光照强度2500-3000lx；
所述开花培养基为：MS+活性炭2.0g/l+香蕉100g/l+蔗糖25g/l+琼脂6g/l+KH2PO40.3-0.8g/L+Ca(NO3)2 0.4-0.6g/L+MgSO4 0.2-0.4g/L。
进一步的，所述步骤1)筛选在小苗期(1.5寸)开花的蝴蝶兰种质资源具体步骤为：收集现有的蝴蝶兰种质资源，获得组培苗，经组培扩繁、驯化后定植在1.5寸育苗钵中，待根系抱住基质后，置于催花室催花45-50天，筛选有花梗抽出的材料，继续催花至开花；花后剪掉花梗，换盆至2.5寸育苗钵中继续养护，6个月后催花，花开后进行人工授粉获得果荚。
进一步的，所述步骤1)中1.5寸可以开花的蝴蝶兰种质资源为小梅花、LL29、小斑马、薇薇安、樱桃番茄、庭欣聪明。更进一步的，所述步骤1)中采用‘LL29’和‘小斑马’进行杂交。
进一步的，所述步骤1)的培养条件为：播种后黑暗处理2周，待种子膨大变为原球茎时改为16小时光照+8小时黑暗，环境温度在25-28℃，光照强度2500lx；生长1个月后，将长大的原球茎接种到原球茎培养基上继续生长，温度、光照不变；生长约1个月后，待大部分原球茎分化出2-3片小叶后，转接到小苗培养基上，光照强度增加至3000lx，温度不变。
进一步的，所述步骤1)的播种培养基为：MS+活性炭2.0g/l+蔗糖25g/l+琼脂6g/l，pH值为5.3-5.5；原球茎培养基为：MS+蛋白胨2.0g/l+香蕉100g/l+活性炭1.5g/l+蔗糖25g/l+琼脂6g/l，pH值为5.3-5.5；小苗培养基为：MS+活性炭2.0g/l+香蕉100g/l+蔗糖25g/l+琼脂6g/l，pH值为5.3-5.5。
进一步的，所述步骤2)的培养条件为：10小时光照+14小时黑暗，光照时温度22-25℃，黑暗时，温度降低到17-19℃，光照强度2500lx。
本发明的技术效果是：
1、早期筛选具有早花特性的微型蝴蝶兰种质材料，为培育瓶内开花蝴蝶兰提供亲本材料；
2、提出蝴蝶兰的童期(花前成熟期)概念，组培苗具有4片叶则完成童期，成为具有开花能力的植株；
3、本发明在继代培养基中添加硝酸钙和硫酸镁，当硝酸钙0.4-0.6g/L，硫酸镁0.2-0.4g/L，硝酸钙:硫酸镁＝2:1时，与磷酸二氢钾配合使用，促进开花；
4、本发明不需生根直接开花，既可以实现组培瓶内开花，也可以田间种植获得微型蝴蝶兰品种，有利于培育微型蝴蝶兰新品系。
附图说明
图1为微型蝴蝶兰从花梗到开花的照片，其中a.具有四片小叶的蝴蝶兰组培苗抽梗；b.蝴蝶兰组培抽梗苗继代，可去掉多余小叶，仅留2片叶继代；c.花梗顶部花苞开始发育；d.微型蝴蝶兰组培苗开花；
图2为全年不同时间段内微型蝴蝶兰开花的照片(其中左、中和右图分别为3、7、10月份开花)。
具体实施方式
以下结合实施例来说明其效果：
实施例1：
1、筛选童期短，可以在小苗期(1.5寸)开花的蝴蝶兰种质资源
收集现有的蝴蝶兰种质资源(120份)，获得组培苗，经组培扩繁、驯化后定植在1.5寸育苗钵中，生长4个月，待根系抱住基质后，置于催花室催花(夜温18℃，日温20-25℃)45-50天，筛选有花梗抽出的材料，继续催花2个月至开花。花后剪掉花梗，换盆至2.5寸育苗钵中继续养护，6个月后催花，花开后进行人工授粉获得果荚。
2、果荚播种
选取1.5寸可以开花的蝴蝶兰亲本(筛选到‘小梅花’、‘LL29’、‘小斑马’、‘薇薇安’‘樱桃番茄’、‘庭欣聪明’可1.5寸开花)进行杂交，以上述亲本互相杂交，以‘LL29’和‘小梅花’、‘LL29’和‘小斑马’为亲本获得杂交果荚。杂交后120天左右，摘取果荚，表面消毒后将果荚放在无菌组培瓶(放入无菌干燥剂)中，使其自然开裂。其中‘LL29’和‘小梅花’的种子未萌发，‘LL29’和‘小斑马’种子萌发。
果荚开裂后，进行无菌播种(参见CN111543322B一种脱毒蝴蝶兰新品种培育及组培扩繁方法)。用镊子轻敲果荚，种子可自裂口处蹦出，不要用镊子等器物刮取，防治绒毛混杂在种子中。果荚自然开裂后的种子，表面灭菌后再进行播种。由于种子非常细小，需提前准备折成漏斗状的滤纸并灭菌。裂开的种子用0.5％的次氯酸钠消毒10分钟，用灭菌滤纸过滤出种子，无菌水冲洗2-3次，然后再播种到播种培养基上。
播种后黑暗处理2周，待种子膨大变为原球茎时改为16小时光照+8小时黑暗，环境温度在25-28℃，光照强度2500lx。生长1个月后，将长大的原球茎接种到原球茎培养基上继续生长，温度、光照不变。生长约1个月后，待大部分原球茎分化出2-3片小叶后，转接到小苗培养基上，光照强度增加至3000lx，温度不变。
播种培养基为：MS+活性炭2.0g/l+蔗糖25g/l+琼脂6g/l，pH值为5.3-5.5。
原球茎培养基为：MS+蛋白胨2.0g/l+香蕉100g/l+活性炭1.5g/l+蔗糖25g/l+琼脂6g/l，pH值为5.3-5.5。
小苗培养基为：MS+活性炭2.0g/l+香蕉100g/l+蔗糖25g/l+琼脂6g/l，pH值为5.3-5.5。
3、继代培养
挑选健壮，具有完整的2、4、6片叶的小苗，定植在继代培养基中，10小时光照+14小时黑暗，光照时温度22-25℃，黑暗时，温度降低到17-19℃，光照强度2500lx。2个月后可见花梗破皮。
继代培养基为：MS+活性炭2.0g/l+香蕉100g/l+蔗糖25g/l+琼脂6g/l+KH2PO40.3-0.6g/L+Ca(NO3)2 0.2-0.6g/L+MgSO40.2-0.4g/L。
小苗合适叶片数以及KH2PO4、Ca(NO3)2、MgSO4含量筛选如表1所示。
表1小苗合适叶片数以及KH2PO4、Ca(NO3)2、MgSO4含量筛选
从表1的结果可以看出：就该蝴蝶兰组合而言，生长至4片大叶是结束童期，具备开花能力的关键因子。组培苗催花50-60天后可见花梗破皮。添加Ca(NO3)2 0.4-0.6g/L，MgSO40.2-0.4g/L，且Ca(NO3)2与MgSO4比值2:1时出梗率最高。
从花梗抽出至开花，一般需经历3-4个月，可每隔1个月用相同的培养基转接一下。
4、开花培养
花梗抽出并伸长到3个节后，移栽到开花培养基，12小时光照+12小时黑暗，温度22-25℃，光照强度2500-3000lx。
开花培养基：MS+活性炭2.0g/l+香蕉100g/l+蔗糖25g/l+琼脂6g/l+KH2PO40.3-0.8g/L+Ca(NO3)2 0.4-0.6g/L+MgSO4 0.2-0.4g/L。
本发明微型蝴蝶兰从花梗到开花如图1所示。从图中可以看出：具有四片小叶的蝴蝶兰组培苗抽梗(a图)，蝴蝶兰组培抽梗苗转接，可去掉多余小叶，仅留2片叶(b图)；花梗顶部花苞开始发育(c图)，然后微型蝴蝶兰组培苗开花(d图)。且可以全年不同时间段内微型蝴蝶兰开花(图2)。
5、生根培养
如需瓶外定植，开花的植株剪掉花梗，定植在生根培养基中，2个月后可驯化出瓶。
生根培养基：1/2MS+IBA 3mg/L+NAA1mg/L+2,4-D 0.2mg/L+活性炭5-8g/L+琼脂6-8g/L+蔗糖18-25g/l+香蕉泥20g/L。
Claims (7)
1.一种微型蝴蝶兰的培育方法，其特征是，具体包括以下步骤：
1)筛选在小苗期1.5寸开花的蝴蝶兰种质资源并进行杂交授粉后获得小苗
首先筛选到1.5寸可以开花的蝴蝶兰亲本‘LL29’和‘小斑马’进行杂交授粉，摘取果荚获得种子，再播种到播种培养基上培养，然后经原球茎培养基上培养，小苗培养基上培养获得小苗；
2)找到标志蝴蝶兰童期结束的关键因子，调整培养基促进瓶内蝴蝶兰出梗
挑选健壮，具有完整的4片叶的小苗，定植在继代培养基中，组培苗催花50-60天后可见花梗破皮；
所述继代培养基为：MS+活性炭2.0g/l+香蕉100g/l+蔗糖25g/l+琼脂6g/l+KH2PO40.3-0.6g/L+Ca(NO3)2 0.4-0.6g/L+MgSO40.2-0.4g/L；
3)适宜的组培环境条件，促进瓶内蝴蝶兰开花
花梗抽出并伸长到3个节后，移栽到开花培养基中培养至开花；所述开花培养条件为：12小时光照+12小时黑暗，温度22-25℃，光照强度2500-3000lx。
2.如权利要求1所述的一种微型蝴蝶兰的培育方法，其特征是，所述步骤3)的开花培养基为：MS+活性炭2.0g/l+香蕉100g/l+蔗糖25g/l+琼脂6g/l+KH2PO4 0.3-0.8g/L+Ca(NO3)20.4-0.6g/L+MgSO4 0.2-0.4g/L。
3.如权利要求1所述的一种微型蝴蝶兰的培育方法，其特征是，
所述步骤1)的培养条件为：播种后黑暗处理2周，待种子膨大变为原球茎时改为16小时光照+8小时黑暗，环境温度在25-28℃，光照强度2500lx；生长1个月后，将长大的原球茎接种到原球茎培养基上继续生长，温度、光照不变；待大部分原球茎分化出2-3片小叶后，转接到小苗培养基上，光照强度增加至3000lx，温度不变。
4.如权利要求1所述的一种微型蝴蝶兰的培育方法，其特征是，所述步骤1)的播种培养基为：MS+活性炭2.0g/l+蔗糖25g/l+琼脂6g/l，pH值为5.3-5.5。
5.如权利要求1所述的一种微型蝴蝶兰的培育方法，其特征是，所述步骤1)的原球茎培养基为：MS+蛋白胨2.0g/l+香蕉100g/l+活性炭1.5g/l+蔗糖25g/l+琼脂6g/l，pH值为5.3-5.5。
6.如权利要求1所述的一种微型蝴蝶兰的培育方法，其特征是，所述步骤1)的小苗培养基为：MS+活性炭2.0g/l+香蕉100g/l+蔗糖25g/l+琼脂6g/l，pH值为5.3-5.5。
7.如权利要求1-6中任一项所述的一种微型蝴蝶兰的培育方法，其特征是，所述步骤2)的培养条件为：10小时光照+14小时黑暗，光照时温度22-25℃，黑暗时，温度降低到17-19℃，光照强度2500lx；所述继代培养基中按质量比硝酸钙:硫酸镁＝2:1。
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