CN111280054B - 一种圆锥绣球组培增殖与生根一体化成苗方法及所用培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种圆锥绣球组培增殖与生根一体化成苗方法及所用培养基。一体化培养基的组成包括：MS基本培养基+6‑BA+IBA+NAA，其中所述6‑BA的浓度为0.5～2mg/L，所述IBA的浓度为0.05～0.2mg/L，所述NAA的浓度为0.05～0.2mg/L。圆锥绣球增殖与生根培养一体化成苗的方法包括：将圆锥绣球的组培苗接种于所述的一体化培养基中进行培养。本发明的圆锥绣球组培增殖与生根培养一体化成苗方法具有增殖率高，生根快的特点，将传统的组培增殖阶段和生根阶段的总时间至少缩短了20d，且生根苗健壮等特点。
Description
技术领域
本发明涉及组织培养，尤其涉及一种圆锥绣球的组培增殖与生根一体化成苗的方法及所用培养基。
背景技术
圆锥绣球(Hgdrangea paniculata)为虎耳草科绣球属的落叶灌木，叶对生或三叶轮生，叶形椭圆或卵状椭圆形，叶缘有细锯齿，叶背具毛。圆锥绣球花序顶生，长达30-40cm，花期7-10月。由于其花期夏季，一直持续到秋季，观赏期长，其花色多由白色渐变成绿色或淡粉色，且花干而不枯，具有极高的观赏价值。然而圆锥绣球的花序绝大部分甚至全部由不孕的无性花组成，无法获得种子，难以采用播种的方法进行繁殖，只能用无性繁殖的方法进行繁殖。传统的无性繁殖，如扦插、压条等方法因受种条数量的影响繁殖系数不高，而组织培养是一种能利用少量的繁殖材料快繁繁殖苗木的方法。
对于绣球组培方面的研究，目前仅有李奕萱等(2017)报道了大花木绣球组织培养体系，而大花木绣球虽名为绣球，实则忍冬科荚迷属植物与圆锥绣球为不同科的植物；蒋梦烟(2017)报道了绣球品种‘蓝尼康’快繁技术研究，以茎尖为外植体，适宜的生根培养基为MS+IBA1.0mg/L，平均生根时间为6.7d，生根长度为2.0cm。适宜的腋芽诱导培养基为MS+6-BA1.0mg/L，出芽率为92.5％，平均出芽个数为3.3个。‘蓝尼康’为大花绣球，与木质的圆锥绣球差异较大。
综上所述，对于圆锥绣球的离体组织培养技术的研究较少，而组培增殖与生根的一体化成苗方法目前未见相关报道。
发明内容
发明目的：针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种圆锥绣球的组培增殖与生根一体化成苗的方法及所用培养基，简化组培过程，将增殖培养过程与生根培养过程合二为一，缩短圆锥绣球离体苗的成苗时间。
技术方案：
一种一体化培养基，组成包括：MS基本培养基+6-BA+IBA+NAA。
一体化培养基中，所述6-BA的浓度为0.5～2mg/L，所述IBA的浓度为0.05～0.2mg/L，所述NAA的浓度为0.05～0.2mg/L。
优选，所述6-BA的浓度为1～2mg/L，所述IBA的浓度为0.1～0.2mg/L，所述NAA的浓度为0.05～0.2mg/L。
更优选，所述6-BA的浓度为1～1.5mg/L，所述IBA的浓度为0.1～0.15mg/L，所述NAA的浓度为0.05～0.1mg/L。
所述的一体化培养基还含有蔗糖25～30g/L，琼脂6.5～8g/L，培养基的pH为5.8～6.0。
本发明还提供了所述的一体化培养基在圆锥绣球增殖与生根培养一体化成苗中的应用。
本发明还提供了一种圆锥绣球增殖与生根培养一体化成苗的方法，包括：将圆锥绣球的无根组培苗接种于所述的一体化培养基中进行培养。
其中，培养时的温度25±2℃，光照1800～2000lx，光照时间10～12h/天，相对湿度为70～80％。
培养的时间为25～40天，最后可将生根苗直接转入驯化移栽阶段。
所述圆锥绣球的品种为‘北极熊’品种。
有益效果：
本发明的圆锥绣球组培增殖与生根培养一体化成苗方法具有增殖率高，生根快的特点，将传统的组培增殖阶段(30d)和生根阶段(30d)的总时间至少缩短了20d，且生根苗健壮等特点。
目前对于圆锥绣球的组培技术研究较少，且均采用的是传统方法，即组培苗需要经过启动培养、增殖培养和生根培养阶段，再进行驯化移栽。而本研究将增殖培养与生根培养阶段合二为一，优化培养基，在保持较高增殖率的同时，使组培苗能够快速成苗，缩短了组培苗出瓶的时间。
附图说明
图1为圆锥绣球无菌苗；
图2为本发明得到的圆锥绣球生根苗。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
实施例1
1材料：材料为圆锥绣球‘北极熊’品种的健壮无菌苗。
2方法：
2.1增殖与生根一体化培养基的配制
由于组培苗为无根的不完整植物，6-BA具有促进芽增殖的作用，发明人前期探索发现6-BA不添加，芽不能增殖且生长很慢，而NAA或者IBA具有促进生根的作用，只有细胞分裂素BA与NAA或IBA的合适浓度组合才有利于芽的萌发和根的生成，另外探索试验中，发现不添加NAA效果较差。因此，培养基采用三因素三水平的L9(34)正交设计，试验因素及水平分别为6-BA(0.5mg/L，1.0mg/L，2.0mg/L)，IBA(0，0.05mg/L，0.1mg/L)和NAA(0.05mg/L，0.1mg/L，0.2mg/L)，试验共9个处理，培养基配方分别为：
①MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L
②MS+6-BA0.5mg/L+IBA0.05mg/L+NAA0.2mg/L
③MS+6-BA0.5mg/L+IBA0.1mg/L+NAA0.1mg/L
④MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L
⑤MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.05mg/L+NAA0.2mg/L
⑥MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.1mg/L+NAA0.05mg/L
⑦MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L
⑧MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.05mg/L+NAA0.05mg/L
⑨MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.1mg/L+NAA0.2mg/L
每个处理培养基中均添加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH调节为5.8。
2.2材料的处理与接种
选择株高为2-3cm，生长健壮的组培无菌苗(该无菌苗是经过外植体消毒灭菌后，成活的组培苗，为无根苗)，取出后，在超净工作台上，修剪掉原来接触培养基的基部及能接触到培养基的茎基部的叶片，垂直接种于增殖与生根一体化培养基中。每个处理接种20瓶，每瓶3株苗；试验重复3次。
2.3组培苗的培养及数据调查
将接种后的试管苗，放置在温度25±2℃，光照2000lx，每天的光照时间12h，室内相对湿度70-80％的培养室内进行培养。培养20d后，观察苗的增殖情况，此时较适宜的培养基上苗的基部已有3-4个新芽萌出；继续培养，至30d时，组培苗的基部开始生根，继续培养10d，调查增殖及生根情况，结果见表1。
表1增殖与生根培养一体化成苗结果统计表
使用SPSS 22.0对上述数据进行分析，结果见表2。
表2主效应分析结果
a.R平方＝.963(调整后的R平方＝.852)
b.R平方＝.989(调整后的R平方＝.957)
c.R平方＝.987(调整后的R平方＝.949)
d.R平方＝.957(调整后的R平方＝.829)
对上述结果进行多重比较得出：对于增殖系数，平均根数、平均根长而言，6-BA的第2、3水平都显著好于第1水平，但2、3之间差异不显著；对于生根率，6-BA第3水平显著好于第2和第1水平；对于增殖系数、平均根数、平均根长而言，IBA的三个水平差异不显著；而对于生根率，IBA的第3水平明显好于第1水平，但与第2水平差异不显著；NAA的三个水平差异不显著。
综合上述分析：圆锥绣球的增殖与生根一体化培养基为MS+6-BA1.0-2.0mg/L+IBA0.1-0.2mg/L+NAA0.05-0.2mg/L；增殖系数最高达3.9，生根率最高100％，根的平均长度1.6cm，平均根数12.2条。
Claims (4)
1.一种圆锥绣球增殖与生根培养一体化成苗的方法，其特征在于，将圆锥绣球的无根组培苗接种于一体化培养基中进行培养；所述一体化培养基组成为：MS基本培养基+6-BA+IBA+ NAA；所述6-BA的浓度为1~2mg/L，所述IBA的浓度为0.1~0.2mg/L，所述NAA的浓度为0.05~0.2mg/L。
2.根据权利要求1所述圆锥绣球增殖与生根培养一体化成苗的方法，其特征在于，所述6-BA的浓度为1~1.5mg/L，所述IBA的浓度为0.1~0.15mg/L，所述NAA的浓度为0.05~0.1mg/L。
3.根据权利要求1所述圆锥绣球增殖与生根培养一体化成苗的方法，其特征在于，所述一体化培养基还含有蔗糖25~30g/L，琼脂6.5~8g/L，培养基的pH为5.8~6.0。
4.根据权利要求1所述圆锥绣球增殖与生根培养一体化成苗的方法，其特征在于，培养时的温度25±2℃，光照1800~2000lx，光照时间10~12h/天，相对湿度为70~80%。
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