CN108029559B - 一种快速培育落叶冬青组培苗的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种快速培育落叶冬青组培苗的方法，包括：1）将经常规消毒、接种方法获得的腋芽，经初代培养后获得1.5~2.0cm的无菌芽；将无菌芽剪切转接入增殖培养基中，先培养产生少量丛生芽，然后继代培养获得大量的丛生芽；2）将增殖培养后的落叶冬青丛芽转接入壮苗培养基中，培养25d后，丛芽继续增殖，且有效苗数量增加；3）剪取3.0cm以上的壮芽接种到生根诱导培养基中，15~25d后开始生根，培养35~45d后，再生植株长至5.0~6.0cm以上，小苗健壮；4）待生根的小苗长至5.0~6.0cm以上、根8~10条时，将小苗进行炼苗、驯化移栽，成活后获得组培苗。本发明操作简单、易行。
Description
技术领域
本发明涉及落叶冬青组培技术领域，具体涉及一种快速培育落叶冬青组培苗的方法。
背景技术
落叶冬青(Ilex verticillata L.)是引自北美地区东部的一种冬青科冬青属的落叶灌木，雌雄异株，通常分布于沼泽与池塘的周围，有许多栽培品种。落叶型冬青与其它常绿冬青树种不同，其特点是冬季落叶，鲜艳饱满的红色果实挂满枝头，挂果期可至翌年4月，给寒冷的严冬带来温暖和喜庆的颜色，是冬季赏果的最佳树种之一。即可用作商业切枝又可做庭院绿化、室内盆景、冬季游园观赏之用，极具园林观赏和商业价值。落叶型冬青引种到我国的时间不长，苗木数量较少。为保持落叶冬青的观赏价值，扩大推广范围，无性繁殖是保持遗传特色的最好方法，而组织培养法是快速获得大量繁殖苗的最佳方法。但由于目前落叶冬青组培苗增殖系数少、生根慢、生根率低，限制了其大规模的推广和繁殖。
发明内容
发明目的：针对现有技术中繁殖系数和生根率低，生根时间长等存在的不足，本发明的目的是提供一种快速培育落叶冬青组培苗的方法，采用组织培养的方法对不同落叶冬青品种的腋芽进行增殖、壮苗、生根培养，建立快速获得再生植株的技术方法，解决了落叶冬青扦插繁殖受季节和种苗限制、组培苗增殖率低、生根慢、生根率低、移栽成活率低等难题，适合多个引种落叶冬青品种，可加快引种落叶冬青的繁殖速度和规模，具有较强的实用性。
技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：
一种快速培育落叶冬青组培苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）取经常规消毒、接种方法获得的腋芽，进行初代培养，获得1.5~2.0cm的无菌芽；将无菌芽剪切转接入增殖培养基中，先培养产生少量丛生芽，然后以25d为继代周期，将带有5~6个小芽的芽丛再转接入增殖培养基中，获得大量的丛生芽；增殖培养基为：MS+0.5mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA+1.0mg/L CPPU（氯吡苯脲），
或MS+0.1mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L CPPU +1.0mg/L GA（赤霉素），
或MS+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L CPPU（氯吡苯脲）；
2）将增殖培养后的落叶冬青丛芽转接入壮苗培养基中，培养25d后，丛芽继续增殖，且有效苗数量增加；壮苗培养基为：MS+0.1 mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA+0.5 mg/L CPPU+1.0 GA；
3）剪取3.0cm以上的壮芽接种到生根诱导培养基中，15~25d后开始生根，培养35~45d后，再生植株长至5.0~6.0cm以上，小苗健壮；生根培养基为：1/2MS+1.0 IBA+1.0 g/LAC （活性炭），或1/2MS+0.1 mg/L IBA+1.0 g/L AC。
4）待生根的小苗长至5.0~6.0cm以上、根8~10条时，将小苗进行炼苗、驯化移栽，成活后获得组培苗。
步骤1）中，无菌腋芽是经常规消毒法选取落叶冬青春季嫩稍，剪取1.0cm带芽茎段进行腋芽诱导培养20d，获得的1.5~2.0cm左右的无菌芽。
步骤1）中，腋芽转接增殖方法为：在超净工作台上用长镊将带腋芽茎段取出，在无菌条件下用将1.5cm左右的腋芽剪下，接种在增殖培养基上。
步骤1）中，丛芽转接方法为：在超净工作台上用长镊将丛生芽取出放置在经灭菌的滤纸上，在无菌条件下将丛生芽分割成带有5~6个小芽的芽丛，接种到增殖培养基上。
步骤2）中，所述的壮苗培养方法为：将增殖后的丛生芽在超净工作台上用长镊取出放置在经灭菌的滤纸上，在无菌条件下将丛生芽分割成3~4cm3大小，接种到壮苗培养基上。
步骤4）中，炼苗、驯化移栽为：炼苗时将封口膜打开，用带孔的双层塑料薄膜蒙闭，在室温下炼苗2~3d，然后将小苗从瓶中取出洗去根部培养基，移入装有珍珠岩：泥炭：蛭石=5：3：2基质的容器中，小苗上部用带孔透明的塑料薄膜遮盖，10d后去除；期间每隔2d补充一次水分，苗木成活后常规管理。
所述的快速培育落叶冬青组培苗的方法，在增殖、壮苗以及生根培养基中，均含3.0 %蔗糖、0.65%琼脂，pH5.8。
所述的快速培育落叶冬青组培苗的方法，在增殖、壮苗以及生根阶段，培养温度为25±2℃，光照时间14h/d，光照强度55 µmol·m–2·s–1。
所述的快速培育落叶冬青组培苗的方法，落叶冬青的品种为‘Winter Red’、‘RedSprite’、‘Winter Gold’。
有益效果：与现有技术相比，本发明的快速培育落叶冬青组培苗的方法，技术操作简单、易行，增殖与壮苗只需75d左右，诱导生根时间从25~35d提前至15~25d，芽苗最高增殖率达415~446%以上，生根率达65~80%，移栽成活率达85%~90%以上，根系发育良好，苗木生长健壮，解决了落叶冬青组培苗增殖率低、生根慢、生根率低、移栽成活率低等难题，且适合多个引种落叶冬青品种，可加快引种落叶冬青的繁殖速度和规模，具有较强的推广应用价值。
附图说明
图1是‘Winter Red’增殖苗图；
图2是‘Winter Red’壮苗培养图；
图3是‘Winter Red’组培生根小苗图；
图4是‘Winter Red’组培苗图；
图5是‘Red Sprite’增殖苗图；
图6是‘Red Sprite’壮苗培养图；
图7是‘Red Sprite’生根小苗图；
图8是‘Red Sprite’组培苗炼苗图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
一种快速培育落叶冬青组培苗的的方法，该落叶冬青的品种为：‘Winter Red’，包括以下步骤：
1）将经常规方法诱导的腋芽转接入增殖培养基中，25d后可产生少量丛生芽，以后以25d为继代周期，将带有5~6个小芽的芽丛再转接入增殖培养基中，可获得大量的丛生芽，增殖率为425%左右。其中，增殖培养基为：MS+0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/LCPPU。培养基中含3.0 %蔗糖、0.65%琼脂，pH5.8左右。培养室温度为25±2℃，光照时间14h/d，光照强度55 µmol·m–2·s–1（图1）。
2）将增殖培养后的落叶冬青丛芽转接入壮苗培养基中，培养25d后，丛芽继续增殖，且有效苗（3cm以上）数量增加；壮苗培养基为：MS+0.1 mg/L NAA+1.0 mg/L6-BA+1.0mg/L CPPU+ 0.5 mg/L GA。培养基中含3.0 %蔗糖、0.65%琼脂，pH5.8左右，培养室条件同上（图2）。
3）剪取2.0~3.0cm的壮芽接种到生根诱导培养基中，25d后开始生根，培养40d后，再生植株可长至5.0~6.0cm以上，小苗健壮，平均根数达8条，根长达3.0cm，生根率达80%。生根培养基为：1/2MS+1.0 mg/L IBA+1.0 g/L AC。培养基中含3.0 %蔗糖、0.65%琼脂，pH5.8左右，培养室条件同上（图3）。
4）待生根的小苗长至6.0~7.0cm以上、根8条以上时将小苗进行炼苗、驯化移栽，成活后获得组培再生苗。
5）移栽成活后进行常规管理，获得扩繁苗（图4）。
实施例2
一种快速培育获得落叶冬青组培苗的方法，该落叶冬青的品种为：‘Red Sprite’，包括以下步骤：
1）将经常规方法诱导的腋芽转接入增殖培养基中，25d后可产生少量丛生芽，以后以25d为继代周期，将带有5~6个小芽的芽丛再转接入增殖培养基中，可获得大量的丛生芽，增殖率为415%。增殖培养基为：MS+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA +0.5mg/L CPPU+1.0 mg/L GA。培养基中含3.0 %蔗糖、0.65%琼脂，pH5.8左右。培养室温度为25±2℃，光照时间14h/d，光照强度55 µmol·m–2·s–1（图5）。
2）将增殖培养后的落叶冬青丛芽转接入壮苗培养基中，培养25d后，丛芽继续增殖，且有效苗（3cm以上）数量增加；壮苗培养基为：MS+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA +0.5mg/L CPPU+1.0 mg/L GA。培养基中含3.0 %蔗糖、0.65% 琼脂，pH5.8左右，培养室条件同上（图6）。
3）剪取2.0~3.0cm的壮芽接种到生根诱导培养基中，25d后开始生根，培养45d后，再生植株可长至5.0cm以上，小苗健壮，平均根数达10条，根长达2.7cm，生根率达75%。生根培养基为：1/2MS+0.1 mg/L IBA+1.0 g/L AC。培养基中含3.0 %蔗糖、0.65%琼脂，pH5.8左右，培养室条件同上（图7）。
4）待生根的小苗长至4.0~5.0cm以上、根8条以上时将小苗进行炼苗、驯化移栽，成活后获得组培再生苗。
5）移栽成活后进行常规管理，获得扩繁苗（图8）。
实施例3
一种快速培育获得落叶冬青组培苗的方法，该落叶冬青的品种为：‘WinterGold’，包括以下步骤：
1）将经常规方法诱导的腋芽转接入增殖培养基中，25d后可产生少量丛生芽，以后以25d为继代周期，将带有5~6个小芽的芽丛再转接入增殖培养基中，可获得大量的丛生芽，增殖率为446%。增殖培养基为：MS+0.5mg/L NAA+0.2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L CPPU。培养基中含3.0 %蔗糖、0.65%琼脂，pH5.8左右。培养室温度为25±2℃，光照时间14h/d，光照强度55µmol·m–2·s–1。
2）将增殖培养后的落叶冬青丛芽转接入壮苗培养基中，培养25d后，丛芽继续增殖，且有效苗（3cm以上）数量增加；壮苗培养基为：MS+0.1 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+1.0mg/L CPPU+ 0.5 mg/L GA。培养基中含3.0 %蔗糖、0.65%琼脂，pH5.8左右，培养室条件同上。
3）剪取2.0~3.0cm的壮芽接种到生根诱导培养基中，20d后开始生根，培养35d后，再生植株可长至5.0cm以上，小苗健壮，平均根数达6.5条，根长达2.5cm，生根率达65%。生根培养基为：1/2MS+0.1 mg/L IBA+1.0 g/L AC（活性炭）。培养基中含3.0 %蔗糖、0.60%琼脂，pH5.8左右，培养室条件同上。
4）待生根的小苗长至4.0~5.0cm以上、根8条以上时将小苗进行炼苗、驯化移栽，成活后获得组培再生苗。
5）移栽成活后进行常规管理，获得扩繁苗。
Claims (7)
1.一种快速培育落叶冬青组培苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）取经常规消毒、接种方法获得的腋芽，进行初代培养，获得1.5~2.0cm的无菌芽；将无菌芽剪切转接入增殖培养基中，先培养产生少量丛生芽，然后以25d为继代周期，将带有5~6个小芽的芽丛再转接入增殖培养基中，获得大量的丛生芽；其中，
落叶冬青的品种为‘Winter Red’，增殖培养基为：MS+0.5mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA+1.0mg/L CPPU；
或落叶冬青的品种为‘Red Sprite’，增殖培养基为：MS+0.1mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L CPPU +1.0mg/L GA，
或落叶冬青的品种为‘Winter Gold’，增殖培养基为：MS+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L CPPU；
2）将增殖培养后的落叶冬青丛芽转接入壮苗培养基中，培养25d后，丛芽继续增殖，且有效苗数量增加；其中，
落叶冬青的品种为‘Winter Red’，壮苗培养基为：MS+0 .1 mg/L NAA+1 .0 mg/L6-BA+1 .0mg/L CPPU+ 0 .5 mg/L GA；
或落叶冬青的品种为‘Red Sprite’，壮苗培养基为：MS+0 .1 mg/L NAA+0 .5 mg/L 6-BA +0 .5mg/L CPPU+1 .0 mg/L GA；
或落叶冬青的品种为‘Winter Gold’，壮苗培养基为：MS+0 .1 mg/L NAA+1 .0 mg/L6-BA+1 .0mg/L CPPU+ 0 .5 mg/L GA；
3）剪取3.0cm的壮芽接种到生根诱导培养基中，15~25d后开始生根，培养35~45d后，再生植株长至5.0~6.0cm，小苗健壮；其中，
落叶冬青的品种为‘Winter Red’，生根培养基为：1/2MS+1 .0 mg/L IBA+1 .0 g/L AC
或落叶冬青的品种为‘Red Sprite’、‘Winter Gold’，生根培养基为：1/2MS+0 .1 mg/LIBA+1 .0 g/L AC；
4）待生根的小苗长至5.0~6.0cm、根8~10条时，将小苗进行炼苗、驯化移栽，成活后获得组培苗；
其中，在增殖、壮苗以及生根培养基中，均含3.0%蔗糖、0.65%琼脂，pH5.8。
2.根据权利要求1所述的快速培育落叶冬青组培苗的方法，其特征在于：步骤1）中，无菌腋芽是经常规消毒法选取落叶冬青春季嫩稍，剪取1 .0cm带芽茎段进行腋芽诱导培养20d，获得1 .5~2 .0cm的无菌芽。
3.根据权利要求1所述的快速培育落叶冬青组培苗的方法，其特征在于：步骤1）中，腋芽转接增殖方法为：在超净工作台上用长镊将带腋芽茎段取出，在无菌条件下用将1.5cm的腋芽剪下，接种在增殖培养基上。
4.根据权利要求1所述的快速培育落叶冬青组培苗的方法，其特征在于：步骤1）中，丛芽转接方法为：在超净工作台上用长镊将丛生芽取出放置在经灭菌的滤纸上，在无菌条件下将丛生芽分割成带有5~6个小芽的芽丛，接种到增殖培养基上。
5.根据权利要求1所述的快速培育落叶冬青组培苗的方法，其特征在于：步骤2）中，所述的壮苗培养方法为：将增殖后的丛生芽在超净工作台上用长镊取出放置在经灭菌的滤纸上，在无菌条件下将丛生芽分割成3~4cm3大小，接种到壮苗培养基上。
6.根据权利要求1所述的快速培育落叶冬青组培苗的方法，其特征在于：步骤4）中，炼苗、驯化移栽为：炼苗时将封口膜打开，用带孔的双层塑料薄膜蒙闭，在室温下炼苗2~3d，然后将小苗从瓶中取出洗去根部培养基，移入装有珍珠岩：泥炭：蛭石=5:3:2基质的容器中，小苗上部用带孔透明的塑料薄膜遮盖，10d后去除；期间每隔2d补充一次水分，苗木成活后常规管理。
7.根据权利要求1所述的快速培育落叶冬青组培苗的方法，其特征在于：在增殖、壮苗以及生根阶段，培养温度为25±2℃，光照时间14h/d，光照强度55µmol·m–2·s–1。
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