CN109220793B - 一种蝴蝶兰新品种的选育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种蝴蝶兰茎尖脱毒再生快繁的方法，该方法同时结合多次茎尖剥离技术、防褐化处理、病毒抑制剂处理以及交替变温热处理技术，有效降低组培苗毒素含量，提高茎尖成活率。多次茎尖剥离技术能够防止植株其他部分的病毒向茎尖分生组织蔓延，其中切取带有叶原基的茎尖组织，可以在有效减少毒素在茎尖中含量的同时提高组培苗的成活率；茎尖预处理过程可以显著降低茎尖褐化死亡率，提高茎尖成活率，与此同时病毒抑制剂结合交替变温处理，能够有效脱出CyMV和ORSV病毒。
Description
技术领域
本发明属于花卉育种技术领域，具体涉及一种蝴蝶兰新品种的选育方法。
背景技术
蝴蝶兰(Phalaenopsis spp.)，为兰科蝴蝶兰属植物，其花型似蝶，色彩鲜艳、花期长久，是我国最流行的兰花种类之一。蝴蝶兰原生约66种，并且早在19世纪初就大量的开展了杂交育种工作，品种遍布世界各地，创造了巨大的经济效益，极大的推动蝴蝶兰产业的发展。但由于育种工作起步较晚，缺乏优秀的蝴蝶兰亲本，种质资源主要依赖引进，培育具有自主知识产权的品种不多，市场占有率低。
新品种的选育是蝴蝶兰产业可持续发展的核心。当前杂交育种仍然是蝴蝶兰育种的重要方法。然而杂交育种主要存在以下问题：第一，亲本血缘关系混乱；第二，杂交育种年限长，一般一个新品种选育周期需要7-8年，育种成本很高；第三，育种方式落后，新品种选育效率低等。
发明内容
本发明克服了上述现有技术的不足，提供一种蝴蝶兰新品种的选育方法，该方法可以有效缩短育种年限，降低育种成本，同时提高蝴蝶兰新品种选育效率。
一种蝴蝶兰新品种的选育方法，包括如下步骤：
1）材料选择与处理：采摘蝴蝶兰杂交果荚洗净、消毒、晾干；
2）杂交种子快速无菌萌发：将步骤1）处理的果荚切开获得蝴蝶兰种子，将种子撒播在快速萌发培养基上，诱导出原球茎；
3）优势原球茎快速增殖：挑取经过步骤2）挑选直径在0.2-0.5cm之间，颜色绿色，且长势健壮的原球茎转接种到增殖培养基上进行增殖培养；
所述的增殖培养基为：花宝1号0.8-1.2g·L-1+花宝2号1.0-1.5 g·L-1+蔗糖23-25 g·L-1+牛肉蛋白胨1.2-1.5g·L-1+土豆泥50-80g·L-1+AC（活性炭）0.8-1.0g·L-1；
4）原球茎的继代增殖：待步骤3）中的原球茎长至直径大于0.5cm时，用解剖刀横向切割成两部分，接种在步骤3）所述的增殖培养基上进行继代增殖培养30±3天，获得一次继代增殖的原球茎；
5）原球茎的二次继代增殖：将上述步骤4）获得的增殖原球茎再次横向切割成两部分，再一次接种在步骤3）所述的增殖培养基上进行继代增殖培养60±3天，获得二次继代增殖的原球茎；
6）成苗培养：挑取步骤5）中二次继代增殖的原球茎接种在一步成苗培养基上，促其分化出实生苗，每个株系培养50-100颗实生苗；
7）实生苗苗盘种植：将步骤6）获得的实生苗株系移入温室中，炼苗后洗净、杀菌，分别定植在盛有泥炭：树皮：蛭石质量比为1：1.5-2：1的苗盘中，盖上无纺布，喷水保湿，待组培苗缓苗后进行常规栽培管理；
8）实生苗2.8寸催花：步骤7）中所述的苗盘生长2-4个月后，将苗盘的实生苗换到2.8寸白色透明营养杯中，定植4-6个月，此后进行催花处理，直至花芽分化；
9）优势实生苗群体评价：待实生苗株系群体开花时，对实生苗进行评价，筛选出优势品系；
10）优势新品种的获得及花梗腋芽组培快繁：切取筛选出的优势品系的花梗腋芽，接种在花梗腋芽组培培养基中进行组培快繁，获得新品种。
进一步的，上述步骤2）中所述快速萌发培养基为：花宝1号0.8-1.2g·L-1+花宝2号1.0-1.5 g·L-1+蔗糖3-25 g·L-1+牛肉蛋白胨0.8-1g·L-1+椰汁150-200ml·L-1+AC（活性炭）0.8-1.0g·L-1。
进一步的，上述步骤2）中所述的快速无菌萌发的培养条件为：温度26-28℃，湿度50-60%，暗处理12-15天。
进一步的，上述步骤3）中所述的优势原球茎快速增殖的培养条件为：温度26-28℃，湿度50-60%，光照1200-1500lux，培养时间30-35天。
进一步的，上述步骤4）中所述的原球茎的继代增殖的培养条件为温度26-28℃，湿度50-60%，光照1200-1500lux，培养时间30-35天。
进一步的，上述步骤6）中所述一步成苗培养基：花宝1号0.8-1.2g·L-1+花宝2号1.0-1.5 g·L-1+蔗糖23-25 g·L-1+牛肉蛋白胨1.2-1.5g·L-1+土豆泥50-80g·L-1+AC（活性炭）0.8-1.0g·L-1；
进一步的，上述步骤6）中所述成苗培养的培养条件为：温度26-28℃，湿度50-60%，光照2500-3000lux，培养时间30天。
进一步的，上述步骤8）中所述实生苗2.8寸催花的培养条件为：白天温度22-25℃，夜晚温度17-20℃，光照10000-13000 lux。
进一步的，上述步骤10）所述的花梗腋芽组培培养基为：1/2MS+6-BA 2.0-5.0mg·L-1+NAA 0.2-1.0mg·L-1+蔗糖23-25g·L-1+牛肉蛋白胨0.8-1g·L-1+土豆泥100-150g·L-1。
进一步的，上述步骤10）所述的花梗腋芽组培快繁的培养条件为：温度25-28℃，湿度50-60%，暗处理25-30天后，光照1200-1500lux，光照培养时间30-35天。
本发明的有益效果：
1）蝴蝶兰种子快速无菌萌发，筛选生长势强的原球茎进行原球茎增殖，淘汰长势弱和长势慢的实生苗，节省了生产成本，也为株系繁殖争取了时间。
2）实生苗2.8寸催花较传统的3.5寸催花缩减了1年的蝴蝶兰栽培时间，大大节约了生产成本。
3）株系的增殖为后续实生苗群体评价，新品系筛选奠定了材料基础，传统方法生产的实生苗单株参差不齐，且每个单株只有一株苗，而本发明中每个实生苗都是一个50-100株苗的群体，对于能够全苗评价新品种的整齐性、一致性、特异性和稳定性，更为重要的是，一旦新品系确定为优势新品种，通过切割花梗腋芽快速繁殖出新品种群体，能够快速推向市场。
4）通过本发明技术，整个新品系选育周期为800-900d（约2.5年），相比于传统技术的选育周期（6-7年）大大的缩短蝴蝶兰新品种选育周期，大大的减少了育种成本，提高了新品种选育效率。
附图说明
图1母本Phalaenopsis ‘C27’。
图2父本 Phalaenopsis ‘31’。
图3蝴蝶兰杂交果荚。
图4蝴蝶兰种子萌发。
图5株系种子分化。
图6蝴蝶兰优势原球茎株系增殖。
图7蝴蝶兰优势株系苗。
图8蝴蝶兰优势株系2.8寸催花。
图9蝴蝶兰优势株系新品种。
具体实施方式
实施例蝴蝶兰新品种选育方法
1 材料
供试材料为山东省农科院蔬菜花卉研究所花卉种质资源圃的一个杂交组合后代群体。父本（♂）： Phalaenopsis ‘31’，株型高大，深紫红色大花，隐线条，花瓣纸质，唇瓣主色紫红色，唇瓣上具长须（如图1）；母本（♀）：Phalaenopsis‘C27’，株型矮小，黄色中花，花瓣厚蜡质，唇瓣主色为橘色和白色，唇瓣上无须（如图2）。
2方法
1）材料选择与处理：采摘115d的蝴蝶兰杂交果荚（如图3），用自来水洗净，置于超净工作台上用75%的酒精浸泡10分钟，后用无菌水冲洗2次，置于不锈钢盘中晾干；
2）杂交种子快速无菌萌发：将步骤1）处理的果荚用解剖刀切去两端0.5cm，纵向切开，将种子均匀的撒播在快速萌发培养基上促使种子萌发，诱导出原球茎（如图4），快速萌发培养基为：花宝1号1.2g·L-1+花宝2号1.5 g·L-1+蔗糖25 g·L-1+牛肉蛋白胨1g·L-1+椰汁200ml·L-1+AC（活性炭）1.0g·L-1，培养温度26-28℃，湿度60%，暗处理15天；
3）优势原球茎快速增殖：挑取经过步骤2）处理后生长势较快且健壮的原球茎接种到增殖培养基上持续增殖培养（如图5），增殖培养基为：花宝1号1.2g·L-1+花宝2号1.5g·L-1+蔗糖25 g·L-1+牛肉蛋白胨1.5g·L-1+土豆泥80g·L-1+AC（活性炭）1.0g·L-1，培养温度26-28℃，湿度60%，光照1500lux，培养时间30天；
4）优势原球茎株系一次继代繁殖：待原球茎直径为大于0.5cm时，将其置于超净工作台上，每个原球茎单独编号后，用解剖刀横向切割成两部分，接种在步骤3）所述的增殖培养基上进行一次继代增殖培养（如图6），培养温度26-28℃，湿度60%，光照1500lux，培养时间30天，获得一次继代增殖的原球茎；
5）原球茎的二次继代增殖：将上述步骤4）获得的增殖原球茎再次横向切割成两部分，再一次接种在步骤3）所述的增殖培养基上进行二次继代增殖培养，培养温度26-28℃，湿度60%，光照1500lux，培养时间60天，获得二次继代增殖的原球茎；
6）成苗培养：将步骤5）中二次继代增殖的原球茎接种在一步成苗培养基上分化出实生苗（如图7），一步成苗培养基为：花宝1号1.2g·L-1+花宝2号1.5 g·L-1+蔗糖25 g·L-1+牛肉蛋白胨1.5g·L-1+土豆泥80g·L-1+AC（活性炭）1.0g·L-1，培养温度26-28℃，湿度60%，光照3000lux，培养时间30天，每个株系培养50-100颗实生苗；
7）实生苗苗盘种植：将步骤6）获得的实生苗株系移入温室中，炼苗15天后，洗净根部培养基，用稀释2000倍的50%多菌灵可湿性粉剂浸泡5min后晾干，分别定植在盛有泥炭：树皮：蛭石质量比为1：2：1的苗盘中，每盘50颗，盖上无纺布，每隔两天喷水一次，保湿，待组培苗缓苗后进行常规栽培管理；
8）实生苗2.8寸催花：苗盘生长4个月后，将苗盘的实生苗换盆到2.8寸白色透明营养杯中，定植6个月，后进行催花处理（如图8），白天温度25℃，夜晚温度17℃，光照13000lux，直至花芽分化；
9）优势实生苗群体评价：待实生苗株系群体开花时，按照实生苗评价标准，对实生苗进行评价，筛选出优势品系；
10）优势新品种的获得及花梗腋芽组培快繁：切取筛选出的优势品系花梗腋芽，接种在1/2MS+6-BA 4.0 mg·L-1+NAA 0.8mg·L-1+蔗糖25g·L-1+牛肉蛋白胨1g·L-1+土豆泥150g·L-1的花梗腋芽组培培养基上，在培养温度25-28℃，湿度60%，暗处理30天后，光照1500lux，培养时间30天，生成蝴蝶兰优势株系新品种（如图9），部分优势单株主要观赏性状见表1。
表1 蝴蝶兰亲本及其杂交F1代花部主要质量性状特征描述
| 材料 | 花瓣底色I | 比色卡编号II（对应花瓣底色） | 花瓣纹案类型I | 花瓣纹案色I | 比色卡编号II（对应花瓣纹案色） |
| 母本 | 黄色 | GREEN-YELLOW GROUP1-D | 无 | 无 | 无 |
| 父本 | 紫红色 | PURPLE GROUP N79-B | 线条 | 紫红 | PURPLE GROUP N79-B |
| 1 | 淡黄色 | GREEN-WHITE GROUP157-B | 细线条 | 紫红 | PURPLE GROUP N79-B |
| 2 | 淡黄色 | GREEN-WHITE GROUP157-B | 粗线条 | 紫红 | PURPLE GROUP N79-B |
| 3 | 紫红色 | PURPLE GROUP N79-B | 线条 | 紫红 | PURPLE GROUP N79-B |
| 4 | 黄色 | GREEN-YELLOW GROUP1-D | 粗线条 | 深紫红 | RED-PURPLE GROUP 59-B |
| 5 | 黄色 | GREEN-YELLOW GROUP1-D | 线条 | 深紫红 | RED-PURPLE GROUP 59-B |
| 6 | 深紫红色 | RED-PURPLE GROUP 59-B | 无 | 无 | 无 |
| 7 | 紫红色 | PURPLE GROUP N79-B | 线条 | 紫红 | PURPLE GROUP N79-B |
备注：1花部性状描述参照国际新品种保护联盟（UPOV）制定的蝴蝶兰DUS测试指南（UPOV Phalaenopsis guidelines 2003； UPOV Phalaenopsis guidelines 2013）；2 所有样品均采用英国皇家园艺协会RHS标准比色卡在没有阳光直射的室内进行比色测定。
3.结论
经过本技术处理的品系选育周期约为2-3年，相比于传统技术的选育周期（6-7年）有了实质性的缩短效果，株系群体为新品种快速推向市场奠定了材料基础。
Claims (6)
1.一种蝴蝶兰新品种选育方法，其特征在于，包括如下步骤：
1）材料选择与处理：采摘蝴蝶兰杂交果荚洗净、消毒、晾干；
2）杂交种子快速无菌萌发：将步骤1）处理的果荚切开获得蝴蝶兰种子，将种子撒播在快速萌发培养基上，诱导出原球茎；所述的快速萌发培养基为：花宝1号0.8-1.2g·L-1+花宝2号1.0-1.5 g·L-1+蔗糖3-25 g·L-1+牛肉蛋白胨0.8-1g·L-1+椰汁150-200ml·L-1+活性炭0.8-1.0g·L-1；
3）优势原球茎快速增殖：挑取直径在0.2-0.5cm，颜色绿色，且长势健壮的原球茎转接种到增殖培养基上进行增殖培养；所述的优势原球茎快速增殖的培养条件为：温度26-28℃，湿度50-60%，光照1200-1500lux，培养时间30-35天；所述步骤3）的增殖培养基为：花宝1号0.8-1.2g·L-1+花宝2号1.0-1.5 g·L-1+蔗糖23-25 g·L-1+牛肉蛋白胨1.2-1.5g·L-1+土豆泥50-80g·L-1+活性炭0.8-1.0g·L-1；
4）原球茎的继代增殖：待步骤3）中的原球茎长至直径大于0.5cm时，用解剖刀横向切割成两部分，接种在步骤3）所述的增殖培养基上进行继代增殖培养30±3天，获得一次继代增殖的原球茎；
5）原球茎的二次继代增殖：将上述步骤4）获得的增殖原球茎再次横向切割成两部分，再一次接种在步骤3）所述的增殖培养基上进行继代增殖培养60±3天，获得二次继代增殖的原球茎；
6）成苗培养：挑取步骤5）中二次继代增殖的原球茎接种在一步成苗培养基上，促其分化出实生苗；所述的一步成苗培养基为：花宝1号0.8-1.2g·L-1+花宝2号1.0-1.5 g·L-1+蔗糖23-25 g·L-1+牛肉蛋白胨1.2-1.5g·L-1+土豆泥50-80g·L-1+活性炭0.8-1.0g·L-1；
7）实生苗苗盘种植：将步骤6）获得的实生苗株系移入温室中，炼苗后洗净、杀菌，分别定植在盛有泥炭：树皮：蛭石质量比为1：1.5-2：1的苗盘中，盖上无纺布，喷水保湿，待组培苗缓苗后进行常规栽培管理；
8）实生苗2.8寸催花：步骤7）中所述的苗盘生长2-4个月后，将苗盘的实生苗换到2.8寸营养杯中，定植4-6个月，此后进行催花处理，直至花芽分化；
9）优势实生苗群体评价：待实生苗株系群体开花时，对实生苗进行评价，筛选出优势品系；
10）优势新品种的获得及花梗腋芽组培快繁：切取筛选出的优势品系的花梗腋芽，接种在花梗腋芽组培培养基中进行组培快繁，获得新品种；所述的花梗腋芽组培培养基为：1/2MS+6-BA 2.0-5.0 mg·L-1+NAA 0.2-1.0mg·L-1+蔗糖23-25g·L-1+牛肉蛋白胨0.8-1g·L-1+土豆泥100-150g·L-1。
2.如权利要求1所述的一种蝴蝶兰新品种选育方法，其特征在于，所述步骤2）的杂交种子快速无菌萌发的培养条件为：温度26-28℃，湿度50-60%，暗处理12-15天。
3.如权利要求1所述的一种蝴蝶兰新品种选育方法，其特征在于，所述步骤4）的原球茎的继代增殖的培养条件为温度26-28℃，湿度50-60%，光照1200-1500lux，培养时间30-35天。
4.如权利要求1所述的一种蝴蝶兰新品种选育方法，其特征在于，所述步骤6）的成苗培养的培养条件为：温度26-28℃，湿度50-60%，光照2500-3000lux，培养时间30天。
5.如权利要求1所述的一种蝴蝶兰新品种选育方法，其特征在于，所述步骤8）的实生苗2.8寸催花的培养条件为：白天温度22-25℃，夜晚温度17-20℃，光照10000-13000 lux。
6.如权利要求1所述的一种蝴蝶兰新品种选育方法，其特征在于，所述步骤10）的花梗腋芽组培快繁的培养条件为：温度25-28℃，湿度50-60%，暗处理25-30天后，光照1200-1500lux，光照培养时间30-35天。
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