CN110583488A - 石蒜属新品种‘桃红’组培快繁技术体系的建立方法 - Google Patents

石蒜属新品种‘桃红’组培快繁技术体系的建立方法 Download PDF

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郑玉红
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Abstract

本发明公开了一种石蒜属新品种‘桃红’组培快繁技术体系的建立方法。该方法以鳞茎块为外植体，对外植体进行消毒，经过不定芽的诱导、丛生芽的诱导、壮芽、壮苗和生根培养、炼苗和移栽步骤后建立了‘桃红’组培快繁技术体系。与其他石蒜属的原生种类相比，采用本发明的快繁技术体系培育石蒜属新品种‘桃红’时，利用其较耐高浓度植物生长调节剂的特点，在芽诱导和芽增殖阶段使用高浓度的植物生长调节剂，可缩短芽萌动的周期，提高芽增殖的效率。本发明的‘桃红’组培快繁技术可以极大的提高其繁殖系数和繁殖速度，为其推广应用奠定了技术基础。

Description

石蒜属新品种‘桃红’组培快繁技术体系的建立方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种石蒜属新品种‘桃红’组培快繁技术体系的建立方法。
背景技术
石蒜属(Lycoris Herb.)隶属石蒜科(Amaryllidaceae)，多年生草本植物。鳞茎卵球形，春季或秋季出叶，叶带状或剑形；春末或夏初休眠；花期7～9月，伞形花序有小花4～6朵；花黄色、红色、白色。花茎挺拔，花形优美，花色艳丽。本属所有种类均具有很高的观赏价值，现已逐渐成为新型的鲜切花、园林地被和盆栽的球根花卉。
‘桃红’是杭州植物园通过杂交育种选育的石蒜属新品种。由于杂交起源，可育性较差，几乎不结实；自然分球繁殖，速度慢，繁殖系数低；一个开花球平均每年分生1-2个子球，子球长大开花需3-4年左右时间。因此，快速繁殖技术体系的建立是‘桃红’推广应用的技术基础。
发明内容
针对上述现有技术中存在的缺陷，本发明提供一种石蒜属新品种‘桃红’的组培快繁技术体系的建立方法，为其推广应用奠定基础。
本发明采用以下技术方案：
一种石蒜属新品种‘桃红’组培快繁技术体系建立的方法，包括以下步骤：
(1)外植体的准备取直径3-5cm，健康的‘桃红’鳞茎，剥去外层鳞叶，切除全部根、1/3鳞茎盘和1/2～2/3鳞茎，保留鳞茎盘，毛刷洗净表面的泥土，根据鳞茎盘大小切成2-4块，每块鳞茎块的大小0.5～1.0cm2，84洗涤剂震荡洗涤15-50min，流水冲洗30-40min；然后将上述材料转移至超净工作台上进行灭菌消毒，并用无菌吸水纸吸干表面的水分，备用；
(2)不定芽的诱导将已灭菌的鳞茎块，以基盘向下的方式直接接种到不定芽诱导培养基上，培养基的组分为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+MS+5.0-8.0mg/L 6-BA+0.8-1.5mg/LNAA；经过20-25d的培养后，从外植体的鳞片间长出不定芽；培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间12h；长出不定芽后继续培养30-60d；
(3)丛生芽的诱导将不定芽转接到丛生芽培养基上进行培养，培养周期为30-40d；培养基配方为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+MS+3.0-5.0mg/L 6-BA+0.3-0.5mg/L NAA；培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h；
(4)壮芽将丛生芽接种到蔗糖40g/L+琼脂7.5g/L+MS+2.0-2.5mg/L 6-BA+0.2-0.3mg/L NAA培养基上进行壮芽培养，每30d继代一次，共培养60-90d，直至丛生芽长成直径2-3mm的小鳞茎；培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h；
(5)壮苗和生根培养壮苗和生根培养一次完成，具体方法是将上述小鳞茎转接到蔗糖40g/L+琼脂7.5g/L+MS+1.5-2.0mg/L 6-BA+0.1-0.2mg/L NAA+2.0-3.0mg/L IBA的培养基上，进行壮苗和生根共培养，直至长成直径3-5mm根3-5条的试管苗；培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h；
(6)炼苗和移栽炼苗在室内进行，将组培瓶开盖，置于自然散射光下，放置2-3d；炼苗完成后，用镊子将试管苗取出，洗去根部的培养基，移栽到10×10的穴盘中，栽培基质为泥炭土：珍珠岩：田园土＝1:1:1，栽培基质须经800-1000倍多菌灵消毒处理；之后进行正常的水肥管理。
上述技术方案中，进一步地，所述的外植体的取材可周年进行，优选为8月底至9月初。
进一步地，所述的步骤(1)中外层鳞叶的剥去方法为直接用手剥去。
本发明的有益效果在于：
‘桃红’为一种石蒜属新品种，由于该品种由杂交育种的方式育成，因此几乎不结实；依靠自然分球来繁殖，一个母球每年仅能分出子球1-2个，繁殖系数极低。本发明的‘桃红’组培快繁技术体系的建立可以极大的提高其繁殖系数和繁殖速度，对于这一优良品种的快速推广和应用具有重要的意义。
本发明方法中，‘桃红’组培快繁一年四季均可进行。但是从芽萌发和芽增殖的速度和效率来看，花期结束、叶片萌发之前即8月底至9月初是外植体取材的最佳时期。此时芽萌发(对应不定芽的诱导阶段)的时间为20-25天，芽增殖(对应丛生芽的诱导)的时间为30-40天，芽增殖的效率为其他取材时间的10-15倍。
与其他石蒜属的原生种类相比，石蒜属新品种‘桃红’较耐高浓度植物生长调节剂。采用本发明的快繁技术体系培育石蒜属新品种‘桃红’时，利用其较耐高浓度植物生长调节剂的特点，在芽诱导(对应不定芽的诱导)和芽增殖阶段(对应丛生芽的诱导)使用较高浓度的植物生长调节剂，可缩短芽萌动的周期，提高芽增殖的效率。
附图说明
图1为组培快繁(左)和切块繁殖(右)的繁殖系数对比图。
具体实施方式
实施例1‘桃红’的组培快繁
(1)外植体的准备：于2018年9月，取3年生直径约5cm，健康的‘桃红’鳞茎，剥去外层鳞叶(直接用手剥去)，切除全部根、1/3鳞茎盘和2/3鳞茎，保留鳞茎盘，毛刷洗净表面的泥土，根据鳞茎盘大小切成4块，每块大小0.5cm2，84洗涤剂震荡洗涤30min，流水冲洗30min。然后将上述材料转移至超净工作台上用体积浓度75％的酒精漂洗30s，质量浓度0.1％HgCl2灭菌40min，无菌水冲洗4-5遍，无菌吸水纸吸干表面的水分，备用。
(2)不定芽的诱导将已灭菌的鳞茎块，以基盘向下的方式直接接种到不定芽诱导培养基上，培养基的组分为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+MS+8.0mg/L 6-BA+1.5mg/L NAA。约经过20d的培养后，从外植体的鳞片间长出不定芽。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间12h。长出不定芽后继续培养60d。
(3)丛生芽的诱导将不定芽转接到丛生芽诱导培养基上进行丛生芽的诱导，培养周期30d。培养基配方为蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+MS+3.0mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。
(4)壮芽将丛生芽切开、分解，转接到蔗糖40g/L+琼脂7.5g/L+MS+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA培养基上，每30d继代一次，共培养90d，直至丛生芽长成小鳞茎。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。
(5)壮苗和生根培养壮苗和生根培养可以一次完成。具体方法是将上述小鳞茎转接到蔗糖40g/L+琼脂7.5g/L+MS+1.5mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+3.0mg/L IBA培养基上，直至长成鳞茎直径3-5mm、重约0.5g根3-5条的试管苗。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。
(6)炼苗和移栽炼苗在室内进行。将组培瓶开盖，置于自然散射光下，放置2d。炼苗完成后，用镊子将试管苗取出，洗去根部的培养基，移栽到10×10的穴盘中。栽培基质为泥炭土：珍珠岩：田园土＝1:1:1，栽培基质须经800倍多菌灵消毒处理。之后进行正常的水肥管理。
实施例2
‘桃红’的组培快繁
(1)外植体的准备：于2018年9月，取3年生直径约5cm，健康的‘桃红’鳞茎，剥去外层鳞叶(直接用手剥去)，切除全部根、1/3鳞茎盘和2/3鳞茎，保留鳞茎盘，毛刷洗净表面的泥土，根据鳞茎盘大小切成4块，每块大小0.5cm2，84洗涤剂震荡洗涤30min，流水冲洗30min。然后将上述材料转移至超净工作台上用体积浓度75％的酒精漂洗30s，质量浓度0.1％HgCl2灭菌40min，无菌水冲洗4-5遍，无菌吸水纸吸干表面的水分，备用。
(2)不定芽的诱导将已灭菌的鳞茎块，以基盘向下的方式直接接种到不定芽诱导培养基上，培养基的组分为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+MS+5.5mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA。约经过25d的培养后，从外植体的鳞片间长出不定芽。长出不定芽后继续培养30d。培养温度25±1℃，光照强度200μmol·m-2·s-1，光照时间12h。
(3)丛生芽的诱导将不定芽转接到丛生芽诱导培养基上进行丛生芽的诱导。培养周期40d。培养基配方为蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+MS+3.0mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA。培养温度25±1℃，光照强度200μmol·m-2·s-1，光照时间16h。
(4)壮芽将丛生芽切开、分解，转接到蔗糖40g/L+琼脂7.5g/L+MS+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA培养基上，每30d继代一次，共培养60d，直至丛生芽长成小鳞茎。培养温度25±1℃，光照强度250μmol·m-2·s-1，光照时间16h。
(5)壮苗和生根培养壮苗和生根培养可以一次完成。具体方法是将上述小鳞茎转接到蔗糖40g/L+琼脂7.5g/L+MS+1.5mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+2.0mg/L IBA培养基上，直至长成鳞茎直径3-5mm、重约0.5g根3-5条的试管苗。培养温度25±1℃，光照强度250μmol·m-2·s-1，光照时间16h。
(6)炼苗和移栽炼苗在室内进行。将组培瓶开盖，置于自然散射光下，放置3d。炼苗完成后，用镊子将试管苗取出，洗去根部的培养基，移栽到10×10的穴盘中。栽培基质为泥炭土：珍珠岩：田园土＝1:1:1，栽培基质须经1000倍多菌灵消毒处理。之后进行正常的水肥管理。
图1为组培快繁(左)和切块繁殖(右)的繁殖系数对比图，由图可知本发明的‘桃红’组培快繁技术体系的建立可以极大的提高其繁殖系数。表1为石蒜属组培快繁激素配比，由表可知与其他石蒜属的原生种类相比，本发明的‘桃红’较耐高浓度植物生长调节剂，为其在芽诱导和芽增殖阶段使用高浓度的植物生长调节剂提供可能，从而可缩短芽萌动的周期，提高芽增殖的效率。
表1石蒜属组培快繁激素配比

Claims (3)

1.一种石蒜属新品种‘桃红’组培快繁技术体系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)外植体的准备取直径3-5cm，健康的‘桃红’鳞茎，剥去外层鳞叶，切除全部根、1/3鳞茎盘和1/2～2/3鳞茎，保留鳞茎盘，毛刷洗净表面的泥土，根据鳞茎盘大小切成2-4块，每块鳞茎块的大小0.5～1.0cm2，84洗涤剂震荡洗涤15-50min，流水冲洗30-40min；然后将上述材料转移至超净工作台上进行消毒灭菌，并用无菌吸水纸吸干表面的水分，备用；
(2)不定芽的诱导将已灭菌的鳞茎块，以基盘向下的方式直接接种到不定芽诱导培养基上，培养基的组分为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+MS+5.0-8.0mg/L 6-BA+0.8-1.5mg/L NAA；经过20-25d的培养后，从外植体的鳞片间长出不定芽；长出不定芽后继续培养30-60d；培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间12h；
(3)丛生芽的诱导将不定芽转接到丛生芽培养基上进行培养，培养周期为30-40d；培养基配方为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+MS+3.0-5.0mg/L 6-BA+0.3-0.5mg/L NAA；培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h；
(4)壮芽将丛生芽接种到蔗糖40g/L+琼脂7.5g/L+MS+2.0-2.5mg/L 6-BA+0.2-0.3mg/LNAA培养基上进行壮芽培养，每30d继代一次，共培养60-90d，直至丛生芽长成直径2-3mm的小鳞茎；培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h；
(5)壮苗和生根培养壮苗和生根培养一次完成，具体方法是将上述小鳞茎转接到蔗糖40g/L+琼脂7.5g/L+MS+1.5-2.0mg/L 6-BA+0.1-0.2mg/L NAA+2.0-3.0mg/L IBA的培养基上，进行壮苗和生根共培养，直至长成直径3-5mm根3-5条的试管苗；培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h；
(6)炼苗和移栽炼苗在室内进行，将组培瓶开盖，置于自然散射光下，放置2-3d；炼苗完成后，用镊子将试管苗取出，洗去根部的培养基，移栽到10×10的穴盘中，栽培基质为泥炭土：珍珠岩：田园土＝1:1:1，栽培基质须经800-1000倍多菌灵消毒处理；之后进行正常的水肥管理。
2.根据权利要求1所述的一种石蒜属新品种‘桃红’组培快繁技术体系的建立方法，其特征在于，所述的外植体的取材时间为8月底至9月初。
3.根据权利要求1所述的一种石蒜属新品种‘桃红’组培快繁技术体系的建立方法，其特征在于，所述的步骤(1)中外层鳞叶的剥去方法为直接用手剥去。
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