CN104255491B - 一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法 - Google Patents
一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法，包括消毒灭菌，初代培养，继代培养，壮苗培养，生根培养，炼苗，移栽步骤。通过采用本发明的金叶龟甲冬青组培繁殖方法，能够提高金叶龟甲冬青的繁殖系数，加快金叶龟甲冬青的繁殖速度，提高金叶龟甲冬青的成活率，为快速繁殖优良的金叶龟甲冬青种苗提供技术支持，满足市场对金叶龟甲冬青的日益增长的需求。
Description
技术领域
本涉及冬青繁殖领域，尤其涉及一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法。
背景技术
金叶龟甲冬青是冬青科冬青属彩叶植物，具有常绿、耐低温、植株低矮紧凑等特点。是我国是近几年从国外引进的彩叶新品种，其老叶片浓绿具光泽，新叶片金黄色，色泽极其亮丽。近年来龟甲冬青在国内外绿化产业中需求旺盛，因此应加快其繁殖速度，满足其日益增加的市场需求。金叶龟甲冬青的常规繁殖方法有扦插繁殖和嫁接繁殖，扦插繁殖的繁殖周期为1年左右，成活率90％左右，繁殖系数小于等于1；嫁接繁殖的繁殖周期为一年以上，成活率60％-80％左右，繁殖系数小于等于1，由于其繁殖速度较慢，繁殖系数和成活率低限制了它的推广应用。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法，通过组培繁殖来提高金叶龟甲冬青的繁殖系数、繁殖速度。
为达到上述目的，本发明是通过以下的技术方案来实现的，一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法，包括以下步骤：
1)消毒灭菌，选取金叶龟甲冬青的幼嫩茎段为外植体，用水清洗干净后，用消毒液消毒；
2)初代培养，将消毒灭菌后的金叶龟甲冬青外植体接种在初代培养基上，无菌培养室培养30d；
3)继代培养，将初代培养得到的芽苗切成带腋芽的长0.5cm的茎段，接种在继代培养基上，无菌培养室培养25d-35d，长成0.8-1.2cm的丛生芽苗；
4)壮苗培养，将继代培养基上的丛生芽苗切下后接种在壮苗培养基上，无菌培养室培养20d-30d；
5)生根培养，当壮苗培养基上的芽苗长至3～4㎝时，转移到生根培养基上培养，无菌培养室培养40d-50d；
6)炼苗，将经过生根培养的组培苗连同生根培养基移至温度23±2℃的温室内放置3d-5d天；
7)移栽，将幼苗取出，用水将组培苗根部的培养基清洗干净，种入铺有栽培基质的苗床，大棚栽培20d-30d。
其中初代培养基：包括MS+玉米素(ZT)0.5-1.0mg/L+萘乙酸(NAA)0.1mg/L+蔗糖25g/L+琼脂7g/L，且培养基的pH值为5.6～5.8；
继代培养基：包括MS+玉米素(ZT)0.5mg/L+萘乙酸(NAA)0.2mg/L+蔗糖25g/L+琼脂7g/L，且培养基的pH值为5.6～5.8；
壮苗培养基：包括MS+玉米素(ZT)0.5mg/L+萘乙酸(NAA)0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，且培养基的pH值为5.6～5.8；
生根培养基：包括1/2MS+吲哚丁酸(IBA)0.1mg/L+萘乙酸(NAA)0.5mg/L+活性炭3g/L+蔗糖20g/L，且培养基的pH值为5.6～5.8；
栽培基质：包括土壤、蛭石、泥炭，土壤、蛭石、泥炭按体积比2:1:1充分混匀。
所述土壤采用经耕作并栽培过花木、蔬菜的土壤，土壤成分和结构适于金叶龟甲冬青的生长，有利于移栽幼苗的成活。
所述步骤1)中用消毒液消毒，过程为先用体积浓度75％酒精浸泡20s，用无菌水冲洗外植体至少3次，每次冲洗时间不少于5min；再转入质量浓度0.1％的升汞溶液(HgCl2)浸泡8-9min，用无菌水冲洗干净后，用灭菌纸将外植体表面的水分吸干。
步骤2)中培养条件为：温度20±2℃、光照强度1000～1500lx、光照时间10～12h/d、培养地点无菌培养室。
所述步骤3)、4)、5)中培养条件为：温度25±2℃、光照强度1500～2000lx、光照时间12～14h/d、培养地点无菌培养室。
步骤3)中每25d-35d将长出的丛生芽苗切下，继续继代培养一次，继代培养3次后，进行壮苗培养。通过反复切割，继代培养后增殖倍数可达5倍左右。
步骤7)中移栽后喷施稀释800-1000倍的甲基托布津或1000倍多菌灵药液，每隔一周喷施一次，连续3-4次。
步骤7)中移栽初期7d-10d内，全封闭管理并遮阴，保持苗床和空气的湿度在90％左右，温度为23±2℃。
有益效果：与现有技术相比，本发明的优点在于：
1)提高金叶龟甲冬青的繁殖系数，繁殖系数可达4-6倍；
2)加快金叶龟甲冬青的繁殖速度，繁殖周期缩短至200-233d；
3)提高金叶龟甲冬青的成活率，成活率达到93-95％。
具体实施方式
下面结合实例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1
选取金叶龟甲冬青的当年生带有腋芽的幼嫩茎段为外植体，将外植体放在流水下反复冲洗1h，加入适量的洗涤剂浸泡清洗3次，边浸泡边振荡，冲洗干净后移至超净工作台进行下一步的消毒处理。消毒处理为：先用体积浓度75％酒精浸泡20s，用无菌水反复冲洗振荡外植体3次，每次冲洗7min；再转入质量浓度0.1％的升汞(HgCl2)消毒8min，用无菌水反复冲洗干净后，用灭菌纸将外植体表面的水分吸干。
将经过消毒灭菌的金叶龟甲冬青外植体接种在初代培养基上，初代培养基的配方为：MS+ZT0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖25g/L+琼脂7g/L，PH值5.6。培养条件为：温度20±2℃、光照强度1000lx、光照时间10h/d的无菌培养室。外植体接种在初代培养基上培养10d，腋芽开始萌动，30d后长为高2cm左右的芽苗。通过初代培养，腋芽诱导率达94％。
将初代培养得到的芽苗切成带腋芽的长0.5cm的茎段，接种在继代培养基上，继代培养基的配方为：MS+ZT0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖25g/L+琼脂7g/L，PH值5.6。培养条件为：温度25±2℃、光照强度1500lx、光照时间12h/d的无菌培养室。35d可长成1.2cm的丛生芽苗，将丛生芽切下，继续接种在继代培养基上，每35d继代一次。当继代培养3代后，继代培养后增殖倍数可达6倍左右，此时可进行壮苗培养。
将继代培养基上的小苗切下后接种在壮苗培养基上，壮苗培养基配方为：MS+ZT0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，PH值5.6左右。培养条件为：温度25±2℃、光照强度1500lx、光照时间12h/d的无菌培养室。壮苗培养30d，将健壮的小苗移入生根培养基培养。
当健壮的金叶龟甲单位无根苗长至3～4cm时，转移到生根培养基上培养。生根培养基配方为：1/2MS+IBA0.1mg/L+NAA0.5mg/L+活性炭3g/L+蔗糖20g/L，PH值5.6左右。培养条件为：温度25±2℃、光照强度1500lx、光照时间12h/d的无菌培养室。12d即可生出白色的根，生根率达100％，50d每苗可分化出4-6条根，即可进行炼苗移栽。
金叶龟甲冬青组培苗炼苗连同生根培养基可先在温度23±2℃的温室内放置3d天，然后进行移栽。
苗床建在普通单体的塑料大棚内，床宽1.2m，床四周砌高30cm，床底整平，铺上栽培基质。栽培基质包括土壤、蛭石、泥炭，按体积比土壤：蛭石：泥炭＝2:1:1混合，栽培基质须经过灭菌，充分混匀后使用，土壤采用经耕作并栽培过花木、蔬菜的土壤。移栽时，将幼苗取出，用清水将金叶龟甲冬青组培苗根部的固体培养基清洗干净，同时应尽量减少伤根。种入苗床后，选择清洁水浇灌，并喷施稀释800倍的甲基托布津药液，以后每隔一周喷施一次，连续3次。移栽初期即7d内，全封闭管理，进行遮阴，要特别注意保持苗床和空气的湿度和温度，湿度保持在85％，温度23±2℃，在20d逐步通风，并除去覆盖物。成活率可达93％。
实施例2
选取金叶龟甲冬青的当年生带有腋芽的幼嫩茎段为外植体，将外植体放在流水下反复冲洗1h，加入适量的洗涤剂浸泡清洗3次，边浸泡边振荡，冲洗干净后移至超净工作台进行下一步的消毒处理。消毒处理为：先用体积浓度75％酒精浸泡20s，用无菌水反复冲洗振荡外植体5次，每次冲洗6min；再转入质量浓度0.1％的升汞(HgCl2)消毒9min，用无菌水反复冲洗干净后，用灭菌纸将外植体表面的水分吸干。
将经过消毒灭菌的金叶龟甲冬青外植体接种在初代培养基上，初代培养基的配方为：MS+ZT1.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖25g/L+琼脂7g/L，PH值5.8。培养条件为：温度20±2℃、光照强度1500lx、光照时间12h/d的无菌培养室。外植体接种在初代培养基上培养7d，腋芽开始萌动，30d后长为高2cm左右的芽苗。通过初代培养，腋芽诱导率达96％。
将初代培养得到的芽苗切成带腋芽的长0.5cm的茎段，接种在继代培养基上，继代培养基的配方为：MS+ZT0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖25g/L+琼脂7g/L，PH值5.8。培养条件为：温度25±2℃、光照强度2000lx、光照时间14h/d的无菌培养室。25d左右可长成0.8cm的丛生芽苗，将丛生芽切下，继续接种在继代培养基上，每25d继代一次。当继代培养3代后，继代培养后增殖倍数可达4倍左右，此时可进行壮苗培养。
将继代培养基上的小苗切下后接种在壮苗培养基上，壮苗培养基配方为：MS+ZT0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，PH值5.8左右。培养条件为：温度25±2℃、光照强度2000lx、光照时间14h/d的无菌培养室。壮苗培养20d，将健壮的小苗移入生根培养基培养。
当健壮的金叶龟甲单位无根苗长至3～4cm时，转移到生根培养基上培养。生根培养基配方为：1/2MS+IBA0.1mg/L+NAA0.5mg/L+活性炭3g/L+蔗糖20g/L，PH值5.8左右。培养条件为：温度25±2℃、光照强度2000lx、光照时间14h/d的无菌培养室。8d即可生出白色的根，生根率达100％，40d每苗可分化出4-6条根，即可进行炼苗移栽。
金叶龟甲冬青组培苗炼苗连同生根培养基可先在温度23±2℃的温室内放置5d天，然后进行移栽。
苗床建在普通单体的塑料大棚内，床宽1.2m，床四周砌高30cm，床底整平，铺上栽培基质。栽培基质包括土壤、蛭石、泥炭，按体积比土壤：蛭石：泥炭＝2:1:1混合，栽培基质须经过灭菌，充分混匀后使用，土壤采用经耕作并栽培过花木、蔬菜的土壤。移栽时，将幼苗取出，用清水将金叶龟甲冬青组培苗根部的固体培养基清洗干净，同时应尽量减少伤根。种入苗床后，选择清洁水浇灌，并喷施稀释1000倍的甲基托布津药液，以后每隔一周喷施一次，连续4次。移栽初期即10d内，全封闭管理，进行遮阴，要特别注意保持苗床和空气的湿度和温度，湿度保持在95％，温度23±2℃，在30d逐步通风，并除去覆盖物。成活率可达95％。
实施例3
选取金叶龟甲冬青的当年生带有腋芽的幼嫩茎段为外植体，将外植体放在流水下反复冲洗1h，加入适量的洗涤剂浸泡清洗3次，边浸泡边振荡，冲洗干净后移至超净工作台进行下一步的消毒处理。消毒处理为：先用体积浓度75％酒精浸泡20s，用无菌水反复冲洗振荡外植体5次，每次冲洗5min；再转入质量浓度0.1％的升汞(HgCl2)消毒8min，用无菌水反复冲洗干净后，用灭菌纸将外植体表面的水分吸干。
将经过消毒灭菌的金叶龟甲冬青外植体接种在初代培养基上，初代培养基的配方为：MS+ZT0.8mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖25g/L+琼脂7g/L，PH值5.7。培养条件为：温度20±2℃、光照强度1200lx、光照时间11h/d的无菌培养室。外植体接种在初代培养基上培养8d，腋芽开始萌动，30d后长为高2cm左右的芽苗。通过初代培养，腋芽诱导率达95％。
将初代培养得到的芽苗切成带腋芽的长0.5cm的茎段，接种在继代培养基上，继代培养基的配方为：MS+ZT0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖25g/L+琼脂7g/L，PH值5.7。培养条件为：温度25±2℃、光照强度1800lx、光照时间13h/d的无菌培养室。30d左右可长成1cm的丛生芽苗，将丛生芽切下，继续接种在继代培养基上，每30d继代一次。当继代培养3代后，继代培养后增殖倍数可达5倍左右，此时可进行壮苗培养。
将继代培养基上的小苗切下后接种在壮苗培养基上，壮苗培养基配方为：MS+ZT0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，PH值5.7左右。培养条件为：温度25±2℃、光照强度18lx、光照时间13h/d的无菌培养室。壮苗培养25d，将健壮的小苗移入生根培养基培养。
当健壮的金叶龟甲单位无根苗长至3～4㎝时，转移到生根培养基上培养。生根培养基配方为：1/2MS+IBA0.1mg/L+NAA0.5mg/L+活性炭3g/L+蔗糖20g/L，PH值5.7左右。培养条件为：温度25±2℃、光照强度1800lx、光照时间13h/d的无菌培养室。10d即可生出白色的根，生根率达100％，45d每苗可分化出4-6条根，即可进行炼苗移栽。
金叶龟甲冬青组培苗炼苗连同生根培养基可先在温度23±2℃的温室内放置4d天，然后进行移栽。
苗床建在普通单体的塑料大棚内，床宽1.2m，床四周砌高30cm，床底整平，铺上栽培基质。栽培基质包括土壤、蛭石、泥炭，按体积比土壤：蛭石：泥炭＝2:1:1混合，栽培基质须经过灭菌，充分混匀后使用，土壤采用经耕作并栽培过花木、蔬菜的土壤。移栽时，将幼苗取出，用清水将金叶龟甲冬青组培苗根部的固体培养基清洗干净，同时应尽量减少伤根。种入苗床后，选择清洁水浇灌，并喷施稀释1000倍多菌灵药液，以后每隔一周喷施一次，4次。移栽初期即7d内，全封闭管理，进行遮阴，要特别注意保持苗床和空气的湿度和温度，湿度保持在90％，温度23±2℃，在25d逐步通风，并除去覆盖物。成活率可达96％。
Claims (7)
1.一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)消毒灭菌，选取金叶龟甲冬青的幼嫩茎段为外植体，用水清洗干净后，用消毒液消毒；
2)初代培养，将消毒灭菌后的金叶龟甲冬青外植体接种在初代培养基上，无菌培养室培养30d；
3)继代培养，将初代培养得到的芽苗切成带腋芽的长0.5cm的茎段，接种在继代培养基上，无菌培养室培养25d-35d，长成0.8-1.2cm的丛生芽苗；
4)壮苗培养，将继代培养基上的丛生芽苗切下后接种在壮苗培养基上，无菌培养室培养20d-30d；
5)生根培养，当壮苗培养基上的芽苗长至3-4㎝时，转移到生根培养基上培养，无菌培养室培养40d-50d；
6)炼苗，将经过生根培养的组培苗连同生根培养基移至温度23±2℃的温室内放置3d-5d天；
7)移栽，将幼苗取出，用水将组培苗根部的培养基清洗干净，种入铺有栽培基质的苗床，大棚栽培20d-30d；
其中，初代培养基：包括MS+玉米素0.5-1.0mg/L+萘乙酸0.1mg/L+蔗糖25g/L+琼脂7g/L，且培养基的pH值为5.6～5.8；
继代培养基：包括MS+玉米素0.5mg/L+萘乙酸0.2mg/L+蔗糖25g/L+琼脂7g/L，且培养基的pH值为5.6～5.8；
壮苗培养基：包括MS+玉米素0.5mg/L+萘乙酸0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，且培养基的pH值为5.6～5.8；
生根培养基：包括1/2MS+吲哚丁酸0.1mg/L+萘乙酸0.5mg/L+活性炭3g/L+蔗糖20g/L，且培养基的pH值为5.6～5.8；
栽培基质：包括土壤、蛭石、泥炭，土壤、蛭石、泥炭按体积比2:1:1充分混匀；
所述土壤为经耕作并栽培过花木、蔬菜的土壤。
2.根据权利要求1所述的一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法，其特征在于，所述步骤1)中用消毒液消毒，过程为先用体积浓度75％酒精浸泡20s，用无菌水冲洗外植体至少3次，每次冲洗时间不少于5min；再转入质量浓度0.1％的升汞溶液(HgCl2)浸泡8-9min，用无菌水冲洗干净后，用灭菌纸将外植体表面的水分吸干。
3.根据权利要求1所述的一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法，其特征在于，所述步骤2)中培养条件为：温度20±2℃、光照强度1000～1500lx、光照时间10～12h/d、培养地点无菌培养室。
4.根据权利要求1所述的一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法，其特征在于，所述步骤3)、4)、5)中培养条件为：温度25±2℃、光照强度1500～2000lx、光照时间12～14h/d、培养地点无菌培养室。
5.根据权利要求1所述的一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法，其特征在于，所述步骤3)中每25d-35d将长出的丛生芽苗切下，继续继代培养一次，继代培养3次后，进行壮苗培养。
6.根据权利要求1所述的一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法，其特征在于，所述步骤7)中移栽后喷施稀释800-1000倍的甲基托布津或1000倍多菌灵药液，每隔一周喷施一次，连续3-4次。
7.根据权利要求1所述的一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法，其特征在于，所述步骤7)中移栽初期7d-10d内，全封闭管理并遮阴，保持苗床和空气的湿度在85～95％，温度为23±2℃。
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |