CN107667860A - 一种山姜的组织培养繁殖方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种山姜的组织培养繁殖方法，属于植物组织培养技术领域，S1)外植体取材与消毒；S2)不定芽诱导；S3)不定芽增殖；S4)生根培养；S5)炼苗与移栽；步骤S1)中以山姜地下茎为原料，经过三次消毒处理获得外植体‑粉红色嫩芽。本发明培养出的山姜周期短、繁殖快和成活率高；同时本发明的组织培养繁殖方法也能应用于红丰收山姜的繁殖。

Description

一种山姜的组织培养繁殖方法

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，尤其涉及一种山姜的组织培养繁殖方法。

背景技术

“红丰收”山姜(Alpinia zerumbet×henryi‘Harvest’)是以艳山姜(Alpiniazerumbet)为母本，小草蔻(Alpiniahenryi)的变种红苞小草蔻为父本，经人工杂交、多年选育而来的姜科山姜属(Alpinia)新型常绿宿根花卉品种，其生长习性与母本艳山姜生长习性较为相似，对广东地区自然环境具有较强的适应性。

“红丰收”山姜的株高1.1～1.7m，叶片11～15片，叶片深绿色或浅绿，且具有不规则放射状深色斑纹；“红丰收”山姜为总状花序顶生，微垂，长15～30cm，径4～8cm，每一花序通常具有25～30个花苞，花序较松散；小苞片粉红色，每苞片有小花2～3朵；小花白色；花冠乳白色，顶端粉红色；唇瓣黄色且有紫红色纹彩；蒴果为卵圆形，熟时为橙红色，花萼宿存。因其株型整齐、花型美、色艳、花期较长且栽培管理容易，可应用于各类公共绿地、庭院及道路两旁绿地。另外，“红丰收”山姜的产花期长达半年，切花在正常水养条件下可观赏3～4天。目前，市场鲜有该类型切花，可作为优质新型切花推广。

“红丰收”山姜繁殖主要采用分切根状茎繁殖，每年可获得2～3倍繁殖增长率，增长率较低。若长期采用分株繁殖，容易导致微劣突变性状积累，也易感染病毒，不利于“红丰收”山姜的品种更新。组织培养繁殖成活率高、繁殖增长率高、生长周期短，可在短期内进行大规模生长；然而，尚未有适合“红丰收”山姜组织培养繁殖的相关方法。

因此，有必要研发出一种山姜的组织培养繁殖方法，其培养出的山姜周期短、繁殖快和成活率高，且也能应用于红丰收山姜的繁殖。

发明内容

本发明目的在于克服现有方法存在的不足，而提供一种山姜的组织培养繁殖方法，该方法培养出的山姜周期短、繁殖快和成活率高，且也能应用于红丰收山姜的繁殖。

为实现上述目的，本发明采取的方法方案为：一种山姜的组织培养繁殖方法，其包括以下步骤：

S1)外植体取材与消毒：将洗净后的山姜地下茎用消毒液进行浸泡消毒，再将消毒后的山姜地下茎置于无菌、黑暗的环境中进行催芽培养；山姜地下茎催芽培养期间，喷洒消毒液进行消毒；待山姜地下茎催芽培养、萌发出新芽后，切去新芽外层包裹的叶鞘，以1～2cm粉红色嫩芽作为外植体，并对外植体进行消毒；

S2)不定芽诱导培养：将步骤S1)中消毒后的外植体接种到不定芽诱导培养基中，进行不定芽的诱导、培养；

S3)不定芽增殖培养：切下步骤S2)中诱导出的不定芽，并将切下的不定芽接种到不定芽增殖培养基中进行继代培养；

S4)生根培养：切下步骤S3)中继代培养的3～4cm不定芽，并将切下的不定芽接种到生根培养基中进行生根培养(包括壮苗培养)，以形成试管苗；

S5)炼苗与移栽：取步骤S4)中培养的6～8cm试管苗，洗净试管苗底部培养基，并将试管苗移栽至栽培基质中，正常培养管理即可获得山姜植株。

本发明以山姜地下茎为原料，地下茎感染有多种微生物；若直接对地下茎进行消毒，由于叶鞘的层层紧密包裹，很难直接将叶鞘内的微生物消灭干净，污染率常高达70％以上，这将影响后续的山姜繁殖，如繁殖慢、成活率低。本发明先对地下茎采取浸泡消毒处理，然后将地下茎置于黑暗条件下进行催芽培养，催芽培养期间再喷施消毒液进行杀菌；最后对剥去外层叶鞘的嫩芽进行消毒处理，催生的新芽远离地下茎，作为外植体的粉红色嫩芽避免接触其他物质和受到感染；本发明对外植体采取三次消毒处理，消毒处理后的外植体污染率可降低至30％～35％，消毒效果显著，这将有利于后续的组织培养繁殖：大大缩短繁殖周期和提高山姜植株的成活率。

优选地，外植体需采用体积分数为70％～75％的酒精浸泡20～30s，无菌水清洗2～3，之后采用质量分数为0.08％～0.12％的升汞溶液消毒8～12min，最后用无菌水冲洗6～8遍，洗净即可。

作为上述技术方案的改进，在步骤S1)中，所述消毒液为多菌灵800～1200 倍稀释液；山姜地下茎浸泡消毒的时间为20～30min；催芽培养的温度为 25～30℃，催芽培养的时间为10～15d；山姜地下茎催芽培养期间，每3天喷洒1 次消毒液。

优选地，所述消毒液为多菌灵1000倍稀释液。

作为上述技术方案的进一步改进，在步骤S2)中，所述不定芽诱导培养基为含有1～3mg/l 6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、0.1～0.3mg/l萘乙酸(NAA)、25～35g/l 蔗糖和4～8g/l琼脂的MS培养基，所述不定芽诱导培养基的pH值为5～6；不定芽诱导的条件为：室内培养的温度为26～30℃，相对湿度为40％～80％，光照强度为1800～2000lx，光照时间为每天10～14h；不定芽诱导培养的时间为20～30d。

优选地，所述不定芽诱导培养基中蔗糖的浓度为30g/l，琼脂的浓度为6g/l；不定芽诱导培养基的pH值为5.8，光照时间为每天12h。

作为上述技术方案的进一步改进，在步骤S3)中，所述不定芽增殖培养基为含有1～2mg/l 6-糠氨基嘌呤(KT)、0.05～0.1mg/l萘乙酸、25～35g/l蔗糖和 4～8g/l琼脂的MS培养基，所述不定芽增殖培养基的pH值为5～6。

优选地，所述不定芽增殖培养基中蔗糖的浓度为30g/l，琼脂的浓度为6g/l，不定芽增殖培养基的pH值为5.8。

作为上述技术方案的更进一步改进，在步骤S3)中，不定芽增殖培养的条件为：室内培养的温度为26～30℃，相对湿度为40％～80％，光照强度为1800～2000 lx，光照时间为每天10～14h；继代培养的时间为40～50d；优选地，光照时间为每天12h。

在不定芽增殖中，40～50d可完成1个继代增殖周期，每个不定芽在1个继代增殖周期内可增殖成4～7个芽，增值倍率达4～7倍，继代6次以上仍可保持稳定的增长率。在继代培养过程中，本发明外植体有1～2条白色不定根生出，不定根生长迅速，20d内长度可达4cm以上。另外，本发明在不定芽增殖培养基添加KT和NAA，KT可显著促使不定芽萌动，NAA可显著促使不定芽伸长生长，产生大量的不定芽。

作为上述技术方案的进一步改进，在步骤S4)中，所述生根培养基为含有 25～35g/l蔗糖和4～8g/l琼脂的MS培养基，所述生根培养基的pH值为5～6；优选地，所述生根培养基中蔗糖的浓度为30g/l，琼脂的浓度为6g/l，生根培养基的pH值为5.8。

本发明不定芽在不添加任何生长激素的培养基中即可生长，生根率达95％以上，不定芽接种5d后即有白色不定根生出，培养30d后每株苗不定根数可达4条以上，大多数不定根长度达5cm以上，根系生长健壮。

作为上述技术方案的更进一步改进，在步骤S4)中，生根培养的条件为：室内培养的温度为26～30℃，相对湿度为40％～80％，光照强度为1800～2000lx，光照时间为每天10～14h；生根培养30～35d后即可培养成试管苗；优选地，光照时间为每天12h。

作为上述技术方案的进一步改进，在步骤S5)中，所述栽培基质为细砂、珍珠岩和泥炭土的混合物，所述细砂、珍珠岩和泥炭土的质量比为0.8～1.2∶ 0.7～1.2∶0.9～1.3。

优选地，细砂、珍珠岩和泥炭土的质量比为1∶1∶1。

作为上述技术方案的进一步改进，在步骤S5)中，在试管苗清洗、移栽前，试管苗在温度为20～25℃的开口容器中培养3～5d；试管苗移栽至栽培基质后，试管苗进行遮阴培养，培养的温度为20～25℃，培养的相对湿度为60％～80％；山姜植株的成活率高达90％以上。

作为上述技术方案的进一步改进，所述山姜是红丰收山姜，所述红丰收山姜是以艳山姜为母本、小草寇为父本人工杂交的品种。

本发明的有益效果在于：本发明提供一种山姜的组织培养繁殖方法，本发明是以山姜地下茎为原料，经过三次消毒处理获得外植体-粉红色嫩芽，消毒处理后的外植体污染率可降低至30％～35％，该方法能短期内获得大量无菌种苗，植株生长健壮，生产成本低，利于大规模市场推广；不定芽的诱导、增殖和生根过程中筛选出3种不同的培养基，3种培养基相辅相成，能促进不定芽的诱导、增殖和生根，如不定芽无需在MS培养基中添加生长激素，即可进行生根诱导、长出不定根，不定根生长迅速，生长势旺盛，可大大缩短生长周期；本发明培养出的试管苗生长势旺盛、植株健壮、根系发达，移栽成活率高达90％，有效解决了工厂化育苗的问题。

具体实施方式

为更好地说明本发明的目的、方法方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

本实施例提供一种红丰收山姜的组织培养繁殖方法，其包括以下步骤：

S1)外植体取材与消毒：将洗净后的红丰收山姜地下茎用多菌灵稀800倍释液浸泡消毒20min，将消毒后的红丰收山姜地下茎置于无菌、黑暗且温度为 25℃的湿润砂子中催芽培养15d，红丰收山姜地下茎催芽培养期间，每3天要喷洒1次多菌灵800倍稀释液；红丰收山姜地下茎催芽培养结束后会萌发出新芽，切去新芽外层包裹的叶鞘，以1～2cm的粉红色嫩芽作为外植体，并对所述外植体进行消毒；

S2)不定芽诱导培养：将步骤S1)中消毒后的外植体接种到不定芽诱导培养基中，进行不定芽的培养、诱导；所述不定芽诱导培养基为含有1mg/l 6-BA、 0.1mg/l NAA、25g/l蔗糖和4g/l琼脂的MS培养基，所述不定芽诱导培养基的 pH值为5；不定芽诱导培养的条件为：室内培养的温度为26℃，相对湿度为40％，光照强度为1800lx，光照时间为每天10h；不定芽诱导培养的时间为30d；

S3)不定芽增殖培养：切下步骤S2)中诱导出的不定芽，并将切下的不定芽接种到不定芽增殖培养基中进行继代培养；所述不定芽增殖培养基为含有1 mg/l KT、0.05mg/lNAA、25g/l蔗糖和4g/l琼脂的MS培养基，所述不定芽增殖培养基的pH值为5；不定芽增殖培养的条件为：室内培养的温度为26℃，相对湿度为40％，光照强度为1800lx，光照时间为每天10h；继代培养的时间为 50d；

S4)生根培养：切下步骤S3)中继代培养的3～4cm不定芽，并将切下的不定芽接种到生根培养基中进行生根培养，以形成试管苗；所述生根培养基为含有25g/l蔗糖和4g/l琼脂的MS培养基，所述生根培养基的pH值为5；生根培养的条件为：室内培养的温度为26℃，相对湿度为40％，光照强度为1800lx，光照时间为每天10h；生根培养35d后即可培养成试管苗；

S5)炼苗与移栽：在试管苗清洗、移栽前，装有试管苗的容器为开口的，且试管苗在20℃温度中培养5d；之后从容器中取出6～8cm试管苗，洗净试管苗底部培养基，并将试管苗移栽至栽培基质中；试管苗移栽至栽培基质后，试管苗进行适度的遮阴培养，培养的温度为20℃，培养的相对湿度为60％，正常培养管理即可获得红丰收山姜植株；所述栽培基质为细砂、珍珠岩和泥炭土的混合物，细砂、珍珠岩和泥炭土的质量比为0.8∶1.2∶0.9。

实施例2

本实施例提供一种红丰收山姜的组织培养繁殖方法，其包括以下步骤：

S1)外植体取材与消毒：将洗净后的红丰收山姜地下茎用多菌灵1000倍稀释液浸泡消毒25min，将消毒后的红丰收山姜地下茎置于无菌、黑暗且温度为 27℃的湿润砂子中催芽培养13d，红丰收山姜地下茎催芽培养期间，每3天要喷洒1次多菌灵1000倍稀释液；红丰收山姜地下茎催芽培养结束后会萌发出新芽，切去新芽外层包裹的叶鞘，以1～2cm的粉红色嫩芽作为外植体，并对所述外植体进行消毒；

S2)不定芽诱导培养：将步骤S1)中消毒后的外植体接种到不定芽诱导培养基中，进行不定芽的培养、诱导；所述不定芽诱导培养基为含有2mg/l 6-BA、 0.2mg/l NAA、30g/l蔗糖和6g/l琼脂的MS培养基，所述不定芽诱导培养基的 pH值为5.8；不定芽诱导培养的条件为：室内培养的温度为28℃，相对湿度为 60％，光照强度为1900lx，光照时间为每天12h；不定芽诱导培养的时间为24d；

S3)不定芽增殖培养：切下步骤S2)中诱导出的不定芽，并将切下的不定芽接种到不定芽增殖培养基中进行继代培养；所述不定芽增殖培养基为含有1.2 mg/l KT、0.07mg/lNAA、30g/l蔗糖和6g/l琼脂的MS培养基，所述不定芽增殖培养基的pH值为5.8；不定芽增殖培养的条件为：室内培养的温度为28℃，相对湿度为60％，光照强度为1900lx，光照时间为每天12h；继代培养的时间为45d；

S4)生根培养：切下步骤S3)中继代培养的3～4cm不定芽，并将切下的不定芽接种到生根培养基中进行生根培养，以形成试管苗；所述生根培养基为含有30g/l蔗糖和6g/l琼脂的MS培养基，所述生根培养基的pH值为5.8；生根培养的条件为：室内培养的温度为28℃，相对湿度为60％，光照强度为1900lx，光照时间为每天12h；生根培养32d后即可培养成试管苗；

S5)炼苗与移栽：在试管苗清洗、移栽前，装有试管苗的容器为开口的，且试管苗在24℃温度中培养4d；之后从容器中取出6～8cm试管苗，洗净试管苗底部培养基，并将试管苗移栽至栽培基质中；试管苗移栽至栽培基质后，试管苗进行适度的遮阴培养，培养的温度为22℃，培养的相对湿度为70％，正常培养管理即可获得红丰收山姜植株；所述栽培基质为细砂、珍珠岩和泥炭土的混合物，细砂、珍珠岩和泥炭土的质量比为1∶1∶1。

实施例3

本实施例提供一种红丰收山姜的组织培养繁殖方法，其包括以下步骤：

S1)外植体取材与消毒：将洗净后的红丰收山姜地下茎用多菌灵1100倍稀释液浸泡消毒27min，将消毒后的红丰收山姜地下茎置于无菌、黑暗且温度为 26℃的湿润砂子中催芽培养14d，红丰收山姜地下茎催芽培养期间，每3天要喷洒1次1100倍多菌灵稀释液；红丰收山姜地下茎催芽培养结束后会萌发出新芽，切去新芽外层包裹的叶鞘，以1～2cm的粉红色嫩芽作为外植体，并对所述外植体进行消毒；

S2)不定芽诱导培养：将步骤S1)中消毒后的外植体接种到不定芽诱导培养基中，进行不定芽的培养、诱导；所述不定芽诱导培养基为含有2.6mg/l 6-BA、 0.24mg/l NAA、31g/l蔗糖和7g/l琼脂的MS培养基，所述不定芽诱导培养基的pH值为5.3；不定芽诱导培养的条件为：室内培养的温度为27℃，相对湿度为69％，光照强度为1930lx，光照时间为每天13h；不定芽诱导培养的时间为 26d；

S3)不定芽增殖培养：切下步骤S2)中诱导出的不定芽，并将切下的不定芽接种到不定芽增殖培养基中进行继代培养；所述不定芽增殖培养基为含有1.6 mg/l KT、0.08mg/lNAA、33g/l蔗糖和6.8g/l琼脂的MS培养基，所述不定芽增殖培养基的pH值为5.1；不定芽增殖培养的条件为：室内培养的温度为29℃，相对湿度为73％，光照强度为1920lx，光照时间为每天12.8h；继代培养的时间为48d；

S4)生根培养：切下步骤S3)中继代培养的3～4cm不定芽，并将切下的不定芽接种到生根培养基中进行生根培养，以形成试管苗；所述生根培养基为含有29g/l蔗糖和4.6g/l琼脂的MS培养基，所述生根培养基的pH值为5.4；生根培养的条件为：室内培养的温度为29℃，相对湿度为73％，光照强度为1910 lx，光照时间为每天11h；生根培养34d后即可培养成试管苗；

S5)炼苗与移栽：在试管苗清洗、移栽前，装有试管苗的容器为开口的，且试管苗在22℃温度中培养4.4d；之后从容器中取出6～8cm试管苗，洗净试管苗底部培养基，并将试管苗移栽至栽培基质中；试管苗移栽至栽培基质后，试管苗进行适度的遮阴培养，培养的温度为23℃，培养的相对湿度为66％，正常培养管理即可获得红丰收山姜植株；所述栽培基质为细砂、珍珠岩和泥炭土的混合物，细砂、珍珠岩和泥炭土的质量比为1.2∶0.7∶1。

实施例4

本实施例提供一种红丰收山姜的组织培养繁殖方法，其包括以下步骤：

S1)外植体取材与消毒：将洗净后的红丰收山姜地下茎用多菌灵1200倍稀释液浸泡消毒30min，将消毒后的红丰收山姜地下茎置于无菌、黑暗且温度为 30℃的湿润砂子中催芽培养10d，红丰收山姜地下茎催芽培养期间，每3天要喷洒1次多菌灵1200倍稀释液；红丰收山姜地下茎催芽培养结束后会萌发出新芽，切去新芽外层包裹的叶鞘，以1～2cm的粉红色嫩芽作为外植体，并对所述外植体进行消毒；

S2)不定芽诱导培养：将步骤S1)中消毒后的外植体接种到不定芽诱导培养基中，进行不定芽的培养、诱导；所述不定芽诱导培养基为含有3mg/l 6-BA、 0.3mg/l NAA、35g/l蔗糖和8g/l琼脂的MS培养基，所述不定芽诱导培养基的 pH值为6；不定芽诱导培养的条件为：室内培养的温度为30℃，相对湿度为80％，光照强度为2000lx，光照时间为每天14h；不定芽诱导培养的时间为20d；

S3)不定芽增殖培养：切下步骤S2)中诱导出的不定芽，并将切下的不定芽接种到不定芽增殖培养基中进行继代培养；所述不定芽增殖培养基为含有2 mg/l KT、0.1mg/lNAA、35g/l蔗糖和8g/l琼脂的MS培养基，所述不定芽增殖培养基的pH值为6；不定芽增殖培养的条件为：室内培养的温度为30℃，相对湿度为80％，光照强度为2000lx，光照时间为每天14h；继代培养的时间为 40d；

S4)生根培养：切下步骤S3)中继代培养的3～4cm不定芽，并将切下的不定芽接种到生根培养基中进行生根培养，以形成试管苗；所述生根培养基为含有35g/l蔗糖和8g/l琼脂的MS培养基，所述生根培养基的pH值为6；生根培养的条件为：室内培养的温度为30℃，相对湿度为80％，光照强度为2000lx，光照时间为每天14h；生根培养30d后即可培养成试管苗；

S5)炼苗与移栽：在试管苗清洗、移栽前，装有试管苗的容器为开口的，且试管苗在25℃温度中培养3d；之后从容器中取出6～8cm试管苗，洗净试管苗底部培养基，并将试管苗移栽至栽培基质中；试管苗移栽至栽培基质后，试管苗进行适度的遮阴培养，培养的温度为25℃，培养的相对湿度为80％，正常培养管理即可获得红丰收山姜植株；所述栽培基质为细砂、珍珠岩和泥炭土的混合物，细砂、珍珠岩和泥炭土的质量比为1.1∶0.7∶1.3。

最后所应当说明的是，以上实施例用以说明本发明的方法方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通方法人员应当理解，可以对本发明的方法方案进行修改或者同等替换，而不脱离本发明方法方案的实质和范围。

Claims (10)

1.一种山姜的组织培养繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1)外植体取材与消毒：将洗净后的山姜地下茎用消毒液进行浸泡消毒，再将消毒后的山姜地下茎置于无菌、黑暗的环境中进行催芽培养；山姜地下茎催芽培养期间，喷洒消毒液进行消毒；待山姜地下茎催芽培养、萌发出新芽后，切去新芽外层包裹的叶鞘，以1～2cm粉红色嫩芽作为外植体，并对外植体进行消毒；

S2)不定芽诱导培养：将步骤S1)中消毒后的外植体接种到不定芽诱导培养基中，进行不定芽的诱导、培养；

S3)不定芽增殖培养：切下步骤S2)中诱导出的不定芽，并将切下的不定芽接种到不定芽增殖培养基中进行继代培养；

S4)生根培养：切下步骤S3)中继代培养的3～4cm不定芽，并将切下的不定芽接种到生根培养基中进行生根培养，以形成试管苗；

S5)炼苗与移栽：取步骤S4)中培养的6～8cm试管苗，洗净试管苗底部的生根培养基，并将试管苗移栽至栽培基质中，正常培养管理即可获得山姜植株。

2.如权利要求1所述的组织培养繁殖方法，其特征在于，在步骤S1)中，所述消毒液为多菌灵800～1200倍稀释液；山姜地下茎浸泡消毒的时间为20～30min；催芽培养的温度为25～30℃，催芽培养的时间为10～15d；山姜地下茎催芽培养期间，每3天喷洒1次消毒液。

3.如权利要求1或2所述的组织培养繁殖方法，其特征在于，在步骤S2)中，所述不定芽诱导培养基为含有1～3mg/l 6-苄氨基腺嘌呤、0.1～0.3mg/l萘乙酸、25～35g/l蔗糖和4～8g/l琼脂的MS培养基，所述不定芽诱导培养基的pH值为5～6；不定芽诱导的条件为：室内培养的温度为26～30℃，相对湿度为40％～80％，光照强度为1800～2000lx，光照时间为每天10～14h，不定芽诱导培养的时间为20～30d。

4.如权利要求1或2所述的组织培养繁殖方法，其特征在于，在步骤S3)中，所述不定芽增殖培养基为含有1～2mg/l 6-糠氨基嘌呤、0.05～0.1mg/l萘乙酸、25～35g/l蔗糖和4～8g/l琼脂的MS培养基，所述不定芽增殖培养基的pH值为5～6。

5.如权利要求4所述的组织培养繁殖方法，其特征在于，在步骤S3)中，不定芽增殖培养的条件为：室内培养的温度为26～30℃，相对湿度为40％～80％，光照强度为1800～2000lx，光照时间为每天10～14h；继代培养的时间为40～50d。

6.如权利要求1或2所述的组织培养繁殖方法，其特征在于，在步骤S4)中，所述生根培养基为含有25～35g/l蔗糖和4～8g/l琼脂的MS培养基，所述生根培养基的pH值为5～6。

7.如权利要求6所述的组织培养繁殖方法，其特征在于，在步骤S4)中，生根培养的条件为：室内培养的温度为26～30℃，相对湿度为40％～80％，光照强度为1800～2000lx，光照时间为每天10～14h，生根培养的时间为30～35d。

8.如权利要求1或2所述的组织培养繁殖方法，其特征在于，在步骤S5)中，所述栽培基质为细砂、珍珠岩和泥炭土的混合物，所述细砂、珍珠岩和泥炭土的质量比为0.8～1.2：0.7～1.2：0.9～1.3。

9.如权利要求1或2所述的组织培养繁殖方法，其特征在于，在步骤S5)中，在试管苗清洗、移栽前，试管苗在温度为20～25℃的开口容器中培养3～5d；试管苗移栽至栽培基质后，试管苗进行遮阴培养，培养的温度为20～25℃，培养的相对湿度为60％～80％。

10.如权利要求1或2所述的组织培养繁殖方法，其特征在于，所述山姜为红丰收山姜，所述红丰收山姜是以艳山姜为母本、小草寇为父本人工杂交的品种。