CN104686338A - 一种白芷花药离体培养技术 - Google Patents
一种白芷花药离体培养技术 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104686338A CN104686338A CN201510085928.9A CN201510085928A CN104686338A CN 104686338 A CN104686338 A CN 104686338A CN 201510085928 A CN201510085928 A CN 201510085928A CN 104686338 A CN104686338 A CN 104686338A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- root
- illumination
- bud
- culture
- day
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Abstract
本发明公开了一种白芷花药离体培养技术，涉及白芷（Angelica dahurica）通过植物细胞培养技术获得单倍体的育种方法。本发明以白芷花药为外植体，经过外植体预处理、愈伤组织诱导、不定芽分化、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了白芷花药离体培养技术体系，为开展白芷新品种选育提供新材料。
Description
技术领域
本发明涉及植物生物技术中单倍体育种方法，具体地说，涉及一种白芷花药离体培养技术。
背景技术
白芷（Angelica dahurica ）为伞形科多年生草本植物，其根可入药，具有解表散寒，祛风止痛，宣通鼻窍，燥湿止滞，消肿排脓功能。我国商品白芷有川白芷、杭白芷、禹白芷和祁白芷四种。
目前我国广泛栽培的白芷主要是通过种子繁殖的，性状分离严重。另外，白芷为异花授粉植物，由于长期的异花授粉，导致其基因型混杂。而利用花药离体培养技术可在短时间内获得性状丰富的单倍体或纯合的二倍体植株，从而缩短育种周期，提高选择效率，为进一步开展白芷育种工作提供新材料。
发明内容
本发明的目的在于提供出一种白芷花药离体培养技术，本发明以白芷花药为外植体，，经过外植体预处理、愈伤组织诱导、不定芽分化、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了白芷花药离体培养技术体系，从而实现了本发明的目的。
本发明的一种白芷花药离体培养技术，包括以下的步骤：
（1）花蕾选择及处理：晴朗天气早上取健壮植株上的花蕾，用改良品红染色镜检花粉发育时期，选择小孢子发育处于单核靠边期的花粉作为外植体。花蕾采摘后先在2～4℃条件下进行低温预处理1～5天后备用。
（2）花药愈伤组织诱导：将步骤（1）处理后的花蕾先用洗洁精水溶液浸泡5～10min，然后用自来水冲洗10～30min，擦干表面水分后在超净工作台中以70%～80%乙醇浸泡5～10s，0.1%升汞溶液消毒8～20min，再用无菌水清洗3～5次后置于无菌滤纸上用已消毒的镊子和解剖针剖开花蕾，取出花药并接种于花药诱导培养基上进行愈伤组织诱导。接种后置于每天光照12～15小时，光照强度为1000～1500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成愈伤组织。
（3）不定芽分化：将步骤（2）形成的愈伤组织转接于分化培养基中进行不定芽分化诱导。接种后先在25～28℃条件下全暗培养3～7天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为2000～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成不定芽。
（4）生根培养：将步骤（3）所获得的高度约为1～2cm的不定芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养3～7天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为2000～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根。
（5）炼苗移栽：待幼苗长至几条短的白根后置于自然光照下炼苗5～7天后，洗净根部培养基，移栽由营养土：沙土：蛭石＝2:1:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/4MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田。
上述步骤（2）所述的花药诱导诱导培养基为：MS+0.5～1mg/L6-BA+1～3mg/L2,4-D+2.0%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8。
上述步骤（3）所述的分化培养基为：MS+1～5mg/L KT+0.5～2mg/L NAA+5～20mg/L AgNO3+2.0%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8。
上述步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+0.2～1mg/L NAA+0.5～2mg/LIBA+2.0%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8。
与现有技术相比本发明的优点是：本发明通过植物细胞培养技术获得单倍体的育种方法。以白芷花药为外植体，，经过外植体预处理、愈伤组织诱导、不定芽分化、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了白芷花药离体培养技术体系，为开展白芷新品种选育提供新材料。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1：
（1）花蕾选择及处理：晴朗天气早上取健壮植株上的花蕾，用改良品红染色镜检花粉发育时期，选择小孢子发育处于单核靠边期的花粉作为外植体。花蕾采摘后先在2℃条件下进行低温预处理1天后备用。
（2）花药愈伤组织诱导：将步骤（1）处理后的花蕾先用洗洁精水溶液浸泡5min，然后用自来水冲洗10min，擦干表面水分后在超净工作台中以70%乙醇浸泡5s，0.1%升汞溶液消毒8min，再用无菌水清洗3次后置于无菌滤纸上用已消毒的镊子和解剖针剖开花蕾，取出花药并接种于花药诱导培养基上进行愈伤组织诱导。接种后置于每天光照12小时，光照强度为1000lx，培养温度为25℃的条件下培养25天即可形成愈伤组织，愈伤组织诱导率可达56.28%。所述花药诱导培养基为MS+0.5mg/L6-BA+1mg/L2,4-D+3.5%蔗糖+0.35%琼脂+0.05%活性炭，pH值为5.4。
（3）不定芽分化：将步骤（2）形成的愈伤组织转接于分化培养基中进行不定芽分化诱导。接种后先在25℃条件下全暗培养3天，然后置于每天光照10小时，光照强度为2000lx，培养温度为25℃的条件下培养28天即可形成不定芽。所述分化培养基为MS+1mg/L KT+0.7mg/L NAA+5mg/L AgNO3+2.0%蔗糖+0.35%琼脂+0.05%活性炭，pH值为5.4。
（4）生根培养：将步骤（3）所获得的高度约为1～2cm的不定芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25℃条件下全暗培养3天，然后置于每天光照10小时，光照强度为2000lx，培养温度为25℃的条件下培养40天即可生根，生根率可达86.1%。所述生根培养基为1/2MS+0.4mg/L NAA+0.5mg/LIBA+3.5%蔗糖+0.5%琼脂+0.05%活性炭，pH值为5.4。
（5）炼苗移栽：待幼苗长至几条短的白根后置于自然光照下炼苗5天后，洗净根部培养基，移栽由营养土：沙土：蛭石＝2:1:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/4MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，移栽成活率可达87.6%。
实施例2：
（1）花蕾选择及处理：晴朗天气早上取健壮植株上的花蕾，用改良品红染色镜检花粉发育时期，选择小孢子发育处于单核靠边期的花粉作为外植体。花蕾采摘后先在4℃条件下进行低温预处理3天后备用。
（2）花药愈伤组织诱导：将步骤（1）处理后的花蕾先用洗洁精水溶液浸泡8min，然后用自来水冲洗10min，擦干表面水分后在超净工作台中以75%乙醇浸泡5s，0.1%升汞溶液消毒10min，再用无菌水清洗3次后置于无菌滤纸上用已消毒的镊子和解剖针剖开花蕾，取出花药并接种于花药诱导培养基上进行愈伤组织诱导。接种后置于每天光照13小时，光照强度为1500lx，培养温度为28℃的条件下培养23天即可形成愈伤组织，愈伤组织诱导率可达60.09%。所述花药诱导培养基为MS+0.8mg/L6-BA+2mg/L2,4-D+3.5%蔗糖+0.35%琼脂+0.05%活性炭，pH值为5.8。
（3）不定芽分化：将步骤（2）形成的愈伤组织转接于分化培养基中进行不定芽分化诱导。接种后先在25℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照11小时，光照强度为2000lx，培养温度为28℃的条件下培养25天即可形成不定芽。所述分化培养基为MS+1.5mg/L KT+0.9mg/L NAA+10mg/L AgNO3+2.0%蔗糖+0.35%琼脂+0.05%活性炭，pH值为5.8。
（4）生根培养：将步骤（3）所获得的高度约为1～2cm的不定芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在28℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照12小时，光照强度为2500lx，培养温度为28℃的条件下培养37天即可生根，生根率可达84.97%。所述生根培养基为1/2MS+0.6mg/L NAA+0.9mg/LIBA+3.5%蔗糖+0.5%琼脂+0.05%活性炭，pH值为5.4。
（5）炼苗移栽：待幼苗长至几条短的白根后置于自然光照下炼苗5天后，洗净根部培养基，移栽由营养土：沙土：蛭石＝2:1:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/4MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，移栽成活率可达90.26%。
Claims (4)
1.一种白芷花药离体培养技术，其特征在于包括以下步骤：
（1）花蕾选择及处理：晴朗天气早上取健壮植株上的花蕾，用改良品红染色镜检花粉发育时期，选择小孢子发育处于单核靠边期的花粉作为外植体,花蕾采摘后先在2～4℃条件下进行低温预处理1～5天后备用；
（2）花药愈伤组织诱导：将步骤（1）处理后的花蕾先用洗洁精水溶液浸泡5～10min，然后用自来水冲洗10～30min，擦干表面水分后在超净工作台中以70%～80%乙醇浸泡5～10s，0.1%升汞溶液消毒8～20min，再用无菌水清洗3～5次后置于无菌滤纸上用已消毒的镊子和解剖针剖开花蕾，取出花药并接种于花药诱导培养基上进行愈伤组织诱导,接种后置于每天光照12～15小时，光照强度为1000～1500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成愈伤组织；
（3）不定芽分化：将步骤（2）形成的愈伤组织转接于分化培养基中进行不定芽分化诱导,接种后先在25～28℃条件下全暗培养3～7天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为2000～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成不定芽；
（4）生根培养：将步骤（3）所获得的高度约为1～2cm的不定芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养3～7天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为2000～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；
（5）炼苗移栽：待幼苗长至几条短的白根后置于自然光照下炼苗5～7天后，洗净根部培养基，移栽由营养土：沙土：蛭石＝2:1:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/4MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度,待幼苗成活后再移栽大田。
2.根据权利要求1所述的一种白芷花药离体培养技术，其特征在于步骤（2）所述的花药诱导诱导培养基为：MS+0.5～1mg/L6-BA+1～3mg/L2,4-D+2.0%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8。
3.根据权利要求1所述的一种白芷花药离体培养技术，其特征在于步骤（3）所述的分化培养基为：MS+1～5mg/L KT+0.5～2mg/L NAA+5～20mg/L AgNO3+2.0%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8。
4.根据权利要求1所述的一种白芷花药离体培养技术，其特征在于步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+0.2～1mg/L NAA+0.5～2mg/LIBA+2.0%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510085928.9A CN104686338A (zh) | 2015-02-22 | 2015-02-22 | 一种白芷花药离体培养技术 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510085928.9A CN104686338A (zh) | 2015-02-22 | 2015-02-22 | 一种白芷花药离体培养技术 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104686338A true CN104686338A (zh) | 2015-06-10 |
Family
ID=53334238
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510085928.9A Pending CN104686338A (zh) | 2015-02-22 | 2015-02-22 | 一种白芷花药离体培养技术 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104686338A (zh) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107593441A (zh) * | 2017-10-16 | 2018-01-19 | 陈金水 | 一种白芷组培体系的建立方法 |
| CN109220813A (zh) * | 2018-11-25 | 2019-01-18 | 林登淞 | 一种忽布花离体培养技术 |
| CN109275567A (zh) * | 2018-11-22 | 2019-01-29 | 张世燊 | 一种扁豆花离体培养技术 |
| CN109275572A (zh) * | 2018-11-29 | 2019-01-29 | 广西玉林市千力农业科技有限公司 | 一种老鹳草离体培养技术 |
| CN109275570A (zh) * | 2018-11-29 | 2019-01-29 | 广西玉林市千力农业科技有限公司 | 一种洋金花离体培养技术 |
| CN109349114A (zh) * | 2018-11-29 | 2019-02-19 | 广西玉林玖旺农业科技有限公司 | 一种榛子离体培养技术 |
| CN109349111A (zh) * | 2018-11-27 | 2019-02-19 | 广西玉林市华睿茶业有限公司 | 一种板蓝根离体培养技术 |
| CN111642396A (zh) * | 2020-06-15 | 2020-09-11 | 张家口市农业科学院(河北省高寒作物研究所) | 一种适用于垂果亚麻花药和子房的培养基以及培养方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1164831B1 (en) * | 1999-03-25 | 2003-11-05 | University of Guelph | Micropropagation and production of phytopharmaceutical plants |
| CN103814823A (zh) * | 2014-03-05 | 2014-05-28 | 四川农业大学 | 白芷花药诱导成苗培养方法 |
| CN104221874A (zh) * | 2014-10-14 | 2014-12-24 | 南京帝道农业科技有限公司 | 一种白芷诱变育种的快速繁殖方法 |
-
2015
- 2015-02-22 CN CN201510085928.9A patent/CN104686338A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1164831B1 (en) * | 1999-03-25 | 2003-11-05 | University of Guelph | Micropropagation and production of phytopharmaceutical plants |
| CN103814823A (zh) * | 2014-03-05 | 2014-05-28 | 四川农业大学 | 白芷花药诱导成苗培养方法 |
| CN104221874A (zh) * | 2014-10-14 | 2014-12-24 | 南京帝道农业科技有限公司 | 一种白芷诱变育种的快速繁殖方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 李静夜: "白芷花药离体培养技术研究", 《四川农业大学硕士论文》 * |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107593441A (zh) * | 2017-10-16 | 2018-01-19 | 陈金水 | 一种白芷组培体系的建立方法 |
| CN109275567A (zh) * | 2018-11-22 | 2019-01-29 | 张世燊 | 一种扁豆花离体培养技术 |
| CN109220813A (zh) * | 2018-11-25 | 2019-01-18 | 林登淞 | 一种忽布花离体培养技术 |
| CN109349111A (zh) * | 2018-11-27 | 2019-02-19 | 广西玉林市华睿茶业有限公司 | 一种板蓝根离体培养技术 |
| CN109275572A (zh) * | 2018-11-29 | 2019-01-29 | 广西玉林市千力农业科技有限公司 | 一种老鹳草离体培养技术 |
| CN109275570A (zh) * | 2018-11-29 | 2019-01-29 | 广西玉林市千力农业科技有限公司 | 一种洋金花离体培养技术 |
| CN109349114A (zh) * | 2018-11-29 | 2019-02-19 | 广西玉林玖旺农业科技有限公司 | 一种榛子离体培养技术 |
| CN111642396A (zh) * | 2020-06-15 | 2020-09-11 | 张家口市农业科学院(河北省高寒作物研究所) | 一种适用于垂果亚麻花药和子房的培养基以及培养方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104686338A (zh) | 一种白芷花药离体培养技术 | |
| CN103190347B (zh) | 一种茶壶枣组织培养方法 | |
| CN104273037B (zh) | 一种尾巨桉dh33-27品种的组培快繁方法 | |
| CN105010143A (zh) | 一种楸树的体外培养方法 | |
| CN104686343A (zh) | 一种菜薹小孢子离体培养方法 | |
| CN104365479B (zh) | 一种尾巨桉dh32-28品种的组培快繁方法 | |
| CN103651141B (zh) | 亳菊工厂化试管苗快繁的方法 | |
| CN105941155B (zh) | 一种利用悬浮培养技术快速繁殖水曲柳的方法 | |
| CN104782497A (zh) | 一种观赏铁线莲离体培养方法 | |
| CN105145363B (zh) | 一种显著提高杉木组培生产出苗率的方法 | |
| CN104686351A (zh) | 一种连香树离体快速繁殖方法 | |
| CN102415339A (zh) | 一种红叶石楠的快速繁育方法 | |
| CN104285815B (zh) | 一种尾巨桉dh32-13品种的组培快繁方法 | |
| CN106613960B (zh) | 一种海伦兜兰愈伤组织再生体系快速繁殖方法 | |
| CN104686335A (zh) | 一种半夏组织培养快繁方法 | |
| CN107711514A (zh) | 一种旱地木槿紫色花系优良单株组培快繁方法 | |
| CN106577280A (zh) | 一种利用驼峰藤幼嫩茎段及叶片快速繁殖无菌苗 | |
| CN105454046A (zh) | 一种早花忍冬的离体快繁方法 | |
| CN109349108A (zh) | 一种甜荞体细胞胚胎发生与植株再生方法 | |
| CN109479723A (zh) | 一种提高百子莲体胚苗诱导效果的方法 | |
| CN108450328A (zh) | 一种鳄嘴花组织培养快速繁殖方法 | |
| CN104542285B (zh) | 一种大花萱草叶片组织培养的方法 | |
| CN102119664B (zh) | 采用植物组织培养葡萄风信子的方法 | |
| CN105075861A (zh) | 一种白芨胚性细胞发生与子叶胚培养方法 | |
| CN109479727A (zh) | 一种以百子莲叶片作为外植体诱导胚性细胞的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20150610 |