CN109349114A - 一种榛子离体培养技术 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种榛子离体培养技术，榛子为世界四大名果之一，共同特征是坚硬的外果皮，里面含着油质的可食果肉，有丰富的营养价值，在我国均有栽培。榛子通过植物细胞培养技术获得单倍体的育种方法，以榛子为外植体，经过外植体预处理、愈伤组织诱导、不定芽分化、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了榛子离体培养技术体系，为开展榛子新品种选育提供新材料。

Description

一种榛子离体培养技术
技术领域
本发明涉及植物生物技术中单倍体育种方法，具体地说，涉及一种榛子离体培养技术。
背景技术
榛子分布在我国黄河以北省份地区为主，江淮一带也有发展，最近也有移植我国南方种植。榛子为世界四大名果之一，共同特征是坚硬的外果皮，里面含着油质的可食果肉，有丰富的营养价值。榛子是一种用途广，经济价值较高的树种。果肉可做巧克力糖果，果壳可制活性炭原料，树皮可制鞣皮物质和烤胶，树叶可养蚕，木材可用制手杖等，利用花药离体培养技术可在短时间内获得性状丰富的单倍体或纯合的二倍体植株，从而缩短育种周期，提高选择效率，为进一步开展榛子育种工作提供新材料。
发明内容
本发明的目的在于提供出一种榛子离体培养技术，本发明以榛子为外植体，经过外植体预处理、愈伤组织诱导、不定芽分化、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了榛子离体培养技术体系，从而实现了本发明的目的。
本发明的一种榛子离体培养技术，包括以下的步骤：
步骤1，花蕾选择及处理：晴朗天气早上取健壮植株上的花蕾，用改良品红染色镜检花粉发育时期，选择小孢子发育处于单核靠边期的花粉作为外植体,花蕾采摘后先在10℃条件下进行低温预处理12天后备用；
步骤2，花愈伤组织诱导：将步骤1处理后的花蕾先用洗洁精水溶液浸泡20min，然后用自来水冲洗40min，擦干表面水分后在超净工作台中以70%～80%乙醇浸泡20s，0.1%升汞溶液消毒40min，再用无菌水清洗10次后置于无菌滤纸上用已消毒的镊子和解剖针剖开花蕾，取出花药并接种于花药诱导培养基上进行愈伤组织诱导,接种后置于每天光照20小时，光照强度为2000lx，培养温度为27℃的条件下培养直至形成愈伤组织；花诱导培养基为：MS+0.45mg/L6-BA+4mg/L2,4-D+6.0%蔗糖+1.0%琼脂+0.8%活性炭，pH值为5.8;
步骤3，不定芽分化：将步骤2形成的愈伤组织转接于分化培养基中进行不定芽分化诱导,接种后先在27℃条件下全暗培养16天，然后置于每天光照13小时，光照强度为2600lx，培养温度为27℃的条件下培养直至形成不定芽；分化培养基为：MS+6mg/L KT+3mg/L NAA+21mg/L AgNO3+5.6%蔗糖+1.0%琼脂+0.8%活性炭，pH值为5.8;
步骤4，生根培养：将步骤3所获得的高度约为6cm的不定芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在27℃条件下全暗培养12天，然后置于每天光照18小时，光照强度为3000lx，培养温度为27℃的条件下培养至生根；生根培养基为：1/2MS+2mg/L NAA+3mg/LIBA+5.5%蔗糖+1.0%琼脂+0.8%活性炭，pH值为5.8;
步骤5，炼苗移栽：待幼苗长至几条短的白根后置于自然光照下炼苗12天后，洗净根部培养基，移栽由营养土：沙土：蛭石=3:2:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/4MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度,待幼苗成活后再移栽大田。
与现有技术相比本发明的优点是：本发明通过植物细胞培养技术获得单倍体的育种方法。以榛子为外植体，经过外植体预处理、愈伤组织诱导、不定芽分化、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了榛子离体培养技术体系，为开展白榛子新品种选育提供新材料。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1：
（1）花蕾选择及处理：晴朗天气早上取健壮植株上的花蕾，用改良品红染色镜检花粉发育时期，选择小孢子发育处于单核靠边期的花粉作为外植体。花蕾采摘后先在2℃条件下进行低温预处理5天后备用。
（2）花药愈伤组织诱导：将步骤（1）处理后的花蕾先用洗洁精水溶液浸泡4min，然后用自来水冲洗20min，擦干表面水分后在超净工作台中以70%乙醇浸泡10s，0.1%升汞溶液消毒20min，再用无菌水清洗10次后置于无菌滤纸上用已消毒的镊子和解剖针剖开花蕾，取出花药并接种于花药诱导培养基上进行愈伤组织诱导。接种后置于每天光照16小时，光照强度为1500lx，培养温度为23℃的条件下培养30天即可形成愈伤组织，愈伤组织诱导率可达70%。所述花药诱导培养基为MS+0.6mg/L6-BA+1.5mg/L2,4-D+4.5%蔗糖+0.5%琼脂+0.45%活性炭，pH值为5.6。
（3）不定芽分化：将步骤（2）形成的愈伤组织转接于分化培养基中进行不定芽分化诱导。接种后先在24℃条件下全暗培养10天，然后置于每天光照20小时，光照强度为2500lx，培养温度为23℃的条件下培养35天即可形成不定芽。所述分化培养基为MS+2mg/LKT+0.8mg/L NAA+6mg/L AgNO3+3.5%蔗糖+0.6%琼脂+0.6%活性炭，pH值为5.6。
（4）生根培养：将步骤（3）所获得的高度约为3cm的不定芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在24℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照20小时，光照强度为2500lx，培养温度为24℃的条件下培养45天即可生根，生根率可达90%。所述生根培养基为1/2MS+0.3mg/L NAA+0.4mg/LIBA+5.0%蔗糖+0.8%琼脂+0.6%活性炭，pH值为5.6。
（5）炼苗移栽：待幼苗长至几条短的白根后置于自然光照下炼苗6天后，洗净根部培养基，移栽由营养土：沙土：蛭石=3:2:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/4MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，移栽成活率可达89%。
实施例2：
（1）花蕾选择及处理：晴朗天气早上取健壮植株上的花蕾，用改良品红染色镜检花粉发育时期，选择小孢子发育处于单核靠边期的花粉作为外植体。花蕾采摘后先在24℃条件下进行低温预处理10天后备用。
（2）花药愈伤组织诱导：将步骤（1）处理后的花蕾先用洗洁精水溶液浸泡15min，然后用自来水冲洗16min，擦干表面水分后在超净工作台中以75%乙醇浸泡10s，0.1%升汞溶液消毒16min，再用无菌水清洗8次后置于无菌滤纸上用已消毒的镊子和解剖针剖开花蕾，取出花药并接种于花药诱导培养基上进行愈伤组织诱导。接种后置于每天光照18小时，光照强度为1800lx，培养温度为24℃的条件下培养26天即可形成愈伤组织，愈伤组织诱导率可达72%。所述花药诱导培养基为MS+0.6mg/L6-BA+1.5mg/L2,4-D+4.5%蔗糖+0.35%琼脂+0.25%活性炭，pH值为5.7。
（3）不定芽分化：将步骤（2）形成的愈伤组织转接于分化培养基中进行不定芽分化诱导。接种后先在24℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照12小时，光照强度为2800lx，培养温度为24℃的条件下培养28天即可形成不定芽。所述分化培养基为MS+1.0mg/L KT+0.6mg/L NAA+9mg/L AgNO3+1.8%蔗糖+0.45%琼脂+0.16%活性炭，pH值为5.7。
（4）生根培养：将步骤（3）所获得的高度约为5cm的不定芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在24℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照18小时，光照强度为2600lx，培养温度为24℃的条件下培养45天即可生根，生根率可过88%。所述生根培养基为1/2MS+0.5mg/L NAA+0.7mg/LIBA+3.5%蔗糖+0.5%琼脂+0.25%活性炭，pH值为5.7。
（5）炼苗移栽：待幼苗长至几条短的白根后置于自然光照下炼苗4天后，洗净根部培养基，移栽由营养土：沙土：蛭石=3:3:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/4MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，移栽成活率可达95%。

Claims (1)

1.一种榛子离体培养技术，其特征在于包括以下步骤：
步骤1，花蕾选择及处理：晴朗天气早上取健壮植株上的花蕾，用改良品红染色镜检花粉发育时期，选择小孢子发育处于单核靠边期的花粉作为外植体,花蕾采摘后先在10℃条件下进行低温预处理12天后备用；
步骤2，花愈伤组织诱导：将步骤1处理后的花蕾先用洗洁精水溶液浸泡20min，然后用自来水冲洗40min，擦干表面水分后在超净工作台中以70%～80%乙醇浸泡20s，0.1%升汞溶液消毒40min，再用无菌水清洗10次后置于无菌滤纸上用已消毒的镊子和解剖针剖开花蕾，取出花药并接种于花药诱导培养基上进行愈伤组织诱导,接种后置于每天光照20小时，光照强度为2000lx，培养温度为27℃的条件下培养直至形成愈伤组织；花诱导培养基为：MS+0.45mg/L6-BA+4mg/L2,4-D+6.0%蔗糖+1.0%琼脂+0.8%活性炭，pH值为5.8;
步骤3，不定芽分化：将步骤2形成的愈伤组织转接于分化培养基中进行不定芽分化诱导,接种后先在27℃条件下全暗培养16天，然后置于每天光照13小时，光照强度为2600lx，培养温度为27℃的条件下培养直至形成不定芽；分化培养基为：MS+6mg/L KT+3mg/L NAA+21mg/L AgNO3+5.6%蔗糖+1.0%琼脂+0.8%活性炭，pH值为5.8;
步骤4，生根培养：将步骤3所获得的高度约为6cm的不定芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在27℃条件下全暗培养12天，然后置于每天光照18小时，光照强度为3000lx，培养温度为27℃的条件下培养至生根；生根培养基为：1/2MS+2mg/L NAA+3mg/LIBA+5.5%蔗糖+1.0%琼脂+0.8%活性炭，pH值为5.8;
步骤5，炼苗移栽：待幼苗长至几条短的白根后置于自然光照下炼苗12天后，洗净根部培养基，移栽由营养土：沙土：蛭石=3:2:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/4MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度,待幼苗成活后再移栽大田。
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CN110393153A (zh) * 2019-07-31 2019-11-01 六安市绿农林木有限责任公司 一种榛子离体培养以及移植方法

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