CN110393153A - 一种榛子离体培养以及移植方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种榛子离体培养，涉及植物生物技术单倍体育种技术领域，包括以下成分：MS培养基、胺鲜酯0.3～0.5mg/L，复硝酚钠0.1～0.5mg/L，生长素5～7mg/L，壳聚糖6～9mg/L。本发明还公开了一种榛子离体培养的移植方法，包括以下步骤：步骤A：选种；步骤B：花愈伤组织诱导；步骤C：培养；步骤D：移栽。本发明通过植物细胞的培养技术，以榛子为外植体，经由混合培养基使孢子愈伤组织诱导、芽分化和生根成长，本发明从芽诱导分化至生根生长的效率更高，大大提高了榛子幼苗的成活率，利于提前对榛子的幼苗进行培养，具有良好的社会推广效益。

Description

一种榛子离体培养以及移植方法
技术领域
本发明涉及植物生物技术单倍体育种技术领域，特别涉及一种榛子离体 培养以及移植方法。
背景技术
榛子树又名榛子，世界上四大干果之一，榛子分布在我国黄河以北省份 地区为主，江淮一带也有发展，最近也有移植我国南方种植，榛子的特征是 坚硬的外果皮，里面含着油质的可食果肉，有丰富的营养价值。
榛子种坚硬皮厚,种胚不易突破种皮,现有技术中的榛子种子在播种前 必须进行种子催芽处理，需要用适宜的水温对种子浸泡多天，但是因榛子种 的种皮较厚，在播种时容易出现种子未能顶破种皮而导致发霉的现象，导致 榛子种子播种后的成活率不高，不利于榛子树的培养发育，存在缺陷。
因此，发明一种榛子离体培养以及移植方法来解决上述问题很有必要。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种榛子离体培养以及移植方法， 以解决上述提到的现有问题。
(二)技术方案
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种榛子离体培 养，包括以下成分：
MS培养基、胺鲜酯0.3～0.5mg/L，复硝酚钠0.1～0.5mg/L，生长素5～ 7mg/L，壳聚糖6～9mg/L。
可选的，包括以下成分：MS培养基、胺鲜酯0.3mg/L、复硝酚钠0.1mg/L、 生长素5mg/L、壳聚糖6mg/L。
可选的，包括以下成分：MS培养基、胺鲜酯0.4mg/L、复硝酚钠0.3mg/L、 生长素6mg/L、壳聚糖7mg/L。
可选的，包括以下成分：MS培养基、胺鲜酯0.5mg/L、复硝酚钠0.5mg/L、 生长素7mg/L、壳聚糖9mg/L。
可选的，所述混合培养基的PH值为6～7。
一种榛子离体培养的移植方法，包括以下步骤：
A：选种，挑选枝干健壮的榛子树，对完整饱满的花蕾进行采摘,通过品 红染色镜检查花粉发育时期，将采摘后的花蕾放入低温静置箱进行预处理备 用，同时选择孢子发育处于单核靠边期的花粉当做外植体；
B：花愈伤组织诱导，在消毒器内准备稀释乙醇，将处理后的花蕾通过洗 洁精溶液进行浸泡3～5min，接着通过净水进行清洗，擦干花蕾表面水分后将 花蕾放入消毒器内浸泡20～30s,再用净水清洗，然后放在无菌工作台上，用 解剖针将花蕾解剖，通过消毒后的镊子将花药取出并接种于混合培养基内， 并放入培养箱内；
C：培养，接种后每天光照时间18～20h，培养箱内温度控制在23～25℃， 直至形成，每天翻动种子1次，并保持一定的湿度，直至种子形成愈伤组织； 之后每天光照时间15～17h，检测补充混合培养基内的营养成分组并保持混合 培养基内的湿度，保持混合培养基内的PH值为6～7，培养箱内温度控制在 25～27℃，直至种子形成不定芽；接着继续检测并补充混合培养基内的营养 成分组，每天光照时间16～18h，培养箱内的温度控制在27℃，保持混合培 养基内的PH值为7，直至种子生根。
D：移栽，在种子幼苗的根部生长出三条以上的根茎后，将幼苗随混合培 养基从培养箱内移出，在混合培养基的内部加入营养土、泥炭土、蛭石和珍 珠岩组成混合基土，然后通过自然光照射幼苗10～14天，每天不定时给幼苗 进行营养液补充，保持混合基土的湿度，直至幼苗成活随混合基土一并移至 田中。
可选的，所述步骤B中，经消毒器浸泡消毒后的花蕾通过净水清洗3次。
可选的，所述步骤B中，稀释乙醇内乙醇的含量为75％。
可选的，所述步骤D中，营养土、泥炭土、蛭石和珍珠岩的质量比为 2:1:1:0.5。
(三)有益效果
本发明提供了一种榛子离体培养以及移植方法，具备以下有益效果：
(1)、本发明通过植物细胞的培养技术，以榛子为外植体，经由混合培 养基使孢子愈伤组织诱导、芽分化和生根成长，本发明从芽诱导分化至生根 生长的效率更高，大大提高了榛子幼苗的成活率，利于提前对榛子的幼苗进 行培养，具有良好的社会推广效益。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所 描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发 明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的 所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
一种榛子离体培养，包括以下成分：
MS培养基、胺鲜酯0.3mg/L、复硝酚钠0.1mg/L、生长素5mg/L、壳聚糖 6mg/L，以上混合培养基的PH值控制为7。
一种榛子离体培养的移植方法，包括以下步骤：
A：选种，挑选枝干健壮的榛子树，对完整饱满的花蕾进行采摘,通过品 红染色镜检查花粉发育时期，将采摘后的花蕾放入低温静置箱进行预处理备 用，同时选择孢子发育处于单核靠边期的花粉当做外植体；
B：花愈伤组织诱导，在消毒器内准备稀释乙醇，稀释乙醇内乙醇的含量 为75％，将处理后的花蕾通过洗洁精溶液进行浸泡3min，接着通过净水进行 清洗，擦干花蕾表面水分后将花蕾放入消毒器内浸泡25s,再用净水清洗，经 消毒器浸泡消毒后的花蕾通过净水清洗3次，然后放在无菌工作台上，用解 剖针将花蕾解剖，通过消毒后的镊子将花药取出并接种于混合培养基内，并 放入培养箱内；
C：培养，接种后每天光照时间18h，培养箱内温度控制在23℃，直至形 成，每天翻动种子1次，并保持一定的湿度，直至种子形成愈伤组织；之后 每天光照时间15h，检测补充混合培养基内的营养成分组并保持混合培养基内 的湿度，保持混合培养基内的PH值为6，培养箱内温度控制在25℃，直至种 子形成不定芽；接着继续检测并补充混合培养基内的营养成分组，每天光照 时间16h，培养箱内的温度控制在27℃，保持混合培养基内的PH值为7，直 至种子生根。
D：移栽，在种子幼苗的根部生长出三条以上的根茎后，将幼苗随混合培 养基从培养箱内移出，在混合培养基的内部加入营养土、泥炭土、蛭石和珍 珠岩组成混合基土，营养土、泥炭土、蛭石和珍珠岩的质量比为2:1:1:0.5， 然后通过自然光照射幼苗10天，每天不定时给幼苗进行营养液补充，保持混 合基土的湿度，直至幼苗成活随混合基土一并移至田中。
实施例2：
一种榛子离体培养以及移植方法，包括以下成分：
MS培养基、胺鲜酯0.4mg/L、复硝酚钠0.3mg/L、生长素6mg/L、壳聚糖 7mg/L，以上混合培养基的PH值控制为7。
一种榛子离体培养的移植方法，包括以下步骤：
A：选种，挑选枝干健壮的榛子树，对完整饱满的花蕾进行采摘,通过品 红染色镜检查花粉发育时期，将采摘后的花蕾放入低温静置箱进行预处理备 用，同时选择孢子发育处于单核靠边期的花粉当做外植体；
B：花愈伤组织诱导，在消毒器内准备稀释乙醇，稀释乙醇内乙醇的含量 为75％，将处理后的花蕾通过洗洁精溶液进行浸泡4min，接着通过净水进行 清洗，擦干花蕾表面水分后将花蕾放入消毒器内浸泡30s,再用净水清洗，经 消毒器浸泡消毒后的花蕾通过净水清洗3次，然后放在无菌工作台上，用解 剖针将花蕾解剖，通过消毒后的镊子将花药取出并接种于混合培养基内，并 放入培养箱内；
C：培养，接种后每天光照时间19h，培养箱内温度控制在24℃，直至形 成，每天翻动种子1次，并保持一定的湿度，直至种子形成愈伤组织；之后 每天光照时间17h，检测补充混合培养基内的营养成分组并保持混合培养基内 的湿度，保持混合培养基内的PH值为7，培养箱内温度控制在26℃，直至种 子形成不定芽；接着继续检测并补充混合培养基内的营养成分组，每天光照 时间18h，培养箱内的温度控制在27℃，保持混合培养基内的PH值为7，直 至种子生根。
D：移栽，在种子幼苗的根部生长出三条以上的根茎后，将幼苗随混合培 养基从培养箱内移出，在混合培养基的内部加入营养土、泥炭土、蛭石和珍 珠岩组成混合基土，营养土、泥炭土、蛭石和珍珠岩的质量比为2:1:1:0.5， 然后通过自然光照射幼苗12天，每天不定时给幼苗进行营养液补充，保持混 合基土的湿度，直至幼苗成活随混合基土一并移至田中。
实施例3：
一种榛子离体培养以及移植方法，包括以下成分：
MS培养基、胺鲜酯0.5mg/L、复硝酚钠0.5mg/L、生长素7mg/L、壳聚糖 9mg/L，以上混合培养基的PH值控制为7。
一种榛子离体培养的移植方法，包括以下步骤：
A：选种，挑选枝干健壮的榛子树，对完整饱满的花蕾进行采摘,通过品 红染色镜检查花粉发育时期，将采摘后的花蕾放入低温静置箱进行预处理备 用，同时选择孢子发育处于单核靠边期的花粉当做外植体；
B：花愈伤组织诱导，在消毒器内准备稀释乙醇，稀释乙醇内乙醇的含量 为75％，将处理后的花蕾通过洗洁精溶液进行浸泡5min，接着通过净水进行 清洗，擦干花蕾表面水分后将花蕾放入消毒器内浸泡30s,再用净水清洗，经 消毒器浸泡消毒后的花蕾通过净水清洗3次，然后放在无菌工作台上，用解 剖针将花蕾解剖，通过消毒后的镊子将花药取出并接种于混合培养基内，并 放入培养箱内；
C：培养，接种后每天光照时间20h，培养箱内温度控制在25℃，直至形 成，每天翻动种子1次，并保持一定的湿度，直至种子形成愈伤组织；之后 每天光照时间17h，检测补充混合培养基内的营养成分组并保持混合培养基内 的湿度，保持混合培养基内的PH值为7，培养箱内温度控制在27℃，直至种 子形成不定芽；接着继续检测并补充混合培养基内的营养成分组，每天光照 时间18h，培养箱内的温度控制在27℃，保持混合培养基内的PH值为7，直 至种子生根。
D：移栽，在种子幼苗的根部生长出三条以上的根茎后，将幼苗随混合培 养基从培养箱内移出，在混合培养基的内部加入营养土、泥炭土、蛭石和珍 珠岩组成混合基土，营养土、泥炭土、蛭石和珍珠岩的质量比为2:1:1:0.5， 然后通过自然光照射幼苗14天，每天不定时给幼苗进行营养液补充，保持混 合基土的湿度，直至幼苗成活随混合基土一并移至田中。
通过以上三组实施例均可对榛子幼苗进行培养以及对榛子的活苗进行移 植，其中第二组实施例提升的效果最好。
表1为本发明第二组实施例的混合培养基成分：
表1
表2为本发明第二组实施例的幼苗环境培养：
表2
本发明通过植物细胞的培养技术，以榛子为外植体，经由混合培养基使 孢子愈伤组织诱导、芽分化和生根成长，本发明从芽诱导分化至生根生长的 效率更高，大大提高了榛子幼苗的成活率，利于提前对榛子的幼苗进行培养， 具有良好的社会推广效益。
需要说明的是，在本发明中，除非另有明确的规定和限定，第一特征在 第二特征“上”或“下”可以是第一和第二特征直接接触，或第一和第二特 征通过中间媒介间接接触。而且，第一特征在第二特征“之上”、“上方” 和“上面”可是第一特征在第二特征正上方或斜上方，或仅仅表示第一特征 水平高度高于第二特征。第一特征在第二特征“之下”、“下方”和“下面” 可以是第一特征在第二特征正下方或斜下方，或仅仅表示第一特征水平高度 小于第二特征。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限 制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的 技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或 者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作 的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种榛子离体培养，其特征在于，包括以下成分：
MS培养基、胺鲜酯0.3～0.5mg/L，复硝酚钠0.1～0.5mg/L，生长素5～7mg/L，壳聚糖6～9mg/L。
2.根据权利要求1所述的一种榛子离体培养，其特征在于：
包括以下成分：MS培养基、胺鲜酯0.3mg/L、复硝酚钠0.1mg/L、生长素5mg/L、壳聚糖6mg/L。
3.根据权利要求1所述的一种榛子离体培养，其特征在于：
包括以下成分：MS培养基、胺鲜酯0.4mg/L、复硝酚钠0.3mg/L、生长素6mg/L、壳聚糖7mg/L。
4.根据权利要求1所述的一种榛子离体培养，其特征在于：
包括以下成分：MS培养基、胺鲜酯0.5mg/L、复硝酚钠0.5mg/L、生长素7mg/L、壳聚糖9mg/L。
5.根据权利要求1所述的一种榛子离体培养，其特征在于：
所述混合培养基的PH值为6～7。
6.一种榛子离体培养的移植方法，其特征在于，包括以下步骤：
A：选种，挑选枝干健壮的榛子树，对完整饱满的花蕾进行采摘，通过品红染色镜检查花粉发育时期，将采摘后的花蕾放入低温静置箱进行预处理备用，同时选择孢子发育处于单核靠边期的花粉当做外植体；
B：花愈伤组织诱导，在消毒器内准备稀释乙醇，将处理后的花蕾通过洗洁精溶液进行浸泡3～5min，接着通过净水进行清洗，擦干花蕾表面水分后将花蕾放入消毒器内浸泡20～30s，再用净水清洗，然后放在无菌工作台上，用解剖针将花蕾解剖，通过消毒后的镊子将花药取出并接种于混合培养基内，并放入培养箱内；
C：培养，接种后每天光照时间18～20h，培养箱内温度控制在23～25℃，直至形成，每天翻动种子1次，并保持一定的湿度，直至种子形成愈伤组织；之后每天光照时间15～17h，检测补充混合培养基内的营养成分组并保持混合培养基内的湿度，保持混合培养基内的PH值为6～7，培养箱内温度控制在25～27℃，直至种子形成不定芽；接着继续检测并补充混合培养基内的营养成分组，每天光照时间16～18h，培养箱内的温度控制在27℃，保持混合培养基内的PH值为7，直至种子生根；
D：移栽，在种子幼苗的根部生长出三条以上的根茎后，将幼苗随混合培养基从培养箱内移出，在混合培养基的内部加入营养土、泥炭土、蛭石和珍珠岩组成混合基土，然后通过自然光照射幼苗10～14天，每天不定时给幼苗进行营养液补充，保持混合基土的湿度，直至幼苗成活随混合基土一并移至田中。
7.根据权利要求6所述的一种榛子离体培养，其特征在于：
所述步骤B中，经消毒器浸泡消毒后的花蕾通过净水清洗3次。
8.根据权利要求6所述的一种榛子离体培养，其特征在于：
所述步骤B中，稀释乙醇内乙醇的含量为75％。
9.根据权利要求6所述的一种榛子离体培养，其特征在于：
所述步骤D中，营养土、泥炭土、蛭石和珍珠岩的质量比为2:1:1:0.5。
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