CN108094197A - 一种油用牡丹凤丹无性繁殖育苗方法 - Google Patents

一种油用牡丹凤丹无性繁殖育苗方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种油用牡丹凤丹无性繁殖育苗方法，涉及牡丹育苗技术领域，包括以下步骤：外植体选择、无菌繁殖系建立、增殖培养、生根培养、壮根培养、移栽。本发明中选择添加适当植物激素的诱导培养基、增殖培养基、生根培养基和壮根培养基，有效保证了无菌繁殖系的增殖分化、生根，生长势较健壮，整个培养期间褐化、枯死率低，具有较高的诱导率、繁殖率和生根率，所得到的组培苗的育苗成活率达65％以上，且所得幼苗能够很好的保持凤丹品种特性，提高凤丹育苗效率，有利于建立牡丹的快速繁殖技术体系，提高育苗产量。

Description

一种油用牡丹凤丹无性繁殖育苗方法
技术领域
本发明涉及牡丹育苗技术领域，尤其涉及一种油用牡丹凤丹无性繁殖育苗方法。
背景技术
牡丹又名“富贵花”、“两百金”等，属芍药科芍药属，是我国重要的传统名花。牡丹栽培品种繁多，花冠硕大、花姿艳丽、色泽鲜艳、色味芳香、雍容华贵，素有“花中之王”之美誉。油用牡丹是指牡丹组中易于结实，且种子含油量高，适宜用作油料作物栽培的种类，其作为一种新兴的木本油料作物，具有高产出、高含油率和低成本的优点。油用牡丹的传统繁育方式有种子繁育、分株繁育、压条繁育和嫁接繁育。但在实际生产中存在一些问题，如种子具有休眠习性，在自然状态下萌发时间长且生根萌发率极低，一些名贵品种经长期人工栽培，结实能力降低，种子发育不良；嫁接和分株等常规无性繁育方式不仅成苗周期长，出苗量少，质量参差不齐，且只能在生长季节繁育，繁育速度有限，难以满足生产的需求。为满足油用牡丹苗木的不断增长的市场需求，针对传统繁育方法中繁育周期长、繁育系数低等问题，利用组织培养可在短期内大量繁育优良品种的优势。因此，在充分的实验研究的基础上，开发油用牡丹组织培养育苗方法是及其有必要的。然而，现有技术中牡丹组织培养技术中，培养材料易发生褐变、枯死等现象，育苗率低。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种油用牡丹凤丹无性繁殖育苗方法，培育的幼苗生长势较健壮，整个培养期间褐化、枯死率低，具有较高的育苗成活率。
本发明提出的一种油用牡丹凤丹无性繁殖育苗方法，包括以下步骤：
S1、外植体选择：选择油用牡丹丹凤的土芽作为外植体，将外植体消毒、杀菌处理；
S2、无菌繁殖系建立：将外植体接种到诱导培养基上，先在10-20℃下暗培养，再在20-25℃下光照培养，光照周期为12-15h/d，光照强度1800-2300Lx，得到无菌苗，所述诱导培养基的组成成分如下：MS+1.0mg/L BA+0.1mg/L NAA+0.08mg/L SA+30.0g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S3、增殖培养：将无菌苗接入增殖培养基中在20-25℃下进行光照增殖培养，光照周期为10-13h/d，光照强度1800-2300Lx，得到增殖苗，所述增殖培养基的组成成分如下：DWK+1.2mg/L BA+1.4mg/L KT+0.08mg/L NAA+0.04g/L葡糖基-β-环糊精+30.0g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S4、生根培养：将增殖苗接入生根培养基中在20-25℃下进行光照预生根培养，光照周期为10-13h/d，光照强度2000-2500Lx，得到生根苗，所述生根培养基的组成成分如下：1/2MS+1.1mg/L IBA+0.3mg/L NAA+25.0g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S5、壮根培养：将生根苗接入壮根培养基中在20-25℃下进行光照壮根壮苗培养，光照周期为9-12h/d，光照强度2000-2500Lx，得到壮根苗，所述壮根培养基的组成成分如下：DWK+1.0mg/L BA+0.5mg/L IBA+20.0g/L蔗糖+2.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S6、移栽：当壮根苗长到高度约5-7cm的植物体时，将其暴露于空气中炼苗5-7d，然后转入培养基质中，当幼苗高度达10cm以上时移栽到温室大田中培养。
优选地，所述S1中，选择生长至2-3cm的土芽作为外植体。
优选地，所述S1中，消毒杀菌处理具体是将土芽外植体用水冲洗干净，然后放入70％酒精中浸泡10-20s，在干净工作台上用0.1％HgCl2溶液消毒5-10min，用无菌水冲洗3-5次。
优选地，所述S2中，先在10-15℃下暗培养3-5d，再在20-25℃下光照培养15-20d。
优选地，所述S3中，增殖培养20-25d。
优选地，所述S4中，预生根培养30-35d。
优选地，所述S5中，壮根壮苗培养10-15d。
优选地，所述S6中，培养基质由珍珠岩和蛭石按照1:1质量比组成的。
有益效果：本发明中选择土芽作为外植体，营养成分累积丰富，且苞片紧实，污染率低，生长至2-3cm的土芽最佳，将其置于诱导培养基中诱导培养，易形成愈伤组织，且诱导培养中先暗培养再光照培养，有利于抑制其褐化作用，增高愈伤组织的增殖倍数，且增殖培养基中含有的葡糖基-β-环糊精能够进一步减少增殖过程中培养材料褐化的发生，且该作用与诱导培养中培养方式有配合作用，对于直接光照培养的愈伤组织，该增殖培养基则不能有效抑制褐变的发生，推测该功效与葡糖基-β-环糊精的固色吸附作用有关系；选择添加适当植物激素的诱导培养基、增殖培养基、生根培养基和壮根培养基，有效保证了无菌繁殖系的增殖分化、生根，生长势较健壮，整个培养期间褐化、枯死率低，具有较高的诱导率、繁殖率和生根率，所得到的组培苗的育苗成活率达65％以上，且所得幼苗能够很好的保持凤丹品种特性，提高凤丹育苗效率，有利于建立牡丹的快速繁殖技术体系，提高育苗产量。
具体实施方式
下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
实施例1
本发明提出的一种油用牡丹凤丹无性繁殖育苗方法，包括以下步骤：
S1、外植体选择：选择油用牡丹丹凤的土芽作为外植体，将外植体消毒、杀菌处理；
S2、无菌繁殖系建立：将外植体接种到诱导培养基上，先在10℃下暗培养，再在20℃下光照培养，光照周期为12h/d，光照强度1800Lx，得到无菌苗，所述诱导培养基的组成成分如下：MS+1.0mg/L BA+0.1mg/L NAA+0.08mg/L SA+30.0g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S3、增殖培养：将无菌苗接入增殖培养基中在20℃下进行光照增殖培养，光照周期为10h/d，光照强度1800Lx，得到增殖苗，所述增殖培养基的组成成分如下：DWK+1.2mg/L BA+1.4mg/L KT+0.08mg/L NAA+0.04g/L葡糖基-β-环糊精+30.0g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S4、生根培养：将增殖苗接入生根培养基中在20℃下进行光照预生根培养，光照周期为10h/d，光照强度2000Lx，得到生根苗，所述生根培养基的组成成分如下：1/2MS+1.1mg/L IBA+0.3mg/L NAA+25.0g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S5、壮根培养：将生根苗接入壮根培养基中在20℃下进行光照壮根壮苗培养，光照周期为9h/d，光照强度2000Lx，得到壮根苗，所述壮根培养基的组成成分如下：DWK+1.0mg/LBA+0.5mg/L IBA+20.0g/L蔗糖+2.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S6、移栽：当壮根苗长到高度约5-7cm的植物体时，将其暴露于空气中炼苗5d，然后转入培养基质中，当幼苗高度达10cm以上时移栽到温室大田中培养。
实施例2
本发明提出的一种油用牡丹凤丹无性繁殖育苗方法，包括以下步骤：
S1、外植体选择：选择油用牡丹丹凤的土芽作为外植体，将土芽外植体用水冲洗干净，然后放入70％酒精中浸泡10s，在干净工作台上用0.1％HgCl2溶液消毒5min，用无菌水冲洗3次；
S2、无菌繁殖系建立：将外植体接种到诱导培养基上，先在13℃下暗培养3d，再在22℃下光照培养15d，光照周期为13h/d，光照强度2000Lx，得到无菌苗，所述诱导培养基的组成成分如下：MS+1.0mg/L BA+0.1mg/L NAA+0.08mg/L SA+30.0g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S3、增殖培养：将无菌苗接入增殖培养基中在22℃下进行光照增殖培养20d，光照周期为11h/d，光照强度2000Lx，得到增殖苗，所述增殖培养基的组成成分如下：DWK+1.2mg/L BA+1.4mg/L KT+0.08mg/L NAA+0.04g/L葡糖基-β-环糊精+30.0g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S4、生根培养：将增殖苗接入生根培养基中在22℃下进行光照预生根培养30d，光照周期为11h/d，光照强度2200Lx，得到生根苗，所述生根培养基的组成成分如下：1/2MS+1.1mg/L IBA+0.3mg/L NAA+25.0g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S5、壮根培养：将生根苗接入壮根培养基中在20℃下进行光照壮根壮苗培养10d，光照周期为10h/d，光照强度2200Lx，得到壮根苗，所述壮根培养基的组成成分如下：DWK+1.0mg/L BA+0.5mg/L IBA+20.0g/L蔗糖+2.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S6、移栽：当壮根苗长到高度约5-7cm的植物体时，将其暴露于空气中炼苗5-7d，然后转入培养基质中，当幼苗高度达10cm以上时移栽到温室大田中培养。
实施例3
本发明提出的一种油用牡丹凤丹无性繁殖育苗方法，包括以下步骤：
S1、外植体选择：选择油用牡丹丹凤生长至2cm的土芽作为外植体，将土芽外植体用水冲洗干净，然后放入70％酒精中浸泡15s，在干净工作台上用0.1％HgCl2溶液消毒8min，用无菌水冲洗4次；
S2、无菌繁殖系建立：将外植体接种到诱导培养基上，先在15℃下暗培养4d，再在22℃下光照培养18d，光照周期为14h/d，光照强度2200Lx，得到无菌苗，所述诱导培养基的组成成分如下：MS+1.0mg/L BA+0.1mg/L NAA+0.08mg/L SA+30.0g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S3、增殖培养：将无菌苗接入增殖培养基中在23℃下进行光照增殖培养23d，光照周期为12h/d，光照强度2200Lx，得到增殖苗，所述增殖培养基的组成成分如下：DWK+1.2mg/L BA+1.4mg/L KT+0.08mg/L NAA+0.04g/L葡糖基-β-环糊精+30.0g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S4、生根培养：将增殖苗接入生根培养基中在23℃下进行光照预生根培养32d，光照周期为12h/d，光照强度2400Lx，得到生根苗，所述生根培养基的组成成分如下：1/2MS+1.1mg/L IBA+0.3mg/L NAA+25.0g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S5、壮根培养：将生根苗接入壮根培养基中在23℃下进行光照壮根壮苗培养14d，光照周期为11h/d，光照强度2400Lx，得到壮根苗，所述壮根培养基的组成成分如下：DWK+1.0mg/L BA+0.5mg/L IBA+20.0g/L蔗糖+2.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S6、移栽：当壮根苗长到高度约5-7cm的植物体时，将其暴露于空气中炼苗5-7d，然后转入由珍珠岩和蛭石按照1:1质量比组成的培养基质中，当幼苗高度达10cm以上时移栽到温室大田中培养。
实施例4
本发明提出的一种油用牡丹凤丹无性繁殖育苗方法，包括以下步骤：
S1、外植体选择：选择油用牡丹丹凤生长至3cm的土芽作为外植体，将土芽外植体用水冲洗干净，然后放入70％酒精中浸泡20s，在干净工作台上用0.1％HgCl2溶液消毒10min，用无菌水冲洗5次；
S2、无菌繁殖系建立：将外植体接种到诱导培养基上，先在15℃下暗培养5d，再在25℃下光照培养20d，光照周期为15h/d，光照强度2300Lx，得到无菌苗，所述诱导培养基的组成成分如下：MS+1.0mg/L BA+0.1mg/L NAA+0.08mg/L SA+30.0g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S3、增殖培养：将无菌苗接入增殖培养基中在25℃下进行光照增殖培养25d，光照周期为13h/d，光照强度2300Lx，得到增殖苗，所述增殖培养基的组成成分如下：DWK+1.2mg/L BA+1.4mg/L KT+0.08mg/L NAA+0.04g/L葡糖基-β-环糊精+30.0g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S4、生根培养：将增殖苗接入生根培养基中在25℃下进行光照预生根培养35d，光照周期为13h/d，光照强度2500Lx，得到生根苗，所述生根培养基的组成成分如下：1/2MS+1.1mg/L IBA+0.3mg/L NAA+25.0g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S5、壮根培养：将生根苗接入壮根培养基中在25℃下进行光照壮根壮苗培养15d，光照周期为12h/d，光照强度2500Lx，得到壮根苗，所述壮根培养基的组成成分如下：DWK+1.0mg/L BA+0.5mg/L IBA+20.0g/L蔗糖+2.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S6、移栽：当壮根苗长到高度约5-7cm的植物体时，将其暴露于空气中炼苗7d，然后转入由珍珠岩和蛭石按照1:1质量比组成的培养基质中，当幼苗高度达10cm以上时移栽到温室大田中培养。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种油用牡丹凤丹无性繁殖育苗方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、外植体选择：选择油用牡丹丹凤的土芽作为外植体，将外植体消毒、杀菌处理；
S2、无菌繁殖系建立：将外植体接种到诱导培养基上，先在10-20℃下暗培养，再在20-25℃下光照培养，光照周期为12-15h/d，光照强度1800-2300Lx，得到无菌苗，所述诱导培养基的组成成分如下：MS+1.0mg/L BA+0.1mg/L NAA+0.08mg/L SA+30.0g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S3、增殖培养：将无菌苗接入增殖培养基中在20-25℃下进行光照增殖培养，光照周期为10-13h/d，光照强度1800-2300Lx，得到增殖苗，所述增殖培养基的组成成分如下：DWK+1.2mg/L BA+1.4mg/L KT+0.08mg/L NAA+0.04g/L葡糖基-β-环糊精+30.0g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S4、生根培养：将增殖苗接入生根培养基中在20-25℃下进行光照预生根培养，光照周期为10-13h/d，光照强度2000-2500Lx，得到生根苗，所述生根培养基的组成成分如下：1/2MS+1.1mg/L IBA+0.3mg/L NAA+25.0g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S5、壮根培养：将生根苗接入壮根培养基中在20-25℃下进行光照壮根壮苗培养，光照周期为9-12h/d，光照强度2000-2500Lx，得到壮根苗，所述壮根培养基的组成成分如下：DWK+1.0mg/L BA+0.5mg/L IBA+20.0g/L蔗糖+2.0g/L琼脂，调节pH至6.0；
S6、移栽：当壮根苗长到高度约5-7cm的植物体时，将其暴露于空气中炼苗5-7d，然后转入培养基质中，当幼苗高度达10cm以上时移栽到温室大田中培养。
2.根据权利要求1所述的油用牡丹凤丹无性繁殖育苗方法，其特征在于，所述S1中，选择生长至2-3cm的土芽作为外植体。
3.根据权利要求1所述的油用牡丹凤丹无性繁殖育苗方法，其特征在于，所述S1中，消毒杀菌处理具体是将土芽外植体用水冲洗干净，然后放入70％酒精中浸泡10-20s，在干净工作台上用0.1％HgCl2溶液消毒5-10min，用无菌水冲洗3-5次。
4.根据权利要求1所述的油用牡丹凤丹无性繁殖育苗方法，其特征在于，所述S2中，先在10-15℃下暗培养3-5d，再在20-25℃下光照培养15-20d。
5.根据权利要求1所述的油用牡丹凤丹无性繁殖育苗方法，其特征在于，所述S3中，增殖培养20-25d。
6.根据权利要求1所述的油用牡丹凤丹无性繁殖育苗方法，其特征在于，所述S4中，预生根培养30-35d。
7.根据权利要求1所述的油用牡丹凤丹无性繁殖育苗方法，其特征在于，所述S5中，壮根壮苗培养10-15d。
8.根据权利要求1所述的油用牡丹凤丹无性繁殖育苗方法，其特征在于，所述S6中，培养基质由珍珠岩和蛭石按照1:1质量比组成的。
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