CN116602212B - 芍药属植物离体培养和增殖方法及专用培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种芍药属植物离体培养和增殖方法及专用培养基。该方法包括：首先，以芍药属植物幼茎为外植体，将所述外植体接种于启动培养基中进行培养以使所述外植体上腋芽陆续长出，用于后续增殖阶段的培养；然后，切取上一步骤得到的外植体上的芽并将其接种于增殖培养基中进行丛生芽的培养。本发明方法可以解决外植体褐化问题，外植体出芽频率高，增殖快。
Description
技术领域
本发明属于植物离体组织培养领域，涉及一种芍药属植物离体培养和增殖方法及专用培养基，该方法能够离体培养与高效增殖芍药和牡丹茎芽。
背景技术
芍药属(Paeonia L.)植物，根据其生长习性与起源分为3个组，包括木本的牡丹组(Sect.Moutan DC.)、草本的芍药组(Sect.Paeonia)和北美芍药组(Sect.Onaepia.)。牡丹(Tree peony，Paeonia suffruticosa Andr.)是起源于我国的传统名花，素有“花中之王”的美称。芍药(Herbaceous peony，Paeonia lactiflflora Pall.)具有“花相”、“五月花神”的美称，是我国古代情花与传统中药材，赤芍(Radix Paeoniae rubra)和白芍(RadixPaeoniae Alba)更是名冠中西。
芍药、牡丹集观赏价值、中药材价值、食用价值、高端食用油价值等多重商业经济价值为一体。规模化种植与发展芍药和牡丹产业，成片花海不但实现景观提升与商旅文化，而且可以带动鲜切花产业、中药材加工、食用油加工、精油提取、花青素提取、饼粕饲用等等全产业链的发展。
芍药和牡丹，根据其用途分为传统的野生药用型、栽培药用型、栽培观赏型(鲜切花)，以及油用型等等。长期以来，芍药、牡丹的繁殖方式比较单一，观赏型芍药主要依靠分株繁殖，种苗增殖速度慢成为了限制新品种快速推广应用与鲜切花产业发展的瓶颈问题。药用型、油用型芍药虽可以通过种子繁殖，但其后代基因分离与品种退化极为严重，优良性状难以有效保持。作为无性繁殖植物的芍药，利用植物组织培养、离体快繁与细胞胚胎工程技术开展优良品种无性系的工厂化快速繁育无疑是解决这个产业瓶颈问题最有力的手段。
高志民等(牡丹、芍药繁殖与育种研究现状，北京林业大学学报，2001，第23卷，4期)对国内外牡丹、芍药的繁殖与育种研究现状进行了系统的分析。近些年也有一些关于芍药、牡丹离体组培的技术研究，但普遍存在着芍药属组培快繁过程中生长速度慢、褐化、出芽率低、玻璃化、繁殖系数低、生根难、组培苗移栽成活率低、实验规模小、重复性差，基因型差异大等难题一直困扰整个学界。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
针对现有技术的缺陷，本发明目的在于提供一种芍药属植物离体培养和增殖方法及专用培养基。本发明方法可以解决外植体褐化问题，外植体出芽频率高，增殖快。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明第一方面提供了一种芍药属植物离体培养和增殖方法，包括如下步骤：
S1：以芍药属植物幼茎为外植体，将所述外植体接种于启动培养基中进行培养以使所述外植体上腋芽陆续长出，用于后续增殖阶段的培养；其中，所述启动培养基以PL1为基础培养基，并在基础培养基PL1中加入如下成分：6-BA1.0-2.0mg/L，LH 100-400mg/L，蔗糖30-50g/L，植物凝胶5-7g/L；所述基础培养基PL1包括：大量元素、微量元素、铁盐、维生素、甘氨酸和肌醇，其中，所述大量元素及其在所述启动培养基中的浓度为：KNO3 600-700mg/L，NH4NO3 80-400mg/L，MgSO4·7H2O 120-370mg/L，KH2PO4 180-272mg/L，Ca(NO3)2·4H2O 400-550mg/L；
S2：切取步骤S1得到的外植体上的芽苗并将其接种于增殖培养基中进行丛生芽的培养；其中所述增殖培养基以PL2为基础培养基，并在基础培养基PL2中加入如下成分：6-BA0.5-1.0mg/L，meta-toplin 0.2-0.5mg/L，GA30.1-0.2mg/L，蔗糖20-30g/L，植物凝胶5-7g/L，所述基础培养基PL2包括：大量元素、微量元素、铁盐、维生素、甘氨酸和肌醇，其中，所述大量元素及其在所述增殖培养基中的浓度为：KNO3 1350-1750mg/L，CaCl2·2H2O180-440mg/L，MgSO4·7H2O 180-370mg/L，NH4H2PO4 180-380mg/L，Ca(NO3)2·4H2O 750-900mg/L。
采用本发明启动培养基培养的目的是调整外植体枝条、芽或腋芽的生理状态，通过7-40天预培养使外植体腋芽陆续长出，可以解决外植体褐化问题，外植体生长状态良好，外植体出芽频率最高、褐化率最低。本发明增殖培养的目的是使启动培养阶段获得的芽在增殖培养基上快速增殖，未经过本发明启动培养阶段的外植体很容易褐化、玻璃化，并逐渐枯死。
在上述芍药属植物离体培养和增殖方法中，所述芍药属植物选自芍药或牡丹，从出芽率和增殖率上来说，所述芍药的品种优选为芍油17C或夏威夷珊瑚粉；所述牡丹的品种优选为黄冠或巴茨拉。
在上述芍药属植物离体培养和增殖方法中，作为一种优选实施方式，所述外植体为春天芍药属植物出苗后的幼茎，优选幼茎长度为10-20cm。采用该时期的外植体进行培养有利于增加出芽率。
在上述芍药属植物离体培养和增殖方法中，作为一种优选实施方式，步骤S1中，所述培养的时间为7-40天；培养温度为25℃，培养条件为12h光培养/12h暗培养交替进行。
在上述芍药属植物离体培养和增殖方法中，作为一种优选实施方式，步骤S2中，所述培养的时间为40天，培养温度为25℃，培养条件为12h光培养/12h暗培养交替进行。
本发明第二方面提供一种芍药属植物离体培养和增殖培养基，所述培养基包括启动培养基和增殖培养基，其中，
所述启动培养基以PL1为基础培养基，并在基础培养基PL1中加入如下成分：6-BA1.5-2.0mg/L，LH 100-400mg/L，蔗糖30-50g/L，植物凝胶5-7g/L；所述基础培养基PL1包括：大量元素、微量元素、铁盐、维生素、甘氨酸和肌醇，其中，所述大量元素及其在所述启动培养基中的浓度为：KNO3 600-700mg/L，NH4NO3 80-400mg/L，MgSO4·7H2O 120-370mg/L，KH2PO4 180-272mg/L，Ca(NO3)2·4H2O 400-550mg/L；
所述增殖培养基以PL2为基础培养基，并在基础培养基PL2中加入如下成分：6-BA0.5-1.0mg/L，meta-toplin 0.2-0.5mg/L，GA3 0.1-0.2mg/L，蔗糖20-30g/L，植物凝胶5-7g/L，所述基础培养基PL2包括：大量元素、微量元素、铁盐、维生素、甘氨酸和肌醇，其中，所述大量元素及其在所述增殖培养基中的浓度为：KNO3 1350-1750mg/L，CaCl2·2H2O 180-440mg/L，MgSO4·7H2O 180-370mg/L，NH4H2PO4 180-380mg/L，Ca(NO3)2·4H2O 750-900mg/L。
在上述芍药属植物离体培养和增殖培养基中，作为一种优选实施方式，所述基础培养基PL1中各成分及浓度如下：
大量元素：KNO3 650mg/L，NH4NO3 80-400mg/L，MgSO4·7H2O 120-370mg/L，KH2PO4180-272mg/L，Ca(NO3)2·4H2O 472mg/L；
微量元素：H3BO3 6.2mg/L，MnSO4·4H2O 22.3mg/L，ZnSO4·7H2O 8.6mg/L，NaMoO4·2H2O 0.25mg/L，CuSO4·5H2O 0.025mg/L，CoCl2·6H2O 0.025mg/L，KI 0.83mg/L；
铁盐：FeSO4·7H2O 55.6mg/L，Na2EDTA·2H2O 74.6mg/L；
维生素：VB1 0.4mg/L，VB6 0.5mg/L，VB5 0.5mg/L；
甘氨酸2mg/L，肌醇100mg/L，pH5.8。
在上述芍药属植物离体培养和增殖培养基中，作为一种优选实施方式，所述基础培养基PL2中各成分及浓度如下：
大量元素：KNO3 1550mg/L，CaCl2·2H2O 180-440mg/L，MgSO4·7H2O180-370mg/L，NH4H2PO4 180-380mg/L，Ca(NO3)2·4H2O 825mg/L；
微量元素：H3BO3 6.2mg/L，MnSO4·4H2O 22.3mg/L，ZnSO4·7H2O 8.6mg/L，NaMoO4·2H2O 0.25mg/L，CuSO4·5H2O 0.025mg/L，CoCl2·6H2O0.025mg/L，KI 0.83mg/L；
铁盐：FeSO4·7H2O 55.6mg/L，Na2EDTA·2H2O 74.6mg/L；
维生素：VB1 0.4mg/L，VB6 0.5mg/L，VB5 0.5mg/L；
甘氨酸2mg/L，肌醇100mg/L；pH5.8。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明将芍药属植物的离体组织培养分为了“启动培养”和“增殖培养”两个阶段。优选方法是芍药牡丹茎芽外植体(即芍药属植物幼茎)，首先接种于PL1作为基础培养基的启动培养基上25℃启动培养7-40天，获得了高的出芽率，同时显著降低了褐化比率。增殖培养阶段芍药牡丹芽苗置于PL2作为基础培养基的增殖培养基上培养40天，芍药(特别是芍油17C、夏威夷珊瑚粉等品种)和牡丹(特别是黄冠、巴茨拉等品种)的组培苗均实现了快速增殖，增殖率达到1.17-4.37倍。在PL2作为基础培养基的增殖培养基上2个芍药品种没有褐化现象，2个牡丹品种的褐化率极低。本发明研发的PL1和PL2系列培养基，适合芍药和牡丹的组织培养，显著优于MS和WPM等培养基，解决了外植体与培养基褐化与组培苗玻璃化(生长停止)的技术难题。本发明将为芍药牡丹珍稀品种种苗的快速繁育提供捷径，加速新品种在园林花卉产业上的快速应用。
附图说明
图1是外植体启动培养的初始效果图；
图2是外植体启动培养1个月后的幼芽；
图3是增殖培养阶段的丛生芽。
具体实施方式
下面将结合具体实施方式和实施例对本发明的技术方案进行详细说明，以下的实施例和实施方式仅是便于更好地理解本发明，而不构成对本发明的限定。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买。
本发明具体实施方式中使用的启动培养基中包括基础培养基PL1和附加的激素成分、蔗糖和凝胶等，启动培养基中各成分的含量如下：
大量元素：KNO3 650mg/L，NH4NO3 80-400mg/L，MgSO4·7H2O 120-370mg/L，KH2PO4180-272mg/L，Ca(NO3)2·4H2O 472mg/L；
微量元素：H3BO3 6.2mg/L，MnSO4·4H2O 22.3mg/L，ZnSO4·7H2O 8.6mg/L，NaMoO4·2H2O 0.25mg/L，CuSO4·5H2O 0.025mg/L，CoCl2·6H2O0.025mg/L，KI 0.83mg/L；
铁盐：FeSO4·7H2O 55.6mg/L，Na2EDTA·2H2O 74.6mg/L；
维生素：VB1 0.4mg/L，VB6 0.5mg/L，VB5 0.5mg/L；
甘氨酸2mg/L，肌醇100mg/L；
6-BA 1.5-2.0mg/L，LH 100-400mg/L，蔗糖30-50g/L，植物凝胶5-7g/L，pH5.8。
本发明具体实施方式中使用的增殖培养基中包括基础培养基PL2和附加的激素成分、蔗糖和凝胶等，启动培养基中各成分的含量如下：
大量元素：KNO3 1550mg/L，CaCl2·2H2O 180-440mg/L，MgSO4·7H2O180-370mg/L，NH4H2PO4 180-380mg/L，Ca(NO3)2·4H2O 825mg/L；
微量元素：H3BO3 6.2mg/L，MnSO4·4H2O 22.3mg/L，ZnSO4·7H2O 8.6mg/L，NaMoO4·2H2O 0.25mg/L，CuSO4·5H2O 0.025mg/L，CoCl2·6H2O0.025mg/L，KI 0.83mg/L；
铁盐：FeSO4·7H2O 55.6mg/L，Na2EDTA·2H2O 74.6mg/L；
维生素：VB1 0.4mg/L，VB6 0.5mg/L，VB5 0.5mg/L；
甘氨酸2mg/L，肌醇100mg/L；
6-BA0.5-1.0mg/L，meta-toplin 0.2-0.5mg/L，GA3 0.1-0.2mg/L，蔗糖20-30g/L，植物凝胶5-7g/L；pH5.8。
培养基各成分均可通过市售途径获得。
实施例1：外植体取材时期与消毒灭菌
取材时期：实验芍药和牡丹品种材料种植在北京市农林科学院院内试验田(海淀区)。芍药取材最佳时间在春季4月1-10日(海淀区)，芍药幼茎高达到10-20cm左右时取地上部外植体最佳，不同品种有所差异。取材太早外植体叶节基部腋芽发育不完全，取材太晚大部分腋芽已分化成花芽。牡丹取材最佳时期，一般比芍药早10-15天左右。
消毒灭菌：外植体用75％酒精擦拭干净后，用2.8％(有效氯含量)的次氯酸钠或2-3％的氯溴异氰尿酸处理20分钟，然后用无菌水冲洗2-3次，接种到启动培养基上。置于25℃培养间，12h光/12h暗交替培养。
实施例2：启动培养与培养基效率试验
以4个芍药品种：芍油17C(杭芍后代选系)、大富贵、杨妃出浴、夏威夷珊瑚粉；3个牡丹品种：黄冠、巴茨拉、景玉等的幼茎外植体为材料，分别置于如下基础培养基中：MS、1/2MS、WPM和PL1，每种培养基上接种的外植体数量相同，25℃培养间培养1-2个月，调查出芽时间、褐化率、出芽个数、芽生长状态，参见下表1和表2。这些品种也可以通过市售渠道购买。四种基本培养基中均分别另外附加6-BA2mg/L+LH 300mg/L+蔗糖50g/L+植物凝胶5g/L，pH5.8。PL1中加入上述附加成分后形成启动培养基。
其中PL1基本培养基中各成分的含量如下(mg/L)：大量元素：KNO3650，NH4NO3 400，MgSO4·7H2O 370，KH2PO4 180，Ca(NO3)2·4H2O 472；微量元素：H3BO3 6.2，MnSO4·4H2O22.3，ZnSO4·7H2O 8.6，NaMoO4·2H2O0.25，CuSO4·5H2O 0.025，CoCl2·6H2O 0.025，KI0.83；铁盐：FeSO4·7H2O55.6，Na2EDTA·2H2O 74.6；有机：VB1 0.4，VB6 0.5，VB5 0.5，甘氨酸2，肌醇100。
外植体启动培养的初始效果图，参见图1；培养1个月后的幼芽，参见图2。
表1和表2中的出芽时间是接种到启动培养基后，外植体最早的出芽时间，出芽时间受品种影响较大，一般早花品种出芽较快，晚花品种出芽较慢。
表1和表2中的褐化率是在接种后第20天的统计结果，褐化率＝褐化苗/接种外植体数量*100％。根据统计数据，同一品种不同培养基(MS、1/2MS、WPM、PL1)之间做差异性显著性分析(p<0.05)标注(上标a、b、c...，如果不同培养基得到的同一类效果数据所标注的字母不同，则表示这两种培养基得到的效果之间存在显著差异)。
表1和表2中的出芽个数是在接种后40天的统计结果，出芽个数是指所有试验接种外植体上出芽的总数。出芽总数多于接种外植体数，说明一个外植体上有多个芽出现。
接种效率＝出芽总数/接种外植体数*100％，根据统计数据，同一品种不同基础培养基(MS、1/2MS、WPM、PL1)之间做差异性显著性分析(p<0.05)标注(上标a、b、c...，如果不同培养基得到的同一类效果数据所标注的字母不同，则表示这两种培养基得到的效果之间存在显著差异)。
表1和表2中芽生长状况在接种后40天肉眼观察芽生长状态，其中，1)叶色深绿、边缘圆润、芽直立、幼叶芽生长旺盛，记为+++++；2)叶色绿、芽基本直立、幼叶芽生长较旺，记为++++；3)叶色较浅、叶边缘略有皱缩，幼叶芽生长一般，记为+++；4)叶色略发白、边缘皱缩显著、叶芽生长势较弱，记为++；5)叶色发黄或白、芽叶干枯、叶芽生长势较弱，记为+。
表1：芍药品种启动培养阶段外植体出芽率与褐化率
从表1可看出，①芍药品种差异较大，外植体接种出芽效果，芍油17C与夏威夷珊瑚粉最佳，芽生长状态最好。②培养基效果，PL1显著优于1/2MS和WPM，MS培养基最差；PL1培养基上外植体出芽数最多，褐化率最低，芽生长状况最佳。③褐化率，受培养基影响最大，受品种影响较小。
表2：牡丹品种启动培养阶段外植体出芽率与褐化率
从表2可看出，①牡丹品种间差异也较大，黄冠外植体出芽最多，芽生长状态最好。②培养基效果，同样是PL1显著优于1/2MS和WPM，MS培养基最差；PL1培养基上外植体出芽数最多，褐化率最低，芽生长状况最佳。③褐化率，受培养基影响最大，受品种影响较小。
在启动培养试验前期，针对6-BA、KT、CPPU、TDZ等不同类型的细胞分裂素，进行了筛选试验，发现1-2mg/L的6-BA出芽效果最好、出芽数量最多。TDZ次之，但外植体基本愈伤化显著，芽容易畸形或出现幼叶重生。总体上讲，出芽数量随着细胞分裂素含量提高而增加，但细胞分裂素过高，外植体和培养基的褐化现象会更加严重。
实施例3：增殖阶段培养基效果试验
将在以PL1为基础培养基的启动培养基上培养的出芽多、生长状态好芍药牡丹品种(芍油17C、夏威夷珊瑚粉、黄冠、巴茨拉)的幼芽苗从外植体上切下，分别转入或接种到1/2MS、WPM、PL1和PL2基础培养基上进行组培苗增殖培养。所有基本培养基中均附加6-BA0.5mg/L+meta-toplin0.5mg/L+GA3 0.1mg/L+蔗糖30g/L+植物凝胶7g/L，pH5.8。
置于25℃培养间，12h光/12h暗交替培养40天。调查组培苗或丛生芽个数、褐化率、苗芽生长状态等，参见表3。
PL1基础培养基的配方同实施例2中PL1基础培养基。
PL2基础培养基的配方如下(mg/L)：大量元素KNO3 1550，CaCl2·2H2O 440，MgSO4·7H2O 370，NH4H2PO4 180，Ca(NO3)2·4H2O 825；微量元素H3BO3 6.2，MnSO4·4H2O22.3，ZnSO4·7H2O 8.6，NaMoO4·2H2O0.25，CuSO4·5H2O 0.025，CoCl2·6H2O 0.025，KI0.83；铁盐FeSO4·7H2O55.6，Na2EDTA·2H2O 74.6；有机VB1 0.4，VB6 0.5，VB5 0.5，甘氨酸2，肌醇100，pH5.8。
增殖培养阶段的丛生芽参见图3。
表3中增殖倍数＝(接种40天后芽的个数-接种的芽苗数量)/接种的芽苗数量，根据统计数据，同一品种不同培养基(1/2MS、WPM、PL1、PL2)之间做差异性显著性分析(p<0.05)标注(上标a、b、c...，如果不同培养基得到的同一类效果数据所标注的字母不同，则表示这两种培养基得到的效果之间存在显著差异)。
表3中褐化率为在接种后第40天的统计结果，褐化率＝褐化苗数量/接种芽苗数量*100％。根据统计数据，同一品种不同培养基(1/2MS、WPM、PL1、PL2)之间做差异性显著性分析(p<0.05)标注(上标a、b、c...，如果不同培养基得到的同一类效果数据所标注的字母不同，则表示这两种培养基得到的效果之间存在显著差异)。
表3中的组培苗生长状况是指在接种后40天肉眼观察芽与苗的生长状态，其中，1)植株增高快、叶色深绿、边缘圆润、生长旺盛，芽增殖多，记为+++++；2)植株生长较快、叶色绿、幼叶芽生长较旺，记为++++；3)植物生长速度一盘，叶色较浅、叶边缘略有皱缩，芽增殖较少，记为+++；4)植株增高较慢，叶色略发白、边缘皱缩显著、叶芽生长势较弱，记为++；5)植株增高慢，叶色发黄或白、芽叶干枯、叶芽生长势较弱，芽增殖很少，记为+。
试验结果(表3)显示，在以PL2为基础培养基的增殖培养基上，组培苗增殖效果最好，芍油17C和夏威夷珊瑚粉等2个芍药品种基本上都是丛生芽，增殖倍数分别为3.06和4.37，都没有褐化；黄冠和巴茨拉2个牡丹品种的增殖倍数分别为2.07和1.17，存在很低的褐化比率，组培苗生长质量略次于2个芍药品种。总体表现，以PL1为基础培养基优于以1/2MS和WPM为基础培养基，牡丹品种巴茨拉在1/2MS和WPM培养基不仅褐化严重，而且玻璃化现象明显，几乎没有增殖。
表3：芍药牡丹品种增殖培养阶段组培苗的增殖倍数与生长状况
在增殖培养阶段，发明人探讨了6-BA、KT、TDZ、CPPU、meta-toplin(新型细胞分裂素)、NAA、GA3、2,4-D和Picloram等不同激素的效果。
添加低浓度的GA3(0.05-0.5mg/L)有利于组培苗增高，但过高的GA3(>2mg/L)苗基部会显著愈伤化，生长速度变慢，在考虑其他成分的作用下，在本发明的增殖培养基中，GA3浓度为0.1-0.2mg/L时效果好。
添加NAA(0.1-0.5mg/L)同样会使植株愈伤化，不同品种反应差别较大，有点品种有低频率的生根现象，总体上讲芽的增殖倍数会降低。
添加TDZ(0.5-2mg/L)愈伤化极为显著，部分品种会形成丛生芽，增殖倍数显著提高，但添加TDZ不利于组培苗的增高。
添加2,4-D和Picloram等对芍药属植物的生长毒害性很强，不建议在组培中使用。
添加6-BA、KT、CPPU、meta-toplin等细胞分裂素，低浓度(0.1-0.5mg/L)有利于芽增殖，但随着浓度(>1mg/L)的提高容易出现组培苗玻璃化和培养基的褐化现象，因此，考虑各成分的作用，在本发明的增殖培养基中，6-BA浓度为0.5-1.0mg/L，meta-toplin浓度为0.2-0.5mg/L。通过多次试验，我们发明6-BA0.5mg/L+meta-toplin 0.5mg/L的组合，芽增殖快，同时培养基褐化频率也会显著降低。
Claims (6)
1.一种芍药属植物离体培养和增殖方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1： 以芍药属植物幼茎为外植体，将所述外植体接种于启动培养基中进行培养以使所述外植体上腋芽陆续长出，用于后续增殖阶段的培养；其中，所述启动培养基以PL1为基础培养基，并在基础培养基PL1中加入如下成分：6-BA 2.0mg/L，LH 300mg/L，蔗糖50g/L， 植物凝胶5g/L；所述基础培养基PL1包括：大量元素、微量元素、铁盐、维生素、甘氨酸和肌醇，所述基础培养基PL1中各成分及浓度如下：
大量元素：KNO3 650 mg/L，NH4NO3 400 mg/L，MgSO4•7H2O 370 mg/L，KH2PO4 180 mg/L，Ca(NO3)2•4H2O 472 mg/L；
微量元素：H3BO3 6.2 mg/L，MnSO4•4H2O 22.3 mg/L，ZnSO4•7H2O 8.6 mg/L，NaMoO4•2H2O0.25 mg/L，CuSO4•5H2O 0.025 mg/L，CoCl2•6H2O 0.025 mg/L，KI 0.83 mg/L；
铁盐：FeSO4•7H2O 55.6 mg/L，Na2EDTA•2H2O 74.6 mg/L；
维生素：VB1 0.4 mg/L，VB6 0.5 mg/L，VB5 0.5 mg/L；
甘氨酸 2 mg/L，肌醇 100 mg/L，pH5.8；
S2 ：切取步骤S1得到的外植体上的芽苗并将其接种于增殖培养基中进行丛生芽的培养；其中所述增殖培养基以PL2为基础培养基，并在基础培养基PL2中加入如下成分： 6-BA0.5 mg/L，meta-toplin 0.5mg/L，GA3 0.1mg/L，蔗糖30g/L，植物凝胶7g/L，所述基础培养基PL2包括：大量元素、微量元素、铁盐、维生素、甘氨酸和肌醇，所述基础培养基PL2中各成分及浓度如下：
大量元素：KNO3 1550 mg/L，CaCl2•2H2O 440 mg/L，MgSO4•7H2O 370 mg/L，NH4H2PO4 180mg/L，Ca(NO3)2•4H2O 825 mg/L；
微量元素：H3BO3 6.2 mg/L，MnSO4•4H2O 22.3 mg/L，ZnSO4•7H2O 8.6 mg/L，NaMoO4•2H2O0.25 mg/L，CuSO4•5H2O 0.025 mg/L，CoCl2•6H2O 0.025 mg/L，KI 0.83 mg/L；
铁盐：FeSO4•7H2O 55.6 mg/L，Na2EDTA•2H2O 74.6 mg/L；
维生素：VB1 0.4 mg/L，VB6 0.5 mg/L，VB5 0.5 mg/L；
甘氨酸 2 mg/L，肌醇 100 mg/L，pH5.8；
所述芍药属植物选自芍药或牡丹，所述芍药的品种为夏威夷珊瑚粉，所述牡丹的品种为黄冠或巴茨拉。
2.根据权利要求1所述的芍药属植物离体培养和增殖方法，其特征在于，所述外植体为春天芍药属植物出苗后的幼茎。
3.根据权利要求2所述的芍药属植物离体培养和增殖方法，其特征在于，所述幼茎长度为10-20cm。
4.根据权利要求1所述的芍药属植物离体培养和增殖方法，其特征在于，步骤S1中，所述培养的时间为7-40天；培养温度为25℃，培养条件为12h光培养/12h暗培养交替进行。
5.根据权利要求1所述的芍药属植物离体培养和增殖方法，其特征在于，步骤S2中，所述培养的时间为40天，培养温度为25℃，培养条件为12h光培养/12h暗培养交替进行。
6.一种芍药属植物用培养基，其特征在于，所述培养基包括启动培养基和增殖培养基，其中，
所述启动培养基以PL1为基础培养基，并在基础培养基PL1中加入如下成分：6-BA2.0mg/L，LH 300mg/L，蔗糖50g/L， 植物凝胶5g/L；所述基础培养基PL1包括：大量元素、微量元素、铁盐、维生素、甘氨酸和肌醇，所述基础培养基PL1中各成分及浓度如下：
大量元素：KNO3 650 mg/L，NH4NO3 400 mg/L，MgSO4•7H2O 370 mg/L，KH2PO4 180 mg/L，Ca(NO3)2•4H2O 472 mg/L；
微量元素：H3BO3 6.2 mg/L，MnSO4•4H2O 22.3 mg/L，ZnSO4•7H2O 8.6 mg/L，NaMoO4•2H2O0.25 mg/L，CuSO4•5H2O 0.025 mg/L，CoCl2•6H2O 0.025 mg/L，KI 0.83 mg/L；
铁盐：FeSO4•7H2O 55.6 mg/L，Na2EDTA•2H2O 74.6 mg/L；
维生素：VB1 0.4 mg/L，VB6 0.5 mg/L，VB5 0.5 mg/L；
甘氨酸 2 mg/L，肌醇 100 mg/L，pH5.8；
所述增殖培养基以PL2为基础培养基，并在基础培养基PL2中加入如下成分： 6-BA0.5mg/L，meta-toplin 0.5mg/L，GA3 0.1mg/L，蔗糖30g/L，植物凝胶7g/L，所述基础培养基PL2包括：大量元素、微量元素、铁盐、维生素、甘氨酸和肌醇，所述基础培养基PL2中各成分及浓度如下：
大量元素：KNO3 1550 mg/L，CaCl2•2H2O 440 mg/L，MgSO4•7H2O 370 mg/L，NH4H2PO4 180mg/L，Ca(NO3)2•4H2O 825 mg/L；
微量元素：H3BO3 6.2 mg/L，MnSO4•4H2O 22.3 mg/L，ZnSO4•7H2O 8.6 mg/L，NaMoO4•2H2O0.25 mg/L，CuSO4•5H2O 0.025 mg/L，CoCl2•6H2O 0.025 mg/L，KI 0.83 mg/L；
铁盐：FeSO4•7H2O 55.6 mg/L，Na2EDTA•2H2O 74.6 mg/L；
维生素：VB1 0.4 mg/L，VB6 0.5 mg/L，VB5 0.5 mg/L；
甘氨酸 2 mg/L，肌醇 100 mg/L，pH5.8。
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