CN104082137A

CN104082137A - 一种铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的组织培养方法

Info

Publication number: CN104082137A
Application number: CN201410295548.3A
Authority: CN
Inventors: 王磊; 宋微; 潘静霞; 胡永进; 杨小花
Original assignee: Jiangsu Polytechnic College of Agriculture and Forestry
Current assignee: Jiangsu Polytechnic College of Agriculture and Forestry
Priority date: 2014-06-26
Filing date: 2014-06-26
Publication date: 2014-10-08

Abstract

本发明公开了一种铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的组织培养方法，包括以下步骤：（1）外植体表面灭菌前处理；（2）外植体表面灭菌与初代培养；（3）继代增殖培养；（4）壮苗培养；（5）生根培养；（6）苗的驯化和移栽。本发明所述的方法能够有效克服铁线莲维奥利特·伊利莎白现有繁殖技术存在的缺陷，加快了繁殖速度，增加了繁殖系数，实现了铁线莲的快速繁殖，对于其在园林上的广泛应用和推广具有较强的价值。

Description

一种铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的组织培养方法

技术领域

本发明涉及的是一种铁线莲栽培品种“维奥利特.伊利莎白”的组织培养方法，属于植物组织培养技术领域。

背景技术

维奥利特·伊利莎白(英文商品名为：Clematis‘Violet Elizabeth’)属铁线莲属植物。铁线莲属(Clematis L.)隶属于毛茛科(Ranunculaceae)，为常绿或落叶藤本，罕直立灌木或宿根草本，是世界著名的观赏植物。共约355种，广布全球；我国有147种，全国各地都有分布，尤以西南地区种类较多；江苏省野生12种，5变种及1变型。

铁线莲为毛茛科铁线莲属植物的通称，是一种兼具园艺及药用双重效用的重要植物资源，靠叶柄缠绕攀援生长，茎棕红色似铁丝，其萼片花瓣状，色彩丰富，花开如莲，故得名铁线莲。其生长适应性强，园林用途广泛，观赏价值高，在垂直绿化中具有十分重要的地位，并号称“攀援皇后”。

野生种常进行种子繁殖，但种子较难发芽。栽培品种“维奥利特·伊利莎白”为杂交种，为保持其种的特性，常进行扦插繁殖。为加快繁殖速度，增加繁殖系数，采用组织培养的方法进行铁线莲“维奥利特.伊利莎白”的快速繁殖，对于“维奥利特.伊利莎白”在园林上广泛应用推广具有较强的价值。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种可有效提高繁殖系数以适应引种推广及园林应用需求的铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的组织培养方。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)外植体表面灭菌前处理：取当年生、无病虫害铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的健壮枝条，剪成1cm带芽茎段作为外植体，首先将外植体用洗衣粉溶液浸泡30min，然后用流水冲洗1h；

(2)外植体表面灭菌与初代培养：在无菌瓶中放20-30个带芽茎段外植体，首先加入75％的酒精浸泡20s，然后用无菌水冲洗2次，再用0.1％的升汞灭菌，灭菌3-8min，在灭菌过程中轻轻晃动三角瓶，使升汞与外植体充分接触，灭菌完成后用无菌水冲洗4-5次，冲洗完成后切除外植体两端与升汞接触的部分，接种于无菌的初代培养基上，每个处理接种30个外植体，在培养温度为25±2℃，空气相对湿度50-60％，光照时间12h/d，光照强度为2000lx的条件下，进行进行14-20d的初代培养，茎段腋芽开始萌动，茎尖明显伸长，30-40d后芽点长成带有3-5节的新梢，形成无菌试管苗；

(3)继代增殖培养：逐节切下步骤(2)所述的无菌试管苗转移到增殖培养基上进行继代增殖培养30d，每个处理接种30株小苗，培养条件为培养温度为25±2℃，空气相对湿度50-60％，光照时间12h/d，光照强度为2000lx；

(4)壮苗培养：将步骤(3)增殖后的苗接种在壮苗培养基上进行壮苗培养30d，培养条件为：温度为25±2℃，空气相对湿度50-60％，光照时间12h/d，光照强度为2000lx；

(5)生根培养：将经过步骤(4)壮苗培养后的苗高大于3cm的苗作为生根苗，接入生根培养基中，每个处理接种30瓶，培养40d，培养条件为：温度为25±1℃，空气相对湿度50-60％，光照时间12h/d，光照强度为2000lx；

(6)苗的驯化和移栽：当步骤(5)所述的经过生根培养后的不定根长至1cm时，首先将生根苗在自然光照条件下炼苗2-3d，然后，敞开瓶盖再炼苗3-4d,进行生根苗的移栽，移栽前将生根苗取出，清水中轻轻漂洗生根苗粘附的培养基，洗净幼苗根系，然后移栽到基质中，移栽后浇一次透水，此时温度为25±1℃，空气相对湿度50-60％，光照时间12h/d，光照强度为2000lx，7d以后，可逐步施加水肥并常规管理。

进一步，所述的初代培养基为MS+1mg/L6-BA+0.05mg/L NAA+7g/L琼脂+30g/L蔗糖，pH为5.8。

所述的增殖培养基为MS+1mg/L6-BA+0.02mg/L NAA+200ml/L椰汁+7g/L琼脂+30g/L蔗糖。

所述的壮苗培养基为：MS+7g/L琼脂+30g/L蔗糖；

而所述的生根培养基为：1/2MS+1mgL-1NAA+0.5mg/L IBA+7g/L琼脂+30g/L蔗糖。

且，上述的MS包括大量元素、微量元素、铁盐和有机成分，其中，

所述的大量元素为：

所述的微量元素为：

所述的铁盐为：

乙二胺二乙酸二钠(Na₂·EDTA) 37.3mg·L^-1；

硫酸亚铁(FeSO₄·7H₂O) 27.8mg·L^-1，

所述的有机成分为：

而上述的1/2MS则包括大量元素、微量元素、铁盐和有机成分，其中，

所述的大量元素为：

所述的微量元素为：

所述的铁盐为：

乙二胺二乙酸二钠(Na₂·EDTA) 37.3mg·L^-1；

硫酸亚铁(FeSO₄·7H₂O) 27.8mg·L^-1，

所述的有机成分为：

此外，所述的基质为珍珠岩。

上述的生长调节物质6-BA为6-苄基腺嘌呤；NAA为萘乙酸；KT为激动素；IBA为吲哚丁酸；TDZ为噻二唑苯基脲。

本发明的有益效果在于：本发明所述的方法能够有效克服铁线莲维奥利特·伊利莎白现有繁殖技术存在的缺陷，加快了繁殖速度，增加了繁殖系数，实现了铁线莲的快速繁殖，对于其在园林上的广泛应用和推广具有较强的价值。

附图说明：

图1为本发明所述的铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的带芽茎段萌发情况示意图。

具体实施方式：

下面结合附图对本发明做具体的介绍。

在本实施方式中，各培养基中应用到的基础培养基成分MS均采用相同的配方，其中，MS包括大量元素、微量元素、铁盐和有机成分，而所述的大量元素为：硝酸钾(KNO₃)1900mg·L^-1；硝酸铵(NH₄NO₃)1650mg·L^-1；磷酸二氢钾(KH₂PO₄)170mg·L^-1；硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)370mg·L^-1；氯化钙(CaCl₂·4H₂O)440mg·L^-1，所述的微量元素为：碘化钾(KI)0.83mg·L^-1；硼酸(H₃BO₃)6.2mg·L^-1；硫酸锰(MnSO₄·4H₂O)22.3mg·L^-1；硫酸锌(ZnSO₄·7H₂O)8.6mg·L^-1；钼酸钠(Na₂MoO₄·2H₂O)0.25mg·L^-1；硫酸铜(CuSO₄·5H₂O)0.025mg·L^-1；氯化钴(CoCl₂·6H₂O)0.025mg·L^-1，而所述的铁盐为：乙二胺二乙酸二钠(Na₂·EDTA)37.3mg·L^-1；硫酸亚铁(FeSO₄·7H₂O)27.8mg·L^-1，且所述的有机成分为：肌醇(C₆H₁₂O₆·2H₂O)100mg·L^-1；甘氨酸(NH₂CH₂COOH)2mg·L^-1；盐酸硫胺素(C₁₂H₁₇ClOS·2HCl)0.1mg·L^-1；盐酸吡哆醇(C8H₁₁O₃N·HCl)0.5mg·L^-1；烟酸(NC₅H₄COOH)0.5mg·L^-1。

此外，应用到的1/2MS基本培养基的成分中，大量元素是MS基本培养基的一半，其余成分微量元素、铁盐,有机成分与上述的MS基本培养基有机成分相同。

而在本发明中，接种、培养需要的基本器械为培养瓶、镊子、剪刀等，所用器械均采用高温灭菌法，将镊子、剪刀等用牛皮纸包严，置于高压灭菌锅中，在121℃下灭菌，置于阴凉干净处备用。

且培养基的制备具体为：根据试验设计，分别制备MS基本培养基，并根据需要添加不同浓度的NAA、IBA、KT、TDZ、6-BA等植物生长调节物质，琼脂粉为7g/L，蔗糖为30g/L，用1mol/L的HCl和NaOH将培养基pH值调到5.8，煮沸，待琼脂融化后，分装到培养瓶中，在121℃下，高压灭菌20min，取出，将装有培养基的培养瓶放于培养室内，冷却凝固后待用。

在本发明中，若无特殊说明：所有培养条件均为：培养温度为(25±2)℃，空气相对湿度50％-60％，光照时间12h/d，光强为2000lx。

本实施方式中，相关指标的计算方法为：

污染率＝(污染的株数/接种总数)×100％；

褐化率＝(褐化的株数/接种总数)×100％；

萌发率＝(萌发的株数/存活的总株数)×100％；

增值系数＝继代后株数/继代前的株数；

生根率＝(生根株数/接种株数)×100％。

下面将根据具体实施例对本发明进行说明：

铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的组织培养方法，具体包括以下步骤：

(1)外植体表面灭菌前处理：取当年生、无病虫害铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的健壮枝条，剪成1cm左右的带芽茎段作为外植体，首先用洗衣粉溶液对外植体浸泡30min，然后用流水冲洗1h；

(2)外植体表面灭菌与初代培养：在无菌瓶中放20-30个带芽茎段外植体，首先加入75％的酒精浸泡20s，然后用无菌水冲洗2次，再用0.1％的升汞灭菌，分别设置3min，5min，和8min三个消毒梯度，在灭菌过程中轻轻晃动三角瓶，使升汞与外植体充分接触，灭菌完成后用无菌水冲洗4-5次，冲洗完成后切除外植体两端与升汞接触的部分，接种于无菌的初代培养基上，每个处理接种30个外植体，从接种之日起每隔5天观察统计萌发情况，4周后统计外植体污染，存活及褐化情况。

表1：不同消毒时间对维奥利特·伊利莎白带芽茎段培养的影响

由表1可知，在三个表面灭菌时间中，污染率都不高，最高也只有3.6％，褐化率也普遍很低，萌发率都较高，都在70％以上，其中以消毒5min时，萌发率最高，为92.33％，综合从污染率，褐化率及萌发率来看，消毒时间为5min时，效果最好，污染率较低，而萌发率最高。

然后，在培养温度为25±2℃，空气相对湿度50-60％，光照时间12h/d，光照强度为2000lx的条件下，进行14-20d的初代培养，茎段腋芽开始萌动，茎尖明显伸长，30-40d后芽点长成带有3-5节的新梢，形成无菌试管苗。

其中，最佳初代培养基的筛选通过以下试验完成，即通过6-BA、NAA不同浓度组合试验筛选最佳初代培养基，具体的试验设计见表2，4周后统计不同组合的萌发率及生长情况，统计结果见表3，而培养过程中各处理的萌发情况则如图1所示。

表2为维奥利特·伊利莎白带芽茎段初代培养试验设计

表1中，基本培养基为MS，pH值为5.8，琼脂为7g/L，糖为30g/L，温度25±1℃，光照2000lx。

表3为维奥利特·伊利莎白初代培养情况

其中，生长非常好(+++++)，较好(++++)，一般(+++)，不是很好(++或+)

由表2、表3和图1可知：带芽茎段在接种后5天左右各处理都有芽的萌发现象，从接种到第14天时是芽萌发高峰期，图1中各处理的线形为迅速上升趋势，在14天时达到最高峰，其中处理1、处理5和处理9的峰值都较高，说明芽萌发速度快，萌发数量多；14天以后各处理的线形较平稳，几乎呈水平状，芽的萌发相对缓慢。从表3也可看出，在接种1个月后，处理1，处理5，处理9中的外植体萌发率较高，都超过92％，并且小苗生长健壮，叶色浓绿，生长速度较快，优于其它组合，而在这三组组合中NAA浓度都为0.05mg/L，6-BA浓度分别为0.5mg/L、1mg/L、2mg/L，说明NAA浓度是影响带芽茎段萌发的关键因素，即确定初代培养基中NAA浓度为0.05mg/L，作为优选，所述的初代培养基为MS+1mg/L6-BA+0.05mg/L NAA+7g/L琼脂+30g/L蔗糖，pH为5.8。

(3)继代增殖培养：逐节切下步骤(2)所述的无菌试管苗转移到增殖培养基上进行继代增殖培养30d，每个处理接种30株小苗，培养条件为培养温度为25±2℃，空气相对湿度50-60％，光照时间12h/d，光照强度为2000lx。

其中，最佳增殖培养基的筛选通过以下试验完成，具体的试验设计见表4、表5、表6，一个月后分别统计苗高，叶片数，增值系数等生长情况，试验统计结果中，褐化死亡的苗不计，统计分析数据为增殖系数。

表4为增值培养基细胞分裂素种类及水平的试验

表4中，基本培养基为MS，PH值为5.8，琼脂为7g/L，糖为30g/L，温度25(25±1)℃，光照2000lx。

表5为不同种类及浓度细胞分裂素对维奥莉特增值效果的影响

表6为不同种类及浓度细胞分裂素对维奥莉特芽增值方差分析表

表7为Duncan多重比较

由表4、表5可知：维奥利特·伊利莎白在6-BA与NAA组合的培养基上，苗生长快，叶片舒展嫩绿、苗粗壮、长势好、增殖系数高，有效的芽多，并且随6-BA浓度的增高，小苗的增值系数逐渐升高。当6-BA的浓度由1mg/L升至2mg/L时，增值系数由1.25增至2.75。而细胞分裂素KT对维奥莉特的增值效果没有6-BA明显，增值系数最好的也只有1.45，而且苗生长较缓慢，苗长势一般，细胞分裂TDZ对其增值效果最差，增值系数都在1左右。

而由表6、表7可知：不同种类及浓度细胞分裂素对维奥莉特的增值有极显著性差异。进一步多重比较显示，处理3与其它处理存在极显著的差异，其它处理间没有显著性差异。

因此，上述试验中，最佳的处理为处理3，增值系数最高，苗生长健壮，速度快，为最佳处理，即MS+2mg/L6-BA+0.02mg/L NAA。

表8为增值培养基生长素种类及水平试验

表8中，基本培养基为MS，PH值为5.8，琼脂为7g/L，糖为30g/L，温度25(25±1)℃，光照2000lx。

表9为不同种类及浓度生长素对维奥莉特芽增值的影响

表10为不同种类及浓度生长素对维奥利特.伊利莎白芽增值方差分析表

表11为Duncan多重比较

由表8和表9可知：生长素NAA和IBA能促进维奥莉特的增值，并且苗生长迅速，苗较粗壮，长势好。当NAA浓度从0.01mg/l升到0.05mg/L时，增值系数由2.28降为1.38。IBA浓度从0.01mg/L升为0.02mg/L时，增值系数由1.38升为2.24。生长素2，4-D不利于铁线莲的增值，增至系数都在1左右，且有些苗出现黄花现象，长势很弱，存活的幼苗数较少。

由表10和表11可知：不同种类及浓度生长素对维奥莉特的增值有显著性差异，进一步多重比较显示，处理3与处理1、处理6存在显著的差异，各处理间不存在极显著差异，从均值来看增值系数最高的处理1为最佳增值处理。

因此此实验的最佳组合为处理处理1，即为MS+0.01mg/L NAA+1mg/L6-BA。

表12为增值培养基有机添加物试验

表6中，基本培养基为MS，pH值为5.8，琼脂为7g/L，糖为30g/L，温度25(25±1)℃，光照2000lx。

表13为有机添加物对维奥利特.伊利莎白芽增值的影响

表14为不同有机添加物对维奥利特.伊利莎白芽增值方差分析表

表15为Duncan多重比较

由表12、表13可知：不添加任何有机物的处理7，增值系数为1.24。添加椰汁的培养基中，增值系数最高的为2.67，最低为0.90，平均增值系数1.88，比处理7的增值系数高0.64。而香蕉泥对铁线莲的增值效果不佳，最高的增值系数为1.22，最低为0.94，平均增值系数为1.05，比处理7的增值系数低0.19，说明椰汁有促进铁线莲增值的作用，并且椰汁浓度从50ml/L升高到200ml/L时，增值系数从0.9升为2.67，从苗的生长情况来看，苗由生长较慢到生长迅速，由生长不健壮到健壮，因此高浓度的椰汁有利于铁线莲的增值及生长，本实验中，200ml/L的椰汁为铁线莲增值的最佳有机添加物及浓度。

而由表14和表15可知：各处理存在显著差异，说明不同浓度椰汁和香蕉泥对维奥利特.伊利莎白的增值效果影响显著，进一步多重比较可以看出，处理3与其它处理存在显著差异，除处理2外与其它处理存在极显著差异，因此最佳增值处理为处理3。

综上所述：最佳的增殖培养基为：MS+1mg/L6-BA+0.02mg/L NAA+200ml/L椰汁+7g/L琼脂+30g/L蔗糖。

(4)壮苗培养：将步骤(3)增殖后的苗接种在壮苗培养基上进行壮苗培养30d，培养条件为：温度为25±2℃，空气相对湿度50-60％，光照时间12h/d，光照强度为2000lx；而所述的壮苗培养基不添加任何激素，即为：MS+7g/L琼脂+30g/L蔗糖。

(5)生根培养：将经过步骤(4)壮苗培养后的苗高大于3cm的苗作为生根苗，接入生根培养基中。其中，试验因素如表16所示，每个处理接种30瓶，40天后统计生根数和根长等生根情况。

表16为不同生长素及浓度对铁线莲生根效果的影响

其中，基本培养基为1/2MS,糖30g/L,琼脂7g/L，温度25(25±1)℃，光照2000lx。

表17为生长素及浓度对生根的影响

由表16和表17可知：将健壮铁线莲小苗转接在生根培养基上40天左右发现部分苗基部有根状突起，为根原基的发生，40-50天可发现0.2-1cm肉眼可见的根，有的根为直接从茎基部生出类型，有的根从愈伤中生出，根多为乳白色，也有褐色根，较粗壮根，生根数有生1-2条根的，而最多可达6-7条。

对于不同处理，试验发现只添加不同浓度NAA的前4组处理中，当NAA浓度不断升高，生根率从零生根到生根率为21.4％，处理5、处理6、处理7为在处理1，处理2，处理3基础上添加不同浓度的IBA。从表中可以看出，最后三组的生根率都高于前三组，说明IBA的添加可提高铁线莲的生根率，其中生根率最高的为处理7，因此确定生根培养基为1/2MS+1mgL-1NAA+0.5mg/L IBA+7g/L琼脂+30g/L蔗糖。

(6)苗的驯化和移栽：当步骤(5)所述的经过生根培养后的不定根长至1cm时，首先将生根苗在自然光照条件下炼苗2-3d，然后，敞开瓶盖再炼苗3-4d,进行生根苗的移栽，移栽前将生根苗取出，清水中轻轻漂洗生根苗粘附的培养基，洗净幼苗根系，然后移栽到基质珍珠岩中，移栽后浇一次透水，此时温度为25±1℃，空气相对湿度50-60％，光照时间12h/d，光照强度为2000lx，7d以后，可逐步施加水肥并常规管理。

本发明按照上述实施例进行了说明应当理解，上述实施例不以任何形式限定本发明，凡采用等同替换或等效变换方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）外植体表面灭菌前处理：取当年生、无病虫害铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的健壮枝条，剪成1cm带芽茎段作为外植体，首先将外植体用洗衣粉溶液浸泡30min，然后用流水冲洗1h；

（2）外植体表面灭菌与初代培养：在无菌瓶中放20-30个带芽茎段外植体，首先加入75%的酒精浸泡20s，然后用无菌水冲洗2次，再用0.1%的升汞灭菌，灭菌3-8min，在灭菌过程中轻轻晃动三角瓶，使升汞与外植体充分接触，灭菌完成后用无菌水冲洗4-5次，冲洗完成后切除外植体两端与升汞接触的部分，接种于无菌的初代培养基上，每个处理接种30个外植体，在培养温度为25±2℃，空气相对湿度50-60%，光照时间12h/d，光照强度为2000lx的条件下，进行进行14-20d的初代培养，茎段腋芽开始萌动，茎尖明显伸长，30-40d后芽点长成带有3-5节的新梢，形成无菌试管苗；

（3）继代增殖培养：逐节切下步骤（2）所述的无菌试管苗转移到增殖培养基上进行继代增殖培养30d，每个处理接种30株小苗，培养条件为培养温度为25±2℃，空气相对湿度50-60%，光照时间12h/d，光照强度为2000lx；

（4）壮苗培养：将步骤（3）增殖后的苗接种在壮苗培养基上进行壮苗培养30d，培养条件为：温度为25±2℃，空气相对湿度50-60%，光照时间12h/d，光照强度为2000lx；

（5）生根培养：将经过步骤（4）壮苗培养后的苗高大于3cm的苗作为生根苗，接入生根培养基中，每个处理接种30瓶，培养40d，培养条件为：温度为25±1℃，空气相对湿度50-60%，光照时间12h/d，光照强度为2000lx；

（6）苗的驯化和移栽：当步骤（5）所述的经过生根培养后的不定根长至1cm时，首先将生根苗在自然光照条件下炼苗2-3d，然后，敞开瓶盖再炼苗3-4d,进行生根苗的移栽，移栽前将生根苗取出，清水中轻轻漂洗生根苗粘附的培养基，洗净幼苗根系，然后移栽到基质中，移栽后浇一次透水，此时温度为25±1℃，空气相对湿度50-60%，光照时间12h/d，光照强度为2000lx，7d以后，可逐步施加水肥并常规管理。

2.根据权利要求1所述的一种铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的组织培养方法，其特征在于，所述的初代培养基为MS+1 mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+7g/L琼脂+30g/L蔗糖，pH为5.8。

3.根据权利要求1所述的一种铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的组织培养方法，其特征在于，所述的增殖培养基为MS+1mg/L 6-BA+0.02mg/L NAA+200 ml/L 椰汁+7g/L琼脂+30g/L蔗糖。

4.根据权利要求1所述的一种铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的组织培养方法，其特征在于，所述的壮苗培养基为：MS+7g/L琼脂+30g/L蔗糖。

5.根据权利要求1所述的一种铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的组织培养方法，其特征在于，所述的生根培养基为：1/2MS+1mg/L NAA+0.5 mg/L IBA +7g/L琼脂+30g/L蔗糖。

6.根据权利要求2-4任一项权利要求所述的一种铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的组织培养方法，其特征在于，所述的MS包括大量元素、微量元素、铁盐和有机成分，其中，

所述的大量元素为：

硝酸钾 1900 mg·L^-1；

硝酸铵 1650 mg·L^-1；

磷酸二氢钾 170 mg·L^-1；

硫酸镁 370 mg·L^-1；

氯化钙 440 mg·L^-1，

所述的微量元素为：

碘化钾 0.83 mg·L^-1；

硼酸 6.2 mg·L^-1；

硫酸锰 22.3 mg·L^-1；

硫酸锌 8.6 mg·L^-1；

钼酸钠 0.25 mg·L^-1；

硫酸铜 0.025 mg·L^-1；

氯化钴 0.025 mg·L^-1，

所述的铁盐为：

乙二胺二乙酸二钠 37.3 mg·L^-1；

硫酸亚铁 27.8 mg·L^-1，

所述的有机成分为：

肌醇 100 mg·L^-1

甘氨酸 2 mg·L^-1

盐酸硫胺素 0.1 mg·L^-1

盐酸吡哆醇 0.5 mg·L^-1

烟酸 0.5 mg·L^-1。

7.根据权利要求5所述的一种铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的组织培养方法，其特征在于，所述的1/2MS包括大量元素、微量元素、铁盐和有机成分，其中，

所述的大量元素为：

硝酸钾 950 mg·L^-1；

硝酸铵 825 mg·L^-1；

磷酸二氢钾 85 mg·L^-1；

硫酸镁 185 mg·L^-1；

氯化钙 220 mg·L^-1，

所述的微量元素为：

碘化钾 0.83 mg·L^-1；

硼酸 6.2 mg·L^-1；

硫酸锰 22.3 mg·L^-1；

硫酸锌 8.6 mg·L^-1；

钼酸钠 0.25 mg·L^-1；

硫酸铜 0.025 mg·L^-1；

氯化钴 0.025 mg·L^-1，

所述的铁盐为：

乙二胺二乙酸二钠 37.3 mg·L^-1；

硫酸亚铁 27.8 mg·L^-1，

所述的有机成分为：

肌醇 100 mg·L^-1

甘氨酸 2 mg·L^-1

盐酸硫胺素 0.1 mg·L^-1

盐酸吡哆醇 0.5 mg·L^-1

烟酸 0.5 mg·L^-1。

8.根据权利要求1所述的一种铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的组织培养方法，其特征在于，所述的基质为珍珠岩。