CN102577972A - 心叶球兰组织培养方法 - Google Patents

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CN102577972A CN2012100636412A CN201210063641A CN102577972A CN 102577972 A CN102577972 A CN 102577972A CN 2012100636412 A CN2012100636412 A CN 2012100636412A CN 201210063641 A CN201210063641 A CN 201210063641A CN 102577972 A CN102577972 A CN 102577972A
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岳健
张志敏
李江黎
李建
李昆华
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Abstract

本发明涉及一种植物的组织培养方法，尤其是涉及心叶球兰的组织培养方法，属农业种植技术领域。本发明心叶球兰的组织培养方法包括消毒灭菌、愈伤组织诱导培养、增殖培养、芽分化培养、壮苗及芽繁培养、生根培养六个步骤。本发明通过组培技术，利用植物组织培养手段对心叶球兰繁殖时，可发挥快繁优势，短时间内获得相对多的幼苗；并且植物组织培养作为一种无性繁殖方式，可保证幼苗整齐划一，既便于后期统一的移栽和种植管理，也能保证所长成的商品成株和盆栽在各个性状上的一致。相对于以往的繁殖方式，本发明所涉及的培养基配方及配套的培养方式，可降低成本，提高繁殖系数和繁殖速度，能够适应大规模工业化生产。

Description

心叶球兰组织培养方法
技术领域
本发明涉及一种植物的组织培养方法，尤其是涉及心叶球兰的组织培养方法，属农业种植技术领域。
背景技术
心叶球兰属萝摩科乳草亚科球兰属植物，又名凹叶球兰、腊兰和腊花等，原产于泰国、老挝等地。其为常绿木质藤本，可攀附他物生长，蔓长可达5米以上，具气根；叶对生，肥厚，倒心形，绿色；伞状花序，花冠淡绿色，具芳香。
作为近年来引进的一种新型观赏植物，心叶球兰具有生长缓慢，耐旱、耐荫，适宜室内摆放的特点，是一种极具市场开发前景的植物。心叶球兰在东南亚各国很受欢迎，有良好的市场需求，在我国云南等地也有分布和销售。除成株外，心叶球兰的叶片扦插生根后可作为盆栽销售，因其叶片心形而具独特观赏价值，受到人们尤其是青年男女的喜爱。但因其繁殖缓慢，市场上成株及盆栽产品供不应求且价格较高。
心叶球兰的传统繁殖方式是利用茎段扦插，一般来说是在晚春进行扦插繁殖；繁殖系数低，生长缓慢。
尽管有文献对心叶球兰组织培养进行了报道，但其繁殖系数低、成本高，远远不能满足工业生产的需要，不能缓解市场上心叶球兰的缺乏情况。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术存在的缺陷，提供一种在短期内获得大量的植株幼苗，生产出性状一致的种苗，保证后续产品整齐划一的商品性能，降低成本，提高繁殖系数和繁殖速度，能够适应大规模工业化生产的心叶球兰组织培养方法。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：心叶球兰组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)消毒灭菌
从老挝采集野生心叶球兰，选择生长势较好、叶片观赏价值较高的植株作为母本；将叶片从母株上摘下，用洗衣粉在流水中清洗15-30min；在超净工作台中，将清洗后的叶片用70％-75％的酒精浸泡30s，用无菌水冲洗一遍；再将叶片浸入0.1％的升汞溶液中10-20min，无菌水冲洗4-5遍；
(2)愈伤组织诱导培养
将表面灭菌后的材料在灭过菌的滤纸上，用解剖刀切割成0.5-1cm2的小块，接种在诱导培养基上；将材料在温度25±2℃、光照800-1000LX下培养，光照时间为8-10h/d；
(3)增殖培养
外植体诱导培养50-60天后，可得到愈伤组织，将其分割转接在增殖培养基上；愈伤组织进行增殖培养30天后，形成绿色、表面有不规则突起的颗粒状组织；在此阶段可对愈伤组织进行切割转接增值，实现扩繁目的；将材料在温度25±2℃、光照1000-1500LX下培养，光照时间为10-12h/d；
(4)芽分化培养
将愈伤组织切割，一般体积为0.5-1cm3大小，转接于芽分化培养基上；将材料在温度25±2℃、光照1500-2000LX下培养，光照时间为10-12h/d；
(5)壮苗及芽繁培养
分化培养40-50天后，愈伤组织上着生多个丛生芽及芽点，可将其转接入壮苗及芽繁培养基上；将材料在温度25±2℃、光照2500-3000LX下培养，光照时间为10-12h/d；
(6)生根培养
壮苗培养至苗高为2.5-3cm时，将无根苗转接入生根培养基；生根培养一个月后，生根苗即可转入温室大棚进行驯化炼苗并销售给种植户；将材料在温度25±2℃、光照2500-3000LX下培养，光照时间为10-12h/d；
最终生根率为90％-93.3％；
所述的诱导培养基包括MS基本培养基，3％的葡萄糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA1.0-2.0mg/L，萘乙酸NAA 0.8-1.2mg/L，2，4二氯苯氧乙酸2-4D 0.8-1.2mg/L；
所述的增殖培养基包括MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA1.0-2.0mg/L，萘乙酸NAA 0.5-1.5mg/L，2，4二氯苯氧乙酸2-4D 0.8-1.2mg/L；
所述的芽分化培养基包括MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA0.5-2.0mg/L，萘乙酸NAA 0.5-1.2mg/L，赤霉素GA 0.8-1.2mg/L；
所述的壮苗及芽繁培养基包括MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA0.5-1.2mg/L，萘乙酸NAA 0.5-1.2mg/L；
所述的生根培养基包括1/2MS基本培养基，2％的蔗糖，0.5％的琼脂，0.5％的活性炭，萘乙酸NAA 0.5-1.2mg/L。
所述的MS基本培养基是由大量元素、微量元素、有机成分组成。
所述的诱导培养基成分优选包括：MS基本培养基，3％的葡萄糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA 1.5mg/L，萘乙酸NAA 1.0mg/L，2，4二氯苯氧乙酸2-4D 1.0mg/L。
所述的增殖培养基成分优选包括：MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA 1.5mg/L，萘乙酸NAA 1.0mg/L，2，4二氯苯氧乙酸2-4D 1.0mg/L。
所述的芽分化培养基成分优选包括：MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA 1.5mg/L，萘乙酸NAA 0.8mg/L，赤霉素GA 1.0mg/L。
所述的在壮苗及芽繁培养基成分优选包括：MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA 0.5mg/L，萘乙酸NAA 0.5mg/L。
所述的生根培养基成分优选包括：1/2MS基本培养基，2％的蔗糖，0.5％的琼脂，0.5％的活性炭，萘乙酸NAA 0.8mg/L。
各培养基的培养温度为25±2℃，光照800-3000LX，光照时间为8-12h/d。
与现有技术相比，本发明通过组培技术，利用植物组织培养手段对心叶球兰繁殖时，可发挥快繁优势，短时间内获得相对多的幼苗；并且植物组织培养作为一种无性繁殖方式，可保证幼苗整齐划一，既便于后期统一的移栽和种植管理，也能保证所长成的商品成株和盆栽在各个性状上的一致。相对于以往的繁殖方式，本发明所涉及的培养基配方及配套的培养方式，可降低成本，提高繁殖系数和繁殖速度，能够适应大规模工业化生产。
附图说明
图1为本发明心叶球兰组织培养方法的流程图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
本发明心叶球兰组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)消毒灭菌
从老挝采集野生心叶球兰，选择生长势较好、叶片观赏价值较高的植株作为母本。将叶片从母株上摘下，用洗衣粉在流水中清洗15-30min(分钟)；在超净工作台中，将清洗后的叶片用70％-75％的酒精浸泡30s(秒)，用无菌水冲洗一遍；再将叶片浸入0.1％的升汞溶液中10-20min(分钟)，无菌水冲洗4-5遍；
(2)愈伤组织诱导培养
将表面灭菌后的材料在灭过菌的滤纸上，用解剖刀切割成0.5-1cm2的小块，接种在诱导培养基上；将材料在温度25±2℃(度)、光照800-1000LX(勒克斯)下培养，光照时间为8-10h/d(小时/天)；
(3)增殖培养
外植体诱导培养50-60天后，可得到愈伤组织，将其分割转接在增殖培养基上；愈伤组织进行增殖培养30天后，会形成绿色、表面有不规则突起的颗粒状组织；在此阶段可对愈伤组织进行切割转接增值，实现扩繁目的；将材料在温度25±2℃、光照1000-1500LX下培养，光照时间为10-12h/d；
(4)芽分化培养
将愈伤组织切割，一般体积为0.5-1cm3(立方厘米)大小，转接于芽分化培养基上；将材料在温度25±2℃、光照1500-2000LX下培养，光照时间为10-12h/d；
(5)壮苗及芽繁培养
分化培养40-50天后，愈伤组织上着生多个丛生芽及芽点，可将其转接入壮苗及芽繁培养基上；将材料在温度25±2℃、光照2500-3000LX下培养，光照时间为10-12h/d；
(6)生根培养
壮苗培养至苗高为2.5-3cm(厘米)时，将无根苗转接入生根培养基；生根培养一个月后，生根苗即可转入温室大棚进行驯化炼苗并销售给种植户；将材料在温度25±2℃、光照2500-3000LX下培养，光照时间为10-12h/d。
最终生根率为90％-93.3％。
所述的诱导培养基包括MS基本培养基，3％的葡萄糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA1.0-2.0mg/L，萘乙酸NAA 0.8-1.2mg/L，2，4二氯苯氧乙酸2-4D 0.8-1.2mg/L。
所述的增殖培养基包括MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA1.0-2mg/L，萘乙酸NAA 0.5-1.5mg/L，2，4二氯苯氧乙酸2-4D 0.8-1.2mg/L。
所述的芽分化培养基包括MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA0.5-2.0mg/L，萘乙酸NAA 0.5-1.2mg/L，赤霉素GA 0.8-1.2mg/L。
所述的壮苗及芽繁培养基包括MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA0.5-1.2mg/L，萘乙酸NAA 0.5-1.2mg/L。
所述的生根培养基包括1/2MS基本培养基，2％的蔗糖，0.5％的琼脂，0.5％的活性炭，萘乙酸NAA 0.5-1.2mg/L。
所述的MS基本培养基是由大量元素、微量元素、有机成分组成。
所述的诱导培养基成分优选包括：MS基本培养基，3％的葡萄糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA 1.5mg/L，萘乙酸NAA 1.0mg/L，2，4二氯苯氧乙酸2-4D 1.0mg/L。
所述的增殖培养基成分优选包括：MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA 1.5mg/L，萘乙酸NAA 1.0mg/L，2，4二氯苯氧乙酸2-4D 1.0mg/L。
所述的芽分化培养基成分优选包括：MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA 1.5mg/L，萘乙酸NAA 0.8mg/L，赤霉素GA 1.0mg/L。
所述的壮苗及芽繁培养基成分优选包括：MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA 0.5mg/L，萘乙酸NAA 0.5mg/L。
所述的生根培养基成分优选包括：1/2MS基本培养基，2％的蔗糖，0.5％的琼脂，0.5％的活性炭，萘乙酸NAA 0.8mg/L。
所述的各培养基的培养温度为25±2℃，光照800-3000LX，光照时间为8-12h/d。
实施例1
(1)消毒灭菌
从老挝采集野生心叶球兰，选择生长势较好、叶片观赏价值较高的植株作为母本。将叶片从母株上摘下，用洗衣粉在流水中清洗15min；在超净工作台中，将清洗后的叶片用70％的酒精浸泡30s，用无菌水冲洗一遍；再将叶片浸入0.1％的升汞溶液中10min，无菌水冲洗4遍。
(2)愈伤组织诱导培养
将表面灭菌后的材料在灭过菌的滤纸上，用解剖刀切割成0.5cm2的小块，接种在诱导培养基上，该培养基成分为：MS基本培养基，3％的葡萄糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤(6-BA)1.0mg/L，萘乙酸(NAA)0.8mg/L，2，4二氯苯氧乙酸(2-4D)0.8mg/L。
将材料在温度23℃、光照800LX下培养，光照时间为8h/d。
(3)增殖培养
外植体诱导培养50天后，可得到愈伤组织，将其分割转接在增殖培养基上，该培养基成分为：MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤(6-BA)1mg/L，萘乙酸(NAA)0.5mg/L，2，4二氯苯氧乙酸(2-4D)0.8mg/L。愈伤组织进行增殖培养30天后，会形成绿色、表面有不规则突起的颗粒状组织；在此阶段可对愈伤组织进行切割转接增值，实现扩繁目的。
将材料在温度23℃、光照1000LX下培养，光照时间为10h/d。
(4)芽分化培养
将愈伤组织切割，一般体积为0.5cm3大小，转接于芽分化培养基上，该培养基成分为：MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤(6-BA)0.5mg/L，萘乙酸(NAA)0.5mg/L，赤霉素(GA)0.8mg/L。
将材料在温度23℃、光照1500LX下培养，光照时间为10h/d。
(5)壮苗及芽繁培养
分化培养40天后，愈伤组织上着生多个丛生芽及芽点，可将其转接入壮苗及芽繁培养基上，该培养基成分为：MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤(6-BA)0.5mg/L，萘乙酸(NAA)0.5mg/L。
将材料在温度23℃、光照2500LX下培养，光照时间为10h/d。
(6)生根培养
壮苗培养至苗高为2.5cm时，将无根苗转接入生根培养基，该培养基成分为：1/2MS基本培养基，2％的蔗糖，0.5％的琼脂，0.5％的活性炭，萘乙酸(NAA)0.5mg/L。生根培养一个月后，生根苗即可转入温室大棚进行驯化炼苗并销售给种植户。
将材料在温度23℃、光照2500LX下培养，光照时间为10h/d。最终生根率为90.8％。
实施例2
(1)消毒灭菌
从老挝采集野生心叶球兰，选择生长势较好、叶片观赏价值较高的植株作为母本。将叶片从母株上摘下，用洗衣粉在流水中清洗25min；在超净工作台中，将清洗后的叶片用75％的酒精浸泡30s，用无菌水冲洗一遍；再将叶片浸入0.1％的升汞溶液中15min，无菌水冲洗5遍。
(2)愈伤组织诱导培养
将表面灭菌后的材料在灭过菌的滤纸上，用解剖刀切割成0.8cm见方的小块，接种在诱导培养基上，该培养基成分为：MS基本培养基，3％的葡萄糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤(6-BA)1.5mg/L，萘乙酸(NAA)1.0mg/L，2，4二氯苯氧乙酸(2-4D)1.0mg/L。
将材料在温度25℃、光照1000LX下培养，光照时间为9h/d。
(3)增殖培养
外植体诱导培养55天后，可得到愈伤组织，将其分割转接在增殖培养基上，该培养基成分为：MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤(6-BA)1.5mg/L，萘乙酸(NAA)1.0mg/L，2，4二氯苯氧乙酸(2-4D)1.0mg/L。愈伤组织进行增殖培养30天后，会形成绿色、表面有不规则突起的颗粒状组织；在此阶段可对愈伤组织进行切割转接增值，实现扩繁目的。
将材料在温度25℃、光照1500LX下培养，光照时间为12h/d。
(4)芽分化培养
将愈伤组织切割，一般体积为1cm3大小，转接于芽分化培养基上，该培养基成分为：MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤(6-BA)1.5mg/L，萘乙酸(NAA)0.8mg/L，赤霉素(GA)1.0mg/L。
将材料在温度25℃、光照2000LX下培养，光照时间为12h/d。
(5)壮苗及芽繁培养
分化培养50天后，愈伤组织上着生多个丛生芽及芽点，可将其转接入壮苗及芽繁培养基上，该培养基成分为：MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤(6-BA)0.5mg/L，萘乙酸(NAA)0.5mg/L。
将材料在温度25℃、光照3000LX下培养，光照时间为12h/d。
(6)生根培养
壮苗培养至苗高为3cm时，将无根苗转接入生根培养基，该培养基成分为：1/2MS基本培养基，2％的蔗糖，0.5％的琼脂，0.5％的活性炭，萘乙酸(NAA)0.8mg/L。生根培养一个月后，生根苗即可转入温室大棚进行驯化炼苗并销售给种植户。
将材料在温度25℃、光照3000LX下培养，光照时间为12h/d。最终生根率为93.3％。
实施例3
(1)消毒灭菌
从老挝采集野生心叶球兰，选择生长势较好、叶片观赏价值较高的植株作为母本。将叶片从母株上摘下，用洗衣粉在流水中清洗30min；在超净工作台中，将清洗后的叶片用75％的酒精浸泡30s，用无菌水冲洗一遍；再将叶片浸入0.1％的升汞溶液中20min，无菌水冲洗5遍。
(2)愈伤组织诱导培养
将表面灭菌后的材料在灭过菌的滤纸上，用解剖刀切割成1cm见方的小块，接种在诱导培养基上，该培养基成分为：MS基本培养基，3％的葡萄糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤(6-BA)2.0mg/L，萘乙酸(NAA)1.2mg/L，2，4二氯苯氧乙酸(2-4D)1.2mg/L。
将材料在温度27℃、光照1000LX下培养，光照时间为10h/d。
(3)增殖培养
外植体诱导培养60天后，可得到愈伤组织，将其分割转接在增殖培养基上，该培养基成分为：MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤(6-BA)2.0mg/L，萘乙酸(NAA)1.5mg/L，2，4二氯苯氧乙酸(2-4D)1.2mg/L。愈伤组织进行增殖培养30天后，会形成绿色、表面有不规则突起的颗粒状组织；在此阶段可对愈伤组织进行切割转接增值，实现扩繁目的。
将材料在温度27℃、光照1500LX下培养，光照时间为12h/d。
(4)芽分化培养
将愈伤组织切割，一般体积为1cm3大小，转接于芽分化培养基上，该培养基成分为：MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤(6-BA)2mg/L，萘乙酸(NAA)1.2mg/L，赤霉素(GA)1.2mg/L。
将材料在温度27℃、光照2000LX下培养，光照时间为12h/d。
(5)壮苗及芽繁培养
分化培养50天后，愈伤组织上着生多个丛生芽及芽点，可将其转接入壮苗及芽繁培养基上，该培养基成分为：MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤(6-BA)1.2mg/L，萘乙酸(NAA)1.2mg/L。
将材料在温度27℃、光照3000LX下培养，光照时间为12h/d。
(6)生根培养
壮苗培养至苗高为3cm时，将无根苗转接入生根培养基，该培养基成分为：1/2MS基本培养基，2％的蔗糖，0.5％的琼脂，0.5％的活性炭，萘乙酸(NAA)1.2mg/L。生根培养一个月后，生根苗即可转入温室大棚进行驯化炼苗并销售给种植户。
将材料在温度27℃、光照3000LX下培养，光照时间为12h/d。最终生根率为91.5％。
试验结果与分析
1外植体愈伤组织诱导及增殖的观察
表1不同的6BA浓度对外植体愈伤组织诱导和增殖的影响
Figure BDA0000142702160000081
通过表1中6BA不同的浓度影响的数据分析比较，结果表明：6BA在2mg/L的水平下，诱导的愈伤组织多，生长旺盛，绿色团块，6BA在1mg/L的水平下，诱导的愈伤组织少，且生长慢。6BA在1.5mg/L的水平下增殖率最高。
2芽分化的观察
表2赤霉素对于芽分化的影响
Figure BDA0000142702160000082
从表2中可以看出，赤霉素对幼苗高度的影响不大，但是在浓度为0.8mg/L时产生的幼苗健壮，叶色较浓绿，在浓度为1mg/L时，幼苗长势虽然良好，但叶色较淡。
3.生根培养的观察
表3不同浓度的NAA对生根的影响
通过表3中，可以看出NAA在0.8mg/L时，生根率最高，叶片长1-1.5片，1-4条白色的根，长2-3.5cm。随着浓度的增加，生根率逐渐下降，甚至不生根。
本发明相对于以往的繁殖方式，所涉及的培养基配方及配套的培养方式，可降低成本，提高繁殖系数和繁殖速度，能够适应大规模工业化生产。

Claims (8)

1.心叶球兰组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)消毒灭菌
从老挝采集野生心叶球兰，选择生长势较好、叶片观赏价值较高的植株作为母本；将叶片从母株上摘下，用洗衣粉在流水中清洗15-30min；在超净工作台中，将清洗后的叶片用70％-75％的酒精浸泡30s，用无菌水冲洗一遍；再将叶片浸入0.1％的升汞溶液中10-20min，无菌水冲洗4-5遍；
(2)愈伤组织诱导培养
将表面灭菌后的材料在灭过菌的滤纸上，用解剖刀切割成0.5-1cm2的小块，接种在诱导培养基上；将材料在温度25±2℃、光照800-1000LX下培养，光照时间为8-10h/d；
(3)增殖培养
外植体诱导培养50-60天后，可得到愈伤组织，将其分割转接在增殖培养基上；愈伤组织进行增殖培养30天后，形成绿色、表面有不规则突起的颗粒状组织；在此阶段可对愈伤组织进行切割转接增值，实现扩繁目的；将材料在温度25±2℃、光照1000-1500LX下培养，光照时间为10-12h/d；
(4)芽分化培养
将愈伤组织切割，一般体积为0.5-1cm3大小，转接于芽分化培养基上；将材料在温度25±2℃、光照1500-2000LX下培养，光照时间为10-12h/d；
(5)壮苗及芽繁培养
分化培养40-50天后，愈伤组织上着生多个丛生芽及芽点，可将其转接入壮苗及芽繁培养基上；将材料在温度25±2℃、光照2500-3000LX下培养，光照时间为10-12h/d；
(6)生根培养
壮苗培养至苗高为2.5-3cm时，将无根苗转接入生根培养基；生根培养一个月后，生根苗即可转入温室大棚进行驯化炼苗并销售给种植户；将材料在温度25±2℃、光照2500-3000LX下培养，光照时间为10-12h/d；
最终生根率为90％-93.3％；
所述的诱导培养基包括MS基本培养基，3％的葡萄糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA1.0-2.0mg/L，萘乙酸NAA 0.8-1.2mg/L，2，4二氯苯氧乙酸2-4D 0.8-1.2mg/L；
所述的增殖培养基包括MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA1.0-2.0mg/L，萘乙酸NAA 0.5-1.5mg/L，2，4二氯苯氧乙酸2-4D 0.8-1.2mg/L；
所述的芽分化培养基包括MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA0.5-2.0mg/L，萘乙酸NAA 0.5-1.2mg/L，赤霉素GA 0.8-1.2mg/L；
所述的壮苗及芽繁培养基包括MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA0.5-1.2mg/L，萘乙酸NAA 0.5-1.2mg/L；
所述的生根培养基包括1/2MS基本培养基，2％的蔗糖，0.5％的琼脂，0.5％的活性炭，萘乙酸NAA 0.5-1.2mg/L。
2.根据权利要求1所述的心叶球兰组织培养方法，其特征在于所述的MS基本培养基是由大量元素、微量元素、有机成分组成。
3.根据权利要求1所述的心叶球兰组织培养方法，其特征在于，所述的诱导培养基成分优选包括：MS基本培养基，3％的葡萄糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA 1.5mg/L，萘乙酸NAA1.0mg/L，2，4二氯苯氧乙酸2-4D 1.0mg/L。
4.根据权利要求1所述的心叶球兰组织培养方法，其特征在于，所述的增殖培养基成分优选包括：MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA 1.5mg/L，萘乙酸NAA1.0mg/L，2，4二氯苯氧乙酸2-4D 1.0mg/L。
5.根据权利要求1所述的心叶球兰组织培养方法，其特征在于，所述的芽分化培养基成分优选包括：MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA 1.5mg/L，萘乙酸NAA0.8mg/L，赤霉素GA 1.0mg/L。
6.根据权利要求1所述的心叶球兰组织培养方法，其特征在于，所述的在壮苗及芽繁培养基成分优选包括：MS基本培养基，3％的蔗糖，0.7％的琼脂，6苄基嘌呤6-BA 0.5mg/L，萘乙酸NAA 0.5mg/L。
7.根据权利要求1所述的心叶球兰组织培养方法，其特征在于，所述的生根培养基成分优选包括：1/2MS基本培养基，2％的蔗糖，0.5％的琼脂，0.5％的活性炭，萘乙酸NAA 0.8mg/L。
8.根据权利要求1所述的心叶球兰组织培养方法，其特征在于各培养基的培养温度为25±2℃，光照800-3000LX，光照时间为8-12h/d。
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