CN102577972A - 心叶球兰组织培养方法 - Google Patents

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CN102577972A CN2012100636412A CN201210063641A CN102577972A CN 102577972 A CN102577972 A CN 102577972A CN 2012100636412 A CN2012100636412 A CN 2012100636412A CN 201210063641 A CN201210063641 A CN 201210063641A CN 102577972 A CN102577972 A CN 102577972A
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岳健
张志敏
李江黎
李建
李昆华
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Abstract

本发明涉及一种植物的组织培养方法,尤其是涉及心叶球兰的组织培养方法,属农业种植技术领域。本发明心叶球兰的组织培养方法包括消毒灭菌、愈伤组织诱导培养、增殖培养、芽分化培养、壮苗及芽繁培养、生根培养六个步骤。本发明通过组培技术,利用植物组织培养手段对心叶球兰繁殖时,可发挥快繁优势,短时间内获得相对多的幼苗;并且植物组织培养作为一种无性繁殖方式,可保证幼苗整齐划一,既便于后期统一的移栽和种植管理,也能保证所长成的商品成株和盆栽在各个性状上的一致。相对于以往的繁殖方式,本发明所涉及的培养基配方及配套的培养方式,可降低成本,提高繁殖系数和繁殖速度,能够适应大规模工业化生产。

Description

心叶球兰组织培养方法
技术领域
本发明涉及一种植物的组织培养方法,尤其是涉及心叶球兰的组织培养方法,属农业种植技术领域。
背景技术
心叶球兰属萝摩科乳草亚科球兰属植物,又名凹叶球兰、腊兰和腊花等,原产于泰国、老挝等地。其为常绿木质藤本,可攀附他物生长,蔓长可达5米以上,具气根;叶对生,肥厚,倒心形,绿色;伞状花序,花冠淡绿色,具芳香。
作为近年来引进的一种新型观赏植物,心叶球兰具有生长缓慢,耐旱、耐荫,适宜室内摆放的特点,是一种极具市场开发前景的植物。心叶球兰在东南亚各国很受欢迎,有良好的市场需求,在我国云南等地也有分布和销售。除成株外,心叶球兰的叶片扦插生根后可作为盆栽销售,因其叶片心形而具独特观赏价值,受到人们尤其是青年男女的喜爱。但因其繁殖缓慢,市场上成株及盆栽产品供不应求且价格较高。
心叶球兰的传统繁殖方式是利用茎段扦插,一般来说是在晚春进行扦插繁殖;繁殖系数低,生长缓慢。
尽管有文献对心叶球兰组织培养进行了报道,但其繁殖系数低、成本高,远远不能满足工业生产的需要,不能缓解市场上心叶球兰的缺乏情况。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术存在的缺陷,提供一种在短期内获得大量的植株幼苗,生产出性状一致的种苗,保证后续产品整齐划一的商品性能,降低成本,提高繁殖系数和繁殖速度,能够适应大规模工业化生产的心叶球兰组织培养方法。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现:心叶球兰组织培养方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
(1)消毒灭菌
从老挝采集野生心叶球兰,选择生长势较好、叶片观赏价值较高的植株作为母本;将叶片从母株上摘下,用洗衣粉在流水中清洗15-30min;在超净工作台中,将清洗后的叶片用70%-75%的酒精浸泡30s,用无菌水冲洗一遍;再将叶片浸入0.1%的升汞溶液中10-20min,无菌水冲洗4-5遍;
(2)愈伤组织诱导培养
将表面灭菌后的材料在灭过菌的滤纸上,用解剖刀切割成0.5-1cm2的小块,接种在诱导培养基上;将材料在温度25±2℃、光照800-1000LX下培养,光照时间为8-10h/d;
(3)增殖培养
外植体诱导培养50-60天后,可得到愈伤组织,将其分割转接在增殖培养基上;愈伤组织进行增殖培养30天后,形成绿色、表面有不规则突起的颗粒状组织;在此阶段可对愈伤组织进行切割转接增值,实现扩繁目的;将材料在温度25±2℃、光照1000-1500LX下培养,光照时间为10-12h/d;
(4)芽分化培养
将愈伤组织切割,一般体积为0.5-1cm3大小,转接于芽分化培养基上;将材料在温度25±2℃、光照1500-2000LX下培养,光照时间为10-12h/d;
(5)壮苗及芽繁培养
分化培养40-50天后,愈伤组织上着生多个丛生芽及芽点,可将其转接入壮苗及芽繁培养基上;将材料在温度25±2℃、光照2500-3000LX下培养,光照时间为10-12h/d;
(6)生根培养
壮苗培养至苗高为2.5-3cm时,将无根苗转接入生根培养基;生根培养一个月后,生根苗即可转入温室大棚进行驯化炼苗并销售给种植户;将材料在温度25±2℃、光照2500-3000LX下培养,光照时间为10-12h/d;
最终生根率为90%-93.3%;
所述的诱导培养基包括MS基本培养基,3%的葡萄糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA1.0-2.0mg/L,萘乙酸NAA 0.8-1.2mg/L,2,4二氯苯氧乙酸2-4D 0.8-1.2mg/L;
所述的增殖培养基包括MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA1.0-2.0mg/L,萘乙酸NAA 0.5-1.5mg/L,2,4二氯苯氧乙酸2-4D 0.8-1.2mg/L;
所述的芽分化培养基包括MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA0.5-2.0mg/L,萘乙酸NAA 0.5-1.2mg/L,赤霉素GA 0.8-1.2mg/L;
所述的壮苗及芽繁培养基包括MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA0.5-1.2mg/L,萘乙酸NAA 0.5-1.2mg/L;
所述的生根培养基包括1/2MS基本培养基,2%的蔗糖,0.5%的琼脂,0.5%的活性炭,萘乙酸NAA 0.5-1.2mg/L。
所述的MS基本培养基是由大量元素、微量元素、有机成分组成。
所述的诱导培养基成分优选包括:MS基本培养基,3%的葡萄糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA 1.5mg/L,萘乙酸NAA 1.0mg/L,2,4二氯苯氧乙酸2-4D 1.0mg/L。
所述的增殖培养基成分优选包括:MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA 1.5mg/L,萘乙酸NAA 1.0mg/L,2,4二氯苯氧乙酸2-4D 1.0mg/L。
所述的芽分化培养基成分优选包括:MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA 1.5mg/L,萘乙酸NAA 0.8mg/L,赤霉素GA 1.0mg/L。
所述的在壮苗及芽繁培养基成分优选包括:MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA 0.5mg/L,萘乙酸NAA 0.5mg/L。
所述的生根培养基成分优选包括:1/2MS基本培养基,2%的蔗糖,0.5%的琼脂,0.5%的活性炭,萘乙酸NAA 0.8mg/L。
各培养基的培养温度为25±2℃,光照800-3000LX,光照时间为8-12h/d。
与现有技术相比,本发明通过组培技术,利用植物组织培养手段对心叶球兰繁殖时,可发挥快繁优势,短时间内获得相对多的幼苗;并且植物组织培养作为一种无性繁殖方式,可保证幼苗整齐划一,既便于后期统一的移栽和种植管理,也能保证所长成的商品成株和盆栽在各个性状上的一致。相对于以往的繁殖方式,本发明所涉及的培养基配方及配套的培养方式,可降低成本,提高繁殖系数和繁殖速度,能够适应大规模工业化生产。
附图说明
图1为本发明心叶球兰组织培养方法的流程图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
本发明心叶球兰组织培养方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
(1)消毒灭菌
从老挝采集野生心叶球兰,选择生长势较好、叶片观赏价值较高的植株作为母本。将叶片从母株上摘下,用洗衣粉在流水中清洗15-30min(分钟);在超净工作台中,将清洗后的叶片用70%-75%的酒精浸泡30s(秒),用无菌水冲洗一遍;再将叶片浸入0.1%的升汞溶液中10-20min(分钟),无菌水冲洗4-5遍;
(2)愈伤组织诱导培养
将表面灭菌后的材料在灭过菌的滤纸上,用解剖刀切割成0.5-1cm2的小块,接种在诱导培养基上;将材料在温度25±2℃(度)、光照800-1000LX(勒克斯)下培养,光照时间为8-10h/d(小时/天);
(3)增殖培养
外植体诱导培养50-60天后,可得到愈伤组织,将其分割转接在增殖培养基上;愈伤组织进行增殖培养30天后,会形成绿色、表面有不规则突起的颗粒状组织;在此阶段可对愈伤组织进行切割转接增值,实现扩繁目的;将材料在温度25±2℃、光照1000-1500LX下培养,光照时间为10-12h/d;
(4)芽分化培养
将愈伤组织切割,一般体积为0.5-1cm3(立方厘米)大小,转接于芽分化培养基上;将材料在温度25±2℃、光照1500-2000LX下培养,光照时间为10-12h/d;
(5)壮苗及芽繁培养
分化培养40-50天后,愈伤组织上着生多个丛生芽及芽点,可将其转接入壮苗及芽繁培养基上;将材料在温度25±2℃、光照2500-3000LX下培养,光照时间为10-12h/d;
(6)生根培养
壮苗培养至苗高为2.5-3cm(厘米)时,将无根苗转接入生根培养基;生根培养一个月后,生根苗即可转入温室大棚进行驯化炼苗并销售给种植户;将材料在温度25±2℃、光照2500-3000LX下培养,光照时间为10-12h/d。
最终生根率为90%-93.3%。
所述的诱导培养基包括MS基本培养基,3%的葡萄糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA1.0-2.0mg/L,萘乙酸NAA 0.8-1.2mg/L,2,4二氯苯氧乙酸2-4D 0.8-1.2mg/L。
所述的增殖培养基包括MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA1.0-2mg/L,萘乙酸NAA 0.5-1.5mg/L,2,4二氯苯氧乙酸2-4D 0.8-1.2mg/L。
所述的芽分化培养基包括MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA0.5-2.0mg/L,萘乙酸NAA 0.5-1.2mg/L,赤霉素GA 0.8-1.2mg/L。
所述的壮苗及芽繁培养基包括MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA0.5-1.2mg/L,萘乙酸NAA 0.5-1.2mg/L。
所述的生根培养基包括1/2MS基本培养基,2%的蔗糖,0.5%的琼脂,0.5%的活性炭,萘乙酸NAA 0.5-1.2mg/L。
所述的MS基本培养基是由大量元素、微量元素、有机成分组成。
所述的诱导培养基成分优选包括:MS基本培养基,3%的葡萄糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA 1.5mg/L,萘乙酸NAA 1.0mg/L,2,4二氯苯氧乙酸2-4D 1.0mg/L。
所述的增殖培养基成分优选包括:MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA 1.5mg/L,萘乙酸NAA 1.0mg/L,2,4二氯苯氧乙酸2-4D 1.0mg/L。
所述的芽分化培养基成分优选包括:MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA 1.5mg/L,萘乙酸NAA 0.8mg/L,赤霉素GA 1.0mg/L。
所述的壮苗及芽繁培养基成分优选包括:MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA 0.5mg/L,萘乙酸NAA 0.5mg/L。
所述的生根培养基成分优选包括:1/2MS基本培养基,2%的蔗糖,0.5%的琼脂,0.5%的活性炭,萘乙酸NAA 0.8mg/L。
所述的各培养基的培养温度为25±2℃,光照800-3000LX,光照时间为8-12h/d。
实施例1
(1)消毒灭菌
从老挝采集野生心叶球兰,选择生长势较好、叶片观赏价值较高的植株作为母本。将叶片从母株上摘下,用洗衣粉在流水中清洗15min;在超净工作台中,将清洗后的叶片用70%的酒精浸泡30s,用无菌水冲洗一遍;再将叶片浸入0.1%的升汞溶液中10min,无菌水冲洗4遍。
(2)愈伤组织诱导培养
将表面灭菌后的材料在灭过菌的滤纸上,用解剖刀切割成0.5cm2的小块,接种在诱导培养基上,该培养基成分为:MS基本培养基,3%的葡萄糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤(6-BA)1.0mg/L,萘乙酸(NAA)0.8mg/L,2,4二氯苯氧乙酸(2-4D)0.8mg/L。
将材料在温度23℃、光照800LX下培养,光照时间为8h/d。
(3)增殖培养
外植体诱导培养50天后,可得到愈伤组织,将其分割转接在增殖培养基上,该培养基成分为:MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤(6-BA)1mg/L,萘乙酸(NAA)0.5mg/L,2,4二氯苯氧乙酸(2-4D)0.8mg/L。愈伤组织进行增殖培养30天后,会形成绿色、表面有不规则突起的颗粒状组织;在此阶段可对愈伤组织进行切割转接增值,实现扩繁目的。
将材料在温度23℃、光照1000LX下培养,光照时间为10h/d。
(4)芽分化培养
将愈伤组织切割,一般体积为0.5cm3大小,转接于芽分化培养基上,该培养基成分为:MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤(6-BA)0.5mg/L,萘乙酸(NAA)0.5mg/L,赤霉素(GA)0.8mg/L。
将材料在温度23℃、光照1500LX下培养,光照时间为10h/d。
(5)壮苗及芽繁培养
分化培养40天后,愈伤组织上着生多个丛生芽及芽点,可将其转接入壮苗及芽繁培养基上,该培养基成分为:MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤(6-BA)0.5mg/L,萘乙酸(NAA)0.5mg/L。
将材料在温度23℃、光照2500LX下培养,光照时间为10h/d。
(6)生根培养
壮苗培养至苗高为2.5cm时,将无根苗转接入生根培养基,该培养基成分为:1/2MS基本培养基,2%的蔗糖,0.5%的琼脂,0.5%的活性炭,萘乙酸(NAA)0.5mg/L。生根培养一个月后,生根苗即可转入温室大棚进行驯化炼苗并销售给种植户。
将材料在温度23℃、光照2500LX下培养,光照时间为10h/d。最终生根率为90.8%。
实施例2
(1)消毒灭菌
从老挝采集野生心叶球兰,选择生长势较好、叶片观赏价值较高的植株作为母本。将叶片从母株上摘下,用洗衣粉在流水中清洗25min;在超净工作台中,将清洗后的叶片用75%的酒精浸泡30s,用无菌水冲洗一遍;再将叶片浸入0.1%的升汞溶液中15min,无菌水冲洗5遍。
(2)愈伤组织诱导培养
将表面灭菌后的材料在灭过菌的滤纸上,用解剖刀切割成0.8cm见方的小块,接种在诱导培养基上,该培养基成分为:MS基本培养基,3%的葡萄糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤(6-BA)1.5mg/L,萘乙酸(NAA)1.0mg/L,2,4二氯苯氧乙酸(2-4D)1.0mg/L。
将材料在温度25℃、光照1000LX下培养,光照时间为9h/d。
(3)增殖培养
外植体诱导培养55天后,可得到愈伤组织,将其分割转接在增殖培养基上,该培养基成分为:MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤(6-BA)1.5mg/L,萘乙酸(NAA)1.0mg/L,2,4二氯苯氧乙酸(2-4D)1.0mg/L。愈伤组织进行增殖培养30天后,会形成绿色、表面有不规则突起的颗粒状组织;在此阶段可对愈伤组织进行切割转接增值,实现扩繁目的。
将材料在温度25℃、光照1500LX下培养,光照时间为12h/d。
(4)芽分化培养
将愈伤组织切割,一般体积为1cm3大小,转接于芽分化培养基上,该培养基成分为:MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤(6-BA)1.5mg/L,萘乙酸(NAA)0.8mg/L,赤霉素(GA)1.0mg/L。
将材料在温度25℃、光照2000LX下培养,光照时间为12h/d。
(5)壮苗及芽繁培养
分化培养50天后,愈伤组织上着生多个丛生芽及芽点,可将其转接入壮苗及芽繁培养基上,该培养基成分为:MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤(6-BA)0.5mg/L,萘乙酸(NAA)0.5mg/L。
将材料在温度25℃、光照3000LX下培养,光照时间为12h/d。
(6)生根培养
壮苗培养至苗高为3cm时,将无根苗转接入生根培养基,该培养基成分为:1/2MS基本培养基,2%的蔗糖,0.5%的琼脂,0.5%的活性炭,萘乙酸(NAA)0.8mg/L。生根培养一个月后,生根苗即可转入温室大棚进行驯化炼苗并销售给种植户。
将材料在温度25℃、光照3000LX下培养,光照时间为12h/d。最终生根率为93.3%。
实施例3
(1)消毒灭菌
从老挝采集野生心叶球兰,选择生长势较好、叶片观赏价值较高的植株作为母本。将叶片从母株上摘下,用洗衣粉在流水中清洗30min;在超净工作台中,将清洗后的叶片用75%的酒精浸泡30s,用无菌水冲洗一遍;再将叶片浸入0.1%的升汞溶液中20min,无菌水冲洗5遍。
(2)愈伤组织诱导培养
将表面灭菌后的材料在灭过菌的滤纸上,用解剖刀切割成1cm见方的小块,接种在诱导培养基上,该培养基成分为:MS基本培养基,3%的葡萄糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤(6-BA)2.0mg/L,萘乙酸(NAA)1.2mg/L,2,4二氯苯氧乙酸(2-4D)1.2mg/L。
将材料在温度27℃、光照1000LX下培养,光照时间为10h/d。
(3)增殖培养
外植体诱导培养60天后,可得到愈伤组织,将其分割转接在增殖培养基上,该培养基成分为:MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤(6-BA)2.0mg/L,萘乙酸(NAA)1.5mg/L,2,4二氯苯氧乙酸(2-4D)1.2mg/L。愈伤组织进行增殖培养30天后,会形成绿色、表面有不规则突起的颗粒状组织;在此阶段可对愈伤组织进行切割转接增值,实现扩繁目的。
将材料在温度27℃、光照1500LX下培养,光照时间为12h/d。
(4)芽分化培养
将愈伤组织切割,一般体积为1cm3大小,转接于芽分化培养基上,该培养基成分为:MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤(6-BA)2mg/L,萘乙酸(NAA)1.2mg/L,赤霉素(GA)1.2mg/L。
将材料在温度27℃、光照2000LX下培养,光照时间为12h/d。
(5)壮苗及芽繁培养
分化培养50天后,愈伤组织上着生多个丛生芽及芽点,可将其转接入壮苗及芽繁培养基上,该培养基成分为:MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤(6-BA)1.2mg/L,萘乙酸(NAA)1.2mg/L。
将材料在温度27℃、光照3000LX下培养,光照时间为12h/d。
(6)生根培养
壮苗培养至苗高为3cm时,将无根苗转接入生根培养基,该培养基成分为:1/2MS基本培养基,2%的蔗糖,0.5%的琼脂,0.5%的活性炭,萘乙酸(NAA)1.2mg/L。生根培养一个月后,生根苗即可转入温室大棚进行驯化炼苗并销售给种植户。
将材料在温度27℃、光照3000LX下培养,光照时间为12h/d。最终生根率为91.5%。
试验结果与分析
1外植体愈伤组织诱导及增殖的观察
表1不同的6BA浓度对外植体愈伤组织诱导和增殖的影响
Figure BDA0000142702160000081
通过表1中6BA不同的浓度影响的数据分析比较,结果表明:6BA在2mg/L的水平下,诱导的愈伤组织多,生长旺盛,绿色团块,6BA在1mg/L的水平下,诱导的愈伤组织少,且生长慢。6BA在1.5mg/L的水平下增殖率最高。
2芽分化的观察
表2赤霉素对于芽分化的影响
Figure BDA0000142702160000082
从表2中可以看出,赤霉素对幼苗高度的影响不大,但是在浓度为0.8mg/L时产生的幼苗健壮,叶色较浓绿,在浓度为1mg/L时,幼苗长势虽然良好,但叶色较淡。
3.生根培养的观察
表3不同浓度的NAA对生根的影响
通过表3中,可以看出NAA在0.8mg/L时,生根率最高,叶片长1-1.5片,1-4条白色的根,长2-3.5cm。随着浓度的增加,生根率逐渐下降,甚至不生根。
本发明相对于以往的繁殖方式,所涉及的培养基配方及配套的培养方式,可降低成本,提高繁殖系数和繁殖速度,能够适应大规模工业化生产。

Claims (8)

1.心叶球兰组织培养方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
(1)消毒灭菌
从老挝采集野生心叶球兰,选择生长势较好、叶片观赏价值较高的植株作为母本;将叶片从母株上摘下,用洗衣粉在流水中清洗15-30min;在超净工作台中,将清洗后的叶片用70%-75%的酒精浸泡30s,用无菌水冲洗一遍;再将叶片浸入0.1%的升汞溶液中10-20min,无菌水冲洗4-5遍;
(2)愈伤组织诱导培养
将表面灭菌后的材料在灭过菌的滤纸上,用解剖刀切割成0.5-1cm2的小块,接种在诱导培养基上;将材料在温度25±2℃、光照800-1000LX下培养,光照时间为8-10h/d;
(3)增殖培养
外植体诱导培养50-60天后,可得到愈伤组织,将其分割转接在增殖培养基上;愈伤组织进行增殖培养30天后,形成绿色、表面有不规则突起的颗粒状组织;在此阶段可对愈伤组织进行切割转接增值,实现扩繁目的;将材料在温度25±2℃、光照1000-1500LX下培养,光照时间为10-12h/d;
(4)芽分化培养
将愈伤组织切割,一般体积为0.5-1cm3大小,转接于芽分化培养基上;将材料在温度25±2℃、光照1500-2000LX下培养,光照时间为10-12h/d;
(5)壮苗及芽繁培养
分化培养40-50天后,愈伤组织上着生多个丛生芽及芽点,可将其转接入壮苗及芽繁培养基上;将材料在温度25±2℃、光照2500-3000LX下培养,光照时间为10-12h/d;
(6)生根培养
壮苗培养至苗高为2.5-3cm时,将无根苗转接入生根培养基;生根培养一个月后,生根苗即可转入温室大棚进行驯化炼苗并销售给种植户;将材料在温度25±2℃、光照2500-3000LX下培养,光照时间为10-12h/d;
最终生根率为90%-93.3%;
所述的诱导培养基包括MS基本培养基,3%的葡萄糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA1.0-2.0mg/L,萘乙酸NAA 0.8-1.2mg/L,2,4二氯苯氧乙酸2-4D 0.8-1.2mg/L;
所述的增殖培养基包括MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA1.0-2.0mg/L,萘乙酸NAA 0.5-1.5mg/L,2,4二氯苯氧乙酸2-4D 0.8-1.2mg/L;
所述的芽分化培养基包括MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA0.5-2.0mg/L,萘乙酸NAA 0.5-1.2mg/L,赤霉素GA 0.8-1.2mg/L;
所述的壮苗及芽繁培养基包括MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA0.5-1.2mg/L,萘乙酸NAA 0.5-1.2mg/L;
所述的生根培养基包括1/2MS基本培养基,2%的蔗糖,0.5%的琼脂,0.5%的活性炭,萘乙酸NAA 0.5-1.2mg/L。
2.根据权利要求1所述的心叶球兰组织培养方法,其特征在于所述的MS基本培养基是由大量元素、微量元素、有机成分组成。
3.根据权利要求1所述的心叶球兰组织培养方法,其特征在于,所述的诱导培养基成分优选包括:MS基本培养基,3%的葡萄糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA 1.5mg/L,萘乙酸NAA1.0mg/L,2,4二氯苯氧乙酸2-4D 1.0mg/L。
4.根据权利要求1所述的心叶球兰组织培养方法,其特征在于,所述的增殖培养基成分优选包括:MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA 1.5mg/L,萘乙酸NAA1.0mg/L,2,4二氯苯氧乙酸2-4D 1.0mg/L。
5.根据权利要求1所述的心叶球兰组织培养方法,其特征在于,所述的芽分化培养基成分优选包括:MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA 1.5mg/L,萘乙酸NAA0.8mg/L,赤霉素GA 1.0mg/L。
6.根据权利要求1所述的心叶球兰组织培养方法,其特征在于,所述的在壮苗及芽繁培养基成分优选包括:MS基本培养基,3%的蔗糖,0.7%的琼脂,6苄基嘌呤6-BA 0.5mg/L,萘乙酸NAA 0.5mg/L。
7.根据权利要求1所述的心叶球兰组织培养方法,其特征在于,所述的生根培养基成分优选包括:1/2MS基本培养基,2%的蔗糖,0.5%的琼脂,0.5%的活性炭,萘乙酸NAA 0.8mg/L。
8.根据权利要求1所述的心叶球兰组织培养方法,其特征在于各培养基的培养温度为25±2℃,光照800-3000LX,光照时间为8-12h/d。
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