CN104160956A

CN104160956A - 一种高效快速繁殖金线莲组培苗的方法

Info

Publication number: CN104160956A
Application number: CN201310185366.6A
Authority: CN
Inventors: 潘俊宇; 潘素芬; 翟全琼; 张雄森; 黄云辉; 梁燊
Original assignee: GUANGXI JUNYU NATIVE HERBAL BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: GUANGXI JUNYU NATIVE HERBAL BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2013-05-20
Filing date: 2013-05-20
Publication date: 2014-11-26

Abstract

本发明属于生物技术领域，具体涉及到一种高效快速繁殖铁皮石斛组培苗的方法。具体包括：将各个阶段的激素浓度调整为最适浓度，然后将铁皮石斛种子在种子培养基中培养形成原球茎并进一步形成小芽，接着把铁皮石斛小芽转接于继代培养基中培养成具有2～3片真叶并带有1～2条幼根的小苗，再小苗转移到一步成苗培养基中培养成具有2～3条根、4片叶片、株高≥2.5cm、茎粗≥0.2cm的商品组培苗，最后将商品组培苗移栽至大棚内苗床上的基质中并培养至可采收。通过实施本发明，种子萌发时间短及萌发率高，芽苗生产快、污染低、变异少，商品组培苗粗壮、叶面展开、根系发达；从而实现铁皮石斛种苗快速无毒繁育的目的。

Description

一种高效快速繁殖金线莲组培苗的方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及到一种高效快速繁殖金线莲组培苗的方法。

背景技术

金线莲别名金线兰、金丝草，为兰科开唇植物花叶兰属多年生珍稀中草药。它在民间使用范围较广，素有“药王”、“金草”、“神草”、“鸟人参”等美称。经有关部门测定发现，金丝莲中氨基酸组成、成分、含量及抗衰老活性微量元素的含量均高于国产和野生西洋参。几百年来作为民间常用草药，而且需求量越来越大。

随着野生资源日渐匮乏，金线莲目前只能够依靠人工栽培来满足市场需求。

金线莲属于兰科植物，其种子发芽率很低，所以通过有性繁殖来发展繁殖金线莲不是明智之举。当前通常采用的是无性繁殖，通过扦插进行繁殖，金线莲种苗成活率低，批量培养也不可行。大批量生产繁殖时，最行之有效的方法是通过组织培养来繁殖。

目前，金线莲组培通常采用的是茎段繁殖技术，该技术的实施步骤为：茎段→消毒→初代培养→增殖培养→壮苗培养→生根培养→成品苗。但是现有技术存在有如下缺点：因为茎段繁殖需经历脱分化和分化过程，而该过程最易发生变异；同时，由于转接的次数之多、生长慢，成苗时间长，导致变异率高，很难保证种苗完全保留野生金线莲的优良品质。另外，由于上述工艺分步培养法工艺复杂，不但成苗时间长，而且容易引起组培苗污染，并导致组培苗污染率提高。

发明内容

本发明的目的就是克服先有的技术不足而提供全新的一种高效快速繁殖金线莲组培苗的方法。具体是：采用金线莲种子通过培养使其萌发形成原球茎并进一步形成小芽，然后通过继代培养变成具有1～2片真叶并带有1～2条幼根的小苗，最后将小苗进行一步成苗培养，使小苗长成具有3～4条根、3～4片叶、株高≥2.5cm、茎粗≥0.2cm的商品组培苗；本发明在实施过程中，还将种子培养基、继代培养基、一步成苗培养基进行科学合理的改良、配制。本发明实现了金线莲在组培过程中缩短其生长周期、降低了污染率、还减少了转接次数，并最终达到快速繁殖金线莲的目的。

本发明是通过以下技术方案来实现的：

1、一种高效快速繁殖金线莲组培苗的方法，技术方案中包括以下步骤：

(1)将金线莲蒴果顶部用刀片切割一小部分，用清水清洗一遍表面，放置于组培瓶中，然后在无菌操作台中先用酒精浸泡30s，接着用氯化汞水溶液浸泡8min，最后用无菌水反复漂洗3～5次后即可完成消毒步骤；

(2)将步骤(1)中得到金线莲种子放置于无菌的铝片上，用手术刀切开后播种于种子培养基中，在25±3℃、湿度≤60％、光照强度1000Lux-1500Lux、光照时间为10h/d的培养室中培养，培养1个月后种子萌发形成原球茎并进一步形成小芽；其中，上述的种子培养基组成为：+6-卡基嘌呤2.5mg/L～3mg/L+萘乙酸0.5mg/L～1mg/L+白糖30g/L+土豆200g/L+琼脂5.1g/L；

(3)将步骤(2)得到的金线莲小芽转接于继代培养基中，在25±3℃、湿度≤60％、光照强度3000Lux-3500Lux、光照时间为11h/d的培养室中培养，1个月后小芽变成具有1～2片真叶并带有1～2条幼根的小苗；其中，上述中继代培养基组成为：MS+6-卡基嘌呤3.5mg/L～4mg/L+萘乙酸0.5mg/L～1mg/L+白糖30g/L+土豆200/L+琼脂5.1g/L；

(4)将步骤(3)中得到的小苗转移到一步成苗培养基中，在25±3℃、湿度≤60％、光照强度3000Lux-3500Lux、光照时间为12h/d的培养室中培养，1个月后小苗长成具有3～4条根、3～4片叶、株高≥2.5cm、茎粗≥0.2cm的商品组培苗；其中，上述中一步成苗培养基组成为：+6-卡基嘌呤0.5mg/L～1mg/L+萘乙酸2.5mg/L～3mg/L+白糖20g/L+土豆200g/L+琼脂5.1g/L。

2、所述的一种高效快速繁殖金线莲组培苗的方法，技术方案中的酒精体积浓度为75％。

3、所述的一种高效快速繁殖金线莲组培苗的方法，技术方案中的氯化钙水溶液浓度为0.1％。

本发明既有如下优点：

1、本发明所提出的种子培养基、继代培养基、一步成苗培养基的制备方法科学合理。

2、通过实施本发明，不但克服了现有金线莲组培利用茎段繁殖时工艺流程复杂、生长周期长、变异率高等缺陷，而且还实现了一步成苗，具有生长周期短、变异率低、工艺简易的效果。

3、通过实施本发明，采用改良后的培养基诱导培养野生金线莲种子形成原球茎，在原球茎阶段实现连续增殖培养8次不发生种苗变异，再利用增殖后的原球茎培育成苗，较利用种子为外植体直接诱导繁育可增上百倍的种苗数量，大大提高了繁殖率。

4、通过实施本发明，是将丛芽、壮苗、生根培养过程集中在同一个组培瓶内完成，简化了工艺步骤，有效解决了传统组培工艺因多次转接培养容易引起组培苗污染的问题。

5、通过实施本发明，不但减少转接次数、降低污染率，而且缩短生长周期，最终达到快速繁殖金线莲的目的，更有利于金线莲工厂化、规模化、集约化地繁殖生产。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的方法进一步说明。

一种高效快速繁殖金线莲组培苗的方法，具体实施方式如下：

1、将金线莲蒴果顶部用刀片切割一小部分，用清水清洗一遍表面，放置于组培瓶中，然后在无菌操作台中先用体积浓度为75％的酒精浸泡30s，接着用浓度为0.1％的氯化汞水溶液浸泡8min，最后用无菌水反复漂洗3～5次后即完成整个消毒步骤。

2、配制种子培养基：

(1)培养基组成：+6-卡基嘌呤2.5mg/L～3mg/L+萘乙酸0.5mg/L～1mg/L+白糖30g/L+土豆200g/L+琼脂5.1g/L；

(2)将配制后的培养基加热至琼脂完全溶解，趁热均匀地分装于干净的培养瓶中，并按常规方法进行灭菌，灭菌后及时取出培养瓶，冷却备用。

3、在无菌环境下将经过消毒处理的金线莲种子放置于无菌的铝片上，用手术刀切开后播种于种子培养基中，在25±3℃、湿度≤60％、光照强度1000Lux-1500Lux、光照时间为10h/d的培养室中培养，培养1个月后种子萌发形成原球茎并进一步形成小芽。

4、配制继代培养基：

(1)培养基组成：MS+6-卡基嘌呤3.5mg/L～4mg/L+萘乙酸0.5mg/L～1mg/L+白糖30g/L+土豆200/L+琼脂5.1g/L；

5、在无菌环境下将萌发形成原球茎并进一步形成小芽的金线莲转接于继代培养基中，在25±3℃、湿度≤60％、光照强度3000Lux-3500Lux、光照时间为11h/d的培养室中培养，1个月后小芽变成具有1～2片真叶并带有1～2条幼根的小苗。

6、配制一步成苗培养基：

(1)培养基组成：+6-卡基嘌呤0.5mg/L～1mg/L+萘乙酸2.5mg/L～3mg/L+白糖20g/L+土豆200g/L+琼脂5.1g/L；

7、在无菌环境下将具有1-2片真叶并带有1～2条幼根的金线莲小苗转移到一步成苗培养基中，在25±3℃、湿度≤60％、光照强度3000Lux-3500Lux、光照时间为12h/d的培养室中培养，1个月后小苗长成具有3～4条根、3～4片叶、株高≥2.5cm、茎粗≥0.2cm的商品组培苗。

Claims

1.一种高效快速繁殖金线莲组培苗的方法，其特征包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种高效快速繁殖金线莲组培苗的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的酒精体积浓度为75％。

3.根据权利要求1所述的一种高效快速繁殖金线莲组培苗的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的氯化钙水溶液浓度为0.1％。