CN103314855A - 白芨的种子组培繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
白芨的种子组培繁殖方法，属于中药材种植技术领域，包括引种灭菌、原球茎诱导培养、原球茎增殖培养、丛生芽诱导培养、丛生芽增殖培养、生根培养六大步骤，其有益效果是采用种子组培，所得到的幼苗污染率低，分化率高，遗传性状稳定，有效物质含量高；同时本发明方法还大大缩短了白芨的组培繁殖周期，从种子到生根苗的组培周期不到4个月，大大缩短了生产时间，降低了生产成本。
Description
技术领域
本发明属于中药材种植技术领域，特别是一种白芨的种子组培繁殖方法。
背景技术
白芨为兰科白芨属多年生草本植物，别名白根、地螺丝、白鸡娃、羊角七、紫兰、刀口药、连及草等。以块茎供药用，能收敛止血，消肿生肌；治肺结核咳血，支气管扩张咯血、胃溃疡吐血、尿血、便血等症。外用治外伤出血、烧烫伤、手足皲裂等症。在生物医药、保健食品、纺织印染、特种涂料和日用化工等方面有巨大的商业利用价值。随着白芨食品的开发利用和印染业、美容业的需求，白芨用量日趋增多。
白芨的种子自然萌发率极低，繁殖困难，野生资源稀少，由于需求量大，野生资源已经频临枯竭，现已列入《濒危动植物种国际贸易公约》予以保护，因此只有采取人工繁育，目前的常规方法大多以分株为主，即将块茎切成小块种植，繁殖系数低，已经无法满足市场需要。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：针对现有技术的不足，提供一种利用白芨的种子进行组织培养，以便快速繁殖白芨幼苗，满足市场需要。
为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是白芨的种子组培繁殖方法，包括引种灭菌、原球茎诱导培养、原球茎增殖培养、丛生芽诱导培养、丛生芽增殖培养、生根培养六大步骤，其特征在于具体方法如下。
⑴引种灭菌：选取健壮的野生白芨蒴果，在流水下冲洗，放入1%洗洁精水溶液中浸泡5分钟，然后用刷子轻轻刷洗，并用无菌水充分洗净；在超净工作台上将种子放置在75％的酒精中消毒30秒钟后，再用0.1％的HgCl2水溶液浸泡30min，然后用无菌水冲洗5～6次，然后置于无菌滤纸上吸干水分后从果实中部剥开，取出种子。
⑵原球茎诱导培养：将种子迅速接种到原球茎诱导培养基上，在夜温20℃，日温22℃，相对湿度68%～70%，暗箱条件下进行种子诱导培养，6～8天后，种子开始萌动膨大；此时调整培养环境，在夜温21℃，日温23℃，相对湿度70%～72%，光照强度2000lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长12小时的条件下进行，再过6～8天后，形成直径1～2mm的原球茎。
⑶原球茎增殖培养：将原球茎切割后转接到原球茎增殖培养基中，在夜温21℃，日温23℃，相对湿度70%～72%，光照强度3000lx，每天光照时长14小时的条件下进行原球茎增殖培养，再过9～12天后，获得大量直径1～2mm的原球茎。
⑷丛生芽诱导培养：将生长状态良好的原球茎转接到丛生芽诱导培养基上，在夜温22℃，日温24℃，相对湿度68%～72%，光照强度3000lx，每天光照时长12小时的条件下进行丛生芽诱导培养，在15～20天后可观察到原球茎开始分化出芽点，然后将温度调整为夜温23℃，日温25℃，再过8-10天后，可观察到原球茎长出小芽并开始分叶，再过5-6天可看到大量茎长为1-2cm的丛生芽。
⑸丛生芽增殖培养：当丛生芽茎长到1-2cm时，将其切分成单芽，转入到增殖培养基中，在夜温24℃，日温26℃，相对湿度68%～72%，光照强度3500lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长12小时的条件下进行丛生芽增殖培养，13～17天后可观察到大量新增殖的丛生芽。
⑹生根培养：当增殖丛生芽长到3～4cm时，将其切分成单芽，转入生根培养基上进行生根诱导培养，在夜温24℃，日温26℃，相对湿度72%～75%，光照强度3500lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长12小时的条件下进行生根培养，28-32天后，可观察到大量3-4cm，每株有根须5-7根，且根须粗壮的白芨苗。
此后，即可将白芨组培苗进行炼苗移栽。
上述组培繁殖方法中，所提到的各阶段培养基的配方是：
原球茎诱导培养：½MS+6-BA0.9mg／L+NAA0.11mg／L +蔗糖30g/L +琼脂5g/L；pH=5.8。
原球茎增殖培养：½MS+6-BA1.1mg／L+NAA0.11mg／L +蔗糖30g/L +琼脂5g/L；pH=5.8。
丛生芽诱导培养：BM+BA4+IAA1+卡拉胶5g/L+蔗糖30g/L；pH=5.8。
丛生芽增殖培养：BM++IAA0.3+卡拉胶5g/L+蔗糖30g/L；pH=5.8。
生根培养：BM+IAA1+卡拉胶5g/L+蔗糖30g/L；pH=5.6。
本发明的有益效果是采用种子组培，所得到的幼苗污染率低，分化率高，遗传性状稳定，有效物质含量高；同时本发明方法还大大缩短了白芨的组培繁殖周期，从种子到生根苗的组培周期不到4个月，大大缩短了生产时间，降低了生产成本。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定，不应以此限制本发明的保护范围。
实施例1。
首先配制培养基：
原球茎诱导培养：½MS+6-BA0.9mg／L+NAA0.11mg／L +蔗糖30g/L +琼脂5g/L；pH=5.8。
原球茎增殖培养：½MS+6-BA1.1mg／L+NAA0.11mg／L +蔗糖30g/L +琼脂5g/L；pH=5.8。
丛生芽诱导培养：BM+BA4+IAA1+卡拉胶5g/L+蔗糖30g/L；pH=5.8。
丛生芽增殖培养：BM++IAA0.3+卡拉胶5g/L+蔗糖30g/L；pH=5.8。
生根培养：BM+IAA1+卡拉胶5g/L+蔗糖30g/L；pH=5.6。
选取健壮的野生白芨蒴果，在流水下冲洗，放入1%洗洁精水溶液中浸泡5分钟，然后用刷子轻轻刷洗，并用无菌水充分洗净；在超净工作台上将种子放置在75％的酒精中消毒30秒钟后，再用0.1％的HgCl2水溶液浸泡30min，然后用无菌水冲洗5～6次，然后置于无菌滤纸上吸干水分后从果实中部剥开，取出种子；将种子迅速接种到原球茎诱导培养基上，在夜温20℃，日温22℃，相对湿度68%，暗箱条件下进行种子诱导培养，6～8天后，种子开始萌动膨大；此时调整培养环境，在夜温21℃，日温23℃，相对湿度70%，光照强度2000lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长12小时的条件下进行，再过6～8天后，形成直径1～2mm的原球茎；将原球茎切割后转接到原球茎增殖培养基中，在夜温21℃，日温23℃，相对湿度70%，光照强度3000lx，每天光照时长14小时的条件下进行原球茎增殖培养，再过9～12天后，获得大量直径1～2mm的原球茎；将生长状态良好的原球茎转接到丛生芽诱导培养基上，在夜温22℃，日温24℃，相对湿度68%，光照强度3000lx，每天光照时长12小时的条件下进行丛生芽诱导培养，在15～20天后可观察到原球茎开始分化出芽点，然后将温度调整为夜温23℃，日温25℃，再过8-10天后，可观察到原球茎长出小芽并开始分叶，再过5-6天可看到大量茎长为1-2cm的丛生芽；当丛生芽茎长到1-2cm时，将其切分成单芽，转入到增殖培养基中，在夜温24℃，日温26℃，相对湿度68%，光照强度3500lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长12小时的条件下进行丛生芽增殖培养，13～17天后可观察到大量新增殖的丛生芽；当增殖丛生芽长到3～4cm时，将其切分成单芽，转入生根培养基上进行生根诱导培养，在夜温24℃，日温26℃，相对湿度72%，光照强度3500lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长12小时的条件下进行生根培养，28-32天后，可观察到大量3-4cm，每株有根须5-7根，且根须粗壮的白芨苗；此后，即可将白芨组培苗进行炼苗移栽。
实施例2。
选取健壮的野生白芨蒴果，在流水下冲洗，放入1%洗洁精水溶液中浸泡5分钟，然后用刷子轻轻刷洗，并用无菌水充分洗净；在超净工作台上将种子放置在75％的酒精中消毒30秒钟后，再用0.1％的HgCl2水溶液浸泡30min，然后用无菌水冲洗5～6次，然后置于无菌滤纸上吸干水分后从果实中部剥开，取出种子；将种子迅速接种到原球茎诱导培养基上，在夜温20℃，日温22℃，相对湿度69%，暗箱条件下进行种子诱导培养，6～8天后，种子开始萌动膨大；此时调整培养环境，在夜温21℃，日温23℃，相对湿度71%，光照强度2000lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长12小时的条件下进行，再过6～8天后，形成直径1～2mm的原球茎；将原球茎切割后转接到原球茎增殖培养基中，在夜温21℃，日温23℃，相对湿度71%，光照强度3000lx，每天光照时长14小时的条件下进行原球茎增殖培养，再过9～12天后，获得大量直径1～2mm的原球茎；将生长状态良好的原球茎转接到丛生芽诱导培养基上，在夜温22℃，日温24℃，相对湿度70%，光照强度3000lx，每天光照时长12小时的条件下进行丛生芽诱导培养，在15～20天后可观察到原球茎开始分化出芽点，然后将温度调整为夜温23℃，日温25℃，再过8-10天后，可观察到原球茎长出小芽并开始分叶，再过5-6天可看到大量茎长为1-2cm的丛生芽；当丛生芽茎长到1-2cm时，将其切分成单芽，转入到增殖培养基中，在夜温24℃，日温26℃，相对湿度70%，光照强度3500lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长12小时的条件下进行丛生芽增殖培养，13～17天后可观察到大量新增殖的丛生芽；当增殖丛生芽长到3～4cm时，将其切分成单芽，转入生根培养基上进行生根诱导培养，在夜温24℃，日温26℃，相对湿度73%，光照强度3500lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长12小时的条件下进行生根培养，28-32天后，可观察到大量3-4cm，每株有根须5-7根，且根须粗壮的白芨苗；此后，即可将白芨组培苗进行炼苗移栽。
实施例3。
选取健壮的野生白芨蒴果，在流水下冲洗，放入1%洗洁精水溶液中浸泡5分钟，然后用刷子轻轻刷洗，并用无菌水充分洗净；在超净工作台上将种子放置在75％的酒精中消毒30秒钟后，再用0.1％的HgCl2水溶液浸泡30min，然后用无菌水冲洗5～6次，然后置于无菌滤纸上吸干水分后从果实中部剥开，取出种子；将种子迅速接种到原球茎诱导培养基上，在夜温20℃，日温22℃，相对湿度70%，暗箱条件下进行种子诱导培养，6～8天后，种子开始萌动膨大；此时调整培养环境，在夜温21℃，日温23℃，相对湿度72%，光照强度2000lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长12小时的条件下进行，再过6～8天后，形成直径1～2mm的原球茎；将原球茎切割后转接到原球茎增殖培养基中，在夜温21℃，日温23℃，相对湿度72%，光照强度3000lx，每天光照时长14小时的条件下进行原球茎增殖培养，再过9～12天后，获得大量直径1～2mm的原球茎；将生长状态良好的原球茎转接到丛生芽诱导培养基上，在夜温22℃，日温24℃，相对湿度72%，光照强度3000lx，每天光照时长12小时的条件下进行丛生芽诱导培养，在15～20天后可观察到原球茎开始分化出芽点，然后将温度调整为夜温23℃，日温25℃，再过8-10天后，可观察到原球茎长出小芽并开始分叶，再过5-6天可看到大量茎长为1-2cm的丛生芽；当丛生芽茎长到1-2cm时，将其切分成单芽，转入到增殖培养基中，在夜温24℃，日温26℃，相对湿度72%，光照强度3500lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长12小时的条件下进行丛生芽增殖培养，13～17天后可观察到大量新增殖的丛生芽；当增殖丛生芽长到3～4cm时，将其切分成单芽，转入生根培养基上进行生根诱导培养，在夜温24℃，日温26℃，相对湿度75%，光照强度3500lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长12小时的条件下进行生根培养，28-32天后，可观察到大量3-4cm，每株有根须5-7根，且根须粗壮的白芨苗；此后，即可将白芨组培苗进行炼苗移栽。
Claims (1)
1.白芨的种子组培繁殖方法，包括引种灭菌、原球茎诱导培养、原球茎增殖培养、丛生芽诱导培养、丛生芽增殖培养、生根培养六大步骤，其特征在于具体方法如下：
⑴引种灭菌：选取健壮的野生白芨蒴果，在流水下冲洗，放入1%洗洁精水溶液中浸泡5分钟，然后用刷子轻轻刷洗，并用无菌水充分洗净；在超净工作台上将种子放置在75％的酒精中消毒30秒钟后，再用0.1％的HgCl2水溶液浸泡30min，然后用无菌水冲洗5～6次，然后置于无菌滤纸上吸干水分后从果实中部剥开，取出种子；
⑵原球茎诱导培养：将种子迅速接种到原球茎诱导培养基上，在夜温20℃，日温22℃，相对湿度68%～70%，暗箱条件下进行种子诱导培养，6～8天后，种子开始萌动膨大；此时调整培养环境，在夜温21℃，日温23℃，相对湿度70%～72%，光照强度2000lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长12小时的条件下进行，再过6～8天后，形成直径1～2mm的原球茎；
⑶原球茎增殖培养：将原球茎切割后转接到原球茎增殖培养基中，在夜温21℃，日温23℃，相对湿度70%～72%，光照强度3000lx，每天光照时长14小时的条件下进行原球茎增殖培养，再过9～12天后，获得大量直径1～2mm的原球茎；
⑷丛生芽诱导培养：将生长状态良好的原球茎转接到丛生芽诱导培养基上，在夜温22℃，日温24℃，相对湿度68%～72%，光照强度3000lx，每天光照时长12小时的条件下进行丛生芽诱导培养，在15～20天后可观察到原球茎开始分化出芽点，然后将温度调整为夜温23℃，日温25℃，再过8-10天后，可观察到原球茎长出小芽并开始分叶，再过5-6天可看到大量茎长为1-2cm的丛生芽；
⑸丛生芽增殖培养：当丛生芽茎长到1-2cm时，将其切分成单芽，转入到增殖培养基中，在夜温24℃，日温26℃，相对湿度68%～72%，光照强度3500lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长12小时的条件下进行丛生芽增殖培养，13～17天后可观察到大量新增殖的丛生芽；
⑹生根培养：当增殖丛生芽长到3～4cm时，将其切分成单芽，转入生根培养基上进行生根诱导培养，在夜温24℃，日温26℃，相对湿度72%～75%，光照强度3500lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长12小时的条件下进行生根培养，28-32天后，可观察到大量3-4cm，每株有根须5-7根，且根须粗壮的白芨苗；
上述组培繁殖方法中，所提到的各阶段培养基的配方是：
原球茎诱导培养：½MS+6-BA0.9mg／L+NAA0.11mg／L +蔗糖30g/L +琼脂5g/L；pH=5.8；
原球茎增殖培养：½MS+6-BA1.1mg／L+NAA0.11mg／L +蔗糖30g/L +琼脂5g/L；pH=5.8；
丛生芽诱导培养：BM+BA4+IAA1+卡拉胶5g/L+蔗糖30g/L；pH=5.8；
丛生芽增殖培养：BM++IAA0.3+卡拉胶5g/L+蔗糖30g/L；pH=5.8；
生根培养：BM+IAA1+卡拉胶5g/L+蔗糖30g/L；pH=5.6。
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| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
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