CN104782485A - 一种白芨的种子组织快繁育苗方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种白芨的种子组织快繁育苗方法，包括以下步骤：种子的消毒灭菌、种子萌发和原球茎诱导、原球茎增殖、丛生芽诱导及增殖、生根培养、炼苗与移植。本发明的有益效果是采用种子组培，所得的幼苗污染率低，分化率高，有效物质含量高；同时本发明方法还大大缩短了白芨的组培繁殖周期，从种子到生根苗的组培周期为4个月左右，大大缩短了生产时间，降低了生产成本。
Description
技术领域
本发明涉及中医药种植领域，具体为一种白芨的种子组织快繁育苗方法。
背景技术
白芨为兰科白芨属多年生草本植物，亦作白及、连及草、甘根，分布于中国至朝鲜、日本，我国产于华东、华南、及河南、陕西、四川、云南等地。白芨的块茎为我国传统中药，早在《神农本草经》中就有记载，《中国药典》中所收载具有补肺、消肿、生肌、止血、敛疮等功效，用于治疗肺伤咳血、金疮出血、溃疡疼痛、汤火灼伤、手足皲裂等症。此外，白芨花色艳丽，也是一种很好的景观植物，因此市场对白芨的需求十分旺盛。由于市场需求的扩大，近年来我国大部分地区的野生白芨遭到过度采挖，导致其野生自然资源急剧减少，濒临灭绝，被国家列为重点保护的野生药用植物之一。
为保护白芨野生资源，人工繁育和栽培白芨势在必行。白芨的种子非常细小且无胚乳，因此在自然状况下很难萌发和生长，实生苗的栽培较为困难，传统栽培主要靠分株繁殖。但分株繁殖周期长，繁殖效率低，而且耗种量大，很难满足大量栽培的需要。
发明内容
为克服现有技术的不足，本发明的目的就在于提供一种利用白芨的种子进行组织培养，以便快速繁殖白芨幼苗，满足市场需要。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案是采用种子萌发途径进行组织培养，包括种子的消毒灭菌、种子萌发和原球茎诱导、原球茎增殖、丛生芽诱导及增殖、生根培养、炼苗与移植。其特征在于具体方法如下：
(1)白芨种子的准备与灭菌：取未开裂的健壮白芨蒴果，用洗衣粉液清洗1-2分钟再经流水漂洗，充分洗净后在超净工作台上用70％的乙醇浸泡30s，再用0.15％升汞浸泡20min，无菌水冲洗4-5遍后至于灭菌的吸水纸上，吸干水分待用。
(2)种子萌发和原球茎诱导：种子经消毒灭菌后即可将其接种到原球茎诱导培养基上，将温度控制在昼温22-24℃，夜温18-20℃，在暗箱中进行种子培养，5-6天后种子开始膨胀增大，此时调整培养条件，温度控制在25±2℃，光照强度1500-2000Lx，每天光照12小时，10天后形成原球茎。
(3)原球茎增殖：在原球茎未分化出叶片时转接到增殖培养基中，放置于温度为23-25℃的培养室中培养，光照强度2000-2500Lx，每天光照12-15小时，培养15天后获得丛生型原球茎。
(4)丛生芽诱导及增殖：将丛生型原球茎转接到丛生芽诱导培养基上，在温度为23-25℃的培养室中进行丛生芽诱导培养，光照强度2000-2500Lx，每天光照12-15小时，在35-40天后可看到大量丛生芽。
(5)生根培养：当丛生芽长到2.5-3.5cm时可转入生根培养基中进行生根诱导培养，培养温度为24-26℃，光照强度2500-3000Lx，每天光照12-15小时，30天后可观察到根须粗壮的白芨苗。
(6)炼苗与移植：在白芨苗生根后长到4-5cm时可炼苗移栽，保持炼苗前期的空气湿度在80％-90％之间，将培养容器打开，与室内自然光照下放置3-4天左右，然后取出小苗，用自来水冲净根上的培养基，移栽到经消毒的基质中，适度遮荫，保持一定的湿度，待其新叶展开和新根长出后，即可按常规管理。
上述组培繁殖方法中，所提到的各阶段培养基的配方是：
原球茎诱导培养：1/2MS+1mg/L6-BA+0.09mg/LNAA+蔗糖30g+马铃薯泥40g/L，ph＝5.8。
原球茎增殖培养：MS+6-BA0.9mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g+马铃薯泥40g/L，ph＝5.8。
丛生芽诱导与增殖：MS+6-BA0.9mg/L+NAA0.14mg/L+卡拉胶6g/L+蔗糖30g，ph＝5.8。
生根培养：1/2MS+NAA0.6mg/+香蕉泥70g/L，ph＝5.6。
本发明的有益效果是采用种子组培，所得的幼苗污染率低，分化率高，有效物质含量高；同时本发明方法还大大缩短了白芨的组培繁殖周期，从种子到生根苗的组培周期为4个月左右，大大缩短了生产时间，降低了生产成本。
具体实施方式
制备培养基：
原球茎诱导培养：1/2MS+1mg/L6-BA+0.09mg/LNAA+蔗糖30g+马铃薯泥40g/L，ph＝5.8。
原球茎增殖培养：MS+6-BA0.9mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g+马铃薯泥40g/L，ph＝5.8。
丛生芽诱导与增殖：MS+6-BA0.9mg/L+NAA0.14mg/L+卡拉胶6g/L+蔗糖30g，ph＝5.8。
生根培养：1/2MS+NAA0.6mg/+香蕉泥70g/L，ph＝5.6。
实施例1：
(1)白芨种子的准备与灭菌：取未开裂的健壮白芨蒴果，用洗衣粉液清洗1-2分钟再经流水漂洗，充分洗净后在超净工作台上用70％的乙醇浸泡30s，再用0.15％升汞浸泡20min，无菌水冲洗4-5遍后至于灭菌的吸水纸上，吸干水分待用。
(2)种子萌发和原球茎诱导：种子经消毒灭菌后即可将其接种到原球茎诱导培养基上，将温度控制在昼温22-24℃，夜温18-20℃，在暗箱中进行种子培养，5-6天后种子开始膨胀增大，此时调整培养条件，温度控制在25±2℃，光照强度1500-2000Lx，每天光照12小时，10天后形成原球茎。
(3)原球茎增殖：在原球茎未分化出叶片时转接到增殖培养基中，放置于温度为23-25℃的培养室中培养，光照强度2000-2500Lx，每天光照12-15小时，培养15天后获得丛生型原球茎。
(4)丛生芽诱导及增殖：将丛生型原球茎转接到丛生芽诱导培养基上，在温度为23-25℃的培养室中进行丛生芽诱导培养，光照强度2000-2500Lx，每天光照12-15小时，在35-40天后可看到大量丛生芽。
(5)生根培养：当丛生芽长到2.5-3.5cm时可转入生根培养基中进行生根诱导培养，培养温度为24-26℃，光照强度2500-3000Lx，每天光照12-15小时，30天后可观察到根须粗壮的白芨苗。
(6)炼苗与移植：在白芨苗生根后长到4-5cm时可炼苗移栽，保持炼苗前期的空气湿度在80％-90％之间，将培养容器打开，与室内自然光照下放置3-4天左右，然后取出小苗，用自来水冲净根上的培养基，移栽到经消毒的基质中，适度遮荫，保持一定的湿度，待其新叶展开和新根长出后，即可按常规管理。
实施例2：
(1)白芨种子的准备与灭菌：取未开裂的健壮白芨蒴果，用洗衣粉液清洗1-2分钟再经流水漂洗，充分洗净后在超净工作台上用70％的乙醇浸泡30s，再用0.15％升汞浸泡20min，无菌水冲洗4-5遍后至于灭菌的吸水纸上，吸干水分待用。
(2)种子萌发和原球茎诱导：种子经消毒灭菌后即可将其接种到原球茎诱导培养基上，将温度控制在昼温22-24℃，夜温18-20℃，在暗箱中进行种子培养，5-6天后种子开始膨胀增大，此时调整培养条件，温度控制在25±2℃，光照强度1500-2000Lx，每天光照12小时，10天后形成原球茎。
(3)原球茎增殖：在原球茎未分化出叶片时转接到增殖培养基中，放置于温度为23-25℃的培养室中培养，光照强度2000-2500Lx，每天光照12-15小时，培养15天后获得丛生型原球茎。
(4)丛生芽诱导及增殖：将丛生型原球茎转接到丛生芽诱导培养基上，在温度为23-25℃的培养室中进行丛生芽诱导培养，光照强度2000-2500Lx，每天光照12-15小时，在35-40天后可看到大量丛生芽。
(5)生根培养：当丛生芽长到2.5-3.5cm时可转入生根培养基中进行生根诱导培养，培养温度为24-26℃，光照强度2500-3000Lx，每天光照12-15小时，30天后可观察到根须粗壮的白芨苗。
(6)炼苗与移植：在白芨苗生根后长到4-5cm时可炼苗移栽，保持炼苗前期的空气湿度在80％-90％之间，将培养容器打开，与室内自然光照下放置3-4天左右，然后取出小苗，用自来水冲净根上的培养基，移栽到经消毒的基质中，适度遮荫，保持一定的湿度，待其新叶展开和新根长出后，即可按常规管理。
Claims (5)
1.一种白芨的种子组织快繁育苗方法，其特征在于，具体方法如下：
(1)白芨种子的准备与灭菌：取未开裂的健壮白芨蒴果，用洗衣粉液清洗1-2分钟再经流水漂洗，充分洗净后在超净工作台上用70％的乙醇浸泡30s，再用0.15％升汞浸泡20min，无菌水冲洗4-5遍后至于灭菌的吸水纸上，吸干水分待用；
(2)种子萌发和原球茎诱导：种子经消毒灭菌后即可将其接种到原球茎诱导培养基上，将温度控制在昼温22-24℃，夜温18-20℃，在暗箱中进行种子培养，5-6天后种子开始膨胀增大，此时调整培养条件，温度控制在25±2℃，光照强度1500-2000Lx，每天光照12小时，10天后形成原球茎；
(3)原球茎增殖：在原球茎未分化出叶片时转接到增殖培养基中，放置于温度为23-25℃的培养室中培养，光照强度2000-2500Lx，每天光照12-15小时，培养15天后获得丛生型原球茎：
(4)丛生芽诱导及增殖：将丛生型原球茎转接到丛生芽诱导培养基上，在温度为23-25℃的培养室中进行丛生芽诱导培养，光照强度2000-2500Lx，每天光照12-15小时，在35-40天后可看到大量丛生芽；
(5)生根培养：当丛生芽长到2.5-3.5cm时可转入生根培养基中进行生根诱导培养，培养温度为24-26℃，光照强度2500-3000Lx，每天光照12-15小时，30天后可观察到根须粗壮的白芨苗；
(6)炼苗与移植：在白芨苗生根后长到4-5cm时可炼苗移栽，保持炼苗前期的空气湿度在80％-90％之间，将培养容器打开，与室内自然光照下放置3-4天左右，然后取出小苗，用自来水冲净根上的培养基，移栽到经消毒的基质中，适度遮荫，保持一定的湿度，待其新叶展开和新根长出后，即可按常规管理。
2.根据权利要求1所述的一种白芨的种子组织快繁育苗方法，其特征在于，原球茎诱导培养基的配方是：1/2MS+1mg/L6-BA+0.09mg/LNAA+蔗糖30g+马铃薯泥40g/L，ph＝5.8。
3.根据权利要求1所述的一种白芨的种子组织快繁育苗方法，其特征在于，原球茎增殖培养的配方是：MS+6-BA0.9mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g+马铃薯泥40g/L，ph＝5.8。
4.根据权利要求1所述的一种白芨的种子组织快繁育苗方法，其特征在于，丛生芽诱导与增殖培养的配方是：MS+6-BA0.9mg/L+NAA0.14mg/L+卡拉胶6g/L+蔗糖30g，ph＝5.8。
5.根据权利要求1所述的一种白芨的种子组织快繁育苗方法，其特征在于，生根培养的配方是：1/2MS+NAA0.6mg/+香蕉泥70g/L，ph＝5.6。
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