CN105210875A - 一种白芨快速扩繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉白芨扩繁技术领域，尤其是一种白芨快速扩繁方法，通过对白芨果实进行饱和洗衣粉水浸泡、酒精浸泡以及次氯酸钠溶液浸泡，并结合浸泡的时间控制，再将其新芽培养基中种子培养，并对新芽培养基的营养成分以及营养配比和培养条件进行控制，再结合对壮苗培养基的营养成分以及营养配比的控制，以及转入壮苗培养基的时机进行控制，进而使得培养的白芨苗的产量得到较大幅度提高，相比传统白芨苗培育方法培育出来的白芨苗的产量高出33～38％，并且相比传统的白芨苗培养周期缩短了约半个月左右，进而极大程度的降低了白芨苗的培养成本，提高了白芨苗品质，尤其是提高了白芨苗的抗病性，确保了白芨苗的基因稳定性，降低了种植白芨的成本。
Description
技术领域
本发明涉白芨扩繁技术领域，尤其是一种白芨快速扩繁方法。
背景技术
白芨(BletillaStriata(Thunb.)Reichb.f.)为兰科(Orchidaceae)植物白芨属多年生草本植物，以干燥块茎入药。具有收敛止血，消肿生肌的功效。对咯血、吐血、便血及外伤止血、疮疡肿毒、手足跋裂等有较好疗效，广泛用于治疗肺结核及支气管扩张咯血、胃溃疡出血等症，其白芨胶广泛应用于食品、医药和日用化学品等领域。近年来，野生白芨遭到过度采挖，导致野生资源濒危。人工栽培因其无性繁殖种苗携带病毒、品质退化、有效产量低，导致市场货源极缺，价格连年攀升。
为此，解决白芨繁殖技术问题成为了缓解白芨市场需求的关键，基于此，有研究者对白芨苗的快速繁殖做出了研究，如专利号为201110175931.1的《一种快速繁殖白芨苗的方法》，按照以下步骤进行：1)选择白芨成熟种子作为外植体；2)种子消毒后接种至萌发培养基，7天左右种子萌发，14天左右形成原球茎，切割原球茎，转接至原球茎增殖培养基；3)原球茎转接至丛生芽诱导及增殖培养基；4)切割丛生芽使其大量繁殖，等丛生芽长成高约3cm的小苗后转接至生根壮苗培养基，待苗长成高约7～10cm时移栽。由此可见，现有技术中，对于白芨苗快速繁殖操作的难度较大，并且采用的培养基培养白芨苗的成本较高，效果较差，尤其是采用的丛生芽诱导及增殖培养基，生根壮苗培养基中的原料成分以及原料配比不恰当，进而导致培养的白芨苗的品质较差，进一步导致白芨的产量受到限制，提高了生产成本。
发明内容
为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供一种白芨快速扩繁方法。
具体是通过以下技术方案得以实现的：
一种白芨快速扩繁方法，包括以下步骤：
(1)选择当年成熟饱满，且无霉烂的白芨果实，并将其采用饱和的洗衣粉水浸泡8-12min，再将其置于自来水管下冲洗3-5h，再将其在无菌条件下，采用体积浓度为75％的酒精浸泡4-6min，再将其转入体积浓度为10％的次氯酸钠溶液中浸泡14-16min，再将其采用无菌水反复冲洗5-6次，再将果实切开，取出种子，并将种子均匀的接种在新芽培养基上；
(2)将步骤1)接种完成的培养基置于温度为24-26℃，光照时间为11-13h/天，光照强度为1990-2100LX的环境中进行培养一个月，得到新芽；
(3)将步骤2)中培养得到的新芽转接在壮苗培养基中置于温度为24-26℃，光照时间为11-13h/天，光照强度为1990-2100LX的环境中进行培养，待培养15-25天后，将其进行自然条件下炼苗5-7天，再将其移栽植入大田，即可。
所述的新芽培养基为MS固体培养基上添加0.19～0.21LNAA和0.24～0.26L6BA。
所述的壮苗培养基为MS固体培养基上添加0.4～0.6LNAA、0.19～0.21L6BA和占壮苗培养基物料总重量9-11％的土豆汁。
所述的无菌水为蒸馏水或者自来水在温度为80-100℃的环境中煮30-50min后冷却至常温的冷却水。
所述的土豆汁，其制备方法是将土豆、磷酸二氢钾、尿素、腐植酸、蚯蚓粪按照质量比为3∶1∶0.1∶1∶2进行混合后，再将其置于研磨机中研磨成浆，并调整浆的水分含量为50～80％，再将其置于超声波处理器中处理2～5min，再将其送入紫外线灭菌箱中灭菌处理10-20min，再将其置于过滤器中过滤，获得汁液和滤渣，并将滤渣置于烘干箱中烘干至水分含量为0.1-0.7％，再将其置于粉磨机中研磨成130-150目的粉末，再向其中加入2-3倍粉末重量的蒸馏水，再将其超声处理1-3min后，加入汁液中，获得。
所述的超声波，其频率为30-300Hz。
与现有技术相比，本发明的技术效果体现在：
通过对白芨果实进行饱和洗衣粉水浸泡、酒精浸泡以及次氯酸钠溶液浸泡，并结合浸泡的时间控制，再将其新芽培养基中种子培养，并对新芽培养基的营养成分以及营养配比和培养条件进行控制，再结合对壮苗培养基的营养成分以及营养配比的控制，以及转入壮苗培养基的时机进行控制，进而使得培养的白芨苗的产量得到较大幅度提高，相比传统白芨苗培育方法培育出来的白芨苗的产量高出33～38％，并且相比传统的白芨苗培养周期缩短了约半个月左右，进而极大程度的降低了白芨苗的培养成本，提高了白芨苗品质，尤其是提高了白芨苗的抗病性，确保了白芨苗的基因稳定性，降低了种植白芨的成本。
具体实施方式
下面结合具体的实施方式来对本发明的技术方案做进一步的限定，但要求保护的范围不仅局限于所作的描述。
本发明所述的NAA为萘乙酸(1-Naphthaleneaceticacid)。
本发明所述的6BA为6-苄氨基嘌呤。
实施例1
一种白芨快速扩繁方法，包括以下步骤：
(1)选择当年成熟饱满，且无霉烂的白芨果实，并将其采用饱和的洗衣粉水浸泡8min，再将其置于自来水管下冲洗3h，再将其在无菌条件下，采用体积浓度为75％的酒精浸泡4min，再将其转入体积浓度为10％的次氯酸钠溶液中浸泡14min，再将其采用无菌水反复冲洗5次，再将果实切开，取出种子，并将种子均匀的接种在新芽培养基上；
(2)将步骤1)接种完成的培养基置于温度为24℃，光照时间为11h/天，光照强度为1990LX的环境中进行培养一个月，得到新芽；
(3)将步骤2)中培养得到的新芽转接在壮苗培养基中置于温度为24℃，光照时间为11h/天，光照强度为1990LX的环境中进行培养，待培养15天后，将其进行自然条件下炼苗5天，再将其移栽植入大田，即可。
所述的新芽培养基为MS固体培养基上添加0.19LNAA和0.24L6BA。
所述的壮苗培养基为MS固体培养基上添加0.4LNAA、0.19L6BA和占壮苗培养基物料总重量9％的土豆汁。
实施例2
一种白芨快速扩繁方法，包括以下步骤：
(1)选择当年成熟饱满，且无霉烂的白芨果实，并将其采用饱和的洗衣粉水浸泡12min，再将其置于自来水管下冲洗5h，再将其在无菌条件下，采用体积浓度为75％的酒精浸泡6min，再将其转入体积浓度为10％的次氯酸钠溶液中浸泡16min，再将其采用无菌水反复冲洗6次，再将果实切开，取出种子，并将种子均匀的接种在新芽培养基上；
(2)将步骤1)接种完成的培养基置于温度为26℃，光照时间为13h/天，光照强度为2100LX的环境中进行培养一个月，得到新芽；
(3)将步骤2)中培养得到的新芽转接在壮苗培养基中置于温度为26℃，光照时间为13h/天，光照强度为2100LX的环境中进行培养，待培养25天后，将其进行自然条件下炼苗7天，再将其移栽植入大田，即可。
所述的新芽培养基为MS固体培养基上添加0.21LNAA和0.26L6BA。
所述的壮苗培养基为MS固体培养基上添加0.6LNAA、0.21L6BA和占壮苗培养基物料总重量11％的土豆汁。
所述的无菌水为自来水在温度为80℃的环境中煮30min后冷却至常温的冷却水。
所述的土豆汁，其制备方法是将土豆、磷酸二氢钾、尿素、腐植酸、蚯蚓粪按照质量比为3∶1∶0.1∶1∶2进行混合后，再将其置于研磨机中研磨成浆，并调整浆的水分含量为50％，再将其置于超声波处理器中处理2min，再将其送入紫外线灭菌箱中灭菌处理10min，再将其置于过滤器中过滤，获得汁液和滤渣，并将滤渣置于烘干箱中烘干至水分含量为0.1％，再将其置于粉磨机中研磨成130目的粉末，再向其中加入2倍粉末重量的蒸馏水，再将其超声处理1min后，加入汁液中，获得。
所述的超声波，其频率为30Hz。
实施例3
一种白芨快速扩繁方法，包括以下步骤：
(1)选择当年成熟饱满，且无霉烂的白芨果实，并将其采用饱和的洗衣粉水浸泡10min，再将其置于自来水管下冲洗4h，再将其在无菌条件下，采用体积浓度为75％的酒精浸泡5min，再将其转入体积浓度为10％的次氯酸钠溶液中浸泡15min，再将其采用无菌水反复冲洗5次，再将果实切开，取出种子，并将种子均匀的接种在新芽培养基上；
(2)将步骤1)接种完成的培养基置于温度为25℃，光照时间为12h/天，光照强度为2000LX的环境中进行培养一个月，得到新芽；
(3)将步骤2)中培养得到的新芽转接在壮苗培养基中置于温度为25℃，光照时间为12h/天，光照强度为2000LX的环境中进行培养，待培养20天后，将其进行自然条件下炼苗6天，再将其移栽植入大田，即可。
所述的新芽培养基为MS固体培养基上添加0.2LNAA和0.25L6BA。
所述的壮苗培养基为MS固体培养基上添加0.5LNAA、0.2L6BA和占壮苗培养基物料总重量10％的土豆汁。
所述的无菌水为自来水在温度为90℃的环境中煮40min后冷却至常温的冷却水。
所述的土豆汁，其制备方法是将土豆、磷酸二氢钾、尿素、腐植酸、蚯蚓粪按照质量比为3∶1∶0.1∶1∶2进行混合后，再将其置于研磨机中研磨成浆，并调整浆的水分含量为70％，再将其置于超声波处理器中处理3min，再将其送入紫外线灭菌箱中灭菌处理15min，再将其置于过滤器中过滤，获得汁液和滤渣，并将滤渣置于烘干箱中烘干至水分含量为0.5％，再将其置于粉磨机中研磨成140目的粉末，再向其中加入3倍粉末重量的蒸馏水，再将其超声处理2min后，加入汁液中，获得。
所述的超声波，其频率为100Hz。
实施例4
一种白芨快速扩繁方法，包括以下步骤：
(1)选择当年成熟饱满，且无霉烂的白芨果实，并将其采用饱和的洗衣粉水浸泡9min，再将其置于自来水管下冲洗3h，再将其在无菌条件下，采用体积浓度为75％的酒精浸泡4min，再将其转入体积浓度为10％的次氯酸钠溶液中浸泡16min，再将其采用无菌水反复冲洗5次，再将果实切开，取出种子，并将种子均匀的接种在新芽培养基上；
(2)将步骤1)接种完成的培养基置于温度为24℃，光照时间为13h/天，光照强度为2100LX的环境中进行培养一个月，得到新芽；
(3)将步骤2)中培养得到的新芽转接在壮苗培养基中置于温度为25℃，光照时间为11h/天，光照强度为1990LX的环境中进行培养，待培养25天后，将其进行自然条件下炼苗5天，再将其移栽植入大田，即可。
所述的新芽培养基为MS固体培养基上添加0.21LNAA和0.24L6BA。
所述的壮苗培养基为MS固体培养基上添加0.4LNAA、0.21L6BA和占壮苗培养基物料总重量11％的土豆汁。
所述的无菌水为自来水在温度为100℃的环境中煮50min后冷却至常温的冷却水。
所述的土豆汁，其制备方法是将土豆、磷酸二氢钾、尿素、腐植酸、蚯蚓粪按照质量比为3∶1∶0.1∶1∶2进行混合后，再将其置于研磨机中研磨成浆，并调整浆的水分含量为80％，再将其置于超声波处理器中处理5min，再将其送入紫外线灭菌箱中灭菌处理20min，再将其置于过滤器中过滤，获得汁液和滤渣，并将滤渣置于烘干箱中烘干至水分含量为0.7％，再将其置于粉磨机中研磨成150目的粉末，再向其中加入3倍粉末重量的蒸馏水，再将其超声处理3min后，加入汁液中，获得。
所述的超声波，其频率为300Hz。
实施例5
在上述的实施例中，无菌水还可以是蒸馏水。
实施例6
一种白芨快速扩繁方法，包括以下步骤：
(1)选择当年成熟饱满，且无霉烂的白芨果实，并将其采用饱和的洗衣粉水浸泡9min，再将其置于自来水管下冲洗3h，再将其在无菌条件下，采用体积浓度为75％的酒精浸泡4min，再将其转入体积浓度为10％的次氯酸钠溶液中浸泡16min，再将其采用无菌水反复冲洗5次，再将果实切开，取出种子，并将种子均匀的接种在新芽培养基上；
(2)将步骤1)接种完成的培养基置于温度为24℃，光照时间为13h/天，光照强度为2100LX的环境中进行培养一个月，得到新芽；
(3)将步骤2)中培养得到的新芽转接在壮苗培养基中置于温度为25℃，光照时间为11h/天，光照强度为1990LX的环境中进行培养，待培养25天后，将其进行自然条件下炼苗5天，再将其移栽植入大田，即可。
所述的新芽培养基为MS固体培养基上添加0.21LNAA和0.24L6BA。
所述的壮苗培养基为MS固体培养基上添加0.4LNAA、0.21L6BA和占壮苗培养基物料总重量11％的土豆汁。
所述的无菌水为自来水在温度为90℃的环境中煮40min后冷却至常温的冷却水。
实验例：
本发明经过将上述实施例中的培养的白芨苗经过产量的检测和培养周期的统计；再将其壮苗培养基和新芽培养基进行交换后进行培养，并对得出的白芨苗的产量和培养周期进行统计；还将上述的壮苗培养基采用：MS+NAA0.2L+6BA0.25L+10％香蕉泥的培养基来替代，并对培养的白芨苗的产量和培养周期进行统计；还将专利号为201110175931.1的《一种快速繁殖白芨苗的方法》作为对照组来进行与上述实验方案的结果进行对比，其得出以下结论：
本发明的实施例培养的白芨苗的产量比专利号为201110175931.1的《一种快速繁殖白芨苗的方法》的白芨的产量高出3-8个百分点；比将本发明的壮苗培养基和新芽培养基进行交换后培养的白芨产量高出13-19个百分点；比将壮苗培养基采用：MS+NAA0.2L+6BA0.25L+10％香蕉泥的培养基来替代的方案培养的白芨的产量高出4-7个百分点。
并且，本发明的实施例培养的白芨苗的培养周期，比专利号为201110175931.1的《一种快速繁殖白芨苗的方法》的白芨苗的培养周期短10-15天；比壮苗培养基和新芽培养基进行交换后进行培养的培养周期短一个月左右；比将壮苗培养基采用：MS+NAA0.2L+6BA0.25L+10％香蕉泥的培养基来替代的培养周期来说，短约半个月。
上述的培养周期界定是将白芨苗培养至相等的株高所需要的时间的检测。
同时，本发明还对新芽培养基中的营养成分的含量进行调整对比实验，其结果为：在NAA添加量达到0.22L时，其得到的白芨产量比添加0.19～0.21L降低了7-9个百分点，而在0.19～0.21L之间，其波动的幅度进行只有0.3～2个百分点；再将NAA添加量低于0.19L，即采用0.18L时，其白芨的产量比0.19～0.21L降低了15-20个百分点；并且，在6BA变化幅度超过0.26L或者低于0.24L时，其白芨苗的培养周期将会超过3-4个月，并且产量也会显著性的下降；同理，对壮苗培养基进行营养成分含量的调整，其结果为：NAA在0.4-0.6L，6BA在0.19-0.21L，土豆汁在9-11％的含量时，比NAA添加量高于0.6L或低于0.4L和/或6BA添加量高于0.21L或低于0.19L和/或土豆汁添加量高于11％或者低于9％时的白芨产量较高，约高出3-6个百分点，并且培养白芨苗至7-10cm的株高的周期也较短，约缩短半个月。
Claims (6)
1.一种白芨快速扩繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)选择当年成熟饱满，且无霉烂的白芨果实，并将其采用饱和的洗衣粉水浸泡8-12min，再将其置于自来水管下冲洗3-5h，再将其在无菌条件下，采用体积浓度为75％的酒精浸泡4-6min，再将其转入体积浓度为10％的次氯酸钠溶液中浸泡14-16min，再将其采用无菌水反复冲洗5-6次，再将果实切开，取出种子，并将种子均匀的接种在新芽培养基上；
(2)将步骤1)接种完成的培养基置于温度为24-26℃，光照时间为11-13h/天，光照强度为1990-2100LX的环境中进行培养一个月，得到新芽；
(3)将步骤2)中培养得到的新芽转接在壮苗培养基中置于温度为24-26℃，光照时间为11-13h/天，光照强度为1990-2100LX的环境中进行培养，待培养15-25天后，将其进行自然条件下炼苗5-7天，再将其移栽植入大田，即可。
2.如权利要求1所述的白芨快速扩繁方法，其特征在于，所述的新芽培养基为MS固体培养基上添加0.19～0.21LNAA和0.24～0.26L6BA。
3.如权利要求1所述的白芨快速扩繁方法，其特征在于，所述的壮苗培养基为MS固体培养基上添加0.4～0.6LNAA、0.19～0.21L6BA和占壮苗培养基物料总重量9-11％的土豆汁。
4.如权利要求1所述的白芨快速扩繁方法，其特征在于，所述的无菌水为蒸馏水或者自来水在温度为80-100℃的环境中煮30-50min后冷却至常温的冷却水。
5.如权利要求3所述的白芨快速扩繁方法，其特征在于，所述的土豆汁，其制备方法是将土豆、磷酸二氢钾、尿素、腐植酸、蚯蚓粪按照质量比为3∶1∶0.1∶1∶2进行混合后，再将其置于研磨机中研磨成浆，并调整浆的水分含量为50～80％，再将其置于超声波处理器中处理2～5min，再将其送入紫外线灭菌箱中灭菌处理10-20min，再将其置于过滤器中过滤，获得汁液和滤渣，并将滤渣置于烘干箱中烘干至水分含量为0.1-0.7％，再将其置于粉磨机中研磨成130-150目的粉末，再向其中加入2-3倍粉末重量的蒸馏水，再将其超声处理1-3min后，加入汁液中，获得。
6.如权利要求3所述的白芨快速扩繁方法，其特征在于，所述的超声波，其频率为30-300Hz。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20160106 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |