CN106258995B - 一种草莓培养基的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种草莓培养基的制备方法，其主要特征是利用蚯蚓粪提取液，在不添加任何矿质元素的前提下，只添加蔗糖和琼脂来配制培养基，其组成成分为：蚯蚓粪提取液20%、蔗糖30 g/L和琼脂7 g/L，培养基灭菌前调节PH值为5.8。即可以用于草莓苗的生长。用蚯蚓粪提取液进行草莓苗培养，草莓幼苗的根长、叶柄长、叶片数、叶面积和株高都有显著提高，培养出的草莓幼苗质量优于MS培养基上生长的幼苗。其优点是培养基取材广泛、价格低廉、制作简单且优质高效，为大规模进行草莓幼苗培养提供了有利条件。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域中的植物组织培养技术，提供了一种草莓培养基的制备方法。
背景技术
草莓（Fragaria ×ananassaDuch.）是蔷薇科草莓属植物。因其鲜艳或绮丽的色泽、较高的营养价值及鲜美的口感而备受人们的欢迎。目前我国草莓的栽培面积超过200万亩，为世界上最大的草莓生产国。草莓属于多年生草本植物，匍匐茎繁殖是其繁殖的主要方式。因此传统草莓育苗多是采用无性繁殖的方法。而通过无性繁殖，草莓苗易携带和积累病毒，造成严重的品种退化。使得植株抵抗力变弱、产量变低、品种变差。因此采用传统繁殖方式会给草莓种植者造成严重的经济损失。而植物组织培养技术的出现，使得利用草莓茎尖进行脱毒和扩繁成为现实。但是植物组织培养需要适宜的营养和生长条件，才能使植物细胞进行正常的分化和生长。而培养基则是给植物细胞提供养分的场所。培养基包括大量元素、微量元素、铁盐及螯合剂、糖和琼脂。目前最常用的培养基是MS培养基，该培养基的配制需要添加无机营养元素、蔗糖、铁盐、琼脂和超纯水。需要分步配制母液，步骤繁琐，费时费力。而商业化的MS培养基，则价格较贵，不利于大面积、规模化育苗使用。
发明内容
本发明的目的是针对上技术中存在的问题，提供一种草莓培养基的制备方法，使用蚯蚓粪提取液替代基本MS培养基，有效的提高了草莓苗的生长势，大大的降低了生产成本，简化了配置流程，为大规模进行草莓幼苗培养提供了有利条件。
本发明的目的是这样实现的，包括用于草莓苗生长的培养基的蚯蚓粪提取液，其特征是，
1.蚯蚓粪样品风干后，将样品磨碎，然后过2mm土壤筛，取2mm筛下样品50g浸于125mL蒸馏水中，充分振荡8小时，然后静置12小时，通过4层纱布过滤并离心，制成蚯蚓粪水浸液原液，于4 oC保存备用。
2.所述含蚯蚓粪提取液的培养基包括蚯蚓粪提取液20%，蔗糖30 g/L和琼脂7 g/L，PH值为5.8。
3.蚯蚓粪提取液培养基的具体应用步骤是：
步骤A：先用70%酒精浸泡草莓种子30s，除去液体；再用20%的次氯酸钠浸泡种子20分钟，期间每隔2分钟震荡一次，除去液体；再用灭菌水洗3次后，浸泡24h，浸泡后的种子，除去蒸馏水；再用70%的酒精洗30s，去除酒精，用灭菌水再洗2遍。
步骤B：将步骤A处理的种子，播种于MS培养基中进行催芽，直到长出第三片叶，培养条件为温度23~25oC，光照1800~2200lx，光照时间为16h/d。
步骤C：将长出3片叶子的草莓苗，转入含有20%蚯蚓粪提取液的培养基中培养4周，进行性状调查。培养条件为温度23~25oC，光照1800~2200lx，光照时间为16h/d。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
第一，利用蚯蚓粪提取液培养基取代MS培养基，能够产生比MS培养基更好的效果，且大大的降低了生产成本。
第二，提供了一种绿色环保、配制简单的培养基制作方法，减少了在培养基配制过程中的时间消耗，为大规模组织培养提供了有利条件。
第三，实现蚯蚓粪资源的高效利用，提高了蚯蚓粪的利用价值，且在生态环境上更加环保。
附图说明：
图1 不同浓度蚯蚓粪提取液培养基中草莓幼苗的生长状况
图2 在MS培养基中添加不同浓度蚯蚓粪提取液后草莓幼苗的生长状况。
表1 不同浓度蚯蚓粪提取液培养基中草莓幼苗的根长、叶柄长、叶面积、叶片数和株高。
表2 在MS培养基中添加不同浓度蚯蚓粪提取液后草莓幼苗的根长、叶柄长、叶面积、叶片数和株高。
具体实施方式：
下面结合实例对本发明做进一步说明
由图1可知，从左到右，0%Q，不含蚯蚓粪提取液培养基；20%Q，20%蚯蚓粪提取液培养基；40%Q，40%蚯蚓粪提取液培养基；60%Q，60%蚯蚓粪提取液培养基；80%Q，80%蚯蚓粪提取液培养基；100%Q，100%蚯蚓粪提取液培养基；其中20%蚯蚓粪提取液培养基草莓幼苗的生长状况最好。
由图2可知，从左到右，20%Q，20%蚯蚓粪提取液培养基；MS, MS培养基；MS+20%Q，MS和20%蚯蚓粪提取液的混合培养基；MS+40%Q，MS和40%蚯蚓粪提取液的混合培养基；MS+60%Q，MS和60%蚯蚓粪提取液的混合培养基；MS+80%Q，MS和80%蚯蚓粪提取液的混合培养基；MS+100%Q，MS和100%蚯蚓粪提取液的混合培养基；比较分析发现，20%蚯蚓粪提取液培养基中的草莓幼苗比单独的MS培养基及MS和不同浓度蚯蚓粪提取液混合培养基中的幼苗生长状况都好。
由表1可知，与其他浓度蚯蚓粪提取液培养基所生长的草莓幼苗相比，蚯蚓粪提取液20%的培养基中草莓幼苗的根长、叶柄长、叶面积、叶片数和株高都显著提高。
由表2可知，与MS培养基及MS和不同浓度蚯蚓粪提取液混合培养基所生长的草莓幼苗相比，蚯蚓粪提取液20%的培养基中的草莓幼苗在根长、叶柄长、叶面积、叶片数和株高都显著提高。
以下结合对比实例详细说明本发明。对比实例是为更好的理解本发明，但不限定于本发明。以下实施方法中的实验方法均为常规方法，所涉及的实验试剂均为常规试剂。
实例1 不同浓度蚯蚓粪提取液培养基对草莓幼苗生长状况的影响
1、蚯蚓粪样品风干后，将样品磨碎，然后过2mm土壤筛，取2mm筛下样品50g浸于125mL蒸馏水中，充分振荡8小时，然后静置12小时，通过4层纱布过滤并离心，上清液即为蚯蚓粪水浸液原液，于4 oC保存备用。
2、将原液分别按0、20%、40%、60%、80%、100%的体积比添加到蒸馏水中。每组处理除添加的提取液体积不同外，其余条件均相同，同时添加蔗糖 30 g/L和琼脂7 g/L，然后调节PH值为5.8。每个处理设置10次重复。
3、蚯蚓粪提取液培养基的应用包括以下步骤：
步骤A：先用70%酒精浸泡草莓种子30s，除去液体；再用20%的次氯酸钠浸泡种子20分钟，每隔2分钟震荡一次，除去液体；再用灭菌水洗3次后，浸泡24h，浸泡后的种子，除去蒸馏水；再用70%的酒精洗30s，去除酒精，用灭菌水再洗2遍。
步骤B：将步骤A处理的种子，播种于MS培养基中进行催芽，直到长出第三片叶，培养条件为温度23~25oC，光照1800~2200lx，光照时间为16h/d。
步骤C：将长出3片叶子的草莓苗，转入含有20%蚯蚓粪提取液的培养基中培养4周，进行性状调查。培养条件为温度23~25oC，光照1800~2200lx，光照时间为16h/d。一个月后进行性状调查并拍照（如表1；图1）。
实例2 蚯蚓粪提取液20%培养基与MS培养基及MS和不同浓度蚯蚓粪提取液混合培养基中的幼苗生长状况的比较
1、蚯蚓粪样品风干后，将样品磨碎，然后过2mm土壤筛，取2mm筛下样品50g浸于125mL蒸馏水中，充分振荡8小时，然后静置12小时，4层纱布过滤并离心，上清液即为蚯蚓粪水浸液原液，于4 oC保存备用。
2、将原液分别按20%，40%，60%，80%，100%的比例添加到MS培养基中，比例是原液占培养基的比例，同时设置 MS 培养基和不添加蚯蚓粪提取液的培养基作为对照，共计7个处理，每个处理设置10次重复。调整培养基 pH 值为5.8。
3、蚯蚓粪提取液培养基的应用包括以下步骤：
步骤A：先用70%酒精浸泡草莓种子30s，除去液体；再用20%的次氯酸钠浸泡种子20分钟，每隔2分钟震荡一次，除去液体，再用灭菌水洗3次后，浸泡24h，浸泡后的种子，除去蒸馏水；再用70%的酒精洗30s，去除酒精，用灭菌水再洗2遍。
步骤B：将步骤A处理的种子，播种于MS培养基中进行催芽，直到长出第三片叶，培养条件为温度23~25oC，光照1800~2200lx，光照时间为16h/d。
步骤C：将长出3片叶子的草莓苗，转入含有20%蚯蚓粪提取液的培养基中培养4周，进行性状调查。培养条件为温度23~25oC，光照1800~2200lx，光照时间为16h/d。一个月后进行性状调查并拍照（如表2；图2）。
表1
| 处理 | 根长/cm | 叶柄长/cm | 叶面积/mm2 | 叶片数 | 株高/cm |
| 0 | 4.06a | 1.49c | 28.00c | 4.75c | 1.63c |
| 20%Q | 3.28b | 4.79a | 74.00a | 7.25ab | 5.23a |
| 40%Q | 2.34c | 4.73a | 72.00a | 7.63a | 5.30a |
| 60%Q | 2.28c | 4.44a | 63.67a | 7.63a | 5.11a |
| 80%Q | 1.58d | 3.40b | 63.33a | 6.50b | 4.03b |
| 100%Q | 1.03d | 1.69c | 42.00b | 4.75c | 2.00c |
表2
| 处理 | 根长/cm | 叶柄长/cm | 叶面积/mm2 | 叶片数 | 株高/cm |
| MS | 2.91ab | 3.28c | 64.80ab | 6.88abc | 4.08b |
| MS+20%Q | 2.76abc | 3.89b | 75.75a | 7.75a | 4.74a |
| MS+40%Q | 2.60bc | 3.28c | 46.00cd | 7.25ab | 3.90b |
| MS+60%Q | 2.23c | 2.96cd | 56.67bc | 6.75bc | 3.56b |
| MS+80%Q | 1.53d | 2.43d | 37.67de | 6.25c | 2.80c |
| MS+100%Q | 1.33d | 1.70e | 26.33e | 6.88abc | 2.08d |
| 20%Q | 3.28a | 4.79a | 67.20ab | 7.25ab | 5.23a |
Claims (2)
1.一种草莓培养基的制备方法，其特征是，蚯蚓粪样品风干后，将样品磨碎，然后过2mm土壤筛，取2mm筛下样品50g浸于125mL蒸馏水中，充分振荡8小时，然后静置12小时，通过4层纱布过滤，再3000r/min离心5分钟，去掉沉淀，上清液即为蚯蚓粪水浸液原液，于4 oC保存备用，培养基中含蚯蚓粪提取液的体积比为20%，含蔗糖30 g/L和琼脂7 g/L，PH值为5.8。
2.根据权利要求1所述的一种草莓培养基的应用方法，其特征是用于草莓苗生长培养基的操作步骤是：
步骤A：先用70%酒精浸泡草莓种子30s，弃液；再用20%的次氯酸钠浸泡种子20分钟，期间每隔2分钟振荡一次，弃液；再用灭菌水洗过3次后，浸泡24h，弃灭菌水；再用70%的酒精洗30s，弃液，用灭菌水洗2遍；
步骤B：将步骤A处理的种子，播种于MS培养基中进行催芽，直到长出第三片叶，培养条件为温度23~25oC，光照1800~2200lx，光照时间为16h/d；
步骤C：将长出3片叶子的草莓苗转入含有20%蚯蚓粪提取液的培养基中培养4周，进行性状调查，培养条件为温度23~25oC，光照1800~2200lx，光照时间为16h/d。
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Granted publication date: 20180731 Termination date: 20181021 |
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