CN102907323A - 一种白及种子无菌生产微型种茎的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种白及种子无菌生产微型种茎的方法，该方法包括白及种子消毒，种子在萌发培养基上发芽，诱导生根，诱导人工种茎的形成、生长和成熟等步骤。本发明优化、提出了白及从种子萌发到形成成熟种茎的技术路线和关键技术，能简化白及组织培养技术，实现从白及种子直接规模化培育和生产白及种茎。其有胚种子萌发率达到95%以上，且80%以上组培苗能形成成熟的微型种茎。本发明克服了自然条件下白及种子极少萌发的困难，也克服了常规白及组培和种子无菌繁殖的幼苗移栽成活率低等缺点。为利用白及种子进行工厂化快速生产大量种茎，提供了切实可行的实用技术，可缓解白及种源紧缺的现状，促进白及规模化人工种植。

Description

一种白及种子无菌生产微型种茎的方法
技术领域
本发明涉及一种白及种子无菌生产微型种茎的方法。
背景技术
白及为兰科植物白及Bletilla striata(Thunb．ex A．Murray)Rchb．f．的干燥块茎。又名白芨、连及草、箬兰、甘根、白根、百笠、紫蕙。白及的药用历史悠久，是我国传统中药。《神农本草经》载：“主治痛肿恶疮败疽，伤阴死肌。”《药性本草》说：“治面上，令人肌滑。”《中华本草》曰：治发背(痈)、瘰疠、扑损、刀箭伤，生肌止痛。《用药法象》说：“止肺血。”实验研究证明，白及煎剂、散剂均有止血作用，对实验性胃及十二指肠穿孔有定的作用，传统上它对肺结核、矽且、肛裂等症有较好疗效，是历代医家治疗肺痨的主药之一。白及也为1977年以后各版《中国药典》所收载，性微寒、味苦、甘，具有补肺、止血、散风除湿、通窍止痛、消肿排脓、生肌、敛疮的功能，主要用于治疗感冒头痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻渊、牙痛、白带、肺伤咳血、衄血、金疮出血、痈疽肿毒、溃疡疼痛、汤火灼伤、手足皲裂等。然而，白及为野生药材，家种品极少，市场供应主要靠野生品来维持。近年来，由于人为的过度采挖和天然生境的破坏，其野生自然资源急剧减少，濒临灭绝，被国家列为重点保护的野生药用植物之一。其种子较小，自然条件下需与真菌共生才能萌发，实生苗的栽培较为困难，而传统分株、切块等无性繁殖的方式成活率极低，繁殖难度很大，不可能满足大规模生产的需要。白及组织培养和种子繁殖技术研究虽然有不少人涉及，但基本上是走培育成幼苗再移栽到田间的技术路线，由于白及组培苗的离开培养环境后，栽培成活困难，限制了其在生产上的应用。
发明内容
本发明的目的是提供了一种白及种子无菌生产微型种茎的方法，实现利用白及种子有性繁殖大量微型种茎，作为繁殖材料。
本发明一种白及种子无菌生产微型种茎的方法， 其特征在于含有以下步骤：
a.种子萌发与无菌苗培养：将白及果实采收后，先用洗衣粉漂洗，后置于2%升汞溶液中消毒，再用无菌水冲洗，然后进行接种；
 b.诱导生根：将步骤a获得的小苗，转接到配方为1/2MS+NAA0.2～0.4mg/L的生根培养基上培养，得生根后的白及苗；
c.微型种茎的培养：将步骤b获得的小苗，转接到PH值为5.8的1/2MS或MS培养基上培养，得白及微型种茎。
本发明一种白及种子无菌生产微型种茎的方法，其特征在于含有以下步骤：
a.种子萌发与无菌苗培养：将白及果实采收后，先用洗衣粉漂洗，后置于2%升汞溶液中消毒，再用无菌水冲洗，然后进行接种；所述的接种方法是：十字状切开果实，将白色粉末状种子弹到经高温灭菌过的滤纸上，然后适量接种到培养基上；接种后培养成小苗；该培养基的配方组成为KC+100～200g/L马铃薯或1/2 MS+10%椰汁或MS+2～4mg6-BA/L+0.2～0.4mgNAA/L，PH值为5.8～6.0；
b.诱导生根：将步骤a获得的小苗，转接到配方为1/2MS+NAA0.2～0.4mg/L的生根培养基上；调PH值为5.8左右，置24±2℃，每天光照10小时，光照强度为20000-30000lx下培养得生根后的白及苗；
c.微型种茎的培养：将步骤b获得的小苗，转接到PH值为5.8的1/2MS或MS培养基上，置24±2℃，每天光照10小时，光照强度为20000-30000lx下培养得白及微型种茎。
本发明一种白及种子无菌生产微型种茎的方法，其特征在于含有以下步骤：
a.种子萌发与无菌苗培养：将白及果实采收后，先用洗衣粉漂洗20分钟，后置于2%升汞溶液中消毒20分钟，再用无菌水冲洗5次，然后进行接种；所述的接种方法是：十字状切开果实，将白色粉末状种子弹到经高温灭菌过的滤纸上，然后适量接种到培养基上；接种后置24±2℃，每天光照10小时，光照强度为20000-30000lx下培养，30天-100天使种子萌发并培养成小苗；该培养基的配方组成为KC+100～200g/L马铃薯或1/2 MS+10%椰汁或MS+2～4mg6-BA/L+0.2～0.4mgNAA/L，PH值为5.8～6.0；
b.诱导生根：将步骤a获得的小苗，转接到配方为1/2MS+NAA0.2～0.4mg/L的生根培养基上；调PH值为5.8左右，置24±2℃，每天光照10小时，光照强度为20000-30000lx下培养，30天-60天获得生根后的白及苗；
c.微型种茎的培养：将步骤b获得的小苗，转接到PH值为5.8的1/2MS或MS培养基上，置24±2℃，每天光照10小时，光照强度为20000-30000lx下培养，30天-60天形成原球茎，继续培养至倒苗，获得白及微型种茎；种茎为绿色，圆球状，直径0.3～0.5cm。
本发明的目的是提供了一种白及种子无菌生产微型种茎的方法，实现利用白及种子有性繁殖大量微型种茎，作为繁殖材料。克服了自然条件下白及种子难萌发的问题，也克服了白及组培和种子无菌繁殖的幼苗移栽成活率低等缺点。
本发明采用白及种子在无菌条件下萌发和生长直至微型种茎的技术，克服了自然条件下白及种子极少萌发的困难，也克服了常规白及组培和种子无菌繁殖的幼苗移栽成活率低，繁殖效率不高等缺点。为利用白及种子进行工厂化快速生产大量种茎，提供了切实可行的实用技术，可缓解白及种源紧缺的现状，促进白及规模化人工种植。
本发明与现有技术比较具有以下优点：⑴利用无菌条件诱导白及种子萌发成幼苗，克服了自然条件下，白及繁殖系数低、周期长的困难，同时技术操作简便，生育周期短，经济效益高。⑵利用无菌条件生产的实生苗，直接生产微型种茎，减少了炼苗和移栽等烦琐的步骤，没有缓苗过程，微型种茎形成效率高，有利于进行规模化工厂化常年生产。⑶本发明所获得的微型种茎，具有较强的抗逆性，易贮藏和运输，可以直接大田播种。
附图说明
附图１：白及种子萌发苗；
附图２：诱导生根后的白及实生苗；
附图３：白及实生苗培育种茎；
附图４：白及实生苗无菌生产的微型种茎。
具体实施方式
白及种子采收与消毒，种子萌发和生根，诱导人工种茎的形成、生长和成熟等技术环节。其中：⑴种子萌发与无菌苗培养：将白及果实采收后，先用洗衣粉漂洗20分钟，后置于2%升汞溶液中消毒20分钟，再用无菌水冲洗5次，然后进行接种。接种方法是：十字状切开果实，将白色粉末状种子弹到经高温灭菌过的滤纸上，然后适量接种到培养基上。接种后置24±2℃，每天光照10小时，光照强度为20000-30000lx下培养，30天-100天使种子萌发并培养成小苗。该培养基的配方组成为KC+100～200g/L马铃薯或1/2 MS+10%椰汁或MS+2～4mg6-BA/L+0.2～0.4mgNAA/L，PH值为5.8～6.0。⑵诱导生根：将步骤⑴获得的小苗，转接到配方为1/2MS+NAA0.2～0.4mg/L的生根培养基上。调PH值为5.8左右，置24±2℃，每天光照10小时，光照强度为20000-30000lx下培养，获得生根后的白及苗。⑶微型种茎的培养：将步骤⑵获得的小苗，转接到PH值为5.8的1/2MS或MS培养基上，置24±2℃，每天光照10小时，光照强度为20000-30000lx下培养，30天-60天形成原球茎，继续培养至倒苗，获得白及微型种茎。种茎为绿色，圆球状，直径0.3～0.5cm。
实施例1
本发明一种白及种子无菌生产微型种茎的方法，一种白及种子无菌生产微型种茎的方法，其主要步骤如下：⑴种子萌发与无菌苗培养：采收成熟的白及果实，先用洗衣粉漂洗20分钟，后置于2%升汞溶液中消毒20分钟，再用无菌水冲洗5次，然后进行接种。接种方法是：十字状切开果实，将白色粉末状种子弹到经高温灭菌过的滤纸上，然后适量接种到培养基上。接种后置24±2℃，每天光照10小时，光照强度为20000-30000lx下培养，30天-100天使种子萌发并培养成小苗。该培养基的配方组成为KC+100～200g/L马铃薯，PH值为5.8～6.0。⑵诱导生根：将步骤⑴获得的小苗，转接到配方为1/2MS+NAA0.2～0.4mg/L的生根培养基上。调PH值为5.8左右，置24±2℃，每天光照10小时，光照强度为20000-30000lx下培养，获得生根后的白及苗。⑶微型种茎的培养：将步骤⑵获得的小苗，转接到PH值为5.8的1/2MS培养基上，置24±2℃，每天光照10小时，光照强度为20000-30000lx下培养，30天-60天形成原球茎，继续培养至倒苗，获得绿色，圆球状白及微型种茎。
实施例2
实例２：根据实施例１中所述的步骤，其中：步骤⑴种子萌发与无菌苗培养中的培养基为1/2 MS +10%椰汁。其它相同。
实施例3
根据实施例１中所述的步骤，其中：步骤⑴种子萌发与无菌苗培养中的培养基为MS+2～4mg6-BA/L+0. 2～0.4mgNAA/L。其它相同。实例４：根据实施例１中所述的步骤，其中：步骤⑶微型种茎的培养所用的培养基为MS培养基。其它相同。

Claims (3)

1.一种白及种子无菌生产微型种茎的方法，其特征在于含有以下步骤：
a.种子萌发与无菌苗培养：将白及果实采收后，先用洗衣粉漂洗，后置于2%升汞溶液中消毒，再用无菌水冲洗，然后进行接种；
b.诱导生根：将步骤a获得的小苗，转接到配方为1/2MS+NAA0.2～0.4mg/L的生根培养基上培养，得生根后的白及苗；
c.微型种茎的培养：将步骤b获得的小苗，转接到PH值为5.8的1/2MS或MS培养基上培养，得白及微型种茎。
2.按照权利要求1一种白及种子无菌生产微型种茎的方法，其特征在于含有以下步骤：
a.种子萌发与无菌苗培养：将白及果实采收后，先用洗衣粉漂洗，后置于2%升汞溶液中消毒，再用无菌水冲洗，然后进行接种；所述的接种方法是：十字状切开果实，将白色粉末状种子弹到经高温灭菌过的滤纸上，然后适量接种到培养基上；接种后培养成小苗；该培养基的配方组成为KC+100～200g/L马铃薯或1/2 MS+10%椰汁或MS+2～4mg6-BA/L+0.2～0.4mgNAA/L，PH值为5.8～6.0；
b.诱导生根：将步骤a获得的小苗，转接到配方为1/2MS+NAA0.2～0.4mg/L的生根培养基上；调PH值为5.8左右，置24±2℃，每天光照10小时，光照强度为20000-30000lx下培养得生根后的白及苗；
c.微型种茎的培养：将步骤b获得的小苗，转接到PH值为5.8的1/2MS或MS培养基上，置24±2℃，每天光照10小时，光照强度为20000-30000lx下培养得白及微型种茎。
3.按照权利要求1一种白及种子无菌生产微型种茎的方法，其特征在于含有以下步骤：
a.种子萌发与无菌苗培养：将白及果实采收后，先用洗衣粉漂洗20分钟，后置于2%升汞溶液中消毒20分钟，再用无菌水冲洗5次，然后进行接种；所述的接种方法是：十字状切开果实，将白色粉末状种子弹到经高温灭菌过的滤纸上，然后适量接种到培养基上；接种后置24±2℃，每天光照10小时，光照强度为20000-30000lx下培养，30天-100天使种子萌发并培养成小苗；该培养基的配方组成为KC+100～200g/L马铃薯或1/2 MS+10%椰汁或MS+2～4mg6-BA/L+0.2～0.4mgNAA/L，PH值为5.8～6.0；
b.诱导生根：将步骤a获得的小苗，转接到配方为1/2MS+NAA0.2～0.4mg/L的生根培养基上；调PH值为5.8左右，置24±2℃，每天光照10小时，光照强度为20000-30000lx下培养，30天-60天获得生根后的白及苗；
c.微型种茎的培养：将步骤b获得的小苗，转接到PH值为5.8的1/2MS或MS培养基上，置24±2℃，每天光照10小时，光照强度为20000-30000lx下培养，30天-60天形成原球茎，继续培养至倒苗，获得白及微型种茎；种茎为绿色，圆球状，直径0.3～0.5cm。
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