CN102907323A - 一种白及种子无菌生产微型种茎的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种白及种子无菌生产微型种茎的方法,该方法包括白及种子消毒,种子在萌发培养基上发芽,诱导生根,诱导人工种茎的形成、生长和成熟等步骤。本发明优化、提出了白及从种子萌发到形成成熟种茎的技术路线和关键技术,能简化白及组织培养技术,实现从白及种子直接规模化培育和生产白及种茎。其有胚种子萌发率达到95%以上,且80%以上组培苗能形成成熟的微型种茎。本发明克服了自然条件下白及种子极少萌发的困难,也克服了常规白及组培和种子无菌繁殖的幼苗移栽成活率低等缺点。为利用白及种子进行工厂化快速生产大量种茎,提供了切实可行的实用技术,可缓解白及种源紧缺的现状,促进白及规模化人工种植。
Description
技术领域
本发明涉及一种白及种子无菌生产微型种茎的方法。
背景技术
白及为兰科植物白及Bletilla striata(Thunb.ex A.Murray)Rchb.f.的干燥块茎。又名白芨、连及草、箬兰、甘根、白根、百笠、紫蕙。白及的药用历史悠久,是我国传统中药。《神农本草经》载:“主治痛肿恶疮败疽,伤阴死肌。”《药性本草》说:“治面上,令人肌滑。”《中华本草》曰:治发背(痈)、瘰疠、扑损、刀箭伤,生肌止痛。《用药法象》说:“止肺血。”实验研究证明,白及煎剂、散剂均有止血作用,对实验性胃及十二指肠穿孔有定的作用,传统上它对肺结核、矽且、肛裂等症有较好疗效,是历代医家治疗肺痨的主药之一。白及也为1977年以后各版《中国药典》所收载,性微寒、味苦、甘,具有补肺、止血、散风除湿、通窍止痛、消肿排脓、生肌、敛疮的功能,主要用于治疗感冒头痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻渊、牙痛、白带、肺伤咳血、衄血、金疮出血、痈疽肿毒、溃疡疼痛、汤火灼伤、手足皲裂等。然而,白及为野生药材,家种品极少,市场供应主要靠野生品来维持。近年来,由于人为的过度采挖和天然生境的破坏,其野生自然资源急剧减少,濒临灭绝,被国家列为重点保护的野生药用植物之一。其种子较小,自然条件下需与真菌共生才能萌发,实生苗的栽培较为困难,而传统分株、切块等无性繁殖的方式成活率极低,繁殖难度很大,不可能满足大规模生产的需要。白及组织培养和种子繁殖技术研究虽然有不少人涉及,但基本上是走培育成幼苗再移栽到田间的技术路线,由于白及组培苗的离开培养环境后,栽培成活困难,限制了其在生产上的应用。
发明内容
本发明的目的是提供了一种白及种子无菌生产微型种茎的方法,实现利用白及种子有性繁殖大量微型种茎,作为繁殖材料。
本发明一种白及种子无菌生产微型种茎的方法, 其特征在于含有以下步骤:
a.种子萌发与无菌苗培养:将白及果实采收后,先用洗衣粉漂洗,后置于2%升汞溶液中消毒,再用无菌水冲洗,然后进行接种;
b.诱导生根:将步骤a获得的小苗,转接到配方为1/2MS+NAA0.2~0.4mg/L的生根培养基上培养,得生根后的白及苗;
c.微型种茎的培养:将步骤b获得的小苗,转接到PH值为5.8的1/2MS或MS培养基上培养,得白及微型种茎。
本发明一种白及种子无菌生产微型种茎的方法,其特征在于含有以下步骤:
a.种子萌发与无菌苗培养:将白及果实采收后,先用洗衣粉漂洗,后置于2%升汞溶液中消毒,再用无菌水冲洗,然后进行接种;所述的接种方法是:十字状切开果实,将白色粉末状种子弹到经高温灭菌过的滤纸上,然后适量接种到培养基上;接种后培养成小苗;该培养基的配方组成为KC+100~200g/L马铃薯或1/2 MS+10%椰汁或MS+2~4mg6-BA/L+0.2~0.4mgNAA/L,PH值为5.8~6.0;
b.诱导生根:将步骤a获得的小苗,转接到配方为1/2MS+NAA0.2~0.4mg/L的生根培养基上;调PH值为5.8左右,置24±2℃,每天光照10小时,光照强度为20000-30000lx下培养得生根后的白及苗;
c.微型种茎的培养:将步骤b获得的小苗,转接到PH值为5.8的1/2MS或MS培养基上,置24±2℃,每天光照10小时,光照强度为20000-30000lx下培养得白及微型种茎。
本发明一种白及种子无菌生产微型种茎的方法,其特征在于含有以下步骤:
a.种子萌发与无菌苗培养:将白及果实采收后,先用洗衣粉漂洗20分钟,后置于2%升汞溶液中消毒20分钟,再用无菌水冲洗5次,然后进行接种;所述的接种方法是:十字状切开果实,将白色粉末状种子弹到经高温灭菌过的滤纸上,然后适量接种到培养基上;接种后置24±2℃,每天光照10小时,光照强度为20000-30000lx下培养,30天-100天使种子萌发并培养成小苗;该培养基的配方组成为KC+100~200g/L马铃薯或1/2 MS+10%椰汁或MS+2~4mg6-BA/L+0.2~0.4mgNAA/L,PH值为5.8~6.0;
b.诱导生根:将步骤a获得的小苗,转接到配方为1/2MS+NAA0.2~0.4mg/L的生根培养基上;调PH值为5.8左右,置24±2℃,每天光照10小时,光照强度为20000-30000lx下培养,30天-60天获得生根后的白及苗;
c.微型种茎的培养:将步骤b获得的小苗,转接到PH值为5.8的1/2MS或MS培养基上,置24±2℃,每天光照10小时,光照强度为20000-30000lx下培养,30天-60天形成原球茎,继续培养至倒苗,获得白及微型种茎;种茎为绿色,圆球状,直径0.3~0.5cm。
本发明的目的是提供了一种白及种子无菌生产微型种茎的方法,实现利用白及种子有性繁殖大量微型种茎,作为繁殖材料。克服了自然条件下白及种子难萌发的问题,也克服了白及组培和种子无菌繁殖的幼苗移栽成活率低等缺点。
本发明采用白及种子在无菌条件下萌发和生长直至微型种茎的技术,克服了自然条件下白及种子极少萌发的困难,也克服了常规白及组培和种子无菌繁殖的幼苗移栽成活率低,繁殖效率不高等缺点。为利用白及种子进行工厂化快速生产大量种茎,提供了切实可行的实用技术,可缓解白及种源紧缺的现状,促进白及规模化人工种植。
本发明与现有技术比较具有以下优点:⑴利用无菌条件诱导白及种子萌发成幼苗,克服了自然条件下,白及繁殖系数低、周期长的困难,同时技术操作简便,生育周期短,经济效益高。⑵利用无菌条件生产的实生苗,直接生产微型种茎,减少了炼苗和移栽等烦琐的步骤,没有缓苗过程,微型种茎形成效率高,有利于进行规模化工厂化常年生产。⑶本发明所获得的微型种茎,具有较强的抗逆性,易贮藏和运输,可以直接大田播种。
附图说明
附图1:白及种子萌发苗;
附图2:诱导生根后的白及实生苗;
附图3:白及实生苗培育种茎;
附图4:白及实生苗无菌生产的微型种茎。
具体实施方式
白及种子采收与消毒,种子萌发和生根,诱导人工种茎的形成、生长和成熟等技术环节。其中:⑴种子萌发与无菌苗培养:将白及果实采收后,先用洗衣粉漂洗20分钟,后置于2%升汞溶液中消毒20分钟,再用无菌水冲洗5次,然后进行接种。接种方法是:十字状切开果实,将白色粉末状种子弹到经高温灭菌过的滤纸上,然后适量接种到培养基上。接种后置24±2℃,每天光照10小时,光照强度为20000-30000lx下培养,30天-100天使种子萌发并培养成小苗。该培养基的配方组成为KC+100~200g/L马铃薯或1/2 MS+10%椰汁或MS+2~4mg6-BA/L+0.2~0.4mgNAA/L,PH值为5.8~6.0。⑵诱导生根:将步骤⑴获得的小苗,转接到配方为1/2MS+NAA0.2~0.4mg/L的生根培养基上。调PH值为5.8左右,置24±2℃,每天光照10小时,光照强度为20000-30000lx下培养,获得生根后的白及苗。⑶微型种茎的培养:将步骤⑵获得的小苗,转接到PH值为5.8的1/2MS或MS培养基上,置24±2℃,每天光照10小时,光照强度为20000-30000lx下培养,30天-60天形成原球茎,继续培养至倒苗,获得白及微型种茎。种茎为绿色,圆球状,直径0.3~0.5cm。
实施例1
本发明一种白及种子无菌生产微型种茎的方法,一种白及种子无菌生产微型种茎的方法,其主要步骤如下:⑴种子萌发与无菌苗培养:采收成熟的白及果实,先用洗衣粉漂洗20分钟,后置于2%升汞溶液中消毒20分钟,再用无菌水冲洗5次,然后进行接种。接种方法是:十字状切开果实,将白色粉末状种子弹到经高温灭菌过的滤纸上,然后适量接种到培养基上。接种后置24±2℃,每天光照10小时,光照强度为20000-30000lx下培养,30天-100天使种子萌发并培养成小苗。该培养基的配方组成为KC+100~200g/L马铃薯,PH值为5.8~6.0。⑵诱导生根:将步骤⑴获得的小苗,转接到配方为1/2MS+NAA0.2~0.4mg/L的生根培养基上。调PH值为5.8左右,置24±2℃,每天光照10小时,光照强度为20000-30000lx下培养,获得生根后的白及苗。⑶微型种茎的培养:将步骤⑵获得的小苗,转接到PH值为5.8的1/2MS培养基上,置24±2℃,每天光照10小时,光照强度为20000-30000lx下培养,30天-60天形成原球茎,继续培养至倒苗,获得绿色,圆球状白及微型种茎。
实施例2
实例2:根据实施例1中所述的步骤,其中:步骤⑴种子萌发与无菌苗培养中的培养基为1/2 MS +10%椰汁。其它相同。
实施例3
根据实施例1中所述的步骤,其中:步骤⑴种子萌发与无菌苗培养中的培养基为MS+2~4mg6-BA/L+0. 2~0.4mgNAA/L。其它相同。实例4:根据实施例1中所述的步骤,其中:步骤⑶微型种茎的培养所用的培养基为MS培养基。其它相同。
Claims (3)
1.一种白及种子无菌生产微型种茎的方法,其特征在于含有以下步骤:
a.种子萌发与无菌苗培养:将白及果实采收后,先用洗衣粉漂洗,后置于2%升汞溶液中消毒,再用无菌水冲洗,然后进行接种;
b.诱导生根:将步骤a获得的小苗,转接到配方为1/2MS+NAA0.2~0.4mg/L的生根培养基上培养,得生根后的白及苗;
c.微型种茎的培养:将步骤b获得的小苗,转接到PH值为5.8的1/2MS或MS培养基上培养,得白及微型种茎。
2.按照权利要求1一种白及种子无菌生产微型种茎的方法,其特征在于含有以下步骤:
a.种子萌发与无菌苗培养:将白及果实采收后,先用洗衣粉漂洗,后置于2%升汞溶液中消毒,再用无菌水冲洗,然后进行接种;所述的接种方法是:十字状切开果实,将白色粉末状种子弹到经高温灭菌过的滤纸上,然后适量接种到培养基上;接种后培养成小苗;该培养基的配方组成为KC+100~200g/L马铃薯或1/2 MS+10%椰汁或MS+2~4mg6-BA/L+0.2~0.4mgNAA/L,PH值为5.8~6.0;
b.诱导生根:将步骤a获得的小苗,转接到配方为1/2MS+NAA0.2~0.4mg/L的生根培养基上;调PH值为5.8左右,置24±2℃,每天光照10小时,光照强度为20000-30000lx下培养得生根后的白及苗;
c.微型种茎的培养:将步骤b获得的小苗,转接到PH值为5.8的1/2MS或MS培养基上,置24±2℃,每天光照10小时,光照强度为20000-30000lx下培养得白及微型种茎。
3.按照权利要求1一种白及种子无菌生产微型种茎的方法,其特征在于含有以下步骤:
a.种子萌发与无菌苗培养:将白及果实采收后,先用洗衣粉漂洗20分钟,后置于2%升汞溶液中消毒20分钟,再用无菌水冲洗5次,然后进行接种;所述的接种方法是:十字状切开果实,将白色粉末状种子弹到经高温灭菌过的滤纸上,然后适量接种到培养基上;接种后置24±2℃,每天光照10小时,光照强度为20000-30000lx下培养,30天-100天使种子萌发并培养成小苗;该培养基的配方组成为KC+100~200g/L马铃薯或1/2 MS+10%椰汁或MS+2~4mg6-BA/L+0.2~0.4mgNAA/L,PH值为5.8~6.0;
b.诱导生根:将步骤a获得的小苗,转接到配方为1/2MS+NAA0.2~0.4mg/L的生根培养基上;调PH值为5.8左右,置24±2℃,每天光照10小时,光照强度为20000-30000lx下培养,30天-60天获得生根后的白及苗;
c.微型种茎的培养:将步骤b获得的小苗,转接到PH值为5.8的1/2MS或MS培养基上,置24±2℃,每天光照10小时,光照强度为20000-30000lx下培养,30天-60天形成原球茎,继续培养至倒苗,获得白及微型种茎;种茎为绿色,圆球状,直径0.3~0.5cm。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20130206 |