CN106106083A - 一种白芨微球茎的制备方法 - Google Patents

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侯锋
莫书亮
李晓俊
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    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01GHORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G31/00Soilless cultivation, e.g. hydroponics
    • AHUMAN NECESSITIES
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    • A01G24/00Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor

Abstract

本发明公开了一种高效生产白芨微球茎的方法,包括如下操作步骤:(1)材料的选取;(2)果荚的储存;(3)培养基的配制;(4)灭菌处理;(5)种子的接入;(6)微球茎的诱导;(7)练苗;(8)大棚培养基质的配制;(9)培养盘的准备;(10)微球茎的培养;(11)水肥管理;(12)微球茎的包衣、贮藏。该方法繁殖速度快,成活率可达90%以上,生产效率高,生产成本低,能周年工厂化生产;生产出来的白芨微球茎具有无病毒、体积小、贮藏运输方便特点,是一项具有产业前景,能从根本上解决白芨资源匮乏等问题。

Description

一种白芨微球茎的制备方法
技术领域
本发明涉及种植方法,尤其是一种白芨微球茎的制备方法。
背景技术
白芨(Bletilla striata (Thunb.ex A.Murray)Rchb.f)为一味常用中药材,白芨具有较好的收敛止血,消肿生肌功效。野生白芨日趋枯竭,主要靠人工种植来满足市场;虽然白芨有大量种子,但种子寿命短没有营养贮备,萌发条件苛刻,幼苗期较长,对环境敏感,白芨的种子非常细小且无胚乳,因此在自然状况下很难萌发和生长,实生苗的栽培较为困难,传统栽培主要靠分株繁殖。
发明内容
针对现有技术的不足之处,本发明旨在提供一种高效生产白芨微球茎的方法,
包括如下操作步骤:
1)选取发育饱满成熟的白芨果荚,将采摘的白芨果荚进行真空包装后放入冰箱中2-4℃保存代用;
2)播种前先用75%的酒精将果荚浸泡2分钟,再用自来水清洗果荚5次后,时间5-10分钟,再把果荚放入0.1 %的HgCl2溶液中灭菌5 min,然后用无菌水冲洗6~8 min,至少冲洗5次,然后放入已经消毒的吸水纸中吸干果荚表皮水分,置于无菌容器内;
3)播种时,用消毒过的镊子剖开果荚轻蘸种子使其疏松,然后将白芨种子均匀铺洒在种子萌发培养基中,培养基为MS+萘乙酸NAA 1.0 mg/L+6-苄氨基腺嘌呤6-BA 1.0 mg/L+3%蔗糖+0.7 %琼脂,培养40-50日后得到具有两片叶子的白芨种苗,培养条件为光照时间12h/d,光照强度1000-3000lx,温度为23—26℃;
4)将已具有两片叶子的白芨种苗从种子萌发培养基中去出,再移栽到微球茎诱导培养基中,培养基成分为的6-糖基氨基嘌呤KT浓度为 0.8 mg/L、萘乙酸NAA浓度为 0.8 mg/L、糖浓度为3 %,诱导培养基的肌醇浓度提高到500 mg/L,培养45天后得到基部带有微球茎的白芨种苗,培养条件为光照时间为12 h/d,光照强度1000-3000lx,温度为23—26℃;
5)将基部带有微球茎的白芨种苗培养瓶移至大棚中,打开封口膜,在常温下练苗4-5日后移栽到大棚培养基质进一步培养,培养时间2-3个月;
6)白芨种苗在大棚中培养直至倒苗后,将白芨种茎去除洗净,去除须根,保留球茎部分,并将获取的微球茎放入到0.5%的高锰酸钾溶液中进行消毒5—8min,然后放入到活性炭: 滑石粉: 多菌灵比例为3:1:0.02的粉末中滚动3-5min,再喷洒6-糖基氨基嘌呤KT浓度为 0.1 mg/L、萘乙酸NAA浓度为 0.1mg/L、赤霉素GA3浓度为 0.1mg/L的1/2MS培养溶液,之后重复上述步骤3次操作,放入5%的褐藻酸钠溶液中侵泡5—7min取出置于空气中固化10-15min,再将已固化的微球茎放入0.4g/L氯化钙溶液中侵泡1-2min取出置于空气中固化后,即可用透气性良好的聚乙烯塑料袋包装贮藏。
本发明中白芨微球茎是指在组织培养条件下,以种子为原材料直接接入到培养基中进行萌发培养,45日后得到具有两片叶子的白芨种苗,在将种苗取出接入到微球茎培养基中进一步培养,45天后得到基部带有微球茎的白芨种苗,再将白芨种苗移栽到大棚培养基质中培养直至倒苗后取出,去除根部洗净即可得到白芨微球茎。
该方法繁殖速度快,生产效率高,生产成本低,能周年工厂化生产;生产出来的白芨微球茎具有无病毒、体积小、贮藏运输方便特点,是一项具有产业前景,能从根本上解决白芨资源匮乏等问题,成活率可达90%以上。
具体实施方式
施秉县中药材种苗繁育组培室。
1)材料的选取
以兰科植物白芨Bletilla striata( Thunb.) Reichb.f.的果荚为原材料,胚龄不低与18周,选取健状无病菌果荚为培养诱导萌发出白芨组培种苗;
2)果荚的储存
白芨果荚摘取后,放在阴凉处放置7-8天,使果荚表面阴干变脆,按每10个一袋规格放入真空包装袋中进行真空包装,放入冰箱中储存,温度2-4℃;
3)培养基的配制
在配制MS培养基时,MS培养基为现有技术,含有MS培养基0.7 %琼脂,MS培养基pH 5.8~6.0,由于MS培养基含有近30种营养成分,为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量,所以将培养基中的各种成分配成浓缩母液,包括大量元素母液,微量元素,有机物母液,铁盐母液,除了大量元素母液为20倍浓缩液之外,其他均为100倍的浓度,冷藏待用,本次所用植物生长调节剂为萘乙酸NAA、6-苄氨基腺嘌呤6-BA、6-糖基氨基嘌呤6-糖基氨基嘌呤KT,均配制为1 mg/mL的溶液,冷藏留待量取;
在配制培养基时,用移液管量取每种母液适宜的量,称取相应的蔗糖,琼脂,蔗糖和琼脂,根据不同培养基的要求称取不同的量,用移液管量取设计培养基所需的植物生长调节剂量,搅拌均匀,定容至所需培养基容积,用电磁炉加热煮沸10 min左右以溶解琼脂,加热完毕后,加入蒸馏水定容,再用HCl和NaOH溶液调节pH值在5.8~6.0之间,分装进培养瓶,由于本次培养时间较长,因此每瓶倒置培养基溶液高度不低与30mm,用封口膜和胶圈密封培养瓶瓶口;
培养基倒好后,将培养瓶放入高压灭菌锅内灭菌,注意要完全排除锅内空气,使锅内全部是水蒸气,灭菌才能彻底完成;
当锅内温度达121 ℃,开始计时20 min,到时间后关闭电源,等灭菌锅压力降到常压后将培养瓶取出,放到指定位置冷却凝固后,即可放入培养基储存架上留待使用;
所述种子萌发培养基为MS+萘乙酸NAA 1.0 mg/L+6-苄氨基腺嘌呤6-BA 1.0 mg/L+3 %蔗糖+0.7 %琼脂;
所述微球茎诱导培养基成分为的6-糖基氨基嘌呤KT浓度为 0.8 mg/L、萘乙酸NAA浓度为 0.8 mg/L、糖浓度为3 %,诱导培养基的肌醇浓度提高到500 mg/L,
4)灭菌处理
在无菌操作台上,播种前先用75%的酒精将果荚浸泡2分钟,再用自来水清洗果荚5次后,时间不低与5分钟,再把果荚放入0.1 %的HgCl2溶液中灭菌5 min,然后用无菌水冲洗6~8 min,冲洗5次,每一步都要不停的摇动,使材料、消毒液与无菌水充分接触,目的是提高消毒效果以及让无菌水更好的去除残留的消毒剂,降低消毒剂对材料的毒害作用,对果荚进行消毒之后,将其放入已经消毒的吸水纸中吸干果荚表皮水分,置于无菌容器内备用,放置时间不宜过长,应立即使用,避免外界病菌再次侵入;
5)种子的接入
播种时,用消毒过的镊子剖开果荚轻蘸种子使其疏松,然后将白芨种子均匀铺洒在种子萌发培养基中,培养基为MS+萘乙酸NAA 1.0 mg/L+6-苄氨基腺嘌呤6-BA 1.0 mg/L+3 %蔗糖+0.7 %琼脂,培养45日后得到具有两片叶子的白芨种苗,培养条件为光照时间12 h/d,光照强度1000-3000lx,温度为23—26℃;
6)微球茎的诱导
将已具有两片叶子的白芨种苗从种子萌发培养基中去出,再移栽到微球茎诱导培养基中,培养基成分为的6-糖基氨基嘌呤KT浓度为 0.8 mg/L、萘乙酸NAA浓度为 0.8 mg/L、糖浓度为3 %,诱导培养基的肌醇浓度提高到500 mg/L,培养45天后得到基部带有微球茎的白芨种苗,培养条件为光照时间为12 h/d,光照强度1000-3000lx,温度为23—26℃左右;
7)练苗
将基部已带有微球茎类型物的白芨种苗培养瓶移至大棚中,打开封口膜,在常温下练苗4-5日,练苗期间应注意观察,出现缺水时,应及时喷施无菌水,避免种苗出现脱水死亡;
8)大棚培养基质的配制
将椰糠、腐殖土、有机基质按体积2:1:1比例混合,加入上述混合物总重量10%的充分腐熟牛粪,反复翻动使其充分混合,用1000 倍50%多菌灵溶液浇透培养基质,放于阳光下爆晒10-15天,至培养基质变干,水份低于5%;
9)培养盘的准备
将培养基质放入盘体长54cm宽28cm穴深40mm口径25mmX25mm的穴盘中,轻轻压实后将培养基扒平,再用清水将基质充分浇透,盖上塑料薄膜保湿并防止异物进入;
10)微球茎的培养
将基部带有微球茎的白芨种苗移栽培养穴盘中,每穴1株,移栽过程中要轻拿轻放,避免损伤种苗,同时覆土厚度不宜过深,以刚好覆盖微球茎为准;
11)水肥管理
移栽后要第一时间喷施无菌水,注意保持土壤湿度,做到少施多次,以保持基质体积不萎缩、用力捻不出水为标准,每隔7-10日喷施一次叶面肥;
12)微球茎的包衣、贮藏
白芨种苗在大棚中培养直至倒苗后,将白芨种茎去除洗净,去除须根,保留球茎部分,选取直径为0.5-1.5cm的白芨种茎到0.5%的高锰酸钾溶液中进行消毒5—8min,然后放入到活性炭: 滑石粉: 多菌灵比例为3:1:0.02的粉末中滚动3-5min,再喷洒6-糖基氨基嘌呤KT浓度为 0.1 mg/L、萘乙酸NAA浓度为 0.1mg/L、赤霉素GA3浓度为 0.1mg/L的1/2MS培养溶液,之后重复上述步骤3次操作,放入5%的褐藻酸钠溶液中侵泡5—7min取出置于空气中固化10-15min,再将已固化的微球茎放入0.4%氯化钙溶液中侵泡1-2min取出置于空气中固化后,即可用透气性良好的聚乙烯塑料袋包装贮藏,亦可直接用于大田生产。

Claims (1)

1.一种高效生产白芨微球茎的方法, 其特征在于包括如下操作步骤:
1)选取发育饱满成熟的白芨果荚,将采摘的白芨果荚进行真空包装后放入冰箱中2-4℃保存代用;
2)播种前先用75%的酒精将果荚浸泡2分钟,再用自来水清洗果荚5次后,时间5-10分钟,再把果荚放入0.1 %的HgCl2溶液中灭菌5 min,然后用无菌水冲洗6~8 min,至少冲洗5次,然后放入已经消毒的吸水纸中吸干果荚表皮水分,置于无菌容器内;
3)播种时,用消毒过的镊子剖开果荚轻蘸种子使其疏松,然后将白芨种子均匀铺洒在种子萌发培养基中,培养基为MS+萘乙酸NAA 1.0 mg/L+6-苄氨基腺嘌呤6-BA 1.0 mg/L+3%蔗糖+0.7 %琼脂,培养40-50日后得到具有两片叶子的白芨种苗,培养条件为光照时间12h/d,光照强度1000-3000lx,温度为23—26℃;
4)将已具有两片叶子的白芨种苗从种子萌发培养基中去出,再移栽到微球茎诱导培养基中,培养基成分为的6-糖基氨基嘌呤KT浓度为 0.8 mg/L、萘乙酸NAA浓度为 0.8 mg/L、糖浓度为3 %,诱导培养基的肌醇浓度提高到500 mg/L,培养45天后得到基部带有微球茎的白芨种苗,培养条件为光照时间为12 h/d,光照强度1000-3000lx,温度为23—26℃;
5)将基部带有微球茎的白芨种苗培养瓶移至大棚中,打开封口膜,在常温下练苗4-5日后移栽到大棚培养基质进一步培养,培养时间2-3个月;
6)白芨种苗在大棚中培养直至倒苗后,将白芨种茎去除洗净,去除须根,保留球茎部分,并将获取的微球茎放入到0.5%的高锰酸钾溶液中进行消毒5—8min,然后放入到活性炭: 滑石粉: 多菌灵比例为3:1:0.02的粉末中滚动3-5min,再喷洒6-糖基氨基嘌呤KT浓度为 0.1 mg/L、萘乙酸NAA浓度为 0.1mg/L、赤霉素GA3浓度为 0.1mg/L的1/2MS培养溶液,之后重复上述步骤3次操作,放入5%的褐藻酸钠溶液中侵泡5—7min取出置于空气中固化10-15min,再将已固化的微球茎放入0.4g/L氯化钙溶液中侵泡1-2min取出置于空气中固化后,即可用透气性良好的聚乙烯塑料袋包装贮藏。
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