CN110447540A

CN110447540A - 一种白及种苗的组织培育方法

Info

Publication number: CN110447540A
Application number: CN201910859876.4A
Authority: CN
Inventors: 李林; 徐德林; 胡冰杰; 张迪; 蒲柯如; 刘怡; 陈中杰; 钱刚; 郑明辉; 闻伟锷
Original assignee: Zunyi Medical University
Current assignee: Zunyi Medical University
Priority date: 2019-09-11
Filing date: 2019-09-11
Publication date: 2019-11-15

Abstract

本申请公开了植物组织培养技术领域的一种白及种苗的组织培育方法，包括以下步骤：步骤一、对白及种子进行无菌处理，将白及种子播种于萌发培养基中，待种子萌发成幼苗且高度为2～4cm；步骤二、将幼苗转入继代培养基中进行壮苗培养；步骤三、待步骤二中的幼苗生长至假鳞径直径为0.5～1.0cm时，将幼苗转至倒苗培养基中培养，获得叶片枯死的白及幼苗；步骤四、去掉步骤三中叶片枯死的白及幼苗的枯叶与根系，保留白及幼苗的假鳞茎；步骤五、将步骤四中的假鳞茎播种于大田育苗基质中，在18℃的自然光照条件下培养6周，获得由假鳞茎萌发的幼苗，培养期间每隔2天进行一次喷水。采用本方案解决了现有的白及种苗不适应于商业化长途运输和存储、规模化种植的问题。

Description

一种白及种苗的组织培育方法

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种白及种苗的组织培育方法。

背景技术

白及(Bletilla striata(Thunb.)Reichb.f.)为兰科白及属多年生草本植物，是我国传统的名贵中草药，其药用部位(假鳞茎)，具有收敛止血，消肿生肌，清热利湿的功效，通常用于肺结核、咯血、肝癌、胃癌、十二指肠溃疡、内外出血等疾病的治疗；现代药理学研究表明白及对结核杆菌、炎症细胞等有明显的抑制作用，具有代血浆、骨髓造血、延缓衰老、增加机体免疫力等保健作用，其合成的大量超氧化物(SOD)还具有抗菌镇痛和抗肿瘤活性(张永为等，2012；王红英，2009；王光辉等，2007；Jiang et al.,2007)。此外，白及还被广泛用作饮片、护肤美白化妆品、烟蒂胶、糊料、浆丝绸、浆纱、涂料等的工业原料和基因递送的载体材料，且白及花色艳丽，也是一种良好的园林花卉。由于用途的广泛扩展，导致近年来，其市场需求急剧增加，价格飞速上涨，前景十分广阔。

通过建立人工繁育的方法是保护白及野生资源，为大田的规模化种植提供大量种苗行之有效的方法。目前对于白及的人工繁育方法已经有较多的研究，然而是实际应用中仍然有许多问题需要解决。其一，种苗繁育为可用种苗的周期较长，通常需要6-8月，商业化售卖的幼苗更要延长至1-2年。其二，组织培养方式繁育种苗中进行大田移栽的存活率低，且移栽初期对于幼苗的管理和移栽条件具有较高要求。其三，传统种苗的运输、保存、移栽等也限制了种苗的在商业化生产中规模化应用。传统种苗均是包含完整叶、茎、根的植株，不能适应长期无光、无水等运输和保存条件，需要在较短时间内进行移植，同时由于全株器官的存在也不能适应机械化的种植方式，需要大量人力的应用，提高了生产成本。因此现在亟需一种缩短育苗周期，提高种苗移栽存活率，可适应于商业化长途运输、耐存储、可规模化种植的培育方法。

发明内容

本发明意在提供一种白及种苗的组织培育方法，以解决现有的白及种苗繁育周期长，移栽存活率低，不适用于商业化长途运输和存储、规模化种植的问题。

为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：一种白及种苗的组织培育方法，包括以下步骤：

步骤一、对白及种子进行无菌处理，将无菌的白及种子播种于萌发培养基中，待种子萌发成幼苗且高度为2～4cm；

步骤二、将幼苗转入继代培养基中进行壮苗培养；

步骤三、待步骤二中的幼苗生长至假鳞径直径为0.5～1.0cm时，将幼苗转至倒苗培养基中培养6～15天，获得叶片枯死的白及幼苗；

步骤四、去掉步骤三中叶片枯死的白及幼苗的枯叶与根系，保留白及幼苗的假鳞茎；

步骤五、将步骤四中的假鳞茎播种于大田育苗基质中，在18～25℃的自然光照条件下培养6～8周，获得由假鳞茎萌发的幼苗，培养期间每隔2～4天进行一次喷水。

本发明的有益效果：本发明中的培育方法采用萌发培养基上进行种子萌发的方式可以大大提高白及种子的萌发率，使得种子的萌发率提高到70～90％。再采用促进白及组培苗中假鳞茎生长的继代培养基，将幼苗放入到继代培养基培育4-6周后，白及幼苗假鳞茎直径可达0.5～1.5cm；本方法在白及假鳞茎直接播种至大田基质后，成苗率高可达到80～95％。同时倒苗后再生的假鳞茎粗壮，适应性强适用于商业化长途运输、耐存储。

进一步，所述步骤一中白及种子的无菌处理步骤为：1)预消毒：选取健康无虫害的白及蒴果，用浓度为75％的酒精擦拭白及蒴果表面，将酒精擦拭过的白及蒴果使用无菌水清洗；2)消毒：将经过预消毒的白及蒴果放入到浓度为0.08～0.12％的升汞溶液中浸泡3～5min，将浸泡后的白及蒴果使用无菌水清洗3～5次。其目的是，通过该种方式对白及蒴果进行消毒，避免白及蒴果上携带的病菌在种子萌发过程中对种子造成的影响，使萌发的种苗染病，进而导致存活率降低。

进一步，所述步骤一中的种子在MS培养基中进行萌发，萌发时间为1～2个月，萌发温度为23～25℃。其目的是，在MS培养基处于23～25℃的温度条件下，最适于白及种子的萌发。

进一步，步骤二中继代培养基为pH值处于5.7～6.0的MS培养基，继代培养基中的营养物质每升包括：6-BA 0.001g、IAA 0.004g、碳粉1g、椰汁10ml、香蕉泥80g。其目的是该组分组成的培养基继续壮苗培养时，幼苗生长更旺盛,促进假鳞茎快速膨大。

进一步，步骤三中的倒苗培养基为pH值处于6.5～7.0的MS培养基，倒苗培养基中的营养物质每升包括：KT 0.001g、NAA 0.0001g、香蕉泥80g、椰汁10ml、碳粉1g。其目的是，该组分组成的倒苗培养基可以使白及幼苗的叶片枯死，但又不会使得白及死亡。

进一步，步骤五中大田育苗基质按重量份数由2～3份泥炭土和1～7份黄土组成。其目的是，该成分组成的大田育苗基质更适于白及假鳞茎萌发成幼苗，为白及假鳞茎的萌发提供了有利的环境。

进一步，步骤五中的光照条件为：16～20小时光照和4～8小时黑暗交替进行。其目的是，该光照与黑暗交替的条件下使得白及的假鳞茎萌发速度更快。

附图说明

图1为本发明一种白及幼苗的组织培育方法的过程图；

图2为未经倒苗处理的白及萌发过程图；

图3为普通白及萌发后的状态与本发明白及萌发后的状态图；

图4为继代培养基筛选白及萌发效果对比图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式进一步详细说明：

如附图4所示，A～F为6种不同组分比构成的继代培养基，所萌发的白及幼苗的效果图。

NAA：1-萘乙酸；6-BA：6-苄氨基腺嘌呤；IAA：吲哚-3-乙酸；KT:细胞分裂素。

A为每升继代培养基中按重量份数由NAA 0.0005g组成的继代后白及壮苗效果图。

B为每升继代培养基中按重量份数由6-BA 0.001g、IAA 0.002g、碳粉1g、椰汁10mL、香蕉泥80g组成的继代后白及壮苗效果图。

C为每升继代培养基中按重量份数由6-BA 0.001g、IAA 0.004g、碳粉1g、椰汁10mL、香蕉泥80g组成的继代后白及壮苗效果图。

D为每升继代培养基中按重量份数由6-BA 0.001g、NAA 0.0002g、碳粉1g、椰汁10mL、香蕉泥80g组成的继代后白及壮苗效果图。

E为每升继代培养基中按重量份数由KT 0.001g、NAA 0.0002g、碳粉1g、椰汁10mL、香蕉泥80g组成的继代后白及壮苗效果图。

F为每升继代培养基中按重量份数由KT 0.001g、NAA 0.001g、碳粉1g、椰汁10mL、香蕉泥80g组成的继代后白及壮苗效果图。

经效果对比，C培养基中的白及幼苗长势良好，且植株分明，最符合实验要求，因此选用C培养基为本申请中所需的继代培养基。

倒苗培养基为MS培养基，pH值6.5～7.0，每升倒苗培养基按重量或体积由：KT0.001g、NAA 0.0001g、香蕉泥80g、椰汁10mL、碳粉1g组成。

实施例1：

一种白及种苗的组织培育方法，包括以下步骤：

步骤一、

1)预消毒：选取健康无虫害的白及蒴果，用浓度为75％的酒精擦拭白及蒴果表面，将酒精擦拭过的白及蒴果使用无菌水清洗；

2)消毒：将经过预消毒的白及蒴果放入到浓度为0.08％的升汞溶液中浸泡3min，将浸泡后的白及蒴果使用无菌水清洗3次。

3)将无菌的白及种子播种于配置好的萌发培养基中，萌发温度23℃，萌发1个月，待种子萌发成幼苗且高度为2cm；

步骤二、将幼苗转入pH值为5.7的继代培养基中进行壮苗培养；

步骤三、待步骤二中的幼苗生长至假鳞径直径为0.5cm时，将幼苗转至pH值为6.5的倒苗培养基中培养6天，获得叶片枯死的白及幼苗；

步骤五、将步骤四中的假鳞茎播种于按重量份数由2份泥炭土、7份黄土组成大田育苗基质中，在18℃的自然光照条件下培养6周，每日光照时间为16小时光照和8小时黑暗交替进行，获得由假鳞茎萌发的幼苗，培养期间每隔2天进行一次喷水。

实施例2

一种白及种苗的组织培育方法，包括以下步骤：

步骤一、

2)消毒：将经过预消毒的白及蒴果放入到浓度为0.12％的升汞溶液中浸泡5min，将浸泡后的白及蒴果使用无菌水清洗5次。

3)将无菌的白及种子播种于配置好的萌发培养基中，萌发温度25℃，萌发2个月，待种子萌发成幼苗且高度为4cm；

步骤二、将幼苗转入pH值为5.8的继代培养基中进行壮苗培养；

步骤三、待步骤二中的幼苗生长至假鳞径直径为1cm时，将幼苗转至pH值为6.8的倒苗培养基中培养10天，获得叶片枯死的白及幼苗；

步骤五、将步骤四中的假鳞茎播种于按重量份数由3份泥炭土、1份黄土组成大田育苗基质中，在25℃的自然光照条件下培养8周，每日光照时间为20小时光照和4小时黑暗交替进行，获得由假鳞茎萌发的幼苗，培养期间每隔4天进行一次喷水。

实施例3

一种白及种苗的组织培育方法，包括以下步骤：

步骤一、

2)消毒：将经过预消毒的白及蒴果放入到浓度为0.1％的升汞溶液中浸泡4min，将浸泡后的白及蒴果使用无菌水清洗4次。

3)将无菌的白及种子播种于配置好的萌发培养基中，萌发温度24℃，萌发1.5个月，待种子萌发成幼苗且高度为3cm；

步骤二、将幼苗转入pH值为6.0的继代培养基中进行壮苗培养；

步骤三、待步骤二中的幼苗生长至假鳞径直径为0.7cm时，将幼苗转至pH值为7.0的倒苗培养基中培养15天，获得叶片枯死的白及幼苗；

步骤五、将步骤四中的假鳞茎播种于按重量份数由2.5份泥炭土、5份黄土组成大田育苗基质中，在22℃的自然光照条件下培养7周，每日光照时间为18小时光照和6小时黑暗交替进行，获得由假鳞茎萌发的幼苗，培养期间每隔3天进行一次喷水。

图1为采用本申请实施例1、实施例2和实施3方式培育出白及幼苗的萌发、成苗、倒苗和再生后的过程图。

图2为未经过倒苗处理的普通白及萌发过程图。

图3中A为未经倒苗处理白及幼苗的假鳞茎的状态图；图3中B为倒苗过程中的白及幼苗的状态图，图3中C为经倒苗后再生后的白及假鳞茎的状态图。

经图3中A与图3中C对比，经倒苗处理后的白及假鳞茎明显比未经倒苗处理的白及假鳞茎更加粗壮、健康，适宜长途运输及栽种。

Claims

1.一种白及种苗的组织培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤二、将幼苗转入继代培养基中进行壮苗培养；

2.根据权利要求1所述的一种白及种苗的组织培育方法，其特征在于：所述步骤一中白及种子的无菌处理步骤为：1)预消毒：选取健康无虫害的白及蒴果，用浓度为75％的酒精擦拭白及蒴果表面，将酒精擦拭过的白及蒴果使用无菌水清洗；2)消毒：将经过预消毒的白及蒴果放入到浓度为0.08～0.12％的升汞溶液中浸泡3～5min，将浸泡后的白及蒴果使用无菌水清洗3～5次。

3.根据权利要求2所述的一种白及种苗的组织培育方法，其特征在于：所述步骤一中的种子在MS培养基中进行萌发，萌发时间为1～2个月，萌发温度为23～25℃。

4.根据权利要求3所述的一种白及种苗的组织培育方法，其特征在于：步骤二中继代培养基为pH值处于5.7～6.0的MS培养基，继代培养基中的营养物质每升包括：6-BA 0.001g、IAA 0.004g、碳粉1g、椰汁10ml、香蕉泥80g。

5.根据权利要求4所述的一种白及种苗的组织培育方法，其特征在于：步骤三中的倒苗培养基为pH值处于6.5～7.0的MS培养基，倒苗培养基中的营养物质每升包括：KT 0.001g、NAA 0.0001g、香蕉泥80g、椰汁10ml、碳粉1g。

6.根据权利要求5所述的一种白及种苗的组织培育方法，其特征在于：步骤五中大田育苗基质按重量份数由2～3份泥炭土和1～7份黄土组成。

7.根据权利要求6所述的一种白及种苗的组织培育方法，其特征在于：步骤五中的光照条件为：16～20小时光照和4～8小时黑暗交替进行。